實(shí)驗(yàn)植物的組織培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)11植物的組織培養(yǎng)本文檔共22頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分大多綠色開花植物靠種子繁殖（有性繁殖），不用種子繁殖（無性繁殖）的方法有：組織培養(yǎng)營養(yǎng)繁殖扦插嫁接壓條

無性繁殖本文檔共22頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分組織培養(yǎng)就是取一部分植物組織（外植體），如葉、芽、莖、根、花瓣或花粉等，在無菌條件下接種在三角瓶中的瓊脂培養(yǎng)基上，給予一定的溫度和光照，使之產(chǎn)生愈傷組織，或進(jìn)而生根發(fā)芽。一、組織培養(yǎng)概述1.概念本文檔共22頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分2、植物組織培養(yǎng)的原理是什么？植物細(xì)胞具有全能性，即生物體的細(xì)胞，具有使后代細(xì)胞形成完整個體的能力。3.植物組織培養(yǎng)的基本過程:離體的植物器官、組織、細(xì)胞脫分化愈傷組織再分化根芽植物體生長發(fā)育本文檔共22頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分植物組織培養(yǎng)過程示意圖煙草植株根細(xì)胞培養(yǎng)形成愈傷組織發(fā)育成幼胚長成幼苗成熟植株本文檔共22頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分4.植物組織培養(yǎng)條件:含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基、一定的溫度、空氣、無菌環(huán)境、適合的PH、適時光照等。細(xì)胞分裂素多，生長素少誘導(dǎo)芽的生成細(xì)胞分裂素少，生長素多誘導(dǎo)根的生成細(xì)胞分裂素適中，生長素少愈傷組織只生長不分化細(xì)胞分裂素生長素比例合適誘導(dǎo)根芽的分化本文檔共22頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分二、實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基配制外植體的選取消毒接種培養(yǎng)移栽和栽培等。本文檔共22頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分1、實(shí)驗(yàn)材料（1）MS培養(yǎng)基：大量元素：C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg微量元素：Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、I、Co有機(jī)成分：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等（3）發(fā)芽培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基+BA+NAA+瓊脂+蒸餾水（2）萘乙酸NAA、芐基腺嘌呤BA（4）生根培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基+NAA+瓊脂+蒸餾水本文檔共22頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分2、步驟1.取外植體超凈臺上將無菌幼苗(無菌水沖洗)切段，每段至少1張葉片2.生芽培養(yǎng)生芽培養(yǎng)基中，放入1-3段切段（莖一部分插入培養(yǎng)基），蓋上封口膜。日光燈下保持18~25℃的溫度培養(yǎng)，每天光照不少于14.5h。3.生根培養(yǎng)2~3周后，將叢狀苗在無菌條件下轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，在上述條件下繼續(xù)培養(yǎng)。本文檔共22頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分5.定植將苗轉(zhuǎn)移到土中培養(yǎng)。4.適應(yīng)鍛煉將苗轉(zhuǎn)移至草炭土或蛭石中繼續(xù)生長，用玻璃罩或塑料布保持80％以上的濕度，2~3天后打開減低濕度進(jìn)行鍛煉，直到將罩全部打開處于自然濕度下為止。本文檔共22頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分幼苗外植體叢芽生根鍛苗消毒接種愈傷組織胚狀體定植

植株生根培養(yǎng)生芽培養(yǎng)本文檔共22頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分1.不同植物、不同組織的生根和生芽是否都可使用與本實(shí)驗(yàn)相同的生長素和細(xì)胞分裂素濃度？2.本實(shí)驗(yàn)用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，為什么？不相同天然激素都有相應(yīng)的使之分解的酶，所以使用時間短，而人工合成的，沒有分解酶，作用時間長，效果顯著。課后題本文檔共22頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營養(yǎng)，無機(jī)鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。4.同LB培養(yǎng)基相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？3.如果在自然界取植物樣本進(jìn)行組織培養(yǎng)，你認(rèn)為應(yīng)采取什么措施保證樣本不被污染?（1）操作環(huán)境清潔（2）植物樣本的潔凈（3）操作敏捷迅速本文檔共22頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分本文檔共22頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分脫分化：將來自已分化組織的已停止分裂的細(xì)胞從植物體部分的抑制性影響下解脫出來，恢復(fù)細(xì)胞的分裂活性。再分化:經(jīng)脫分化的組織或細(xì)胞在一定的培養(yǎng)條件下可有轉(zhuǎn)變?yōu)楦鞣N不同細(xì)胞類型的能力。愈傷組織本文檔共22頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分1、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時帶入4、環(huán)境不清潔污染途徑本文檔共22頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分污染的預(yù)防措施（一）防止外植體帶菌（二）保證培養(yǎng)基及接種器具徹底滅菌（三）操作人員嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程（四）保證接種與培養(yǎng)環(huán)境清潔本文檔共22頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分本文檔共22頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分思考：以下培養(yǎng)基出現(xiàn)的現(xiàn)象反應(yīng)了什么問題？生長素/細(xì)胞分裂素高利于根和愈傷組織的形成適中利于根芽的分化本文檔共22頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精燈——灼燒）4、無菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時間。在整個操作過程中，是如何來實(shí)現(xiàn)無菌環(huán)境的？本文檔共22頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期二\1點(diǎn)22分植物全能性的表