第一篇第四章動物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器

體外培養(yǎng)的動物細胞根據(jù)它們在培養(yǎng)器皿是否能貼附于支持物上生長特征，可分為貼附型生長和懸浮型生長兩大類。貼附型細胞在培養(yǎng)時能貼附在支技物表面生長。大多數(shù)動物細胞屬于貼壁型細胞，如Hela、Vero、BHK、CHO細胞系。懸浮型細胞在培養(yǎng)中懸浮生長。來源于血液、淋巴組織的細胞，許多腫瘤細胞和某些轉(zhuǎn)化細胞。動物細胞培養(yǎng)方法本文檔共21頁；當前第1頁；編輯于星期三\9點12分動物細胞培養(yǎng)方法貼壁培養(yǎng)(單層細胞培養(yǎng))

分散的細胞懸浮在培養(yǎng)瓶中很快(幾十分鐘至幾小時)就貼附在瓶壁上，

稱為細胞貼壁，

貼壁后的細胞形態(tài)形成多態(tài)性，

呈單層生長，

所以此法又叫單層細胞培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)

細胞在培養(yǎng)器中自由懸浮生長的過程，不貼壁，主要用于懸浮型細胞培養(yǎng)，如淋巴細和腫瘤細胞的培養(yǎng)。本文檔共21頁；當前第2頁；編輯于星期三\9點12分固定化培養(yǎng)一種包埋培養(yǎng)。對兩類細胞都適用，細胞生長密度高，抗剪切力和抗污染能力強。懸浮型細胞常用海藻酸鈣包埋，貼壁型細胞常用膠原包埋。動物細胞培養(yǎng)方法本文檔共21頁；當前第3頁；編輯于星期三\9點12分動物細胞培養(yǎng)可生產(chǎn)的生物制品1.病毒疫苗：口蹄疫(FMD)、狂犬疫苗等2.非抗體免疫調(diào)節(jié)劑：干擾素(IFN)、白介素(IL)等3.多肽生長因子：神經(jīng)生長因子(NGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)4.酶：組織血纖維溶酶原激活劑(t-PA)5.激素：紅細胞生成素(EPO)、促黃體生成素(LH)6.病毒殺蟲劑7.腫瘤特異性抗原：癌胚抗原(CEA)8.單克隆抗體9.皮膚重植10.細胞動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用本文檔共21頁；當前第4頁；編輯于星期三\9點12分動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用動物細胞培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品工藝實例1.組織纖溶酶激活劑生產(chǎn)工藝流程細胞單層細胞懸液細胞培養(yǎng)物培養(yǎng)培養(yǎng)液提取液層析液濃縮液層析液tPA成品分散分離提取層析純化濃縮層析精制凍干2.抗HBsAS的單克隆抗體生產(chǎn)工藝流程培養(yǎng)液雜種細胞混合物大鼠骨髓瘤＋免疫大鼠脾淋巴細胞融合融合混合物篩選克隆化雜交瘤克隆系種質(zhì)培養(yǎng)細胞種質(zhì)擴大培養(yǎng)分離粗制McAb精制層析液超慮濃縮液凍干McAb精品本文檔共21頁；當前第5頁；編輯于星期三\9點12分動物細胞培養(yǎng)的特點1.細胞生長緩慢，易受微生物污染，培養(yǎng)時需要抗生素；2.動物細胞較微生物大得多，無細胞壁，機械強度低，適應(yīng)環(huán)境能力差；3.培養(yǎng)過程需氧量少，且不耐受強力通風與攪拌；4.在機體中，細胞相互粘連以集群形式存在；5.培養(yǎng)過程產(chǎn)物分布于細胞內(nèi)外，成本高，產(chǎn)品價格昂貴；6.大規(guī)模培養(yǎng)時，不可套用微生物反應(yīng)的經(jīng)驗；7.原代培養(yǎng)細胞一般繁殖50代即退化死亡。動物細胞培養(yǎng)的特點本文檔共21頁；當前第6頁；編輯于星期三\9點12分無論是貼壁細胞還是懸浮細胞，深層培養(yǎng)的操作方式可分細胞培養(yǎng)的操作方式分批式、流加式、半連續(xù)式、連續(xù)式和灌注式。分批式操作操作簡單、是最常用的操作方式。分批式培養(yǎng)過程中，細胞的生長可分為延遲期、對數(shù)生長期、減速期、平穩(wěn)期和衰退期分批式培養(yǎng)細胞生長曲線本文檔共21頁；當前第7頁；編輯于星期三\9點12分流加式操作半連續(xù)式操作細胞培養(yǎng)的操作方式能夠調(diào)節(jié)培養(yǎng)環(huán)境中營養(yǎng)物質(zhì)的濃度。連續(xù)操作能提高細胞密度，應(yīng)用于培養(yǎng)懸浮型細胞。灌注培養(yǎng)大大提高細胞密度，有助于產(chǎn)物的表達和純化。本文檔共21頁；當前第8頁；編輯于星期三\9點12分動物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器本文檔共21頁；當前第9頁；編輯于星期三\9點12分動物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器本文檔共21頁；當前第10頁；編輯于星期三\9點12分通氣攪拌式細胞培養(yǎng)反應(yīng)器本文檔共21頁；當前第11頁；編輯于星期三\9點12分通氣攪拌式細胞培養(yǎng)反應(yīng)器本文檔共21頁；當前第12頁；編輯于星期三\9點12分本文檔共21頁；當前第13頁；編輯于星期三\9點12分動物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器氣升式細胞培養(yǎng)反應(yīng)器氣升式培養(yǎng)系統(tǒng)的優(yōu)點：

①沒有移動部件；②完全密封；③便于無菌操作；④設(shè)計簡單；⑤便于放大生產(chǎn)；⑥氧的轉(zhuǎn)換率高。本文檔共21頁；當前第14頁；編輯于星期三\9點12分動物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器細胞培養(yǎng)流程本文檔共21頁；當前第15頁；編輯于星期三\9點12分動物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器中空纖維細胞培養(yǎng)反應(yīng)器本文檔共21頁；當前第16頁；編輯于星期三\9點12分動物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器中空纖維細胞培養(yǎng)反應(yīng)器優(yōu)點：

①培養(yǎng)體積小，細胞高密度生長；②有濃縮產(chǎn)品的功能；③產(chǎn)物純度高；④自動化程度高，細胞生長周期長。缺點：

中空纖維價格昂貴，生產(chǎn)成本高。本文檔共21頁；當前第17頁；編輯于星期三\9點12分動物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器微囊細胞培養(yǎng)反應(yīng)器特點：①細胞密度大；②產(chǎn)物濃度高；③分離純化操作經(jīng)濟簡單；④抗體活性、純度好本文檔共21頁；當前第18頁；編輯于星期三\9點12分動物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器

微載體細胞培養(yǎng)反應(yīng)器本文檔共21頁；當前第19頁；編輯于星期三