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高效毛細(xì)管電泳在蛋白質(zhì)分析中應(yīng)用第一頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六一、概述
隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的不斷發(fā)展及各種新型蛋白質(zhì)類生化藥物的相繼問(wèn)世.傳統(tǒng)的SDS一聚丙烯酰胺電泳及常規(guī)的液相色譜技術(shù)已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能適應(yīng)大規(guī)模藥物生產(chǎn)過(guò)程分析與產(chǎn)品純度檢驗(yàn)的需要,而毛細(xì)管電泳(HPCE)技術(shù)是近年來(lái)迅速發(fā)展起來(lái)的一種新型分離、分析技術(shù)。具有高效、快速、簡(jiǎn)便、微量的優(yōu)異特點(diǎn)。該技術(shù)在生物大分子、無(wú)機(jī)離子、光學(xué)異構(gòu)體及有機(jī)藥物分離、分析方面獲得了廣泛的應(yīng)用。第二頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六分離原理電泳儀進(jìn)樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)第三頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六毛細(xì)管電泳的分離模式
毛細(xì)管電泳有多種分離模式,給樣品分離提供了不同的選擇機(jī)會(huì).根據(jù)分離原理可分為:毛細(xì)管區(qū)帶電泳CZE膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜MEKC等電聚焦CIEF、等速電泳CITP、凝膠電泳CGE毛細(xì)管電色譜CEC親和毛細(xì)管電泳ACE、免疫毛細(xì)管電泳CETA非水毛細(xì)管電泳NACE芯片電泳等第四頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六毛細(xì)管區(qū)帶電泳
capillaryzoneelectrophoresis,CZE第五頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六
帶電粒子的遷移速度=電泳和電滲流速度的矢量和正離子:兩種效應(yīng)的運(yùn)動(dòng)方向一致,在負(fù)極最先流出;中性粒子:無(wú)電泳現(xiàn)象,受電滲流影響,在陽(yáng)離子后流出;陰離子:兩種效應(yīng)的運(yùn)動(dòng)方向相反;ν電滲流>ν電泳時(shí),陰離子在負(fù)極最后流出,在這種情況下,不但可以按類分離,同種類離子由于差速遷移被相互分離。
是最基本、應(yīng)用廣的分離模式第六頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六毛細(xì)管等電聚焦電泳(CIEF,isoelectricfocusingelectrophoresis)利用特殊的一種緩沖液(兩性電解質(zhì))在凝膠(常用聚丙烯酰胺凝膠)內(nèi)制造一個(gè)pH梯度,電泳時(shí)每種蛋白質(zhì)就將遷移到等于其等電點(diǎn)(pI)的pH處(此時(shí)此蛋白質(zhì)不再帶有凈的正或負(fù)電荷),形成一個(gè)很窄的區(qū)帶,也同時(shí)達(dá)到濃縮的作用。第七頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六毛細(xì)管凝膠電泳
capillarygelelectrophoresis,CGE將聚丙烯酰胺等在毛細(xì)管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠。其具有多孔性,類似分子篩的作用,試樣分子按大小分離。能夠有效減小組分?jǐn)U散,所得峰型尖銳,分離效率高。常用于蛋白質(zhì)、DNA等的分離,是DAN排序的重要手段。特點(diǎn):抗對(duì)流性好,散熱性好,分離度極高。無(wú)膠篩分技術(shù):采用低粘度的線性聚合物溶液代替高粘度交聯(lián)聚丙烯酰胺。柱便宜、易制備。第八頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜(MECC,MEKC)
micellarelectrokineticcapillarychromatography,MEKC第九頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六緩沖溶液中加入離子型表面活性劑,其濃度達(dá)到臨界濃度,形成一疏水內(nèi)核、外部帶負(fù)電的膠束。在電場(chǎng)力的作用下,膠束在柱中移動(dòng)。中性分子在膠束相和溶液(水相)間分配,疏水性強(qiáng)的組分與膠束結(jié)合的較牢,流出時(shí)間長(zhǎng);可用來(lái)分離中性物質(zhì),擴(kuò)展了高效毛細(xì)管電泳的應(yīng)用范圍。是色譜與電泳分離模式的結(jié)合第十頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六毛細(xì)管電泳分離模式選擇根據(jù)簡(jiǎn)單通用性原則,還是以CZE、MEKC為優(yōu),分離中性離子時(shí)優(yōu)先考慮MEKC在分離生物樣品時(shí),通常需要根據(jù)分離的目的來(lái)選擇分離方式,若測(cè)定樣品的尺寸,就須選NGCE或CGE,偶可選CZE或MEKC,要測(cè)定樣品的等電點(diǎn),則應(yīng)選用CIEF,在做親和作用研究時(shí),應(yīng)首選ACE.分離蛋白質(zhì)和多肽等兩性樣品時(shí)優(yōu)先考慮CIEF分離水難溶組分時(shí),優(yōu)先考慮非水毛細(xì)管電泳形式第十一頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六CE技術(shù)的應(yīng)用
毛細(xì)管電泳技術(shù)不僅廣泛應(yīng)用于環(huán)境保護(hù)、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)衛(wèi)生、臨床檢測(cè)、司法、食品衛(wèi)生、藥品檢測(cè)、農(nóng)業(yè)化學(xué)等領(lǐng),在臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的應(yīng)用也有較多應(yīng)用第十二頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六第十三頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六CE在蛋白質(zhì)分離分析中的應(yīng)用
主要包括:肽和蛋白的鑒別分析、結(jié)構(gòu)分析、微量制備,以及蛋白的定量測(cè)定、純度檢測(cè)、非均一性檢測(cè)、穩(wěn)定性和動(dòng)力學(xué)研究。蛋白的鑒別分析通常包括對(duì)氨基酸的組成和序列、一些物化常數(shù)如分子量和等電點(diǎn)等的測(cè)定,以區(qū)分和鑒定結(jié)構(gòu)和種類不同的蛋白質(zhì)第十四頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六氨基酸與蛋白質(zhì)分析
analysisofaminoacids第十五頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六蛋白質(zhì)分析第十六頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六核酸分析及DNA排序
analysisofnucleicacidsandsequence
ofDNA重要分析手段;圖,酶解的雙螺旋DNA限制性片段的分離;第十七頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六蛋白質(zhì)的尺寸分離
蛋白質(zhì)的尺寸分離或分子量測(cè)定,是化學(xué)等研究中的重要工作,通常利用超速離心、質(zhì)譜、凝膠排斥色譜、SDS等方法完成。利用毛細(xì)管電泳有較其他方法的優(yōu)點(diǎn):
1.只需消耗納升級(jí)的樣品;
2.可在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行重復(fù)和自動(dòng)化的測(cè)定3.如果能獲得準(zhǔn)確的分子量標(biāo)準(zhǔn),可以比較準(zhǔn)確的測(cè)定未知蛋白質(zhì)的分子量;
4.利用紫外等進(jìn)行柱上檢測(cè),可以實(shí)現(xiàn)定量分析等;
第十八頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六
蛋白質(zhì)尺寸分析的關(guān)鍵,首先是篩分介質(zhì)的選擇,其次是緩沖體系的確定,此外還需需要仔細(xì)考慮進(jìn)樣、分離電壓和電泳溫度等因素。第十九頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六
常用的篩分介質(zhì)有兩大類,一是各種凝膠,應(yīng)用于CGE,適合于蛋白質(zhì)分離的凝膠有線性聚丙烯酰胺、交聯(lián)聚丙烯酰胺和瓊脂糖等。二是水溶性高分子溶液或稱非膠篩分介質(zhì),用于NGCE,最好選用紫外透明或吸收較弱的高分子,例如葡聚糖、聚乙二醇等。第二十頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六第二十一頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六第二十二頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六
蛋白質(zhì)對(duì)毛細(xì)管內(nèi)壁的吸附某種程度上限制了毛細(xì)管電泳在該領(lǐng)域的應(yīng)用。影響毛細(xì)管電泳分離蛋白質(zhì)效率及重現(xiàn)性的最主要因素是毛細(xì)管壁對(duì)蛋白質(zhì)的吸附,吸附作用的大小取決于毛細(xì)管材料、蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)、緩沖溶液的pH值等多種因素。存在的問(wèn)題第二十三頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六毛細(xì)管內(nèi)壁對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生吸附的原因
毛細(xì)管電泳中的蛋白質(zhì)吸附,可源于疏水作用、靜電作用和其它多種兩相分配機(jī)制。通常情況下堿性蛋白的靜電吸附最為突出,在常用緩沖溶液的pH下(pH=4~8),管內(nèi)壁的硅羥基發(fā)生解離,使管內(nèi)壁帶負(fù)電荷,蛋白質(zhì)在低于等電點(diǎn)時(shí)會(huì)帶上正電荷,在高于等電點(diǎn)時(shí)帶負(fù)電荷。第二十四頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六
若緩沖溶液的pH值低于蛋白質(zhì)等電點(diǎn),蛋白質(zhì)則吸附H+而帶正電荷,由于靜電相互作用,蛋白質(zhì)與管壁發(fā)生吸附當(dāng)pH值增大到接近等電點(diǎn)時(shí),蛋白質(zhì)顯中性,不帶電;pH值繼續(xù)增大(超過(guò)等電點(diǎn)),蛋白質(zhì)帶負(fù)電,此時(shí)與毛細(xì)管壁的SiO-產(chǎn)生排斥作用,不再發(fā)生吸附。第二十五頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六(a)堿性蛋白質(zhì)(pI=8)所帶電荷量隨pH的變化曲線;(b)在pH=4時(shí),堿性蛋白質(zhì)(pI=8)與毛細(xì)管壁發(fā)生吸附第二十六頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六解決辦法1、極端pH值法緩沖溶液pH值通過(guò)影響柱壁與溶質(zhì)的電荷差異,從而改變其間的相互作用。在低pH下,硅羥基主要以不帶電的質(zhì)子化形式存在,壁電荷非常小,可以減少吸附。在高pH值下,內(nèi)壁表面SiOH基大部分電離帶負(fù)電荷,與溶液中帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)產(chǎn)生庫(kù)侖排斥作用,從而有效地抑制了管壁的吸附。第二十七頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六2、添加小分子添加劑
在CE分離中,除了背景電解質(zhì)外,常常還在緩沖溶液中添加某種成分,常用添加劑有:表面活性劑,如季銨鹽和氟化的陽(yáng)離子表面活性劑;中性鹽,如磷酸鹽、硫酸鉀等;胺類,三乙醇胺、三乙胺、N-乙基二乙醇胺、N,N,N,N-四甲基-1,3丁二胺(TMBD)等;有機(jī)溶劑,包括醇類、乙腈、丙酮、四氫呋喃、二甲亞砜等。上述兩種方法只能從一定程度上降低蛋白質(zhì)吸附,而且pH值過(guò)高(或過(guò)低),小分子添加劑濃度過(guò)大都會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)聚集和變性。第二十八頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六3、聚合物涂覆毛細(xì)管內(nèi)壁抑制蛋白質(zhì)吸附化學(xué)鍵合涂層的涂覆過(guò)程如圖2所示,一般分為兩大步:首先,硅烷化試劑與毛細(xì)管內(nèi)壁的SiOH反應(yīng)生成Si-O-Si結(jié)構(gòu)固定在管壁內(nèi)表面;然后,通過(guò)硅烷化試劑末端雙鍵與適宜單體共聚生成聚合物覆蓋在毛細(xì)管內(nèi)表面,形成永久涂層。
第二十九頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六常見(jiàn)的化學(xué)鍵合聚合物涂層有以下幾種:
聚丙烯酰胺(PAA)
聚乙烯醇(PVA)
聚乙二醇(PEG)
聚N,N-二甲基丙烯酰胺(PDMA)
通過(guò)共價(jià)鍵與毛細(xì)管壁結(jié)合的涂層壽命長(zhǎng),穩(wěn)定性好,分離效率高,已在毛細(xì)管電泳中獲得廣泛應(yīng)用,但是化學(xué)鍵合的過(guò)程中涉及毛細(xì)管硅烷化和引發(fā)單體聚合兩步反應(yīng),一方面受兩步反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率影響,Si-OH很難被完全屏蔽;另一方面,毛細(xì)管內(nèi)的聚合反應(yīng)很難控制,容易造成涂層的不均一性、不規(guī)整性,甚至阻塞毛細(xì)管。第三十頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六化學(xué)鍵合的交聯(lián)的PVA涂層對(duì)4種堿性蛋白質(zhì)實(shí)現(xiàn)第2次和第902次分離的電泳圖譜樣品濃度:50ug/mL的(1)細(xì)胞色素C,(2)溶解酵素,(3)胰蛋白酶原,(4)胰凝乳蛋白酶原。分離條件:毛細(xì)管,內(nèi)徑50μm,總長(zhǎng)48cm(有效長(zhǎng)度40cm);注入,3kV,5s;緩沖液,40mM磷酸鈉;分離,309V/cm第三十一頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六物理吸附的毛細(xì)管涂層通過(guò)物理作用吸附在毛細(xì)管壁上的聚合物涂層相對(duì)于化學(xué)鍵合涂層優(yōu)勢(shì)在于:(1)涂層制備過(guò)程簡(jiǎn)單易操作,涂覆過(guò)程可一步完成,比化學(xué)鍵合的涂層省去了硅烷化步驟,聚合物直接通過(guò)物理作用(包括氫鍵,靜電引力和疏水基團(tuán)間的相互作用)吸附在管壁上;(2)涂層可再生。這種涂層可以是中性的、帶正電荷的、也可以是吸附在帶正電的聚合物涂層表面轉(zhuǎn)而帶負(fù)電荷的。第三十二頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六無(wú)膠篩分毛細(xì)管電泳(non-gelsievingcapillaryelectrophoresis,NGCE)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種用于檢測(cè)核酸的新方法,與毛細(xì)管凝膠電泳相比,具有向毛細(xì)管內(nèi)注入篩分介質(zhì)方便,易于沖洗,毛細(xì)管可反復(fù)使用,以及便于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。NGCE一般以非交聯(lián)的高分子水溶性化合物作篩分介質(zhì),常用的有水溶性纖維素衍生物、聚吡咯烷酮、線性聚丙烯酰胺等。可采用非涂層管,以大分子聚乙二醇為篩分介質(zhì),以NGCE模式進(jìn)行蛋白質(zhì)樣品的檢測(cè)。第三十三頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六三、儀器設(shè)備1、高壓電源系列CL101系列包含:CL101A智能高壓電源(正)
CL101B智能高壓電源(負(fù))
CL101C智能高壓電源(正負(fù))
CL101D多路智能高壓電源
CL101E高壓電源(恒流、正)
CL101F高壓電源(恒流、負(fù))第三十四頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六技術(shù)指標(biāo)輸出電壓:0~30KV,連續(xù)可調(diào)(正電源)(標(biāo)配)輸出電壓:0~-30KV,連續(xù)可調(diào)(負(fù)電源)(選配)輸出電流范圍:0~999μA電源調(diào)節(jié)率:電源電壓變化±10%,輸出電壓變化0.01%負(fù)載調(diào)節(jié):10V/100A紋波:輸出電壓的0.1%P-P電壓示值誤差:≤2.0%電流示值誤差:≤3.0%穩(wěn)定度變化:≤1.5%第三十五頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六CL101A智能高壓電源正CL101B智能高壓電源負(fù)第三十六頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六CL101C智能高壓電源正負(fù)CL101E高壓電源正第三十七頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六2、CL1020高效毛細(xì)管電泳儀紫外檢測(cè)器
包含:國(guó)產(chǎn)紫外檢測(cè)器電泳機(jī)箱高壓電源工作站紫外檢測(cè)池第三十八頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六工作原理
紫外檢測(cè)原理基于被測(cè)組分和背景電解質(zhì)的吸光度不同,當(dāng)被測(cè)組分通過(guò)檢測(cè)窗時(shí),吸光度發(fā)生的變化服從朗伯-比爾定律,即在一定的實(shí)驗(yàn)條件下,吸光度與被測(cè)組分的濃度成正比。
第三十九頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六技術(shù)指標(biāo)光路系統(tǒng):進(jìn)口設(shè)計(jì)衍射光柵單色儀,進(jìn)口光電池?zé)粼矗喝毡緸I松L6302氘燈波長(zhǎng)范圍:190~700nm,連續(xù)可調(diào)波長(zhǎng)精度:±2nm;波長(zhǎng)重復(fù)性:±0.4nm噪聲:±1.5×10-5AU在254nm,t=1s漂移:±4×10-4AU/h在254nm,t=1s檢測(cè)限:≤1×10-6g/ml(對(duì)氨基苯甲酸)定性重復(fù)性:RSD≤1.3%;定量重復(fù)性:RSD≤3.0%第四十頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六儀器特點(diǎn)
分離效率高,分析速度快,檢測(cè)靈敏度高試劑用量少,樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單微處理器控制,波長(zhǎng)重復(fù)性高,檢測(cè)范圍寬可變波長(zhǎng)選擇,190~700nm連續(xù)可調(diào)液晶屏幕顯示,輕觸面板,程控找波長(zhǎng),自動(dòng)調(diào)零獨(dú)特的氘燈溫度控制方式,氘燈使用壽命可達(dá)2500小時(shí)進(jìn)樣方式:電進(jìn)樣0~30KV可調(diào),壓差進(jìn)樣130~230mm可調(diào)沖洗方式:彈簧加壓沖洗第四十一頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六第四十二頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六3、CL1030高效毛細(xì)管電泳儀紫外檢測(cè)器包含:諾爾紫外檢測(cè)器電泳機(jī)箱高壓電源工作站諾爾紫外檢測(cè)池第四十三頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六技術(shù)指標(biāo)
進(jìn)口德國(guó)諾爾(Knauer)紫外檢測(cè)器光路系統(tǒng):衍射光柵單色儀,光電二極管燈源:氘燈(標(biāo)準(zhǔn)),鎢鹵燈(選配)波長(zhǎng)范圍:190~740nm,連續(xù)可調(diào)邊緣濾波:370nm波長(zhǎng)精度:±2nm時(shí)間常數(shù):0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/5.0/10.0s掃描速度:全程范圍掃描速度:100nm/s模擬輸出:±1V自動(dòng)調(diào)零:全量程GLP功能:詳細(xì)報(bào)告,點(diǎn)燈時(shí)間和點(diǎn)燈次數(shù)噪聲:±1.5×10-5AU在254nm,t=1s基線漂移:±4×10-4AU/h在254nm,t=1s檢測(cè)限:≤1×10-6g/ml(對(duì)氨基苯甲酸)定性重復(fù)性:RSD≤1.3%;定量重復(fù)性:RSD≤3.0%第四十四頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六4、CL3020高效毛細(xì)管電泳液相色譜一體機(jī)
包括:國(guó)產(chǎn)紫外檢測(cè)器平流泵高壓電源進(jìn)樣閥色譜柱毛細(xì)管電泳檢測(cè)池液相色譜檢測(cè)池第四十五頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六性能介紹CL3020高效毛細(xì)管電泳液相色譜一體機(jī)既具有高效液相色譜的功能,既具有高效毛細(xì)管電泳儀的所有功能,更換液相的流通池又可以做液相色譜分析。采用的是溫分檢測(cè)器,溫分平流泵等梯度高壓輸液系統(tǒng)。此款儀器是為廣大用戶提供最優(yōu)性價(jià)比的分析儀器。在生物學(xué)、藥物學(xué)、食品科學(xué)、化學(xué)化工、農(nóng)業(yè)、刑偵和環(huán)保等方面具有廣泛的應(yīng)用前景。
第四十六頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六技術(shù)指標(biāo)CL3020高壓輸液泵泵壓力范圍:0.00~42Mpa流量范圍:0.01~10ml/min(分析型)流量精度:<3μl(0.01ml/min~0.1ml/min)
<1%(0.5ml/min~10ml/min)流量穩(wěn)定度:±0.3%第四十七頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六
光路系統(tǒng):衍射光柵單色儀,光電二極管波長(zhǎng)范圍:190~700nm,連續(xù)可調(diào)燈源:日本濱松L6302氘燈波長(zhǎng)精度:±2nm;波長(zhǎng)重復(fù)性:±1nm衰減范圍:0.002~2AU/mv10檔噪音:±1.5×10-5AU;基線漂移:±4×10-4AU/h檢測(cè)限:≤1×10-6g/ml(對(duì)氨基苯甲酸,毛細(xì)管電泳)≤2×10-8g/ml(萘的甲醇檢出量,液相色譜)定量重復(fù)性:RSD≤3.0%(毛細(xì)管電泳)檢測(cè)池體積:4.5μl(液相檢測(cè)池)CL3020紫外檢測(cè)器第四十八頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六進(jìn)口馬達(dá),進(jìn)口驅(qū)動(dòng)器,細(xì)分兩萬(wàn)步,無(wú)機(jī)械噪聲,確保精度顯示方式:液晶屏幕顯示,輕觸面板,程控找波長(zhǎng),自動(dòng)調(diào)零單柱塞往復(fù)泵,獨(dú)特的單向閥設(shè)計(jì),流動(dòng)相無(wú)須脫氣,進(jìn)口密封系統(tǒng),耐高壓能力強(qiáng)進(jìn)口緩沖器,緩沖能力強(qiáng),使脈動(dòng)最小顯示模式:實(shí)際壓力顯示,流量設(shè)置,壓力上下限設(shè)置安全控制:壓力上下限控制,蜂鳴報(bào)警,自動(dòng)停機(jī)儀器特點(diǎn)第四十九頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六全進(jìn)口液路管,簡(jiǎn)單液路連接可更換流通池,使之適用于分析型高效液相色譜和高效毛細(xì)管電泳分離系統(tǒng)燈源:日本濱松L6302氘燈微處理器控制,波長(zhǎng)重復(fù)性高獨(dú)特的控制氘燈溫度,啟輝電壓氘燈的使用壽命可達(dá)2500小時(shí)專利的反壓器設(shè)計(jì),使氣泡不易進(jìn)入流通池尺寸與重量:440×420×400(W×D×H)35kg第五十頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六毛細(xì)管:50μm(i.d)×50cm,有效長(zhǎng)度38cm,緩沖溶液:60mmol/L的檸檬酸緩沖溶液工作電壓:15KV;高差進(jìn)樣:10厘米20s;檢測(cè)波長(zhǎng):230nm;B瘦肉精HPLC色譜圖A瘦肉精HPCE色譜圖流動(dòng)相:甲醇:水:磷酸:三乙胺=40:60:0.2:0.2流速:0.8ml/minC18柱:25cm波長(zhǎng):220nm第五十一頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六5、CL3020高效毛細(xì)管電泳液相色譜一體機(jī)包括:溫分紫外檢測(cè)器溫分三元低壓梯度泵高壓電源進(jìn)樣閥色譜柱毛細(xì)管電泳檢測(cè)池液相色譜檢測(cè)池第五十二頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六性能介紹
毛細(xì)管電泳與液相色譜相比具有更加高效、快速、微量、經(jīng)濟(jì)等幾大特點(diǎn),是當(dāng)代分離科學(xué)的最新成就。尤其在多肽、蛋白質(zhì)、核酸等方面的分離顯示出優(yōu)越性能。CL3030高效毛細(xì)管電泳液相色譜一體機(jī)則集成高效液相色譜和高效毛細(xì)管電泳儀的所有功能,紫外檢測(cè)器采用的是溫分紫外檢測(cè)器,液相輸液泵可以按照用戶的要求配置二元或三元梯度系統(tǒng)。第五十三頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六技術(shù)指標(biāo)CL3030高壓輸液泵泵壓力范圍:0.00~42Mpa流量范圍:0.01~15ml/min(分析型)流量精度:<3μl(0.01ml/min~0.1ml/min)
<1%(0.5ml/min~9.99ml/min)B液%精度:±0.5%ABS第五十四頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六紫外檢測(cè)器
光路系統(tǒng):衍射光柵單色儀,光電二極管波長(zhǎng)范圍:190~700nm,連續(xù)可調(diào)波長(zhǎng)精度:±2nm;波長(zhǎng)重復(fù)性:±1nm衰減范圍:0.002~2AU/mv10檔噪音:±1.5×10-5AU;基線漂移:±4×10-4AU/h檢測(cè)限:≤1×10-6g/ml(對(duì)氨基苯甲酸,HPCE)≤2×10-8g/ml(萘的甲醇檢出量,HPLC)定量重復(fù)性:RSD≤3.0%(HPCE)檢測(cè)池體積:4.5μl(HPLC)第五十五頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六1、安賽蜜2、糖精鈉3、苯甲酸4、山梨酸甲醇:0.02M乙酸銨=35:65的溶液做流動(dòng)相;流速0.5ml/min,波長(zhǎng)230nm,柱子25cmC-18色譜柱。1、山梨酸2、苯甲酸3、糖精鈉4、安賽蜜毛細(xì)管:50μm(i.d)×50cm,有效長(zhǎng)度38cm,緩沖溶液:30mmol/L的硼砂溶液;工作電壓:25KV;高差進(jìn)樣:10厘米20s;檢測(cè)波長(zhǎng):230nm;A防腐劑HPCE色譜圖B防腐劑HPLC色譜圖第五十六頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六蛋白質(zhì)的分離儀器:WatersQuanta4000CE檢測(cè)器:UV--214nm毛細(xì)管:75pmI.D.×60cm,分離長(zhǎng)度52cm內(nèi)壁修飾:無(wú)進(jìn)樣:虹吸30s分離模式:FSCE電場(chǎng)強(qiáng)度:V/cm電壓:12kV電流:uA溫度:室溫載體電解質(zhì)溶液:33mmol/L磷酸鹽pH2.0第五十七頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于2023年,星期六pl點(diǎn)以上蛋白質(zhì)的分離
儀器:CE檢測(cè)器:UV毛細(xì)管:52μm×101cm,分離長(zhǎng)度55cm內(nèi)壁修飾:無(wú)進(jìn)樣:分離模式:FSCE電場(chǎng)強(qiáng)度:V/cm電壓:30kV電流:uA溫度:室溫載體電解質(zhì)溶液:20mmol/L硼酸鹽pH8.25第五十八頁(yè),共六十四頁(yè),編輯于202
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