紅景天苷心肌缺血

紅景天苷心肌缺血

1器材

藥品與試劑注射用紅景天苷，由成都恒基醫(yī)藥科技有限公司提供，純度大于90%；葛根素注射液，北京協(xié)和藥廠生產(chǎn)；注射用鹽酸地爾硫卓，天津田邊制藥有限公司進(jìn)口分裝；垂體后葉素注射液，上海第一生化藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；連二亞硫酸鈉，天津市福晨化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，分析純；溴化--2、5二苯基四氮唑，美國(guó)sigma公司出品；乳酸脫氫酶試劑盒及肌酸激酶試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所；其它試劑均為市售分析純。

儀器ECG-6511型心電圖機(jī)，日本光電工株式會(huì)社出品；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司出品；DG-5031型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，華東電子集團(tuán)醫(yī)療裝備有限責(zé)任公司出品。

動(dòng)物SD大鼠，雌雄各半，g，清潔級(jí)；SD孕大鼠，清潔級(jí)；均由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK2005-0001。

2方法

紅景天苷對(duì)垂體后葉素所致大鼠急性心肌缺血的影響［3］SD大鼠70只，雌雄各半，隨機(jī)分為7組。分別為正常對(duì)照組和模型組，葛根素組，地爾硫卓組，紅景天苷高、中、低劑量組。以上各組以不同濃度等容積給藥/kg。

將大鼠用3％的戊巴比妥鈉以40mg/kg的劑量腹腔注射麻醉后，仰臥位固定，記錄一段正常心電圖。靜脈給藥5min后尾靜脈注射腦垂體后葉素/kg［4,5］，給藥容積為/kg，注射速度為5～10s。記錄注射后5，10，30s，1，2，5，10，20min的Ⅱ?qū)?lián)心電圖，觀察T波和J點(diǎn)的變化。

紅景天苷對(duì)心肌細(xì)胞的影響

對(duì)缺氧/復(fù)氧所致心肌細(xì)胞損傷的影響根據(jù)文獻(xiàn)［6～8］方法體外培養(yǎng)原代乳鼠心肌細(xì)胞。

取生長(zhǎng)良好的細(xì)胞隨機(jī)分為正常組；模型組；葛根素組；鹽酸地爾硫卓組；紅景天苷高、中、低劑量組。每組6個(gè)孔，加入藥物4h后除對(duì)照組外均加入Na2S2O4，刺激細(xì)胞1h。缺氧損傷1h后，換去細(xì)胞培養(yǎng)液為正常含血清DMEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)1h［9，10］。用MTT染色法測(cè)定96孔培養(yǎng)板內(nèi)心肌細(xì)胞的活力。取培養(yǎng)液測(cè)定其中LDH和CK的含量。

對(duì)H2O2誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷的影響［11］取生長(zhǎng)良好的細(xì)胞隨機(jī)分組同“”。每組6個(gè)孔，加入藥物4h后再加H2O2刺激細(xì)胞4h。用MTT染色法測(cè)定96孔培養(yǎng)板內(nèi)心肌細(xì)胞的活力。取培養(yǎng)液測(cè)定其中LDH和CK的含量。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用±s表示。采用單因素方差分析進(jìn)行組間顯著性比較，兩組間樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，P<認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3結(jié)果

紅景天苷對(duì)垂體后葉素所致大鼠心肌缺血的影響與對(duì)照組比較，給予垂體后葉素后，模型組出現(xiàn)明顯的T波抬高，持續(xù)30s，隨后T波降低。與模型組相比，紅景天苷高劑量組于5，10s時(shí)能明顯抑制T波抬高；中劑量組于5，10s時(shí)也可抑制T波抬高；低劑量組不能抑制T波抬高。紅景天苷高、中劑量組作用強(qiáng)度與地爾硫卓組和葛根素組比較無(wú)顯著差異。結(jié)果見(jiàn)表1。

與對(duì)照組比較，給予垂體后葉素后，模型組出現(xiàn)明顯的J點(diǎn)升高，且持續(xù)至藥后20min尚未恢復(fù)。與模型組相比，紅景天苷高、中劑量組能顯著抑制J點(diǎn)升高，低劑量組/kg無(wú)明顯作用。紅景天苷高、中劑量組作用強(qiáng)度與地爾硫卓組/kg和葛根素組/kg比較無(wú)顯著差異。結(jié)果見(jiàn)表2。

表1紅景天苷對(duì)垂體后葉素所致心肌缺血大鼠T波的影響

與對(duì)照組比較，**P<；與模型組比較，##P<，#P<；n＝10

表2紅景天苷對(duì)垂體后葉素所致心肌缺血大鼠J點(diǎn)的影響

與對(duì)照組比較，**P<；與模型組比較，##P<，#P<；n＝10

紅景天苷對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞的影響

對(duì)缺氧/復(fù)氧所致心肌細(xì)胞損傷的影響與對(duì)照組比較，模型組的細(xì)胞存活率明顯下降，差異有顯著性；培養(yǎng)液中的LDH和CK的含量也顯著升高，均表明心肌細(xì)胞活性下降，損傷較嚴(yán)重。與模型組比較，紅景天苷高、中、低劑量組均可顯著升高A570的細(xì)胞存活率，均可顯著降低培養(yǎng)液中的LDH和CK的含量，說(shuō)明紅景天苷對(duì)缺氧/復(fù)氧損傷的心肌細(xì)胞有一定的保護(hù)作用。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3紅景天苷對(duì)缺氧/復(fù)氧所致心肌細(xì)胞損傷的影響

與對(duì)照組比較，**P<；與模型組比較，##P<；n=6

紅景天苷對(duì)H2O2誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷的影響與對(duì)照組比較，模型組的細(xì)胞存活率明顯下降，差異有顯著性；培養(yǎng)液中的LDH和CK的含量也顯著升高，均表明心肌細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷，活性下降。與模型組比較，紅景天苷高、中、低劑量組均可顯著升高A570的細(xì)胞存活率，均可顯著降低培養(yǎng)液中的LDH和CK的含量，說(shuō)明紅景天苷具有顯著的抗氧化損傷能力，對(duì)氧化損傷的心肌細(xì)胞有一定的保護(hù)作用。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4紅景天苷對(duì)H2O2誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷的影響

與對(duì)照組比較，**P<；與模型組比較，##P<；n=6

4討論

垂體后葉素誘發(fā)的急性心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ蛷V泛應(yīng)用于篩選抗心肌缺血藥物的研究［12］。靜脈注射垂體后葉素后心電圖立刻發(fā)生變化，可分為兩期：第1期，注射后5～20s，T波顯著升高，ST段明顯抬高；第2期，注射后30s至數(shù)分鐘，ST段下移,T波降低、平坦、雙相或倒置。該實(shí)驗(yàn)給予大鼠垂體后葉素后，模型組立刻出現(xiàn)明顯的T波抬高，持續(xù)30s，隨后T波降低；同時(shí)出現(xiàn)明顯的J點(diǎn)升高并持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間，表明大鼠發(fā)生急性心肌缺血。預(yù)先給予藥物后，觀察到紅景天苷對(duì)第1期中的T波升高和J點(diǎn)抬高都有顯著的抑制作用，對(duì)第2期的T波降低也有一定的抑制作用，表明紅景天苷對(duì)垂體后葉素所致的大鼠心肌缺血有較明顯的保護(hù)作用。

研究發(fā)現(xiàn)氧自由基的產(chǎn)生及脂質(zhì)過(guò)氧化物反應(yīng)增強(qiáng)與心肌缺血損傷的病理改變關(guān)系密切。心肌缺血時(shí)由于氧自由基生成增加，導(dǎo)致細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能損傷，從而加劇缺血心肌的組織損傷及功能障礙。

本實(shí)驗(yàn)的缺氧/復(fù)氧模型中，Na2S2O4處理細(xì)胞存活率明顯下降，培養(yǎng)液中LDH和CK活性增高，表明心肌細(xì)胞抗氧化損傷能力下降，細(xì)胞發(fā)生了氧自由基損傷；給予紅景天苷后，能夠明顯提高心肌細(xì)胞的存活率，同時(shí)顯著降低LDH和CK的含量。LDH和CK是細(xì)胞內(nèi)的酶，當(dāng)機(jī)體細(xì)胞膜受到損傷時(shí)，膜的流動(dòng)性降低，細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的釋放量會(huì)大大增加。紅景天苷可減少細(xì)胞內(nèi)酶的釋放，表明該藥物可以保持細(xì)胞的結(jié)構(gòu)完整，維持細(xì)胞膜的相對(duì)穩(wěn)定，保護(hù)細(xì)胞不受氧自由基的損傷。同時(shí)LDH和CK含量的減少還可間接增強(qiáng)細(xì)胞清除氧自由基的能力，降低細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化程度，因而可以保護(hù)缺血/再灌后的心肌細(xì)胞。

過(guò)氧化氫是有機(jī)體氧化代謝產(chǎn)物，同時(shí)是一種活性氧，