藥典微生物檢驗(yàn)方法

PAGEPAGE10附錄ⅪJ（第二次公示稿）的方法。檢查項(xiàng)目包括細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查。微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000100菌的測(cè)試方法》的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。及對(duì)微生物的生長(zhǎng)和存活無(wú)影響無(wú)毒性。除另有規(guī)定外，本檢查法中細(xì)菌及控制菌培養(yǎng)溫度為30～35℃；霉菌、酵23～28℃35～37℃。裝單位報(bào)告。檢驗(yàn)量檢驗(yàn)量即一次試驗(yàn)所用的供試品量（g、mlcm2。量應(yīng)10g10ml30g30ml。檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)從2個(gè)以上最小包裝單位中抽取供試品，膜劑還不得少于4片。（兩個(gè)以上最小包裝單位的3倍量供試品。供試液的制備制備若需用水浴加溫時(shí)，溫度不應(yīng)超過(guò)45℃。供試液從制備至加入檢驗(yàn)用培養(yǎng)11.液體供試品取供試品10ml，加pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，作為1∶10的供試液。油劑可加入適量的無(wú)菌聚山梨酯80使供試品分散均勻。水溶性液體制劑也可用混合的供試品原液作為供試液。2.固體、半固體或黏稠性供試品并置水浴中適當(dāng)加溫使供試品分散均勻。3.需用特殊供試液制備方法的供試品(1)非水溶性供試品15（5ml（45℃5g80、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80無(wú)菌混合物的燒杯中，用無(wú)菌玻棒攪100ml，邊加邊1∶20取供試品5～101∶10(2)膜劑供試品100cm2100mlpH7.0100ml（必要時(shí)可增加稀釋液1∶10(3)腸溶及結(jié)腸溶制劑供試品1∶10(4)氣霧劑、噴霧劑供試品釋出。用無(wú)菌注射器吸出全部藥液，加至適量的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（若含非水溶性成分，加適量的無(wú)菌聚山梨酯80）中，混勻，取相當(dāng)于10g10ml1∶10(5)貼膏劑供試品（80）的稀釋劑中，用力振蕩至少30分鐘，或以其他方法制備成供試液。(5)(6)具抑菌活性的供試品性后，再依法檢查。常用的方法如下。①勻，凝固，培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。每1ml供試液所注的平皿中生長(zhǎng)的菌數(shù)之和即為1ml1ml菌檢查時(shí)，可加大增菌培養(yǎng)基的用量。有沉淀，先以50053分鐘，取全部上清液再離心，棄去上清液，留2ml，加稀釋液補(bǔ)至原量。用于細(xì)菌檢查。④中和法凡含汞、砷或防腐劑等具有抑菌作用的供試品，可用適宜的中和細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查基、由脫水培養(yǎng)基或按培養(yǎng)基處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)檢查。菌種試驗(yàn)用菌株的傳代次數(shù)不得超過(guò)5（從菌種保存中心獲得的冷凍干驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。大腸埃希菌（Escherichiacoli〔CMCC（B）44102〕金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus〔CMCC（B）26003枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis〔CMCC（B）63501〕白色念珠菌（Candidaalbicans〔CMCC（F）98001黑曲霉（Aspergillusniger〔CMCC（F）98003〕至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18～24小時(shí)；接種白色念珠菌的24～485～73～800.9%1ml50～100cfu用。黑曲霉可制成穩(wěn)定的孢子懸液保存在2～8℃，在驗(yàn)證過(guò)的貯存期內(nèi)替代對(duì)應(yīng)量的新鮮孢子懸液使用。50～100cfu，230～35℃培養(yǎng)4850～100cfu，分別注入無(wú)菌平皿中，立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備27250～100cfu，2被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。結(jié)果判定被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)相比大查符合規(guī)定。計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證藥產(chǎn)品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)的測(cè)定。若藥產(chǎn)證。求進(jìn)行。對(duì)各試驗(yàn)菌的回收率應(yīng)逐一進(jìn)行驗(yàn)證。菌種驗(yàn)證試驗(yàn)所用的菌株傳代次數(shù)不得超過(guò)5（從菌種保存中心獲得的0，并采用適宜的菌種保藏技術(shù)，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。大腸埃希菌（Escherichiacoli〔CMCC（B）44102〕金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus〔CMCC（B）26003草芽孢桿菌（Bacillussubtilis〔CMCC（B）63501〕白色念珠菌（Candidaalbicans〔CMCC（F）98001曲霉（Aspergillusniger〔CMCC（F）98003〕營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18～24小時(shí)；接種白色念珠菌的新24～485～73～無(wú)菌棉花或紗布能過(guò)濾菌絲的無(wú)菌毛細(xì)吸管）至無(wú)菌試管內(nèi)，用0.9%無(wú)菌氯化1ml50～100cfu菌種及菌液制備同計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查驗(yàn)證方法驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3菌每次試驗(yàn)的回收率。1ml50～100cfu驗(yàn)菌，過(guò)濾，按薄膜過(guò)濾法測(cè)定其菌數(shù)。菌液組測(cè)定所加的試驗(yàn)菌數(shù)。稀釋劑對(duì)照組若供試液制備需要分散、乳化、中和、離心或薄膜過(guò)濾1ml供試液含50～100cfu，按試驗(yàn)組的供試液制備方法和菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定其菌數(shù)。結(jié)果判斷3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中，稀釋劑對(duì)照組的菌回收率（稀釋劑對(duì)照組的平均菌落數(shù)占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）70%。若試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)的百分率）70%，照該供試液制備方法和計(jì)數(shù)法測(cè)定供試70%，應(yīng)采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過(guò)濾法、中和法（1）等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。1干擾物可選用的中和劑或滅活方法戊二醛亞硫酸氫納酚類、乙醇、吸附物稀釋法醛類稀釋法、甘氨酸、硫代硫酸鹽季銨類化合物（QACs、對(duì)羥基苯甲酸酯、卵磷脂、聚山梨酯汞類制劑亞硫酸氫納、巰基乙酸鹽、硫代硫酸鹽雙胍類化合物卵磷脂碘酒、洗必泰類聚山梨酯鹵化物硫代硫酸鹽乙二胺四乙酸（EDTA）鎂或鈣離子磺胺類對(duì)氨基苯甲酸?-內(nèi)酰胺類抗生素?-內(nèi)酰胺酶若沒(méi)有適宜的方法消除供試品中的抑菌作用，那么驗(yàn)證試驗(yàn)中微生物回收的失敗可看成是因供試品的抗菌活性引起的，同時(shí)表明該供試品不能被試驗(yàn)菌污驗(yàn)結(jié)果判斷的前提下，應(yīng)采用能使微生物生長(zhǎng)的更高稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行方法驗(yàn)行供試品檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)方法若還存在一株或多株試驗(yàn)菌的回收率達(dá)供試品檢查法品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌菌數(shù)的測(cè)定。按計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證試驗(yàn)確認(rèn)的程序進(jìn)行稀釋1∶101∶1021∶103等稀釋級(jí)的供試液。1.平皿法2～315～20ml45℃的溶化的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂22483，逐日點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)，一4837257255～715，1粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基測(cè)定酵母菌數(shù)，合并計(jì)數(shù)。菌數(shù)報(bào)告規(guī)則細(xì)菌、酵母菌宜選取細(xì)菌、酵母菌平均菌落數(shù)在30～300之300cfu、霉菌宜選取平均菌落30～100100cfu的稀釋級(jí)，作取兩位有效數(shù)字）的依據(jù)。以最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值1g、1mL10cm2供試品中所含的菌數(shù)。稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù)。），應(yīng)查明原因再行檢查，必要時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法的重新驗(yàn)證。當(dāng)各稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)均小于30，以最低稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)乘以1＜12.薄膜過(guò)濾法100ml，1000ml每片濾膜的總過(guò)濾量不宜過(guò)大，以避免濾膜上的微生物受損傷。1g、1ml10cm2供試品的供試液，加至適量的稀釋劑1ml，pH7.0面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)。每種培養(yǎng)基至少制備一張濾膜。貼膏劑應(yīng)采用薄膜過(guò)濾法進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)。陰性對(duì)照試驗(yàn)取試驗(yàn)用的稀釋液1ml照。陰性對(duì)照不得有菌生長(zhǎng)。培養(yǎng)和計(jì)數(shù) 和計(jì)數(shù)方法同平皿法每片濾膜上的菌落數(shù)應(yīng)不超過(guò)100個(gè)。菌數(shù)報(bào)告規(guī)則1g、1ml10cm2供試品的菌落數(shù)報(bào)告菌數(shù)；若濾膜上無(wú)菌落生長(zhǎng)，以<1（1g、1ml2＜1控制菌檢查控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查示和抑制特性能力。菌種對(duì)試驗(yàn)菌種的要求同計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查。大腸埃希菌（Escherichiacoli〔CMCC（B）44102金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus〔CMCC（B）26003〕乙型付傷寒沙門菌（SalmonellaparatyphiB〔CMCC（B）50094銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa〔CMCC（B）10104〕生孢梭菌（Clostridiumsporogenes〔CMCC（B）64941白色念珠菌（Candidaalbicans〔CMCC（F）98001〕18～241ml10～100cfu用。適用性檢查 控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查所用的菌株及檢測(cè)項(xiàng)目見(jiàn)表2。2控制菌檢查用培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)、抑制和指示能力檢查控制菌檢查培養(yǎng)基特性試驗(yàn)菌株大腸埃希菌膽鹽乳糖培養(yǎng)基MUG曙紅亞甲藍(lán)瓊脂或麥康凱瓊脂抑制能力促生長(zhǎng)能力+指示能力促生長(zhǎng)能力+指示能力大腸埃希菌大腸埃希菌大腸埃希菌大腸菌群乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基曙紅亞甲藍(lán)瓊脂或麥康凱瓊脂抑制能力促生長(zhǎng)能力+指示能力促生長(zhǎng)能力+指示能力大腸埃希菌大腸埃希菌大腸埃希菌沙門菌營(yíng)養(yǎng)肉湯四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力促生長(zhǎng)能力乙型付傷寒沙門菌乙型付傷寒沙門膽鹽硫乳瓊脂或沙門、志賀氏屬瓊脂曙紅亞甲藍(lán)瓊脂或麥康凱瓊脂抑制能力促生長(zhǎng)能力+指示能力促生長(zhǎng)能力+指示能力菌金黃色葡萄球菌乙型付傷寒沙門菌乙型付傷寒沙門菌銅綠假單胞菌膽鹽乳糖培養(yǎng)基溴化十六烷基三甲銨瓊脂綠膿菌素測(cè)定用培養(yǎng)基抑制能力抑制能力促生長(zhǎng)能力+指示能力銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌大腸埃希菌銅綠假單胞菌金黃色葡萄球菌亞碲酸鹽肉湯培養(yǎng)基卵黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基或甘露醇鹽瓊脂抑制能力促生長(zhǎng)能力+指示能力抑制能力大腸埃希菌金黃色葡萄球菌大腸埃希菌梭菌梭菌增菌培養(yǎng)基哥倫比亞瓊脂促生長(zhǎng)能力促生長(zhǎng)能力生孢梭菌生孢梭菌白色念珠菌促生長(zhǎng)能力促生長(zhǎng)能力+指示能力念珠菌顯色培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示能力白色念珠菌抑制能力大腸埃希菌80促生長(zhǎng)能力+指示能力白色念珠菌下培養(yǎng)。與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗(yàn)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好。0.1ml（50～100cfu）分別中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最長(zhǎng)時(shí)間下培養(yǎng)，試驗(yàn)菌應(yīng)不得生長(zhǎng)。（2）應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基一致。控制菌檢查方法的驗(yàn)證可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，檢查方法應(yīng)重新驗(yàn)證。試液的制備和控制菌檢查法的規(guī)定及下列要求進(jìn)行。菌種對(duì)試驗(yàn)菌種的要求同細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證。腸埃希菌（Escherichiacoli〔CMCC（B）44102〕金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus〔CMCC（B）26003〕乙型付傷寒沙門菌（SalmonellaparatyphiB〔CMCC（B）50094綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa〔CMCC（B）10104〕生孢梭菌（Clostridiumsporogenes〔CMCC（B）64941〕物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18～24小時(shí)。用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成1ml10～100cfu菌種及菌液制備同控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查驗(yàn)證方法試驗(yàn)組入增菌培養(yǎng)基中。陰性菌對(duì)照組設(shè)立陰性菌對(duì)照組是為了驗(yàn)證該控制菌檢查方法的專陰性對(duì)照菌采用大腸埃希菌；陰性對(duì)照菌不得檢出。結(jié)果判斷陰性菌對(duì)照組不得檢出陰性對(duì)照菌。若上述試驗(yàn)組檢出試驗(yàn)菌，聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。供試品檢查法菌檢查方法的驗(yàn)證。10～100cfu，方法同供試品的控制菌檢查。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)檢出相應(yīng)的控制菌。陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。大腸埃希菌（Escherichiacoli）10ml（1g、1ml、10cm2，直接或處理后接種至適量（100ml）的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，18～244824366nmMUGMUG18～24若平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)、或生長(zhǎng)的菌落與表13所列的菌落形態(tài)特征不符，判腸埃希菌。13大腸埃希菌菌落形態(tài)特征培養(yǎng)基菌落形態(tài)曙紅亞甲藍(lán)瓊脂潤(rùn)，常有金屬光澤麥康凱瓊脂緣整齊，表面光滑，濕潤(rùn)大腸菌群（Coliform）取含適量（10ml）的膽鹽乳糖膽鹽發(fā)31∶101m（0.1g0.1ml1001m（0.01g0.01ml1∶10001m（0.001g0.001ml1膽鹽乳糖膽鹽1ml18～2418～24若平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)，或生長(zhǎng)的菌落與表24所列的菌落形態(tài)特征不符或?yàn)榉歉锾m陰性無(wú)芽孢桿菌，判該管未檢出大腸菌群；若平板上生長(zhǎng)的菌落與表24表24大腸菌群菌落形態(tài)特征培養(yǎng)基菌落形態(tài)曙紅亞甲藍(lán)瓊呈紫黑色、紫紅色、紅色或粉紅色，圓形，扁平或稍凸起，邊脂緣整齊，表面光滑，濕潤(rùn)麥康凱瓊脂鮮桃紅色或粉紅色，圓形，扁平或稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤(rùn)確證試驗(yàn)從上述分離平板上挑選4～5否則判未檢出大腸菌群。各供試品量的檢出結(jié)果數(shù)N（個(gè)/gml）0.1g0.1ml0.01g0.01ml0.001g各供試品量的檢出結(jié)果數(shù)N（個(gè)/gml）0.1g0.1ml0.01g0.01ml0.001g0.001ml+++＞103++-102＜N＜103+--10＜N＜102＜10注：+代表檢出大腸菌群；-代表未檢出大腸菌群。沙門菌（Salmonella）取供試品10g或10ml，直接或處理后接種至18～2418～24（必要時(shí)延長(zhǎng)至40～48小時(shí)。若平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)，或生長(zhǎng)的菌落不同于表46所列的特征，判供試品未檢出沙門菌。46所列的菌落形態(tài)特征相符或疑似，用接種針挑2～318～24生化試驗(yàn)和血清凝集鑒定試驗(yàn)，確認(rèn)是否為沙門菌。表46沙門菌菌落形態(tài)特征培養(yǎng)基菌落形態(tài)膽鹽硫乳瓊脂無(wú)色至淺橙色，半透明，菌落中心帶黑色或全部黑色或無(wú)黑色無(wú)色至淡紅色，半透明或不透明，菌落中心有時(shí)帶黑褐色曙紅亞甲藍(lán)瓊脂無(wú)色至淺橙色，透明或半透明，光滑濕潤(rùn)的圓形菌落麥康凱瓊脂無(wú)色至淺橙色，透明或半透明，菌落中心有時(shí)為暗色銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）10ml（相當(dāng)于1g、1ml、10cm2，直接或處理后接種至適量（100ml）18～24小時(shí)。取斜面培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭染色、鏡檢及氧化酶試驗(yàn)。片上，滴加新配制的1％二鹽酸二甲基對(duì)苯二胺試液，在30秒內(nèi)若培養(yǎng)物呈粉紅色并逐漸變?yōu)樽霞t色為氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性，否則為陰性。出銅綠假單胞菌。否則，應(yīng)進(jìn)行綠膿菌素試驗(yàn)?？?，將三氯甲烷相移至另一試管中，加入1mol/L鹽酸試液約1ml，振搖后，靜PDP菌素試驗(yàn)陰性，應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行適宜的生化鑒定試驗(yàn)，確認(rèn)是否為銅綠假單胞菌。金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）10ml（相當(dāng)于1g、1ml、10cm2，直接或處理后接種至適量（100ml）57所列特征，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌。57金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)特征培養(yǎng)基菌落形態(tài)甘露醇氯化鈉瓊脂0.7～1mm卵黃氯化鈉瓊脂1～2mm2～318～24漿凝固酶試驗(yàn)。3（1∶1）0.5ml，再分別加入可疑菌株的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物（或由營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)物制備的濃菌懸液）0.5ml、金黃色葡萄球菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物（或由營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)物制備的濃菌懸液）0.5ml、營(yíng)養(yǎng)肉湯或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液0.5ml，3，3小時(shí)后開24對(duì)照管不符合規(guī)定時(shí)，應(yīng)另制備血漿，重新試驗(yàn)。黃色葡萄球菌。梭菌（Clostridium）取供試液10ml（1g、1ml）2種至100ml的0.1%新鮮庖肉梭菌增菌培養(yǎng)基中，各培養(yǎng)基管在置厭氧條件下培的哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上，在置48～722～3別進(jìn)行革蘭染色和過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)。過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)取上述平板上的菌落，置潔凈玻片上，滴加3%過(guò)氧化氫試液，若菌落表面有氣泡產(chǎn)生，為過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)陽(yáng)性，否則為陰性。陰性，判供試品檢出梭菌，否則判供試品未檢出梭菌。白色念珠菌（Candidaalbicans）取供試液10ml（1g、1ml、10cm2）直接或處理后接種至適量（100ml）的沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)48～7224～48（72。色念珠菌。如平板上生長(zhǎng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征相符或疑似，應(yīng)挑選2～324～48（必要時(shí)延長(zhǎng)至72。若平板上無(wú)綠色或翠綠色的菌落生長(zhǎng)，判供試品未檢出白色念珠菌。若平板上生長(zhǎng)的菌落為綠色或翠綠色，挑取相符或疑似的菌落接種于1%吐24～48試驗(yàn)。芽管試驗(yàn) 挑取1%吐溫80-玉米瓊脂培養(yǎng)基上的培養(yǎng)物接種于加有一滴血35～37℃、1～3微鏡下觀察，可見(jiàn)到由孢子長(zhǎng)出短小芽管。試品未檢出白色念珠菌。結(jié)果判斷供試品檢出控制菌或其他致病菌時(shí)，按一次檢出結(jié)果為準(zhǔn)，不再?gòu)?fù)試。供試品的細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)其中任何一項(xiàng)不符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定，3試品的霉菌和酵母菌數(shù)符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定。試品不符合規(guī)定。稀釋液稀釋液配制后，應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液照無(wú)菌檢查法（H)制備。pH6.8pH7.6無(wú)菌磷酸鹽緩沖液按緩沖液（附錄ⅩⅤD）配制后，過(guò)濾，分裝，滅菌。如需要，可在上述稀釋液滅菌前或滅菌后加入表面活性劑或中和劑等。0.9%9.0g，1000ml，過(guò)濾，分裝、滅菌。培養(yǎng)基及其制備方法培養(yǎng)基可按以下處方制備，也可使用按該處方生產(chǎn)的符合要求的脫水培養(yǎng)基。配制后，應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基及改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基照無(wú)菌檢查法（H）制備。2.玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基胨5.0g玫瑰紅鈉0.0133g葡萄糖10.0g瓊脂14.0g磷酸二氫鉀1.0g水1000ml硫酸鎂0.5g玫瑰紅鈉，分裝，滅菌。3.酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（YPD）胨10.0g瓊脂14.0g酵母浸出粉5.0g水1000ml葡萄糖20.0g菌。4.膽鹽乳糖培養(yǎng)基（BL）胨20.0g磷酸二氫鉀1.3g乳糖5.0g牛膽鹽2.0g氯化鈉5.0g（或去氧膽酸鈉）（0.5g）磷酸氫二鉀4.0g水1000mlpH7.4±0.2，煮沸，濾清，加入乳糖、牛膽鹽（或去氧膽酸鈉分裝，滅菌。5.膽鹽乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基蛋白胨20.0g0.04%溴甲酚紫水溶液25ml乳糖10.0g水1000ml牛膽鹽5.0g7.4±0.2，0.04%溴甲酚紫指示液25ml，根據(jù)要求的用量分裝于含倒管的試管中。滅菌。所用倒管的規(guī)格應(yīng)保證產(chǎn)氣結(jié)果的觀察。6.曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（EMB）營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基100ml曙紅鈉指示液2ml20％乳糖溶液5ml亞甲藍(lán)指示液1.3～1.6ml37.麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（MacC）胨20.0g1%中性紅指示液3ml乳糖10.0g瓊脂14.0g牛膽鹽5.0g水1000ml氯化鈉5.0g中性指示液、牛膽鹽及瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，pH7.2±0.2，加入瓊脂，加熱溶化后，再加入其余各成分，60℃，傾注平皿。8.4-甲基傘形酮葡糖苷酸（4-methylumbelliferyl-β-D-glucuronide，MUG）培養(yǎng)基胨10.0g磷酸二氫鉀（無(wú)水）0.9g硫酸錳0.5mg磷酸氫二鈉（無(wú)水）6.2g硫酸鋅0.5mg亞硫酸鈉40mg硫酸鎂0.1g去氧膽酸鈉1.0g氯化鈉5.0gMUG75mg氯化鈣50mg水1000mlMUGpHMUG，5ml，滅菌。9.三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基（TSI）胨20.0g硫酸亞鐵0.2g牛肉浸出粉5.0g硫代硫酸鈉0.2g乳糖10.0g0.2%酚磺酞指示液12.5ml蔗糖10.0g瓊脂12.0g葡萄糖1.0g水1000ml氯化鈉5.0g勻，分裝，滅菌，制成高底層（2～3cm）短斜面。10.四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基（TTB）胨5.0g硫代硫酸鈉30.0g牛膽鹽1.0g水1000ml碳酸鈣10.0g取上述成分，混合，微溫溶解，滅菌。0.2ml0.1ml，混勻。11.沙門、志賀菌屬瓊脂培養(yǎng)基（SS）胨 5.0g硫代硫酸鈉 牛肉浸出粉5.0g中性紅指示液 乳糖 10.0g亮綠試液 牛膽鹽 8.5g瓊脂 16.0g枸櫞酸鈉8.5g水 枸櫞酸鐵銨1.0g除乳糖、中性紅指示液、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH7.2±0.1，濾過(guò)，加入瓊脂，加熱溶化后，再加入其余各成分，60℃，傾注平皿。12.膽鹽硫乳瓊脂培養(yǎng)基（DHL）胨20.0g枸櫞酸鈉1.0g牛肉浸出粉3.0g枸櫞酸鐵銨1.0g乳糖10.0g中性紅指示液3ml蔗糖10.0g瓊脂16.0g去氧膽酸鈉1.0g水1000ml硫代硫酸鈉2.3gpH60℃，傾注平皿。13.溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基胨10.0g溴化十六烷基三甲銨0.3g牛肉浸出粉3.0g瓊脂14.0g氯化鈉5.0g水1000mlpH60℃，傾注平皿。14.亞碲酸鹽肉湯培養(yǎng)基臨用前，取滅菌的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，每100ml中加入新配制的1%亞碲酸鈉15.卵黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基胨6.0g10%氯化鈉卵黃液100ml牛肉浸出粉1.8g瓊脂14.0g氯化鈉30.0g水650ml除10%氯化鈉卵黃液外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH值使滅菌60℃，10%氯化鈉卵黃液，充分振搖，傾注平皿。110%100ml16.甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基胨10.0g酚磺酞指示液2.5ml牛肉浸出粉1.0g瓊脂14.0g甘露醇10.0g水1000ml氯化鈉75.0g除甘露醇、酚磺酞指示液及瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)加入瓊脂，加熱溶化后，濾過(guò)，分裝，滅菌，冷至60℃，傾注平皿。17.乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基胨20.0g0.04%溴甲酚紫指示液25ml乳糖10.0g水1000ml除0.04%溴甲酚紫指示液外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2±0.2，加入指示液，分裝于含倒管的小試管中，每管3ml。滅菌。綠膿菌素（Pyocyanin）測(cè)定用培養(yǎng)基（PDP）胨20.0g甘油10ml氯化鎂（無(wú)水）1.4g瓊脂14.0g硫酸鉀（無(wú)水）10.0g水1000mlpH7.3±0.1，加入甘油及瓊脂，加熱溶化，混勻，分裝于試管，滅菌，置成斜面。庖肉培養(yǎng)基牛肉碎塊的制備10分鐘，小2～3（不要擠壓用。1.5%，pH7.3±0.1。滅菌。19.梭菌增菌培養(yǎng)基牛肉浸出粉10.0g鹽酸半胱氨酸0.5g胨10.0g氯化鈉5.0g酵母浸出粉3.0g醋酸鈉3.0g可溶淀粉1.0g瓊脂0.5g葡萄糖5.0g水1000mL熱溶化，濾過(guò)，分裝，滅菌。20.哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基酪蛋白胰酶消化物10.0g肉胃酶消化物5.0g心胰酶消化物3.0g氯化鈉5.0g玉米淀粉1.0g瓊脂15.0g酵母浸出粉5.0g水1000mlpH大霉素的無(wú)菌硫酸慶大霉素，混勻，傾注平皿。沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基葡萄糖 40g 水 蛋白胨 10g除葡萄糖外。取上述成分，混合，微溫溶解，濾過(guò)。加入葡萄糖，溶解，分裝，滅菌。沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基葡萄糖 40g 瓊脂 15～18g蛋白胨 10g 水 1000ml除瓊脂和葡萄糖外?；旌?，微溫溶解，濾過(guò)。加入瓊脂和葡萄糖，溶解，分裝，滅菌。念珠菌顯色培養(yǎng)基(CHROMagar)蛋白胨10.2g瓊脂15g氫罌素0.5g,滅菌水1000ml色素22.0gpH6.3±0.2。濾過(guò)，加入瓊脂，加熱煮沸,不斷攪拌至瓊脂完全溶解，傾注平皿。1%80-玉米瓊脂培養(yǎng)基黃色玉米粉40g瓊脂10～15g聚山梨酯8010ml水1000ml取玉米粉、吐溫80及蒸餾水500ml,混合，65℃加熱30分鐘,混勻，用紗布濾過(guò),補(bǔ)足原水量。取瓊脂，水500ml,混合，加熱溶解。將以上兩種溶液混合，搖勻，分裝，滅菌。試藥IsopropylMyristate〔C17H34O2=270.46〕本品為無(wú)色液體。溶于乙醇、乙醚、丙酮、三氯甲烷或甲苯，不溶于水、甘208℃分解。二鹽酸二甲基對(duì)苯二胺N，N-dimethyl-p-phenylenediaminedihydrochloride〔C8H12N2·2HCl=209.12〕中溶解。溴化十六烷基三甲銨CetylTrimethylammoniumBromide〔C19H42BrN=364.46〕NeutralRed〔C15H17N4Cl=288.78〕BeefExtractPowderOxBileSaltMannitol〔C6H14O6=182.17〕本品為白色結(jié)晶；無(wú)臭，味甜。在水中溶解，在乙醇中微溶。4-甲基傘形酮葡糖苷酸4-Methylumbelliferyl-β-D-glucuronide，MUG〔C18H16O9=376.3〕SodiumDeoxycholate〔C24H39NaO4=414.56〕〕本品為白色粉末。在熱水中易溶，在水中微溶。（）RoseBengalSodiumSalt〔C20H2Cl4I4Na2O5=1017.6〕液為棕色。GlycerolMonostearte〔C21H42O4=358.56〕水能乳化?！潮酒窞榘咨Y(jié)晶或粉末。在水中易溶，在乙醇中不溶。AmmoniumFerricCitrate〔C12H22FeN3O14=488.16〕在醇或醚中不溶。本品為米黃色粉末。在水中溶解。硫酸鋅ZincSulfate〔ZnSO4·7H2O=287.56〕ManganeseSulfate〔MnSO4·H2O=169.02〕本品為粉紅色結(jié)晶。在水中溶解，在乙醇中不溶。酪蛋白胰酶消化物（胰酪胨或酪胨）PancreaticDigestofCasein精制而成。試液0.1g，10ml，即得。需新鮮少量配制