林氏咽寧散體外抗金黃色葡萄球菌實驗

林氏咽寧散體外抗金黃色葡萄球菌實驗

【關(guān)鍵詞】林氏咽寧散；金黃色葡萄球菌；抗菌實驗

摘要：目的探討林氏咽寧散體外對金黃色葡萄球菌的抑菌作用。方法以微生物試驗瓊脂平皿法、液體試管法觀察其抗菌作用。結(jié)果對金黃色葡萄球菌有一定的抑菌作用。瓊脂平皿法最低抑菌濃度為g/ml，液體試管法最低抑菌濃度和最低殺菌濃度均為g/ml。結(jié)論實驗結(jié)果表明，林氏咽寧散體外抗菌活性測定顯示，對金黃色葡萄球菌有一定的抗菌作用，與其相關(guān)的臨床功能主治相符，為其臨床應(yīng)用提供了一定的實驗基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：林氏咽寧散；金黃色葡萄球菌；抗菌實驗

林氏咽寧散系采用著名老中醫(yī)祖?zhèn)鹘?jīng)驗方，運用先進(jìn)工藝制成的純中藥散劑。主要有鳳凰衣、藏青果、薄荷葉、人工牛黃、珍珠粉、冰片、黃柏等10味中藥組成。用于治療急慢性咽炎等。本實驗對林氏咽寧散進(jìn)行體外抗金葡菌實驗，為臨床應(yīng)用提供一定的實驗基礎(chǔ)。

1材料

藥品林氏咽寧散，青霉素－V鉀片g，錫類散。

菌種金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus［CMCC(B)26003］(中國藥品生物制品檢定所)。

培養(yǎng)基［1］

Mueller－Hinton肉湯培養(yǎng)基成分：牛肉浸膏3g，純水1000ml，可溶性淀粉g，酪蛋白水解物g。制法：將上述各成分混合，搖勻，調(diào)pH至，分裝，滅菌，備用。

Mueller－Hinton瓊脂培養(yǎng)基成分：M-H肉湯1000ml，瓊脂17g。制法：將瓊脂加入M-H肉湯內(nèi)，加熱溶解，分裝，滅菌，備用。

2方法與結(jié)果

最小抑菌濃度與最小殺菌濃度的測定

平皿二倍稀釋法［1］采用瓊脂稀釋法，用Mueller－Hinton瓊脂培養(yǎng)基對林氏咽寧散進(jìn)行定量抗金葡菌試驗。

藥液稀釋稱取林氏咽寧散6g，加pH無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液30ml振搖，混勻，即為g/ml供試液。取青霉素－V鉀片1片，研磨，用pH無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液溶解并稀釋至025g/ml的溶液，作為藥物對照液。取錫類散3g，加pH無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液15ml振搖，混勻，即為g/ml的對照液。取無菌空試管6支，第1管中放入林氏咽寧散供試液，第2～6管中分別加5mlpH無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液，于第1管中取出5ml放入第2管中，混勻，即為g/ml的供試液，同法從第2管取出5ml放入第3管，如此連續(xù)稀釋至第6管，供試溶液的含藥濃度依次為：，，，，5，25g/ml。取無菌空試管6支，同法將錫類散依次稀釋成，，，，5，25g/ml的溶液。

含藥平皿制備分別取上述供試液與對照液1ml加入無菌平皿中，然后分別加入相同量的Mueller－Hinton瓊脂培養(yǎng)基15ml，充分搖勻，開蓋，在凈化臺上適當(dāng)消除冷凝水，待培養(yǎng)基凝固。同一濃度的藥液平行做2個平板。用吸管吸取ml金黃色葡萄球菌稀釋液于上述各平板上，用接種棒均勻涂抹于整個平板。同時設(shè)一份不含藥物的Mueller－Hinton瓊脂培養(yǎng)基平板作為陽性菌生長對照；一份含藥物但不含實驗菌的空白對照；一份pH無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液與Mueller－Hinton瓊脂培養(yǎng)基混合的稀釋劑對照。

培養(yǎng)、觀察結(jié)果將制備好的平板置35℃培養(yǎng)18～24h后，觀察各平板是否有金葡菌生長，金葡菌不生長的最低藥物濃度，即為金葡菌的最低抑菌濃度。結(jié)果見表1。

表1平皿法抑菌實驗結(jié)果

＋表示試驗皿長菌；－表示試驗皿未長菌

結(jié)果證實，青霉素V鉀對金黃色葡萄球菌［CMCC(B)26003］高度敏感。林氏咽寧散對金黃色葡萄球菌有一定的抑制作用，固體平皿法最低抑菌濃度為g/ml。而錫類散在此系列濃度下對金葡菌的抑菌作用不明顯。

液體試管法［1，2］采用液體培養(yǎng)基倍比稀釋法，用Mueller－Hinton肉湯培養(yǎng)基對林氏咽寧散進(jìn)行定量抗金葡菌試驗。

藥液稀釋取無菌空試管10支，于10支試管中加入Mueller－Hinton肉湯培養(yǎng)基各1ml，第1管中加入林氏咽寧散供試液1ml，混合后吸取1ml加入第2管，同法稀釋至第9管，從第9管中取出1ml于一滅菌空試管中作為空白對照，不加金葡菌以便觀察供試液是否被污染。則1～9管的藥物濃度依次為，，，5，25，12，56，78，39g/ml。第10管作為陽性生長對照管。另取一滅菌空試管，分別加入mlMueller－Hinton肉湯培養(yǎng)基和pH無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液作為稀釋劑對照管。取無菌空試管10支，同法將錫類散依次稀釋成，，，，5，25，12，56，78，39g/ml的溶液。從第9管中取出1ml于一滅菌空試管中作為空白對照，不加金葡菌以便觀察供試液是否被污染。取上述青霉素－V鉀025g/ml溶液，作為藥物對照液。

加入菌液各試驗管、陽性對照管加入ml金黃色葡萄球菌稀釋液。

培養(yǎng)、觀察結(jié)果將各試驗管置35℃培養(yǎng)18～24h后，取出，備用。將各試驗管的培養(yǎng)物分別劃線轉(zhuǎn)種于甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上，35℃培養(yǎng)18～24h后，觀察各平板是否有金葡菌生長，金葡菌不生長的最低藥物濃度，即為金葡菌的最低抑菌濃度。分別吸取各試驗管的培養(yǎng)物ml，用接種棒均勻涂抹于整個甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上，35℃培養(yǎng)18～24h后，觀察各平板上的金葡菌菌落數(shù)，平板上的菌落數(shù)小于5個的最小稀釋度的藥物濃度即為最低殺菌濃度。結(jié)果見表2。

表2液體試管法抑菌實驗結(jié)果

＋表示試驗管長菌；－表示試驗管未長菌

結(jié)果證實，青霉素V鉀對金黃色葡萄球菌［CMCC(B)26003］高度敏感。林氏咽寧散對金黃色葡萄球菌有一定的抑制作用，液體試管法最低抑菌濃度為g/ml。最低殺菌濃度為g/ml。而錫類散在此系列濃度下對金葡菌的抑菌作用不明顯。

3結(jié)論

林氏咽寧散體外抗金葡菌試驗，平皿二倍稀釋法最低抑菌濃度為g/ml，液體試管法最低抑菌濃度和最低殺菌濃度均為g/ml。因為液體試管法藥液與試驗菌體充分接觸，使得試驗菌對藥物較固體法更敏感一些，導(dǎo)致兩法MIC值稍有一些差別，液體試管法的結(jié)果更精確。林氏咽寧散為純中藥制成的散劑，用于咽喉腫痛，抗菌消炎，噴于患