乙型肝炎實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的研究進(jìn)展

乙型肝炎實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的研究進(jìn)展

【關(guān)鍵詞】乙型肝炎動(dòng)物模型研究進(jìn)展

建立合適的乙型肝炎病毒感染的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，對(duì)于開展抗乙肝中藥的篩選，探索HBV感染機(jī)制，尋找有效的防治方法等，具有重要的意義。當(dāng)代病毒學(xué)、分子生物學(xué)及免疫學(xué)等相關(guān)學(xué)科的發(fā)展，極大地推動(dòng)了HBV感染動(dòng)物模型的研究［1］。本文就近年來(lái)有關(guān)HBV及其它嗜肝病毒感染的動(dòng)物模型的造模方法作一綜述。

1靈長(zhǎng)類動(dòng)物HHBV感染模型

Barker等［2］首次報(bào)道黑猩猩感染HHBV模型實(shí)驗(yàn)獲得成功，研究中發(fā)現(xiàn)黑猩猩對(duì)四種亞型HBsAg陽(yáng)性血清都可成功獲得感染，并在黑猩猩的血清中檢測(cè)出與接種物相同亞型的HBsAg，其中以adr亞型的致病性較強(qiáng)。Barker等［3］研究表明，恒河猴是最實(shí)用的HHBV易感動(dòng)物，但其敏感性低于黑猩猩。感染HHBV后的恒河猴，其血清中HBsAg和HBVs呈陽(yáng)性，但在急性期未出現(xiàn)谷丙轉(zhuǎn)氨酶異常升高和肝臟損害。張濤等［4］研究發(fā)現(xiàn)，獼猴感染HHBV后肝組織有類似人乙型肝炎的病理改變，免疫組化法與原位雜交法檢測(cè)結(jié)果相吻合。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，西里伯類人猿、Palas猴，長(zhǎng)尾黑顎猴、白臉猴、尤猴、新域猴、長(zhǎng)臂猿、狒狒、卷毛猴、平頂猴、大猩猩及蜘蛛猴等均可用HHBV感染成功獲得乙型肝炎動(dòng)物模型，在它們體內(nèi)均可檢測(cè)出HBsAg、抗HBs、抗-HBc、HBV-DNA。

2鴨DHBV感染模型

唐霓等［5］用不同日齡鴨接種DHBV建立急性和慢性感染模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)慢性感染的形成與幼鴨免疫系統(tǒng)發(fā)育尚未完善有關(guān)，即不同日齡的鴨肝細(xì)胞對(duì)DHBV易感性不同。姚云清等［6］用HBV-DNA轉(zhuǎn)染的原代鴨肝細(xì)胞與DHBV感染的原代鴨肝細(xì)胞進(jìn)行比較，結(jié)果提示兩者的復(fù)制與表達(dá)相似。朱清靜等［7］用DHBV陽(yáng)性血清反復(fù)攻擊成功獲得鴨乙型肝炎肝纖維化模型。鴨乙型肝炎并不能誘發(fā)肝細(xì)胞性肝癌，郝連杰［8］報(bào)道Hans等經(jīng)過對(duì)鴨乙型肝炎病毒基因結(jié)構(gòu)的分析，證實(shí)鴨乙型肝炎病毒所有分離株中均存在一缺乏常規(guī)翻譯起始密碼子的X樣開讀框架，并不是沒有X基因。

3大、小鼠HBV感染模型

HBV部分片段的轉(zhuǎn)基因小鼠模型

胡衛(wèi)江等［9］應(yīng)用受精卵原核顯微注射的方法，制備了含有拷貝HBV基因組的轉(zhuǎn)基因小鼠，發(fā)現(xiàn)HBV基因在轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)可以穩(wěn)定遺傳，并有病毒顆粒形成。劉紅等［10］采用受精卵顯微注射的方法，建立了HBV核心抗原轉(zhuǎn)基因小鼠模型，核心抗原基因能夠在小鼠肝臟中表達(dá)并可穩(wěn)定遺傳。金艷花等［11］采用原核顯微注射法將質(zhì)粒pcDNA/St注射入小鼠受精卵雄原核，成功獲得了穩(wěn)定遺傳3′末端缺失的preS/S基因并表達(dá)preS2蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠，命名為C57-TgNSMMU。訾曉淵等［12］研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)5代C57-TgNSMMU小鼠具有基因組中穩(wěn)定整合病毒DNA，血清和肝組織中有病毒蛋白表達(dá)和病毒復(fù)制的特征，并具有一定的組織學(xué)變化。

DNA疫苗免疫HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型

Oka等［13］用單劑量質(zhì)粒pS及pS2-S免疫30例HBV轉(zhuǎn)基因小鼠，導(dǎo)致了其中28例HBsAg的清除；而HBsAg蛋白疫苗在注射7個(gè)月之后，僅導(dǎo)致29例HBV轉(zhuǎn)基因小鼠中10例HBsAg的清除，提示DNA疫苗免疫效果較好。Schirmbeck等［14］用HBV-DNA疫苗及HBsAg重組蛋白疫苗免疫H-2b小鼠及其同源HBV轉(zhuǎn)基因小鼠，未誘導(dǎo)出免疫反應(yīng)；但將免疫小鼠脾細(xì)胞轉(zhuǎn)輸入HBV轉(zhuǎn)基因小鼠，則可導(dǎo)致血清HBsAg滴度下降，抗HBsAg抗體產(chǎn)生，并誘導(dǎo)出CTL反應(yīng)，但未使肝臟HBsAg轉(zhuǎn)基因表達(dá)得到控制。

HBV免疫缺陷小鼠模型

Brown等［15］將非腫瘤源性永生性人肝細(xì)胞株移植到重組激活基因-2剔除鼠體內(nèi)，建立了長(zhǎng)期HBV病毒血癥模型。Ilan等［16］給正常小鼠高劑量射線全身照射以消除小鼠的免疫活性，再將嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷鼠的骨髓細(xì)胞移植給該鼠，最后將已感染HBV的人肝組織移植到該鼠肝臟，成功建立了與人自然感染HBV過程相似的HBV三聚體小鼠模型。Dandri等［17］把正常人的肝細(xì)胞注入uPA免疫缺陷的小鼠肝內(nèi)，再給該鼠接種HBV，成功獲得了病毒復(fù)制過程與HBV感染人體過程相似的HBV免疫缺陷小鼠模型。Ohashi等［18］用競(jìng)爭(zhēng)性抗cMet抗體處理非肥胖型糖尿病小鼠，并將原代人肝細(xì)胞移植到鼠腎球囊基底膜，同時(shí)給小鼠接種HHBV，結(jié)果表明此模型對(duì)HHBV易感。Dunkdri等［19］將uPA轉(zhuǎn)基因鼠與RAG-2剔除鼠進(jìn)行交配，所得日齡雜合子作為移植受體，將人肝細(xì)胞注入脾內(nèi)，2d后皮下注射20μLHHBV血清，成功建立了感染過程與人慢性HBV感染相似的HHBV感染動(dòng)物模型。覃小敏等［20］將純化的3型鼠肝炎病毒經(jīng)腹腔注入近交系C3H/HeJ小鼠體內(nèi)，建立了與人類慢性病毒性肝炎的發(fā)生發(fā)展極為相似的慢性病毒性肝炎動(dòng)物模型。

大鼠HBV感染模型

譚龍益等［21］將經(jīng)磷酸鈣沉淀的含全序列HBV-DNA的HBV-PCNCX質(zhì)粒直接導(dǎo)入大鼠肝臟，成功建立了HBV感染模型，在該鼠血清中檢測(cè)到HBsAg和HBeAg，肝細(xì)胞中HBV-mRNA及HBsAg得到表達(dá)。Wu等［22］將人肝細(xì)胞移植到有免疫活性的SD大鼠體內(nèi)，再接種HBV，成功建立了HBV感染模型，3w后即可在血清中檢測(cè)到HBsAg含量穩(wěn)定上升，HBV-DNA可至少持續(xù)60d；同時(shí)肝中出現(xiàn)HBV-RNA，免疫熒光示成串的肝細(xì)胞含染色陽(yáng)性的HBcAg。蔣黎等［23］用與Wu類似的方法成功建立了Wistar大鼠乙型肝炎模型，人肝細(xì)胞型細(xì)胞角蛋白和HBsAg在該模型肝組織中得到了表達(dá)。

4其他嗜肝病毒及相關(guān)動(dòng)物模型

蘇建家等［24］給樹鼩接種HHBV的新鮮血清建立了樹鼩感染HHBV的模型，在樹鼩血清中可觀察到HBsAg及Dane顆粒。Yan等［25］用樹鼩模型，進(jìn)行了黃曲霉毒素B1攝入和HBV感染誘發(fā)樹鼩肝癌及其機(jī)制的系列研究，首次在樹鼩體內(nèi)證實(shí)了HBV與AFB1有協(xié)同致肝癌作用。Glebe等［26~27］用純化的HBV感染原代樹鼩肝細(xì)胞，可檢測(cè)出HBVcccDNA、HBVmRNA、HBcAg、HBeAg。

Cote等［28~30］研究發(fā)現(xiàn)，土撥鼠感染年齡和土撥鼠肝炎病毒的不同亞型是感染后慢性化的關(guān)鍵，新生期土撥鼠感染W(wǎng)HV后由免疫介導(dǎo)的細(xì)胞和非細(xì)胞溶解途徑清除已感染的肝細(xì)胞的能力下降，新生的土撥鼠接種WHV感染率可達(dá)60%以上。Cote等［31］給新生土撥鼠接種WHV并在感染初期切除動(dòng)物大部分肝臟，1年后半數(shù)動(dòng)物發(fā)展成慢性WHV感染。Coffin等［32］研究發(fā)現(xiàn)WHV可由感染的母動(dòng)物垂直傳播，感染的仔動(dòng)物體內(nèi)的WHV-DNA可持續(xù)至動(dòng)物成年；處于感染恢復(fù)期的母動(dòng)物所生的健康土撥鼠接種WHV時(shí)對(duì)病毒易感。

與HBV同屬于嗜肝病毒科的還有地松鼠肝炎病毒、北極地松鼠肝炎病毒、樹松鼠肝炎病毒、雪鵝肝炎病毒、蒼鷺肝炎病毒、白鸛肝炎病毒等，其中以地松鼠感染GSHV模型的研究較多見［33］。

5結(jié)語(yǔ)

雖然，HBV動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究有了很大的進(jìn)展，但仍未能建立起在生物學(xué)分類上與人類相近、感染率高、維持時(shí)間長(zhǎng)的經(jīng)濟(jì)適用的動(dòng)物模型。因此，我們應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)HBV感染肝細(xì)胞分子機(jī)制的研究，提供合適的HHBV自然感染的動(dòng)物模型。

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