第三章轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)與藥物生產(chǎn)

第三章轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)與藥物生產(chǎn)本文檔共92頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分基因工程技術(shù)按照人們的意志,通過人工操作的方式將外源基因整合到生物體基因組內(nèi),使該轉(zhuǎn)基因生物能穩(wěn)定地將此基因遺傳給后代的實(shí)驗技術(shù)。本文檔共92頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分特點(diǎn):基因體外重組不受生物種類的限制精確細(xì)致地控制本文檔共92頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分外源目的基因的制備，外源目的基因有效地導(dǎo)入生殖

細(xì)胞或胚胎干細(xì)胞；選擇獲得攜有目的基因的細(xì)胞，選擇合適的體外培養(yǎng)

系統(tǒng)和宿主動物；轉(zhuǎn)基因細(xì)胞胚胎發(fā)育及鑒定；篩選所得的轉(zhuǎn)基因動物品系。關(guān)鍵技術(shù)包括：6.1轉(zhuǎn)基因動物的原理和方法本文檔共92頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分轉(zhuǎn)基因技術(shù)目的基因的制備和來源目的基因的克隆細(xì)胞轉(zhuǎn)染外源基因的方法轉(zhuǎn)染細(xì)胞的鑒定6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分1．采用限制性內(nèi)切酶，獲取目的基因2．通過mRNA合成cDNA3．人工體外合成DNA片斷4．聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增特定基因片段目的基因的制備和來源6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分目的基因的克?。?）質(zhì)粒載體基因克隆的載體（2）病毒類載體（λ噬菌體載體等）（3）粘粒載體（4）人工染色體6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分質(zhì)粒載體質(zhì)粒是細(xì)菌染色體外小型雙鏈環(huán)狀DNA復(fù)制子，對細(xì)菌的某些代謝活動和抗藥性表型有一定作用。質(zhì)粒DNA不但能在細(xì)菌中復(fù)制，并且在添加真核復(fù)制信號和啟動子后，可以構(gòu)建出能在原核或真核細(xì)胞中均可復(fù)制的穿梭質(zhì)粒，因此以質(zhì)粒為載體的基因克隆方法被廣泛使用。6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分λ噬菌體是一種雙鏈DNA噬菌體，基因組約有50kb，在λ噬菌體顆粒中分離出來的DNA為線性雙鏈分子，在分子兩端各有12個堿基的互補(bǔ)單鏈順序，是天然的粘性末端。λ噬菌體功能相關(guān)基因成簇排列在基因組上，中間部分(約占30％)為非裂解生長所必須，根據(jù)這一特性，可用其他外源DNA片段插入或取代該區(qū)域，而對噬菌體的感染和生長不會造成嚴(yán)重影響。這是λ噬菌體成為重要的、有價值的基因克隆載體的基礎(chǔ)所在。構(gòu)建的重組λ噬菌體分子，其總長不得超過野生型DNA的105％，不能短于75％。病毒類載體（λ噬菌體載體等）6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分粘粒(cosmid)是由質(zhì)粒和噬菌體的粘性末端構(gòu)建而成，由于λ噬菌體載體容量仍然受到一定限制，最大插入片段不能超過23kb。1978年勘Collis和比Hohn發(fā)展了這類質(zhì)粒與噬菌體聯(lián)合的新載體——粘粒，其基因組一般由以下幾部分組成：質(zhì)粒復(fù)制起始位點(diǎn)，1個或多個限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)，抗藥性標(biāo)記和帶有粘性末端的DNA片段。粘粒載體大小為4—6kb，而插入片段為29—45kb。粘粒載體6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分人工染色體人工酵母染色體(YeastArtificialChromosome,YAC)人工細(xì)菌染色體(BacterialArtificialChromosome,BAC)6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分染色體DNA的三種功能元件（functionalelements）自主復(fù)制DNA序列(autonomouslyreplicatingDNAsequence,ARS)著絲粒DNA序列(centromereDNAsequence,CEN)端粒DNA序列(telomereDNAsequence,TEL)6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分人工酵母染色體法YAC能克隆百萬對堿基的大片段DNAA.陽性ES細(xì)胞在YAC轉(zhuǎn)染及體外篩選,囊胚腔注射B.YAC的原核微注射。技術(shù)途徑：6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分優(yōu)點(diǎn)： A.保證大片段DNA的完整性 B.提高較長外源片段在動物轉(zhuǎn)基因時的整合率 C.保證目的基因上下游的側(cè)翼序列的完整性因而可以消除或減弱基因整合后的位置效應(yīng)。YAC介導(dǎo)法制備轉(zhuǎn)基因動物具有廣闊的應(yīng)用前景。6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分人工酵母染色體（YAC）的制備6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分細(xì)胞接受外源的方式6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分細(xì)胞轉(zhuǎn)染外源基因的方法：物理方法化學(xué)方法生物學(xué)方法6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分物理方法電穿孔法微注射法裸露DNA直接注射法6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分電穿孔法6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分電穿孔法示意圖6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分微注射法6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分微注射法示意圖6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分裸露DNA直接注射法將裸露DNA直接注射到組織中,DNA有可能被細(xì)胞攝入這是最簡單的基因轉(zhuǎn)移方法,但是轉(zhuǎn)移效率很低6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分化學(xué)方法主要原理是通過改變細(xì)胞膜的通透性或者增加DNA與細(xì)胞的吸附而實(shí)現(xiàn)基因的轉(zhuǎn)移6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分DEAE-葡聚糖法磷酸鈣-DNA共沉淀法脂質(zhì)體載體包埋法6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分DEAE-葡聚糖法最早的動物細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法。將外源DNA片段與DEAE——葡聚糖等高分子碳水化合物混合，DNA鏈上帶負(fù)電的磷酸骨架便被吸附于DEAE的正電荷基團(tuán)上，從而形成DNA大顆粒。后者黏附于受體細(xì)胞表面，并通過胞飲作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。該方法的轉(zhuǎn)化率較低。6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分磷酸鈣-DNA共沉淀法是受二價金屬離子能促進(jìn)細(xì)菌吸收外源DNA而來.當(dāng)核酸以磷酸鈣-DNA共沉淀物的形式存在時,細(xì)胞攝取DNA的能力顯著增加。6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分磷酸鈣-DNA共沉淀法圖示6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分脂質(zhì)體載體包埋法6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分脂質(zhì)體載體包埋法圖示6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分生物學(xué)方法基因轉(zhuǎn)移的生物學(xué)方法主要是病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移。根據(jù)受體細(xì)胞類型不同可選擇不同宿主范圍和不同感染途徑的病毒基因組作為載體。目前常用的病毒載體包括DNA病毒載體（腺病毒載體、牛痘病毒載體等）、反轉(zhuǎn)錄病毒載體等。6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分腺病毒載體運(yùn)載DNA片段較大安全性好宿主范圍廣對受體細(xì)胞分裂周期要求不嚴(yán)外源基因表達(dá)高效6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分反轉(zhuǎn)錄病毒載體可獲得穩(wěn)定有效的轉(zhuǎn)染可用于不易轉(zhuǎn)化的細(xì)胞但有免疫反應(yīng),轉(zhuǎn)染能力有限6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分反轉(zhuǎn)錄病毒載體圖示6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分轉(zhuǎn)染細(xì)胞的鑒定載體的抗藥性選擇DNA分子雜交法6.2轉(zhuǎn)基因技術(shù)本文檔共92頁；當(dāng)前第38頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分制備轉(zhuǎn)基因動物的方法

轉(zhuǎn)基因動物研究的核心技術(shù)是成功地把目的基因轉(zhuǎn)入動物早期胚胎細(xì)胞中。目前，研究生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物的主要方法有基因顯微注射法，胚胎干細(xì)胞移植法，反轉(zhuǎn)錄病毒感染法和精子載體導(dǎo)入法等。6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第39頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第40頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分基因顯微注射法6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第41頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分顯微注射DNA(目的基因)的構(gòu)型、末端結(jié)構(gòu)、長度與濃度、克隆載體和溶解DNA的緩沖液對目的基因的轉(zhuǎn)移、整合及表達(dá)都有一定影響。

顯微注射DNA的制備與純化6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第42頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分DNA構(gòu)型和末端結(jié)構(gòu)：線狀與環(huán)狀DNA均可用于轉(zhuǎn)基因研究。線狀DNA的末端結(jié)構(gòu)差異(平末端、粘性末端)對整合效率與整合分子的結(jié)構(gòu)影響不大。轉(zhuǎn)移的DNA在染色體上的整合大多呈首尾相連的多拷貝，不同構(gòu)型與末端間無明顯差異。6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第43頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分載體：原核克隆載體(如質(zhì)粒)序列不影響攜帶基因的整合效率，但影響基因在轉(zhuǎn)基因動物中的表達(dá)。注射前去除載體的基因，其表達(dá)水平顯著高于保留載體的基因，且前者具有較好的重復(fù)性。對某些基因(如珠蛋白基因)，只有注射前去除載體才能得到組織特異性表達(dá)。6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第44頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分留在核內(nèi)的DNA溶液體積不明。DNA濃度易掌握，1ug/ml-3ug/mlDNA體積與濃度：6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第45頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分溶解DNA的緩沖液：EDTA濃度需適中6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第46頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分鼠的準(zhǔn)備與要求母鼠——卵供體和假孕母鼠公鼠——正常、結(jié)扎6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第47頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第48頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分卵供體母鼠：超排卵供體——4～6周鼠3—4周母鼠產(chǎn)卵更多但卵細(xì)胞膜脆性較大，在處理過程中易破裂。5周以后母鼠產(chǎn)卵逐漸減少。超排卵較好的母鼠每只每次產(chǎn)20—30個卵。6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第49頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分公鼠性成熟約在6—8周，不同種系公鼠性維持時間不一，一般1—2年，但純系公鼠只可使用8—10個月。每個公鼠需單籠飼養(yǎng)以免咬傷，飼養(yǎng)于2周后方可與超排卵母鼠交配。每個母鼠與1個公鼠交配，次日上午檢查精栓，如兩次以上都不能使母鼠有精栓，則需更換公鼠。為保證有足夠的受精卵，公鼠最好每周只交配1次。6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第50頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分假孕母鼠母鼠在正常發(fā)情期與結(jié)扎公鼠交配即產(chǎn)生，假孕母鼠作為顯微注射后受精卵的受體及其后的養(yǎng)母。這種母鼠在6周至5個月較適宜，體重最好大于20克，已產(chǎn)過仔并成功撫育過仔鼠的假孕母鼠最理想。6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第51頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第52頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分超排卵與取卵4—6周母鼠在明暗循環(huán)的動物房內(nèi)飼養(yǎng)3—5天，即可作超排卵，母鼠的性成熟程度是影響其超排卵的主要因素，一般在3—5周，卵泡成熟周期已開始，對卵泡刺激素(FSH)有反應(yīng)的卵泡數(shù)達(dá)峰值。母鼠的不同種系其超排卵數(shù)也不同，這取決于其對FSH和LH(黃體生成素)的敏感程度，高敏種系每只鼠超排卵數(shù)可達(dá)40—60個，低敏種系不足15個。取卵：取卵全過程應(yīng)盡快完成(1小時內(nèi))以減少暴露狀態(tài)給卵帶來的不利因素。6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第53頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第54頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分需8周以上，無種系要求。在正式實(shí)驗以前，每只結(jié)扎公鼠至少需要先后使3只母鼠產(chǎn)生精栓且所有產(chǎn)生精栓的母鼠均未懷孕，然后才可用于與母鼠交配，產(chǎn)生假孕母鼠。

結(jié)扎公鼠6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第55頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第56頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分顯微注射6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第57頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第58頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第59頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分卵的轉(zhuǎn)移6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第60頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分

轉(zhuǎn)基因鼠的獲得胚胎干細(xì)胞方法反轉(zhuǎn)錄病毒感染法精子載體法6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第61頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分胚胎干細(xì)胞(embryonicstemcell，ES)是從早期胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(ICM)分離出來的，能在體外培養(yǎng)的一種高度未分化的多能細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞方法6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第62頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第63頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第64頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第65頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第66頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分利用反轉(zhuǎn)錄病毒的高效率感染和在宿主細(xì)胞DNA上的高度整合特性，可以大大提高基因轉(zhuǎn)移的效率。因此可以利用反轉(zhuǎn)錄病毒作為目的基因的載體，通過感染實(shí)現(xiàn)基因轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生嵌合體動物，再經(jīng)過雜交，篩選即可獲得轉(zhuǎn)基因動物反轉(zhuǎn)錄病毒感染法

6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第67頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第68頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分精子吸附DNA就使目的基因進(jìn)入精細(xì)胞，再通過受精作用把目的基因傳給子代動物，獲得轉(zhuǎn)基因動物。外源目的基因進(jìn)入精細(xì)胞可通過與精子共育法、電穿孔導(dǎo)入法和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法。精子載體法精子吸附DNA的方法6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第69頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分受精技術(shù)精子在吸附外源性DNA后，即可以利用其進(jìn)行受精，受精的方法及途徑隨著精子的處理方式及卵來源不同而有所不同6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第70頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分人工授精壺腹部手術(shù)授精體外授精6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第71頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分其他方法原始生殖細(xì)胞技術(shù)體細(xì)胞核移植技術(shù)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體注射MⅡ期的卵母細(xì)胞精子頭與外源DNA合并注射卵母細(xì)胞6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第72頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第73頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第74頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第75頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分轉(zhuǎn)基因動物鑒定技術(shù)分子雜交斑點(diǎn)雜交聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)原位雜交6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第76頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分轉(zhuǎn)基因動物的應(yīng)用研究基因的結(jié)構(gòu)與功能研究基因的組織特異性表達(dá)研究發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)與調(diào)控克隆在發(fā)育中起重要作用的基因基因多級調(diào)節(jié)系統(tǒng)的研究細(xì)胞功能的研究轉(zhuǎn)基因動物在生命科學(xué)基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第77頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分快速生長與肉質(zhì)改良增強(qiáng)抗病性增加羊毛產(chǎn)量和性能抗凍品種培育優(yōu)良動物品種育種在農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第78頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分研究病毒性疾病研究建立人類疾病的轉(zhuǎn)基因動物模型轉(zhuǎn)基因動物與基因治療生產(chǎn)天然活性藥物蛋白轉(zhuǎn)基因動物在醫(yī)藥研究領(lǐng)域中的應(yīng)用

6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第79頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分在異種器官移植中的應(yīng)用建立異種抗原缺失或者表達(dá)水平低下的轉(zhuǎn)基因豬建立HLA轉(zhuǎn)基因豬建立人補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白CD55,CD59等的轉(zhuǎn)基因豬6.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第80頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分轉(zhuǎn)基因動物應(yīng)用面臨的問題目的基因整合與表達(dá)的效率較低，或者引起宿主細(xì)胞基因突變。轉(zhuǎn)基因動物的負(fù)面效應(yīng)。研究費(fèi)用高，需要相當(dāng)?shù)呢斄χС?.3轉(zhuǎn)基因動物本文檔共92頁；當(dāng)前第81頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分轉(zhuǎn)基因生物反應(yīng)器類型轉(zhuǎn)基因微生物反應(yīng)器轉(zhuǎn)基因植物反應(yīng)器轉(zhuǎn)基因動物反應(yīng)器動物乳腺生物反應(yīng)器動物血液生物反應(yīng)器其他生物反應(yīng)器6.4轉(zhuǎn)基因生物反應(yīng)器本文檔共92頁；當(dāng)前第82頁；編輯于星期三\10點(diǎn)27分轉(zhuǎn)基因動物反應(yīng)器從1987年，Gordon等，轉(zhuǎn)基因小鼠組織型纖維蛋白溶酶原激活因子（tPA）1998年，3種轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)的重組蛋白進(jìn)入臨床