基因工程和基因組學(xué)

第九章基因工程和基因組學(xué)第一節(jié)基因工程遺傳工程廣義：細胞工程、染色體工程細胞器工程、基因工程狹義：基因工程

一、基因工程概述基因工程是20世紀70年代初隨著DNA重組技術(shù)的發(fā)展應(yīng)運而生的一門新技術(shù)。

→1982年經(jīng)美國食品及藥物管理局批準，采用基因工程方法在細菌中表達生產(chǎn)的人的胰島素進入市場，成為基因工程產(chǎn)品直接造福于人類的首例→1985年轉(zhuǎn)基因植物獲得成功→1996年克隆羊誕生?！F(xiàn)在，人類已利用這一技術(shù)改造和創(chuàng)建新的生命形態(tài)、生產(chǎn)藥品、疫苗、牛奶和食品，診斷和治療遺傳疾病。

1.從細胞和組織中分離DNA。2.利用限制性內(nèi)切核酸酶酶切DNA分子，制備DNA片段。3.將酶切的DNA片段與載體DNA連接，構(gòu)建重組DNA分子。4.將重組DNA分子導(dǎo)入宿主細胞后，在細胞內(nèi)復(fù)制，產(chǎn)生克隆(clones)。5.重組DNA能隨宿主細胞的分裂而分配到子細胞，使子代群體細胞均具有重組DNA分子。6.能從宿主細胞中回收、純化和分析克隆的重組DNA分子。7.克隆的DNA能轉(zhuǎn)錄成mRNA、翻譯成蛋白質(zhì)。能分離、鑒定基因產(chǎn)物。

二、限制性內(nèi)切核酸酶限制酶：作用于特定（異）核苷酸序列的磷酸二脂酶，是遺傳工程的工具酶目前已分離和鑒定出200多種不同的限制酶

限制性酶據(jù)其作用特點可分為兩類:第Ⅰ類:每隔一段DNA序列隨機切割雙鏈DNA分子，沒有序列特異性。很少在基因工程中應(yīng)用。第Ⅱ類:能識別一段特異的DNA序列，準確地酶切雙鏈DNA的特異序列?；蚬こ讨袕V泛應(yīng)用。

圖9－1限制性內(nèi)切酶EcoRI的酶切位點及酶切產(chǎn)物連接

回紋序列圖9－2限制性內(nèi)切酶SmaI的識別及酶切位點平齊末端三、載體經(jīng)限制性酶酶切的DNA片段或基因，必需與適合的載體DNA連接構(gòu)成重組DNA后，才可以高效率地進入宿主細胞，并在其中復(fù)制、擴增、克隆可作為DNA載體的有質(zhì)粒、噬菌體、病毒、細菌或酵母菌人工染色體BAC、YAC等

作為精載體集，需潔具備嘗4個裙條件角：1.鑒具復(fù)溝制原杯點，在宿蛇主細腐胞中岸能獨敬立復(fù)溉制，能澆帶動陣攜帶摘的外窄源DN豪A片段愁復(fù)制疲。2.蒜具有宣多克藏隆位暑點，刪即具宗有多睬種限耕制酶嘉切點，怠每一逗種酶探的切老點只哄有一竄個，蜻用于賺克隆外談源DN皺A片段譯。3.砍至少倉具有法一個騾選擇竹標(biāo)記耐基因檔，這唯個基椒因是抗訂菌素驢的抗猾性基真因或凝某種為酶的冒基因污，而宿別主細毛胞則柏沒有揚這種釋基因亮，使流有或凝無載體鞋的宿做主細植胞具員有易民鑒別孫的表守型。4.窄易從舌宿主繞細胞忠中回貪收。1、別細菌己質(zhì)粒繡：廣扣泛應(yīng)探用于數(shù)基因梅工程2、噬菌怖體載門體1、噬菌叢體；2、噬菌談體DN另A；3、噬菌慚體DN耽A中間基因抗簇；4、將寒連接立物體的外包繪裝后絕感染窩細菌多，制嫩備基界因庫（用旗于基宰因庫蟲構(gòu)建納）3、灑柯斯封質(zhì)粒：是利紀用部牲分λ噬菌舍體DN談A與部戲分細燒菌質(zhì)銜粒DN射A序列佩組建悲而成糕的，弟它可孕接受嗓長達鳳50kb的外引源DN墊A片段濟，在克胳隆真扎核生巴物基證因中估十分鍋有用4、詞穿梭死質(zhì)粒：能在造兩種存不同治的生掠物中論復(fù)制憤的載諷體。裂例如丟既能緩在原軋核生顫物(著如大計腸桿舌菌)益中復(fù)溫制，炭又能付在真頃核細茅胞(如貴酵母抱)中迷復(fù)制印的載體。很多塌酵母梁菌的穿梭鉤載體捆，用眼于功能互款補法鋪分離顏、鑒定真核生抱物基燈因的研究5、豆細菌潛人工縣染色需體：上述路的幾觸種載能體都番不能砍攜帶匯大于逮50kb的外計源DN添A片段劍，而此很多后真核跳生物渴基因方長度古在5路0kb以上促。細菌汗人工豆染色販體(BA降C)載體省就是總為克花隆更畜大的材外源DN嘗A片段榴而設(shè)奶計構(gòu)夏建的6、室酵母丈菌人攤工染預(yù)色體焰：YA沉C可接氏受1縮慧00漫-1攤00逃0kb的外箭源DN秀A片段暴，這一尾特點遠使YA蘆C成為留人類皆基因駕組計瞎劃及飽圖位件克隆沖分離銹基因嗎的重寺要工拿具7、Ti質(zhì)粒戒及其位衍生撲載體Ti質(zhì)粒環(huán)包括效五個拒區(qū)域繪，1杠.LB與RB之間攤的T-劍DN洲A，這段謹序列稈整合盜到植立物基老因組脾中；債2障.扶質(zhì)粒倡轉(zhuǎn)移窄區(qū)(PT在)；3.冠癭主堿代謹謝區(qū)理；4.亭復(fù)鈔制原括點；5.竟毒吐性區(qū)膨?！鶷-瓦DN舊A區(qū)域旦內(nèi)的潮所有蠅基因秤與轉(zhuǎn)慢移無柜關(guān)，怖所以渾將致疾瘤基棉因全愛部缺耳失即衰卸甲警(di耐sa芝rm舒ed學(xué))后，廢將細央菌抗遼生素青的抗即性基緊因或縫其它欲序列鉛插入縱到這暖個區(qū)機域，攻形成駕的T-尸DN矛A仍可攜將RB至LB內(nèi)的聚序列屋轉(zhuǎn)移帖并整羽合到玩植物暢基因謀組?！鶹i虜r區(qū)的刻毒性賺基因斜是T-墻DN舟A轉(zhuǎn)移練所必尊需的絞，毒骨性基弦因可徐以順溉式及叉反式口兩種零方式博控制T-刮DN克A轉(zhuǎn)移嶺。Ti質(zhì)粒竟是約獸20尚0-妥50橋0kb的環(huán)目狀DN口A分子懲，很訪難直綿接使馳用，壁故需什對其熔加以代改造摔，構(gòu)詠建出Ti質(zhì)粒助的衍浸生載畢體系灶統(tǒng)，備廣泛殼用作膀植物盼基因塘工程艙中的亦載體糠：（1泄）雙刑元載磚體(bi鹽na逃ry墻v狀ec批to財rs漢）如pB教in梅19載體禾，具其有原灑核生賽物的仿卡那辱霉素屈抗性寧基因喘(Ap俱hⅠ)作為示細菌伍選擇雹標(biāo)記即，真譜核生公物的趣卡那逢霉素斤抗性響基因六(no師s-Np糟tⅡ)作為心植物陸的選鏟擇標(biāo)美記，pU濁C1撈9的多蟻克隆趁位點升及α-互補途顯色葡標(biāo)記（2勁）共娛整合簽載體萬(in晃te哄gr課at濤ed病v脹ec括to虛rs你)四、蛇基因立的分嬌離與窄鑒定一個汽基因瓣就是若編碼陸一條寧多肽童鏈的歡一個DN召A片段銷，包平括啟握動子枕、終庫止子窗及內(nèi)陡含子滲。利用DN貧A重組畏技術(shù)灶，可雹從一如個含這有1喪0萬簽個基氣因的仁大基清因組津中，婚準確懇地分媽離出證特異澡的單燃個目誰的基防因。抹分離梨與鑒雙定基噴因是DN與A重組睬中的根關(guān)鍵蘿步驟呢之一揉。1、核從基春因庫繞中分植離基僚因基因膜庫(li數(shù)br乖ar鴨y)是一賢組DN嶄A和cD蚊NA序列奇克隆吉的集薄合體頁。從倒基因星庫中校分離瓦基因慚，首乏先要黨構(gòu)建鑄基因所庫。（1夏）構(gòu)率建基描因庫根據(jù)就克隆星的核懲酸序稍列、欠來源巴，基混因庫住可分想為核基貢因庫、染色市體庫、cD州NA庫、線粒捏體庫等①核基青因庫美：將某爬一生庸物的挨全部嗎基因駕組DN盼A酶切礎(chǔ)后與摸載體努連接括構(gòu)建乎而成曉的。方法藝是：即盡量建提取妹大分糧子量黎的核DN悟A，用限改制性孔酶酶洽切后老，分母離選宇擇具尾有一景定長盆度(峽大于盞15kb碑)的DN裂A片段暴，與適蔽宜的歷載體地連接壓構(gòu)成丸重組DN腰A分子筋,根據(jù)泄所用設(shè)的載忠體，恒選擇姥相應(yīng)帆的宿訪主細才胞用啄于克定隆。②染色區(qū)體基嘗因庫塑：將基把因組罵的一趣部分擴（如爹一根精染色意體）葡用來拌構(gòu)建恥基因忌庫，研對于叮選擇秋特異揉基因煙及分燃析染先色體轟結(jié)構(gòu)肯和組炊織十隸分有拍價值拴。例如律果蠅X染色虹體上冬的一腿個片膜段，弊具有妄50吐多個策多線糠染色敏體帶，利用跨微切咬割技富術(shù)將射這一假段染斃色體眠切割鏈，抽乳提DN部A用限尊制性取酶酶籠切后丹，克寒隆到貓噬菌白體上樸構(gòu)建遷成染公色體欲片段粉基因款庫。③cD查NA庫cD憂NA庫是援以mR冠NA為模板繳，經(jīng)哄反轉(zhuǎn)錄酶濁合成賴互補DN腦A（cD欺NA)構(gòu)建的基階因庫穩(wěn)。圖經(jīng)9－擱10cD由NA合成治示意莫圖1.po攜ly含-T引物榜和po慰ly捧-AmR鄙NA分子貫復(fù)性孩；2.款在po丈ly趴-T引導(dǎo)柱下開年始形路成互仿補DN解A(cD夸NA)；3.完整膝第一佩鏈cD指NA合成膛，形方成RN頓A-cD欣NA雜合谷雙鏈迫；4.cD參NA鏈在表3端形哄成發(fā)遼夾結(jié)叉構(gòu)；5.聾發(fā)采夾結(jié)挨構(gòu)引饅導(dǎo)合笑成第愉二鏈銳(或菊用RN沸as甩eH處理株)；6.宮用S1酶將蜓單鏈運降解事得到景雙鏈cD屢NA得到秧的雙洽鏈DN峰A分子檔經(jīng)兩辛端補敏齊后拾，與范帶有塑限制粘性酶錢切點準的人顧工接躺頭連雖接，干酶切鐵后與禮載體(通常敞是λ噬菌共體)連接薦，再警用類踏似核魂基因柱庫中械介紹煩的方柔法，上制備cD第NA庫。cD貞NA庫與形核DN旱A(chǔ)庫不我同，cD開NA庫僅矛具有孟用于洪分離mR擱NA的細云胞或頑組織簡內(nèi)表吳達的帆基因息的mR慕NA序列交，所嗓以它碰僅包圣括基扛因組兔的部悶分基鬼因序遭列。cD嫩NA庫對鉤于研萍究基粱因的傻表達禿模式招、分挽離某竹一特爹定基吧因是離十分蠅有用燒的。（2蕉）篩貼選基笨因庫大多禽數(shù)方界法是役利用拴一段皺核苷為酸序護列(DN涂A，cD匠NA或寡買核苷納酸)師作探該針(pr退ob孩e)溝，用放說射性似同位副素或酷非放脆射性糞同位戶素標(biāo)未記探帝針，災(zāi)也可起用抗違體作叫探針鴨，篩述選基落因庫籠。如：每篩選λ噬菌汁體構(gòu)奏建的驢庫常構(gòu)利用菌斑脫雜交獲法：將經(jīng)斯重組脂噬菌理體(圍來自禁基因秩庫)俊感染堤的宿勢主細竄菌細墊胞與惹培養(yǎng)揭基混逮合后旅，倒懇在培初養(yǎng)皿糕中，豈培養(yǎng)玩過夜解，形暖成噬堅菌斑猴(伴圖9凱－1仗1)烘。圖趕9蜘－1瘦1借篩選南基因松庫1、計培養(yǎng)活基因慮庫，新將噬疏菌斑轉(zhuǎn)移款到硝鏟酸纖蹦維素圓膜上2、枕將膜偏上的DN決A變性車成單鏈3、若用標(biāo)拌記的升探針亞與膜綱一起保溫第，進沿行分抗子雜脅交4、鮮將膜最洗后宿，用X-光片放射粗自顯燃影，內(nèi)箭頭刮處表示有雜交活信號茫的斑膀點5、校挑出現(xiàn)陽性非克隆觀，用渠于進一步某分析（3悼）陽塞性克耗隆的鉛分析登與鑒位定從基鵝因庫擊中篩炭選出馳的陽嶼性克摘隆，毫還需瞞進一朗步分執(zhí)析、余鑒定粉，才蹦能得陷到目衣的基匆因。①限剖制性啊酶圖喉譜采用亮類似艙的方選法，廈將不會同DN輔A用限濫制酶刮消化你，根碼據(jù)其創(chuàng)產(chǎn)生的多杏型性曠即RF塑LP援，來分艇析DN廈A水平劈燕的變覆異程圓度，繼以RF史LP作為分子被標(biāo)記寺進行純基因盼組圖睛譜分菊析此外完，上臂述經(jīng)No謎tⅠ或Sa屑lⅠ消化的斷片段淋，可疼以亞悔克隆挺到pU泛C1絨8等質(zhì)宅粒上拿，用技于限膽制性圖譜能分析得或序辛列測奏定。②核酸溪分子旦雜交So栽ut雜he弓rn雜交:a.將DN尚A用限誤制性毀酶酶筋切；b.將酶享切的DN注A進行言瓊脂誤糖凝豆膠電支泳；c.經(jīng)過暗變性畫處理襯后，另將凝遍膠上宇的DN足A轉(zhuǎn)移鴨到膜刮上；d.用經(jīng)常過放公射性多同位眼素或槽非放晚射性劈燕同位戰(zhàn)素標(biāo)獎記的DN抖A探針仔與膜趴上的DN身A片段湯雜交助；e.洗去侵膜上船非特歷異性姨結(jié)合彎的探月針后誘，用X-光片怒放射趨自顯特影檢呀測雜堅交信青號；f.如果渣轉(zhuǎn)移隆的膜上具淘有與封雜交際探針相同絡(luò)或部些分同此源的序列扭，放吐射自猛顯影后就寫會檢間測到賄雜交帶信赴號No灘rt千he持rn雜交煩:采用叢與So服ut宜he衡rn雜交灑相同罰的原飽理及遭程序局，不現(xiàn)同的芒是用RN論A進行搞瓊脂曠糖凝份膠電原泳。基本熟程序:a.提取柳總RN懼A，經(jīng)過脖瓊脂丟糖凝毫膠電駕泳;b.轉(zhuǎn)移密并進染行分拉子雜真交,僚雜交絨的探歪針來擋自克泄隆的機基因郊;c.如果草膜上數(shù)有與霜探針航互補傲的RN陡A分子礎(chǔ)，則柜在X-光片似上可走見到垃雜交漂信號艱帶。No四rt忍he浙rn雜交愿廣泛經(jīng)用于壁研究蟲基因脹在不滑同細脊胞、蹈組織歪或器憑官的談表達必模式獅，檢炕測mR除NA分子只量大雜小以塘及mR雹NA加工歐過程睡中可她能存凡在的賠不同份方式瘦，定市量分最析mR磚NA等。We梯st某er規(guī)n雜交名:用蛋垂白質(zhì)命電泳筍后轉(zhuǎn)將移到島膜上符進行方分析③口核酸披序列闊測定Sa炸ng剖er待(1誘97玩7)發(fā)明壇雙脫腦氧核芬糖核走酸鏈矛終止普法:猴將序敢列反跨應(yīng)分沸為A，臺C，偏G和T四管紫，每牙管中妻含有近變性惕的DN虧A模板僻、DN齊A聚合博酶、柳標(biāo)記死的引萬物、蘭四種汪脫氧權(quán)核苷高酸，返再摻錢入一閃種一陽定比糧例的旬雙脫費氧核維苷酸把(如A管中孩，即挺是腺揚嘌呤A雙脫漆氧核震苷酸瓜，以徑此類巷推)熄。在DN買A合成薯過程伐中，鄭雙脫厲氧核迎苷酸硬與互掃補序替列配穴對被險整合凡到正踏在延勵長的DN熟A鏈中刷，在朱不同DN歡A鏈上尊隨機射地整示合在逐不同補位置另。由裳于雙喊脫氧凍核苷駱?biāo)嵩谕璧谌次粵]有辱游離娃的羥棉基(蘆-OH杯)，無法何再連酬接另剛一個庸核苷坦酸，猜導(dǎo)致DN隆A鏈合霞成在法這里稼終止綁。結(jié)幣果每始一個耍反應(yīng)桶管中糧都合德成一創(chuàng)系列斜不同炕大小勻的DN肥A分子裹。將云四個陣反應(yīng)量產(chǎn)物挖并排醫(yī)點在糧聚丙西烯酰絮胺凝暮膠上倦的四盒個孔申中，變電泳珠后每交個孔猾中形難成一燈條梯菊狀DN痰A(chǔ)帶，從底獄部往帶上閱咳讀，炎即是錯5′童到3緣瑞′端覽的序鴿列:CG游CT柜CA尋GC獵TG靜GT昌GA殲TT算GT掉GT④古核酸掘序列務(wù)分析→測定煩的核獲酸序頸列是欲不是賴所需立要的艙基因膽，或諒具有什么阿功能慚，還諸要用扶計算東機軟守件或妖生物嚼學(xué)實鉤驗進一步嚇分析笨，才撈能最斃后得池出結(jié)洪論。→同源靠性比萬較是害常用箱的方青法之返一?？蓮墨@核酸擁及蛋白質(zhì)稈兩種澡水平點比較降基因鹽間的抵同源窄性。首先鏡可將測出辜的核奴酸序萬列同概雜交誓的探熔針序榆列進續(xù)行比蹄較，或?qū)⒙暤玫教说男虿m列發(fā)偵到BL彈AS難T等DN張A批Da岔ta庫的潑網(wǎng)址上比脆較，預(yù)很快伶就可效知道盒測得膏的序安列與殊所有策的已知序斧列之貪間的冤同源抗程度寧?！硪患宸N方棚法是述分析情核酸躍序列追的閱捐讀框佳架。一個OR抵F就是厘一段醉能編笨碼一畜條多丸肽鏈予，并邊通常絨具有甚翻譯起膽始信認號以價及一肌種終服止信氧號的妖核苷否酸序祥列。2、攜聚合售酶鏈羞式反錢應(yīng)(PC消R)擴增縱基因PC嫁R是體陳外快洋速擴鋼增DN邪A的方晉法,釣由美話國的Mu病ll疑is增(1屠98隨6)發(fā)明貓,可半在幾襖小時粘內(nèi)使?jié)L目的宏基因乖片段濾擴增拋到數(shù)兆百萬匠個拷仁貝。方法紫:首先免根據(jù)互待擴猛增基翅因序徐列合仙成兩僑個引壟物，影分別看與待頓擴增她基因梁二條付鏈的修兩端蛙互補售，從掩5′墊到3業(yè)′的夕方向吵向待果擴增扁基因棉的中繡間延痰伸。門在DN帖A模板披變性仗成單蚊鏈后貌，兩拴個引殲物分艦別與占單鏈DN族A復(fù)性無，在乞耐熱DN借A聚合偷酶(Ta喊q酶)察及四則種脫芹氧核派苷酸憶存在占下，此由引該物引劍導(dǎo)合滑成DN繼A新鏈緩。PC勞R反應(yīng)禾包括依三個劈燕步驟辜：(1臂)變們性：94側(cè)-95威℃，使模陳板DN摟A的雙透鏈變傲性成谷單鏈(2亂)復(fù)渾性：50蕩-7炊0℃，兩個柳引物分畏別與較單鏈DN翼A互補民復(fù)性(3盡)延伸碗：72℃，頃引物榜引導(dǎo)狡、Ta慎q酶、4dN堆TP旬s，合成模板DN臺A的互肌補鏈→這三逼個步陡驟稱圣為一筋個循杜環(huán)，PC腸R反應(yīng)脅常有25茫-3受5個慨循環(huán)智。一個喜循環(huán)虎完成豎后，蓋待擴觸增的基醋因擴裙增了腔一倍削，新輝增加咸的基聚因又丸可作為模桑板用蕩于下章一步悟的擴池增，爭所以揉，PC不R反應(yīng)中擴乞增的交基因旺是成朽指數(shù)叮級增草長的藝。因盒此僅用少抗量的攝模板DN條A分子料，經(jīng)PC瘋R后可火以得伶到大量證擴增籍基因俯產(chǎn)物境?！鶳C覺R擴增醋的基撈因經(jīng)孟過核趙酸序朝列測擊定分親析后獅，可作架為基平因工柱程的丹目的賓基因拳?！鶕?jù)PC圓R方法片及原哪理，克現(xiàn)已娘發(fā)展芒衍生傭出很油多新方添法，屈如RA第PD秩,疑AF珠LP等，磨廣泛擺用于門基因分子憤標(biāo)記委等研可究中煉。3、泥人工轟合成恐基因（1魯）化紐奉學(xué)合窄成多糕個含捎有8臺0-鎮(zhèn)10賣0個瓣核苷鴉酸的敞寡核觀苷酸找，每穿個寡羨核苷掠酸之蔬間具鍋有1些9-參24扎個核秋苷酸爬的重廢疊序助列（2棍）將春各個禽寡核艱苷酸桶等量壟混合咱，在DN槍A聚合鬧酶(?；騎a泥q酶)牧作用價下，權(quán)各寡謙核苷稻酸又惠作為駁引物中合成劇新鏈隸，使步單鏈鼻部分辛補齊泳成為猶雙鏈摟，再妥用兩屠個PC趁R引物邁，經(jīng)PC喝R擴增域出DN鄰A片段隱。（3份）若財將兩戒個DN升A片段覆放在僅一起核，經(jīng)SO需E-長PC他R擴增猛出完愈整的基肝因片溪段，做或直接測辨序，傭或克蓬隆到質(zhì)粒友上再份測序么后加以利舉用。五、夫重組DN羞A分子六、師將目踐的基素因?qū)ト胧塥q體細懸胞（船植物櫻、動物待等）素，獲貞得表曲達個體—掉轉(zhuǎn)基擠因個木體1、茫農(nóng)桿窄菌介趁導(dǎo)法主要障用于接雙子們?nèi)~植趟物2、崇基因踐槍法主要沒用于掘單子纏葉植爺物3、繳電擊掙法、條聚乙陪二醇斤法、花粉唱管通襪道法愈、顯鴿微注射氏法、解超聲呀波法萌、激光威微束渾法等七、罪轉(zhuǎn)基程因生嘆物的艘鑒定PC爆RSo慎ut記he根rn腔b壇lo糊tt鐮in怒gNo塔rt俘he芬rn辱b駕lo嬸tt案in們gWe妄st婆er巷n積bl笑ot丑ti點ng特性償（表煤型）島鑒定圖9－18抗除甜草劑礦轉(zhuǎn)基因巨植物顫產(chǎn)生役的方摧法1、將頓抗除建草劑抬基因沫與Ca樂MV35跟S啟動謠子連格接成重爛組DN皇A分子雖；2、將觸重組DN綢A分子戚與載體連砌接；3、將姨重組爭質(zhì)粒膠導(dǎo)入謎土壤農(nóng)桿傍菌；4、在趨土壤即農(nóng)桿更菌介伸導(dǎo)下，部咐分質(zhì)林粒及藍目的御基因整谷合到眨植物崗染色咳體上；5、在走選擇蝦培養(yǎng)僚基上蜓選擇、培浩養(yǎng)、叢再生車；6、抗舞除草抗劑轉(zhuǎn)定基因險植株八、訓(xùn)基因兔工程匠的應(yīng)各用1、基因瓶工程便工業(yè)生產(chǎn)森胰島優(yōu)素等在細菌妙中產(chǎn)蒼生胰話島素灰的方望法2、穿轉(zhuǎn)基土因植烘物抗除寶草劑喬、抗鉤蟲、煩抗病該、抗秀逆的序優(yōu)鍋良品俗系或乞品種肌，很酷多已經(jīng)料大面語積種演植推能廣。20散02令年5震00玻0萬襲公頃蛋：大豆饞、玉尸米、芹棉花謠、水稻趣、馬棚鈴薯屈、番漸茄、小麥蕉等3、父轉(zhuǎn)基漫因動澇物：使羊、借牛4、穿遺傳站疾病水診斷（1悟）RF伐LP法（閥鐮刀榮性貧運血病勺）（2易）等位巾基因胞特異藍寡核其苷酸對法當(dāng)已別知突析變基臺因的核惱苷酸礎(chǔ)序列茶時，就可理以用筋人工境合成的偏寡核褲苷酸申進行PC噴R反應(yīng)無，將PC郵R產(chǎn)物仍用作護點雜交診分析穩(wěn)，鑒揪定基因包型5、柳基因獎治療利用牽基因是工程科技術(shù)佳，將刪特異架基因驚導(dǎo)入右并整飾合到信具有噴遺傳寫缺陷文的患鳴者的段基因棕組中駝，以害治療盆遺傳氧疾病基因古治療罵的載墊體和蜂重組DN疑A分子6、DN障A芯片DN瞇A芯片須(DN墓A躲ch尾ip促s)是將候核酸染分子夢雜交屢的原機理和饅方法那,與叫半導(dǎo)謹體技夾術(shù)結(jié)嫌合而質(zhì)發(fā)展血形成楊的一護門新安技術(shù)九、侄安全霉問題1、轉(zhuǎn)基惜因植圍物成崗為雜譽草2、把導(dǎo)致妥新的貪病蟲景害，旅威脅軟生物多樣即性3、誼食品夕安全秩性2n嫌=3垮6,撕A慘AC2n糟=2律5,腥A師A+很1C不同鍵漸滲墾系與AA回交第二衫節(jié)刪基川因組套學(xué)基因阻組學(xué)憲(ge浙no起mi稱cs)是遺嚷傳學(xué)離研究紛進入昌分子卷水平仗后發(fā)缸展起衫來的鵲一個停分支厘，主絕要研陣究生衡物體挑全基坊因組餡(ge絞no由me收)的分捎子特取征?；蛎}組學(xué)小強調(diào)宵的是殼以基姜因組洲為單禿位，獸而不芬是以它單個盼基因共為單需位作穩(wěn)為研戒究對掙象，年因此辯，基考因組拋學(xué)的謠研究葡目標(biāo)肥是認句識基爬因組功的結(jié)分構(gòu)、名功能六及進出化，夕弄清刺基因刊組包呼含的會遺傳怖物質(zhì)董的全哥部信慣息及壇相互爆關(guān)系覆，為歐最終報充分豆合理游地利堆用各覽種有銹效資糕源，呆為預(yù)血防和半治療蛛人類蹦遺傳夠疾病傾提供素科學(xué)遍依據(jù)柱?；蛱斀M學(xué)謎的重宅要組撇成部倉分是掉基因芳組計早劃，如人肚類、速水稻仗基因錄組計趟劃，大體決可分宵為：1、構(gòu)建給基因縫組的沾遺傳緒圖譜2、休構(gòu)建袋基因想組的猶物理閘圖譜3、純測定徐基因閑組DN鏡A的全烤部序仰列4、特構(gòu)建洽基因己組的糖轉(zhuǎn)錄燥本圖盟譜5、甩分析扭基因詞組的爬功能基因拴組計受劃研針究開逢始于19她90年，美國賓國立除衛(wèi)生文研究全院(NI犯H)和能路源部(DO年E)聯(lián)合喇啟動巴了被六譽為“人體電阿波佳羅計對劃”的“人類?；蚶C組計董劃”(hu平ma由n禾ge區(qū)no仁me政p奇ro溉je松ct撥，H射GP豈)。在美顏國提架出人械類基睬因組亡計劃擱后，霞英、偽法、星日、奮前蘇齊聯(lián)、般中等揮，也款相繼嗽啟動肆了類仍似的西研究爛項目鹽。20缺00驗?zāi)?蠢月2追6日綠，各恭國科少學(xué)家拋公布列了人襲類基何因組塊工作蒜草圖孔，2鉗00嶄1年灰8月檔26畏日，降人類拖基因紐奉組計膜劃中求國部飾分測椅序項勻目匯巾報及菜聯(lián)合劇驗收艇會在鹿京召仗開，是標(biāo)志便人類字基因餓組“宣中國應(yīng)卷”變通過純驗收19幼92年8面月，歪中國遭根據(jù)炎國情兔正式杜宣布雜實施戀自己共的“減水稻雨基因趁組研竊究計禽劃”苦，已只完成釘水稻販基因衡組物技理圖行譜的巾構(gòu)建均。20柏02呆年4史月5抬日，弦《Sc蕉ie閥nc怒e》以14攤頁的兵篇幅援刊登頁和宣拜布中烏國科炕學(xué)家腫獨立箭繪制萬完成蒜的水岸稻基待因組爸草圖芽序列倡（4蝦.6諷億）一、顯基因桂組圖獎譜的隆構(gòu)建在進都行大酒規(guī)模描序列債測定稱之前征，構(gòu)叫建基隔因組料圖譜恩是測腎定大艦基因奶組全網(wǎng)部核逝苷酸諒序列格的重群要一交環(huán)。須基因著組圖炸譜可粥作為露序列貼測定擺中制唇定測揉序方貝案的勸依據(jù)疾，以箏便先盆重后逐輕地煌分析膊基因溫，錨光定測柜知的話核酸怪序列炕在染秤色體單上的叔位置俗。因此不，在型人類筑基因斧組計音劃實讓施過皮程中巖，首切先用為了六鳳年時淚間構(gòu)蜜建高過密度呼的基牙因組團圖譜譜，然賀后才牢進入蹄測序露工作橫。1、遺傳尺圖譜（1逃）圖癢譜標(biāo)陵記圖譜粱構(gòu)建日中需羊要可冰以鑒卸別的房誠標(biāo)記膊(ma揚rk水er菊)，在構(gòu)夕建遺占傳圖襲譜中怎，可禾用基宮因和DN匹A作為酷標(biāo)記擾?；蛩麡?biāo)記泊：用基環(huán)因作柳為標(biāo)須記，戲分析仗各基喊因間跌的連旁鎖關(guān)肅系及航遺傳鈴距離區(qū)，繪鹽制出跨連鎖貨遺傳狐圖譜DN映A標(biāo)記敞：限制婦性內(nèi)排切酶皮多型浪性(RF膨LP被)、簡單搭序列烤長度竹多型屑性(SS不LP攏)、單核樂苷酸惱多型龍性(SN膀Ps)（2籃）遺福傳圖刃譜的昏構(gòu)建人類雪基因滅組遺島傳圖骨譜的挪構(gòu)建技：人類邪的遺熱傳圖狠譜是灑利用敞家系魄分析虧法，稀在對圖8個陣家系豎的1伯34纏個成摘員的類分析近中，含主要剃根據(jù)梅52守64愿個ST餐R標(biāo)記劣繪制岔而成罰的。計利用牲這些鼓家系后的資笛料繪渣制第蓋1至雜22截號染霞色體若圖譜虎。對友于X染色循體圖彩譜，僻還利貌用了釋來自陷另外射12可個家森系，摧17術(shù)0個咳成員越的資跨料繪概制而逆成。將5臺26靜4個鑰標(biāo)記凡定位莊在2徑33絕5個練位點貼，據(jù)希此構(gòu)馳建的蜂人類獸基因桂組遺描傳圖脹譜的睡密度通為每繳個標(biāo)植記5蠶99Kb宰。植物刃基因翼組遺塘傳圖協(xié)譜的助構(gòu)建：選擇親衣本產(chǎn)生鄉(xiāng)豐構(gòu)圖牢群體遺傳厚標(biāo)記上的染把色體帖定位標(biāo)記酸間的利連鎖架分析2、物理四圖譜由于半遺傳戒圖譜榮的分姐辨率刻有限鼠、精燥確性壤不高社，所域以還毀要構(gòu)棚建物表理圖彎譜?；蛄w組物熟理圖乏譜的句構(gòu)建接主要歇有三顛種途甜徑：①限制歐性酶跨圖譜②熒光駐原位撇雜交惜技術(shù)衛(wèi)(FI溉SH你)③序列疊標(biāo)簽求位點鈔(ST捷S)如表震達的尺序列老標(biāo)簽煌(ES吳T)覆，來自cD刪NA圖9－27酵母冬菌第II蛾I染色峽體遺威傳圖外譜(A)與物匪理圖景譜(B)的比暫較二、蔑基因賓組圖泊譜的矮應(yīng)用翠：1、民基因失組序微列測寨定2、赤基因睜定位3、款基因?qū)M比名較分含析4、堆分子緣瑞標(biāo)記砌輔助踏選擇5、列基因愛的克宣隆與希分離三、禍后基籍因組誤學(xué)后基童因組飄學(xué)