白血病免疫分型講課最終版本

白血病免疫(miǎnyì)分型寧波二院李學(xué)雷第一頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt正常血細(xì)胞從多能干細(xì)胞分化、發(fā)育、成熟為功能細(xì)胞的過(guò)程中，細(xì)胞膜、細(xì)胞漿或胞核抗原的出現(xiàn)、表達(dá)增多與減少甚至消失與血細(xì)胞的分化發(fā)育階段密切相關(guān)，而且表現(xiàn)出與細(xì)胞系列及其分化程度相關(guān)的特異性。因此，這些(zhèxiē)抗原的表達(dá)與否可作為鑒別和分類血細(xì)胞的基礎(chǔ)。白血病是造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，在形態(tài)上變化雖相當(dāng)大，但仍能表達(dá)正常血細(xì)胞所具有的抗原，因而仍可依據(jù)其抗原的表達(dá)譜對(duì)白血病進(jìn)行免疫分型。由于白血病細(xì)胞具有腫瘤細(xì)胞的特征，其抗原表達(dá)又不完全同于正常血細(xì)胞，?？沙霈F(xiàn)某些抗原缺乏、過(guò)度表達(dá)、系列交叉表達(dá)某一系列或階段不應(yīng)有的抗原，這又增加了白血病免疫分型的復(fù)雜性。白血病/淋巴瘤的免疫分型已成為診斷血液惡性腫瘤不可缺少的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。第二頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt

早年曾用過(guò)的熒光顯微鏡或APAAP方法基本被廢棄。國(guó)際上公認(rèn)的通用的方法是流式細(xì)胞術(shù)（FCM）。流式細(xì)胞術(shù)（FCM）白血病免疫分型是利用熒光素標(biāo)記的單克隆抗體（McAb）作分子探針，多參數(shù)分析白血病細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿或細(xì)胞核的免疫表型，由此了解被測(cè)白血病細(xì)胞所屬細(xì)胞系列及其分化程度。因?yàn)镕CM能快速，多參數(shù)，客觀的定性又定量測(cè)定細(xì)胞膜，漿，核的抗原表達(dá)。另一個(gè)重要理由是至今尚未發(fā)現(xiàn)白血病/淋巴瘤的特異抗原。所以能用正常血細(xì)胞的單抗來(lái)進(jìn)行免疫分型是基于白血病形成(xíngchéng)的分化阻斷學(xué)說(shuō)即白血病細(xì)胞基因異常，分化受阻于某階段形成(xíngchéng)不同亞型的白血病。這群細(xì)胞充盈于骨髓?？乖磉_(dá)與其相應(yīng)系列/階段的血細(xì)胞無(wú)明顯差異。與形態(tài)學(xué)檢查相似僅能根據(jù)數(shù)量的差異來(lái)判斷病變細(xì)胞的屬性。第三頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt單參數(shù)免疫標(biāo)志測(cè)定易將正常細(xì)胞包括在內(nèi)。因此，近年來(lái)主張用設(shè)門（gating）方法。即用CD45與側(cè)向角（side

scatter,SSC），對(duì)數(shù)取樣后可將骨髓細(xì)胞清晰地分出淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞，成熟粒細(xì)胞，幼稚細(xì)胞和紅細(xì)胞群，其理論依據(jù)是CD45是所有白細(xì)胞的抗原。其表達(dá)量在淋巴細(xì)胞最高，單核細(xì)胞，成熟粒細(xì)胞，早期造血細(xì)胞（blasts）依次減弱。紅細(xì)胞（中，晚幼紅細(xì)胞，成熟紅細(xì)胞）不表達(dá)CD45。SSC反映細(xì)胞的顆粒性，成熟粒細(xì)胞SSC最高，依次為單核細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，blasts，紅細(xì)胞。以CD45/SSC雙參數(shù)，對(duì)數(shù)取樣時(shí)即可把各細(xì)胞群區(qū)分出來(lái)。若同時(shí)加上一個(gè)，二個(gè)甚或三個(gè)熒光(yíngguāng)標(biāo)記的單抗，則很容易識(shí)別非正常細(xì)胞群所表達(dá)的抗原。這樣可以排除正常細(xì)胞的干擾。在幼稚細(xì)胞％低的情況下或檢測(cè)殘存白血病時(shí)尤為必要FCM分析白血病免疫表型時(shí)，測(cè)量細(xì)胞數(shù)量一般在10000～50000細(xì)胞之間，而且快速、特異、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，能區(qū)分細(xì)胞起源、劃分其分化發(fā)育階段等，對(duì)白血病的診斷與分型、治療方案選擇與預(yù)后判斷、發(fā)病機(jī)理研究等有重要價(jià)值。

第四頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt

一白細(xì)胞分化抗原白細(xì)胞分化抗原（leukocytedifferentiationantigen，LDA）指血細(xì)胞在分化成熟為不同譜系（lineage）、分化的不同階段及細(xì)胞活化過(guò)程中，出現(xiàn)或消失的細(xì)胞表面標(biāo)記。它們大都(dàdōu)為跨膜分子，由胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞漿區(qū)組成；有些以糖基磷脂酰肌醇（GPI）“錨”在細(xì)胞膜上；它們大都是蛋白或糖蛋白，少數(shù)為碳水化合物第五頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt

二CD的概念(gàiniàn)、CD分子的分類、功能及應(yīng)用CD：用以單克隆抗體鑒定為主的聚類分析法，將來(lái)自不同實(shí)驗(yàn)室的單克隆抗體所識(shí)別的同一分化抗原歸為一個(gè)分化群（Clusterofdifferentiation，CD）。并以此代替分化抗原以往的命名。在許多(xǔduō)情況下，單克隆抗體及其識(shí)別的相應(yīng)抗原都用同一個(gè)CD序號(hào)。迄今為止，人CD分子的序號(hào)已從CD1命名至CD371，可大致劃分為14個(gè)組。第六頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt第七頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選pptCD分子(fēnzǐ)的功能：（1）免疫應(yīng)答過(guò)程中參與免疫細(xì)胞的相互識(shí)別；免疫細(xì)胞識(shí)別抗原、活化、增殖和分化；免疫效應(yīng)功能的發(fā)揮；（2）參與造血細(xì)胞的分化和造血過(guò)程的調(diào)控；（3）參與炎癥的發(fā)生；（4）參與細(xì)胞的遷移如腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移等。第八頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選pptCD分子的臨床應(yīng)用CD單克隆抗體可用于（1）闡明(chǎnmíng)某些疾病的發(fā)病機(jī)制；（2）廣泛應(yīng)用于多種疾病的免疫診斷；（3）治療移植排斥反應(yīng)和腫瘤等疾?。?/p>

第九頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt第十頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt第十一頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt

CD20分子(fēnzǐ)結(jié)構(gòu)與分布(fēnbù)：?jiǎn)捂溈缒さ鞍?，僅表達(dá)于B細(xì)胞，早期即表達(dá)，分化為漿細(xì)胞后消失功能：（1）參與和調(diào)節(jié)B細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、生長(zhǎng)和分化。（2）直接參與調(diào)節(jié)跨膜Ca2+的流動(dòng)。第十二頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt三免疫(miǎnyì)分型常用的免疫(miǎnyì)標(biāo)志及其意義

第十三頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt

白血病系列(xìliè)分化抗原T淋巴細(xì)胞白血?。篊D3、CD5、CD7。

B淋巴細(xì)胞白血?。篊D10、CD19、CD22。NK淋巴細(xì)胞白血?。篊D16、CD56、CD57。

髓系白血?。篊D13、CD14、CD33、MPO（髓過(guò)氧化物(ɡuòyǎnɡhuàwù)酶）。紅白血?。篏lyA（血型糖蛋白A）。

巨核細(xì)胞白血病：CD41、CD42、CD61。

第十四頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt白血病系列(xìliè)非特異性抗原CD34、HLA－DR為早期細(xì)胞抗原，無(wú)系列特異性，可與CD38聯(lián)合(liánhé)運(yùn)用于免疫分型。一般而言，干/祖細(xì)胞CD34＋、HLA－DR＋、CD38－，原始細(xì)胞CD34＋、HLA－DR＋、CD38＋，而幼稚細(xì)胞（如早幼粒細(xì)胞）CD34－、HLA－DR－、CD38＋。第十五頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt

白血病分化(fēnhuà)階段抗原T細(xì)胞(xìbāo)抗原：CD4、CD8。

B細(xì)胞抗原：CD10、Cyμ（胞漿μ鏈）、SmIg（表面膜免疫球蛋白）、CD38和CyIg（胞漿免疫球蛋白）、CD11C。第十六頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt

白細(xì)胞共同(gòngtóng)抗原CD45為白細(xì)胞共同抗原，但原幼細(xì)胞表達(dá)(biǎodá)量比成熟淋巴細(xì)胞低，幼紅細(xì)胞不表達(dá)(biǎodá)。用SSC/CD45

PerCP雙參數(shù)分析可十分容易鑒別骨髓和血液中的原始或成熟細(xì)胞。用兩個(gè)系列或階段特異性McAb加CD45進(jìn)行三色免疫熒光染色，經(jīng)FSC、SSC、McAbl-FITC、McAb2-PE、CD45

PerCP五參數(shù)分析，可特異地分析原幼白血病細(xì)胞的免疫表型而不受成熟細(xì)胞的干擾。第十七頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt四白血病免疫(miǎnyì)分型急性(jíxìng)髓系細(xì)胞白血病第十八頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選pptMO

Mo

blasts

有低的SSC和FSC。在CD45－SSC圖上出現(xiàn)在淋巴細(xì)胞位置上，至少表達(dá)一個(gè)特異性標(biāo)志(biāozhì)如CD13或CD116，但MPO比CD13與CD33更靈敏。一般淋系標(biāo)志(biāozhì)陰性，但也可表達(dá)CD7或CD4。Mo

blasts一般HLA－DR、CD34陽(yáng)性，有些研究表明CD7與CD34共表達(dá)在AML且預(yù)后差。第十九頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選pptM1流式上M1與M0相似不易區(qū)分，M1一般(yībān)CD13＋、CD33＋、HLA－DR－，但CD34表達(dá)少于M0，可能表達(dá)部分CD15。

M2

M2與M1要區(qū)別是成熟度增加，blasts減少，CD15較M1較顯著，CD34弱于M1，CD13有時(shí)表達(dá)強(qiáng)于CD33，多數(shù)病例HLA－DR（-）。CD45－SSC圖顯示從髓系blast區(qū)至成熟骨髓細(xì)胞區(qū)的連續(xù)細(xì)胞帶，CD45－SSC圖有助于確定blasts比例。第二十頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選pptM3高顆粒性，具較高的SSC，但CD45較成熟細(xì)胞少，多數(shù)情況(qíngkuàng)HLA－DR（-）或表達(dá)減少，CD34少于M2、一般CD13弱（＋），可有CD2表達(dá)。第二十一頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選pptM4與M5兩型表型相似，但M4較M5表達(dá)更多的CD34（＋），較之M0、M1，M4與M5有更大的FSS和SSC，CD45－SSC圖上，成熟C出現(xiàn)(chūxiàn)在單核區(qū)，重要的表型為CD13、CD33、HLA－DR、CD14和CD15，CD33可表達(dá)強(qiáng)于CD13，CD33（＋）、CD13（－）、CD34（－）很可能為M5，但只出現(xiàn)(chūxiàn)在少數(shù)病人中，部分M5可見(jiàn)CD56（＋）。第二十二頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選pptM6

M6較少見(jiàn)且特征不明顯，一般HLA－DR，CD34、CD13、CD33陽(yáng)性，CD45－SSC圖顯示主要為紅系成份。M7巨核細(xì)胞白血病，在AML中少于1％。一般CD61（GpⅢa）和/或CD41（GpⅡb-Ⅲa）陽(yáng)性，而注意由于血小板粘附在blasts上造成的假陽(yáng)性，可以用流式雙色分析在EDTA存在(cúnzài)下，測(cè)pⅡb/Ⅲa與CD34以減少激活血小板的粘附。第二十三頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt

急性(jíxìng)淋巴細(xì)胞白血病ALL是兒童中最常見(jiàn)的惡性腫瘤，約占全部腫瘤的25％，在成人，ALL約占急性白血病的25％，我們將ALL分為(fēnwéi)B祖細(xì)胞型，CD10＋或CD10－，前B細(xì)胞型，B細(xì)胞型，T細(xì)胞型第二十四頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選pptB祖細(xì)胞型ALL：在幼兒約占ALL的65％～70％，青少年為55％～60，人為50％。在兒童，約90％病例CD10＋，在幼兒只有少于50％病例CD10＋，blasts一般FSC、SSC很少，是FAB標(biāo)準(zhǔn)的L1或L2，一般TdT(+)HLA-DR(+)，CD19(+)，此型又分為2個(gè)亞型，CD10＋和CD10－，前者預(yù)后好，多數(shù)病例CD24＋，CD34＋，CD20表達(dá)隨成熟度增加(zēngjiā)而增加(zēngjiā)，B祖細(xì)胞被定義為sIg-。第二十五頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt前B細(xì)胞型ALL：此亞型約占兒童ALL的25％，細(xì)胞一般為CD19＋，CD24，HLA－DR＋，胞漿CD22＋，CD10＋，TdT隨CD20變化，CD34多為陰性，前B亞型被認(rèn)為(rènwéi)比B祖型預(yù)后更差，這與t(1；19)出現(xiàn)相關(guān)并由此產(chǎn)生E2A－PBX1融合蛋白，它的表型為CD19＋、CD10＋、CD9＋，不同程度CD20表達(dá)，CD34－，確認(rèn)此表型有助于診斷基因上不確定的病例。第二十六頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選pptB細(xì)胞型ALL：成熟B細(xì)胞型ALL約占ALL2％～5％，B細(xì)胞型ALL較之B祖細(xì)胞型ALL有更大的FSC和SSC，在CD45－SSC圖上出現(xiàn)在淋巴和單核細(xì)胞區(qū)域，即FAB標(biāo)準(zhǔn)的L3，表型為CD19、CD20、CD22、CD24且sIg（多數(shù)(duōshù)為IGM）多數(shù)(duōshù)病例CD10＋。但成熟抗原及sIg使之區(qū)別于更早的B系A(chǔ)LL，極少數(shù)成熟B細(xì)胞ALL無(wú)FAB－L3形態(tài)。第二十七頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選pptT-ALL：多數(shù)病例有大的FSC、SSC，在CD45－SSC圖上可能出現(xiàn)在淋系未成熟細(xì)胞和髓系未成熟細(xì)胞或單核細(xì)胞區(qū)，多數(shù)表現(xiàn)為胸腺亞型，最常見(jiàn)亞型為皮質(zhì)晚期表達(dá)，CD1、CD2、CD5、CD7、CD4/CD8雙陽(yáng)與極少膜表面CD3、TdT多為陽(yáng)性。另一常見(jiàn)亞型為皮質(zhì)早期表達(dá)CD2、CD5、CD7、TdT強(qiáng)表達(dá)。髓質(zhì)期亞型表達(dá)CD2、CD5、CD7、與CD3＋CD4＋/CD3+CD8+,很少見(jiàn)TdT表達(dá)。前T細(xì)胞亞型，表達(dá)CD7胞漿CD3＋且無(wú)其它(qítā)T細(xì)胞抗原，T細(xì)胞腫瘤的特征是喪失T細(xì)胞抗原而表現(xiàn)出其它(qítā)異常抗原組合。第二十八頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt雜合型白血?。弘S著流式技術(shù)的廣泛應(yīng)用，我們發(fā)現(xiàn)(fāxiàn)許多病例并不能嚴(yán)格劃分為淋系或髓系，真正的雙表型病人多為t(9；22)或（11q23），現(xiàn)在雜合型的誤診率很高。最常導(dǎo)致誤診的原因是在分析中未能排除非白細(xì)胞，過(guò)度強(qiáng)調(diào)弱的非特異性結(jié)合，忽略了某些抗體缺乏系特異性，最重要的系特異性抗原在B系、T系、髓系分別為CD22、CD3和MPO。第二十九頁(yè)，共三十三頁(yè)。精選ppt

慢性(mànxìng)粒細(xì)胞白血病由于慢性期顯著的細(xì)胞分化，在CD45－SSC圖上除了髓系細(xì)胞占主導(dǎo)外，只顯示一個(gè)正常骨髓像，CML可確診，CML起病與發(fā)展相對(duì)緩慢，慢性期的持續(xù)1年左右最終(zuìzhōnɡ)發(fā)展為加速期和急變期。流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)急變期亞型的診斷具有極高價(jià)值。直接影響到治療效果。急變期CML主要表現(xiàn)為髓系，偶為淋系，髓性急變可表現(xiàn)出多種形態(tài)包括未分化細(xì)胞。淋性急變具典型形態(tài)特征，為CD10