考馬斯亮藍(lán)法顯示細(xì)胞中的微絲

考馬斯亮藍(lán)法顯示(xiǎnshì)細(xì)胞中的微絲第一頁，共十二頁。編輯課件目的要求基本原理實(shí)驗(yàn)(shíyàn)用品方法與步驟實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)報(bào)告第二頁，共十二頁。編輯課件目的(mùdì)要求掌握考馬斯亮藍(lán)的染色(rǎnsè)方法；了解細(xì)胞內(nèi)微絲的分布。第三頁，共十二頁。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)原理細(xì)胞質(zhì)中錯(cuò)綜復(fù)雜的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)稱為細(xì)胞骨架，主要包括微管、微絲和中間纖維。考馬斯亮藍(lán)R250是一種普通的蛋白染料，它可以使多種蛋白質(zhì)著色，由于有些細(xì)胞骨架纖維在該實(shí)驗(yàn)(shíyàn)條件下不夠穩(wěn)定，有些類型的纖維太細(xì)，在光學(xué)顯微鏡下無法分辨，因此我們看到的主要是微絲組成的張力纖維。張力纖維在體外培養(yǎng)細(xì)胞中普遍存在，與細(xì)胞的附著、維持扁平鋪展的形態(tài)有關(guān)。第四頁，共十二頁。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)用品1．器材：烘箱、青霉素小瓶、培養(yǎng)細(xì)胞飛片、水浴鍋、載玻片、蓋玻片。2．試劑:0.01mol/LPBS；M-緩沖液；1%TritonX-100/M緩沖液；0.2%考馬斯亮藍(lán)染液；3%戊二醛-PBS溶液；3．實(shí)驗(yàn)材料(cáiliào)：洋蔥內(nèi)表皮，培養(yǎng)細(xì)胞飛片第五頁，共十二頁。編輯課件方法(fāngfǎ)與步驟利用培養(yǎng)細(xì)胞為材料(cáiliào)進(jìn)行骨架顯示時(shí),先從培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)細(xì)胞飛片,棄去培養(yǎng)液,加入PBS漂洗,加入1%TritonX-100/M-緩沖液處理15分鐘;第六頁，共十二頁。編輯課件M緩沖液輕輕洗3次,然后加入境%戊二醛-PBS液固定(gùdìng)15分鐘，PBS沖洗數(shù)次，0.2%考馬斯亮藍(lán)R250染色30分鐘，水洗，鏡檢。第七頁，共十二頁。編輯課件以洋蔥為材料進(jìn)行細(xì)胞骨架顯示時(shí)，先撕取一片洋蔥內(nèi)表皮，置于小平皿中進(jìn)行操作，其余(qíyú)步驟相同。第八頁，共十二頁。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)結(jié)果洋蔥(yángcōng)內(nèi)表皮中的微絲第九頁，共十二頁。編輯課件培養(yǎng)(péiyǎng)細(xì)胞中的微絲第十頁，共十二頁。編輯課件實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)的目的、原理、步驟和結(jié)果分析；繪圖(huìtú)表示微絲在細(xì)胞中的分布情況；在實(shí)驗(yàn)中TritonX-100抽提起到了什么樣的作用？第十一頁，共十二頁。編輯課件內(nèi)容(nèiróng)總結(jié)考馬斯亮藍(lán)法顯示細(xì)胞中的微絲。細(xì)胞質(zhì)中錯(cuò)綜復(fù)雜的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)稱為細(xì)胞骨架，主要包括微管(wēiɡuǎn)、微絲和中間纖維。張力纖維在體外培養(yǎng)細(xì)胞中普遍存在，與細(xì)胞的附著、維持扁平鋪展的形態(tài)有關(guān)。1．器材：烘箱、青霉素小瓶、培養(yǎng)細(xì)胞飛片、水浴鍋、載玻片、蓋玻片。利用培養(yǎng)細(xì)胞為材料進(jìn)行骨架顯示時(shí),先從培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)細(xì)胞