孕產(chǎn)婦及所生兒童艾滋病檢測章三英

全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范National

Guideline

for

Detection

ofHIV/AIDS（2009年版）檢測依據(jù)：2014年修訂版還沒正式推出本文檔共55頁；當前第1頁；編輯于星期一\14點19分樣本的采集和處理1.對從其他實驗室送的樣品，注意檢查并注明其送檢單與標本記錄的符號.樣品管遺漏.破損情況。如有遺漏要把殘留的樣品移出，并對管壁和盛器消毒。要檢查并記錄樣品的質(zhì)量有無溶血，脂血，細菌感染等情況。2.對實驗室自己采集的標本，注意是血液先自然存放1-2小時候，再用3000rpm離心15分鐘，吸出上清液備用，如要幾天內(nèi)檢查可放入2-8℃冰箱，要儲存則置于-20℃低冰箱內(nèi)。3.濾紙片的采集.用移液管從樣品管中吸取100uL抗凝全血或血漿，對準濾紙片印圈中心處蔣樣品滴在濾紙上，或者穿刺后自皮膚傷口流出的末梢血直接滴加在濾紙印圈的中心處。在室溫下自然干燥至少4小時，不要加熱或堆疊，自然干燥后放入密封袋中。本文檔共55頁；當前第2頁；編輯于星期一\14點19分

報告“HIV抗

體陽

性

”

報告“HIV抗體陰

性

”無反應提供疑似陽性咨詢進一步做補充試驗

不確定無反應兩種均無反應或原有試劑雙份進行復檢兩種均有反應

或一有反應一無反應

有反應原

有

試

劑+另

一種篩

查

試劑進

行

復

檢

提供咨詢進行核酸檢測等

其他補充試驗孕期艾滋病檢測及服務流程

孕期初次接受產(chǎn)前保健的孕婦

主動提供有關(guān)的檢測信息

采集血

樣本

，

進

行

HIV抗體

篩查試驗檢測后咨詢、指導

常規(guī)孕產(chǎn)期保健

檢測后咨詢、指導進行傳染病信息報告

提供后續(xù)干預服務流行病學史無

有進行核酸檢測或

2-4周

后隨訪

補充試驗（首選抗體補充試驗）

有反應本文檔共55頁；當前第3頁；編輯于星期一\14點19分《嬰兒艾滋病感染早期診斷工作方案》

對HIV陽性產(chǎn)婦所生兒童于出生后6周和3個月時，分別采集血標本，進行嬰兒感染早期診斷。詳見圖3嬰兒艾滋病感染早期診斷檢測及服務流程。未進行嬰兒早期診斷檢測或嬰兒早期診斷檢測結(jié)果為陰性的兒童，應于12、18月齡進行艾滋病抗體篩查及必要的補充試驗，以明確艾滋病感染狀態(tài)。兒童抗體檢測及服務流程見圖7。本文檔共55頁；當前第4頁；編輯于星期一\14點19分

提供咨詢繼續(xù)提供干預服務盡早獲得檢測結(jié)果產(chǎn)后暫時未得到補充試驗結(jié)果或

補

充試

驗

結(jié)果為

“不確

定”分娩前快速檢測結(jié)果兩種均陽性者“HIV抗體陰性

”

提供咨詢

終止干預提供咨詢終止干預提供咨詢，

進行核酸檢測等其他

補充試驗

有反應報告不確定

一有反應一無反應

檢測后咨詢，知情選擇干預措施

及時應用抗艾滋病病毒藥物；

適宜、安全的助產(chǎn)服務盡早進行補充試驗，及時獲得檢測結(jié)果

（首選抗體補充試驗）

產(chǎn)時艾滋病檢測及服務流程（適用于孕期未接受艾滋病檢測的產(chǎn)婦）

孕期未接受

HIV抗

體

檢測

的

臨

產(chǎn)產(chǎn)婦

主動提供相關(guān)檢測信息，采集血樣本

同時用兩種不同的快速檢測試劑

進行HIV抗

體

篩

查試驗

兩種均有反應或

兩種均無反應報

告

“HIV抗

體陰性”

檢測后咨詢、指導

常規(guī)助產(chǎn)及服務

“HIV抗體陽

性

”

提供咨詢，進行

傳染病信息報告繼續(xù)提供干預服務

所生新生兒特別護理、應用抗病毒藥物；喂養(yǎng)指導、

營養(yǎng)咨詢等感染婦女納入當?shù)匕滩?/p>

防治系統(tǒng)所生兒童繼續(xù)隨訪、進行

艾滋病相關(guān)檢測無反應

報告分娩前快速檢測結(jié)果為一

有反應一無反應者，

用另一種篩查試劑

再次檢測

無反應有反應本文檔共55頁；當前第5頁；編輯于星期一\14點19分艾滋病感染孕產(chǎn)婦所生兒童艾滋病抗體檢測及服務流程（圖3）

艾滋病感染產(chǎn)婦所生兒童

早期診斷檢測結(jié)果陰性；或未接受早期診斷檢測、

感染狀態(tài)不明確者

12個

月

進

行HIV抗

體篩查

試

驗

無反應用另一種篩查試劑再次檢測有反應無反應

有反應18個月時再

進行

HIV抗

體

篩

查試驗無反應有反應不確定

提供咨詢，

進行核酸

檢測等其他

補充試驗

無反應用另一種篩查試劑

有反應

再次檢測報告“HIV抗

體

陰性”

排除兒童

HIV感染

常規(guī)兒童保健隨訪兩種均無反應

原有試劑+另一

種篩

查

試

劑

進

行

復檢

或

原有試劑雙份進行復檢

兩種均有反應

或

一有反應一無反應

補充試驗

（首選抗體補充試驗）

有反應無反應

報

告

“HIV抗體

陽

性

”

診

斷

兒童

HIV感

染

進行傳染病信息報告

提供轉(zhuǎn)介服務

隨訪并監(jiān)測病情本文檔共55頁；當前第6頁；編輯于星期一\14點19分18個月以下嬰幼兒的HIV檢測診斷

母親

HIV

抗體經(jīng)胎盤進入胎兒，出生時新生兒和嬰兒早期抗體有反應，不一定是感染

出生時母親的抗體，80~90%

在生后9~12

個月消失，出生后

18

個月基本上全部消失

18

個月后兒童

HIV

仍然有反應，視為自身感染產(chǎn)生的抗體本文檔共55頁；當前第7頁；編輯于星期一\14點19分18個月以下嬰幼兒的HIV檢測診斷

檢測HIV

DNA或RNA

推薦檢測HIVDNA,

因為HIV前病毒DNA以細胞內(nèi)前病毒感染狀態(tài)存在，所以它不受母親圍產(chǎn)期抗病毒治療的影響和嬰幼兒預防性抗病毒治療的影響HIV

DNA的適宜月齡為3-6個月不得使用臍帶血.本文檔共55頁；當前第8頁；編輯于星期一\14點19分HIV/AIDS實驗室檢測

診斷性檢測初篩實驗：ELISA、化學發(fā)光（CLIA)、快速檢測（RT）

、PA等確認實驗（補充實驗）：蛋白免疫印跡試驗(WB)條帶/線性免疫試驗（RIBA/LIA）嬰兒診斷：HIV

DNA

病情判定檢測T細胞亞群檢測：流式細胞儀技術(shù)HIV

RNA檢測：病毒載量

HIV耐藥檢測表型耐藥：細胞培養(yǎng)技術(shù)基因型耐藥：序列測定，雜交技術(shù)本文檔共55頁；當前第9頁；編輯于星期一\14點19分疫膠體

金（或膠體硒）快速試驗

初篩實驗酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）化學發(fā)光快速檢測（RT）及其它檢測

(1)明膠顆粒凝集試驗(PA)

(2)免疫滲濾試驗：斑點ELISA和斑點免本文檔共55頁；當前第10頁；編輯于星期一\14點19分1.將抗原包被在固相載體上。2.如樣品中含有抗體，則結(jié)合為抗原抗體復合物。3.再加入酶標記抗原，則結(jié)合為抗原-抗體-酶標記抗原復合物。4.酶催化底物并顯色。

酶抗原酶標記

抗原抗體

抗原固相載體

雙抗原夾心法示意圖本文檔共55頁；當前第11頁；編輯于星期一\14點19分16結(jié)果判定：以梅里埃第三代ELISA（雙抗原夾心法）為例①陰性對照（NC），HIV-1陽性對照（PC1），HIV-2陽性對照（PC2）?

NC

必須＜0.25方可用，排除NC≥0.25的值，計算NC平均值。?

NC界限范圍：0.6倍NC均值＜NC＜1.4倍NC均值。②符合以下條件的實驗成立：?

兩個以上的NC可用。PC1-NC均值

≥

0.4，PC2-NC均值

≥

0.4③Cut

off值

=

陰性對照均值

+

0.100?

小于Cut

off為陰性，大于或等于Cut

off為陽性本文檔共55頁；當前第12頁；編輯于星期一\14點19分化學發(fā)光法結(jié)果判斷??S/CO

<

1.00的樣本被認定為非反應性(NR)。S/CO

≥

1.00的樣本被認定為反應性(R)。初始結(jié)果為有反應性的樣本必須經(jīng)離心后以復檢。

18本文檔共55頁；當前第13頁；編輯于星期一\14點19分19篩查實驗注意事項ELISA法1.實驗前

試劑室溫下平衡2.樣品血清、血漿分離好3.加樣避免濺出或產(chǎn)生氣泡、及時放入孵箱4.孵育

溫度、濕度及時間5.洗板

保證洗液注滿各孔，洗板針暢通6.顯色

臨用前配制、避免接觸金屬器械7.加液避免產(chǎn)生氣泡8.讀板

保證酶標板底部清潔本文檔共55頁；當前第14頁；編輯于星期一\14點19分20化學發(fā)光法血清、血漿分離好注意觀察是否有沒加上標本的（機器會有報警）本文檔共55頁；當前第15頁；編輯于星期一\14點19分21ELISA檢測的干擾因素一、內(nèi)源性物質(zhì)（1）類風濕因子（2）補體（3）嗜異性抗體（4）標本中其它成分的影響血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等，均對ELISA測定結(jié)果

有干擾作用二、外源性物質(zhì)（1）標本溶血（2）標本受細菌污染（3）標本凝集不全（4）標本管中添加物質(zhì)的影響本文檔共55頁；當前第16頁；編輯于星期一\14點19分24化學發(fā)光法檢測的干擾因素異嗜性抗體經(jīng)常接觸動物或動物血清產(chǎn)品的患者接受過小鼠單克隆抗體制劑診斷或治療的患者本文檔共55頁；當前第17頁；編輯于星期一\14點19分免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗

與斑點EIA相似，也是以硝酸纖維膜為載體。

區(qū)別在于不用酶標記抗體，而代之以紅色的膠體

金（或膠體硒）A蛋白，用滲濾法作為洗滌方法。本文檔共55頁；當前第18頁；編輯于星期一\14點19分

免疫層析法樣品墊:

加入血漿,血清或全血樣品.紅細胞在此遷移過程中被去除連接物墊:含分析特異性試劑結(jié)合的硒

標,為一種肉眼可見的紅色信號,被分析

物和硒標特異性試劑在此反應結(jié)合病人條:固定的含特異性分析試劑,任何

與硒標特異性試劑結(jié)合的分析復合物在

此被結(jié)合固定,形成三文治結(jié)合物,肉眼

可見的紅色線條說明有有反應性質(zhì)控條:固定的含捕捉硒標物的特異性

試劑,不管樣品中有無被檢測物都應出

現(xiàn)紅色線條.控制測試結(jié)果的有效性本文檔共55頁；當前第19頁；編輯于星期一\14點19分

撕下所需的測試紙條數(shù),撕下表面保護膜本文檔共55頁；當前第20頁；編輯于星期一\14點19分血清/血漿樣品加50ul樣品于樣品墊中15分鐘內(nèi)讀取結(jié)果本文檔共55頁；當前第21頁；編輯于星期一\14點19分全血樣品加50ul樣品于樣品墊中手指血方法

加一滴緩沖液靜脈血方法15分鐘內(nèi)讀取結(jié)果本文檔共55頁；當前第22頁；編輯于星期一\14點19分病人條質(zhì)控條本文檔共55頁；當前第23頁；編輯于星期一\14點19分結(jié)果報告：對呈無反應的樣品，可出具HIV抗體陰性（-）報告；對呈有反應的樣品，需要進一步做復檢試驗和確證試驗。對初篩試驗呈有反應者不能出陽性報告，可出具“HIV抗體待復檢”報告。《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009版）》本文檔共55頁；當前第24頁；編輯于星期一\14點19分HIV抗體檢測復檢試驗復檢試劑：

應使用原有試劑和另外一種不同原理（或廠家）

的試劑，或另外兩種不同原理或不同廠家的試

劑進行復檢試驗。

。

如果初篩檢測使用抗原抗體聯(lián)合試劑，則復檢必須包括一種抗原抗體聯(lián)合試劑?！度珖滩z測技術(shù)規(guī)范（2009版）》本文檔共55頁；當前第25頁；編輯于星期一\14點19分

HIV抗體檢測復檢試驗復檢結(jié)果處理：

如果兩種試劑復測均呈無反應，則報告HIV抗體陰性；。

如均呈有反應，或一無反應一有反應，需送艾滋病確認實驗

室進行確認。報告為“HIV抗體待復檢”。

HIV抗體復檢報告有固定的表格，需由1名檢驗人員和1名審核

人員簽字。

對初篩試驗呈有反應者不能出陽性報告，可

出具“HIV抗體待復檢”報告

《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009版）》本文檔共55頁；當前第26頁；編輯于星期一\14點19分樣本均有反應

一無反應一有反應送確認均無反應性

陰性報告

有反應復檢試驗

原有試劑和另外一種不同

原理（或廠家）的試劑

另外兩種不同原理或不同廠家的試劑進行復檢試驗。

篩查試劑初篩檢測

無反應陰性報告HIV抗體初篩檢測流程圖本文檔共55頁；當前第27頁；編輯于星期一\14點19分初篩試驗呈有反應性樣品的轉(zhuǎn)送：

需要核對身份，補充個人信息（如姓名和身份證號碼），必要時采集第二份血樣，持HIV抗體篩查報告，送當?shù)匕滩『Y查中心實驗室，或直接送確證實驗室復檢。

無論篩查無反應和有反應者，均需做好檢測后咨詢。本文檔共55頁；當前第28頁；編輯于星期一\14點19分HIV抗體確認試驗確認試驗的試劑：必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準、在有效期內(nèi)的試劑。確認試驗方法：

包括免疫印跡試驗（WB）、條帶免疫試驗、放射免疫沉淀試驗及免疫熒光試驗（IFA）等?！度珖滩z測技術(shù)規(guī)范（2009版）》本文檔共55頁；當前第29頁；編輯于星期一\14點19分蛋白印跡實驗（WB）

——廣泛使用的確認實驗基本原理HIV全病毒抗原經(jīng)過聚丙烯酰胺凝膠電泳,將分子量大小不等的HIV抗原蛋白帶分離開來,然后再把這些已經(jīng)分離的不同蛋白帶電轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。將此膜切割成條狀,每一條硝酸纖維素膜上均含有經(jīng)電泳分離過的HIV病毒抗原。本文檔共55頁；當前第30頁；編輯于星期一\14點19分本文檔共55頁；當前第31頁；編輯于星期一\14點19分試劑盒包括1.硝酸纖維膜（試劑膜條）2.陰性對照3.強陽性對照4.弱陽性對照5.濃縮樣品稀釋緩沖液(10×)6.濃縮洗膜緩沖液(

20×)7.酶結(jié)合物8.底物液9.封閉粉10.孵育板，11.使用手冊12.鑷子

18或36條

1管

1管

1管

1瓶

1瓶

1管

1瓶10袋

2或4塊板

1本1支本文檔共55頁；當前第32頁；編輯于星期一\14點19分原理加樣洗加酶結(jié)合物(Ab-HRP)洗加底物本文檔共55頁；當前第33頁；編輯于星期一\14點19分

HIV-1

病毒裂解蛋白

HIV-2

多肽條帶

內(nèi)對照

可選快速或過夜檢測方法本文檔共55頁；當前第34頁；編輯于星期一\14點19分其可檢測標本中針對HIV不同抗原的抗體，故被用做確認試劑。不同的研究機構(gòu)有不同的判定標準本文檔共55頁；當前第35頁；編輯于星期一\14點19分

gp140/gp105、gp36，也可為gp125/gp80、gp36

p56、p26、p16

p68、p53、p34

gp160/gp120

gp41

p55、p24、p17

（或p18）p66（或p65）、p51、

p31envgagpolHIV-2抗體特異帶HIV-1抗體特異帶本文檔共55頁；當前第36頁；編輯于星期一\14點19分WB結(jié)果判定標準無條帶或只有P17

無條帶2

ENV+GAG+POL

1

ENV

+

p24/p31

WHOFDA（USA）陰性陽性組織本文檔共55頁；當前第37頁；編輯于星期一\14點19分我國的判斷標準

HIV-1抗體陽性同時符合以下2條標準可判為HIV-1抗體陽性：①至少有2條env帶（gp41和gp160/gp120）出現(xiàn)，或至少1條env帶和p24帶同時出現(xiàn)；②符合試劑盒提供的陽性判定標準

HIV抗體不確定出現(xiàn)HIV抗體特異帶，但不足以判定陽性

HIV抗體陰性無HIV抗體特異帶出現(xiàn)《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009版）》本文檔共55頁；當前第38頁；編輯于星期一\14點19分HIV抗體確認實驗結(jié)果a

強陽性對照（HIV-1和HIV-2）b弱陽性對照（HIV-1）c陰性對照d典型的HIV-2血清陽性反應abcd

gp160

gp120

p66p55p51

gp41

p39

p31

P24

p17

血清對照HIV-2特異帶本文檔共55頁；當前第39頁；編輯于星期一\14點19分試驗中應注意的問題

1.充分浸泡

2.充分洗滌

3.顯色時間

等等本文檔共55頁；當前第40頁；編輯于星期一\14點19分HIV抗體確認實驗流程圖本文檔共55頁；當前第41頁；編輯于星期一\14點19分結(jié)果匯報

符合HIV-1抗體陽性判斷標準，報告“HIV-1抗體陽性（＋）”；

符合HIV-2抗體陽性判斷標準，報告“HIV-2抗體陽性（＋）”，

并按規(guī)定做好檢測后咨詢、保密和疫情報告工作。

符合HIV抗體陰性判斷標準，報告“HIV抗體陰性（－）”。如疑

似“窗口期”感染，建議進一步做HIV-1P24抗原檢測和HIV核酸檢

測，盡早明確診斷。

符合HIV抗體不確定判斷標準，報告“HIV抗體不確定（±）”，在備注中應注明“4周后復檢”。《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009版）》本文檔共55頁；當前第42頁；編輯于星期一\14點19分晚期病例在我院一中年男性患者，高燒1月余，肺部感染，有鵝口瘡，CD4絕對計數(shù)是6個/ul

，3代試劑篩查呈陽性，快速陽性，WB帶型為gp160，gp120，gp41?？箼C會性感染一個月后，抗體篩查陽性，快速陽性、P24抗原陽性，WB帶型gp160，gp120，gp41，p24。本文檔共55頁；當前第43頁；編輯于星期一\14點19分55嬰幼兒HIV感染核酸檢測本文檔共55頁；當前第44頁；編輯于星期一\14點19分中國嬰兒早期診斷依據(jù)

5.4嬰兒早期診斷

適用范圍未滿18個月的HIV感染產(chǎn)婦所生嬰幼兒；

母親HIV感染狀態(tài)不詳

，出現(xiàn)HIV相關(guān)臨床表

現(xiàn)，臨床懷疑HIV感染者。本文檔共55頁；當前第45頁；編輯于星期一\14點19分58HIV-1

濾紙片干血斑樣品檢測技術(shù)（Dried

Blood

Spot，

DBS）本文檔共55頁；當前第46頁；編輯于星期一\14點19分60本文檔共55頁；當前第47頁；編輯于星期一\14點19分臨床應用67

嬰兒，<18個月兒童

缺點：污染本文檔共55頁；當前第48頁；編輯于星期一\14點19分87影響病毒載量測定結(jié)果的因素本文檔共55頁；當前第49頁；編輯于星期一\14點19分88血漿和血清標本測定病毒載量應該首選血漿標本