雙柏凝膠劑中大黃素體外透皮吸收的實(shí)驗(yàn)研究

雙柏凝膠劑中大黃素體外透皮吸收的實(shí)驗(yàn)研究【摘要】目的研究雙柏凝膠劑中主要成分大黃素的透皮吸收特性，并考察了處方中其他成分對(duì)大黃素吸收的影響作用。方法采用改良的Franz擴(kuò)散裝置，以離體鼠皮為屏障、磷酸鹽緩沖液為接受介質(zhì)，研究了大黃提取物凝膠及雙柏凝膠劑中大黃素透皮吸收性能。結(jié)果在大黃提取物和雙柏凝膠劑中，大黃素12h累積透皮釋藥為，μg·cm-1。結(jié)論大黃提取物凝膠中大黃素具有一定的透皮吸收，但不太理想，而雙柏凝膠劑由于其他組分的加入，促進(jìn)了大黃素的吸收，從一個(gè)方面佐證了該處方制成凝膠劑的可行性。

【關(guān)鍵詞】雙柏凝膠劑；大黃素；透皮吸收

雙柏散由大黃、黃柏、澤蘭、側(cè)柏葉、薄荷組成，具有消腫止痛，活血化瘀之功效，主要用于治療跌打損傷早期及瘡瘍初起紅腫熱痛等癥［1］。傳統(tǒng)的蜜調(diào)散劑使用時(shí)易污染衣物，且存在較多的過敏反應(yīng)。為方便使用，同時(shí)為提高藥物的生物利用度，我們將其制成雙柏凝膠劑。本文以大黃提取物凝膠作對(duì)比，以大黃素為指標(biāo)，考察了雙柏凝膠劑透皮吸收情況，從而對(duì)雙柏凝膠劑的體外吸收進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。

1儀器與試藥

儀器高效液相色譜儀：LC-10ATvp雙泵，SLC-10Avp控制器，SPD-10Avp紫外檢測(cè)器，CTO-10ASvp柱溫箱。

試藥大黃素對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)為0756-9908)；甲醇為色譜純;大黃、黃柏、澤蘭、側(cè)柏葉、薄荷由柳州市神農(nóng)中藥飲片廠提供，經(jīng)柳州市中醫(yī)院藥檢室鑒定，符合《中國(guó)藥典》要求；其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

凝膠劑的制備取處方量的大黃(A)和根據(jù)雙柏散處方比例稱取藥材粗粉(B)，均加95%乙醇浸泡6h，以5～7ml/min的速度滲漉提取，相應(yīng)滲漉液濃縮至約50g，加入3g卡波姆940，密閉放置過夜使其充分溶脹，加蒸餾水至100g，研勻即得。分裝于密閉避光的容器中，貯存于涼處。A：大黃凝膠;B:雙柏凝膠

建立測(cè)定方法

色譜條件

色譜柱為選Kromasil-C18柱(5μm，250mm×mm)；流動(dòng)相為甲醇-水；流速ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量：10μl。

對(duì)照品溶液制備

精密稱取大黃素對(duì)照品5mg，加甲醇溶解定容至25ml，制成mg/ml的溶液，即可。

供試品溶液制備

精密稱取凝膠劑1g，水浴濃縮至近干，加蒸餾水10ml，濃鹽酸1ml，沸水浴中水解30min，再加氯仿20ml，超聲振蕩20min，置分液漏斗中分層，取氯仿層；水層用氯仿洗3次，每次10ml，合并氯仿液，揮干。加適量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中，超聲振蕩數(shù)分鐘使溶解完全，加甲醇至刻度，搖勻。針孔式微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

線性關(guān)系

考察精密吸取對(duì)照品溶液用流動(dòng)相稀釋成，，，，μg·ml-1進(jìn)樣10μl測(cè)定，以大黃素進(jìn)樣量和峰面積進(jìn)行線性回歸，求得標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：Y=3422，r=8。結(jié)果表明大黃素進(jìn)樣量在～10μg·ml-1范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取上述對(duì)照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定5次，結(jié)果大黃素峰面積值的RSD=%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取供試品溶液，于0，1，2，3h分別進(jìn)樣測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD=%。表明供試品在3h內(nèi)穩(wěn)定。

體外透皮吸收方法

離體鼠皮的制備

取體質(zhì)量20～22g小鼠，乙醚麻醉，剪去背部毛，取皮膚剝離皮下脂肪及粘液,用生理鹽水沖洗干凈，備用。

接受液pH的磷酸鹽緩沖液。

體外透皮實(shí)驗(yàn)裝置及方法

本實(shí)驗(yàn)采用Franz擴(kuò)散池裝置。將備用鼠皮固定在擴(kuò)散池的供應(yīng)室與接受室之間，使角質(zhì)層面向供應(yīng)室，上下夾緊后在接受室中注滿接受液，驅(qū)除氣泡。在供應(yīng)室中分別加入1g樣品凝膠(A)及(B)。開啟電磁攪拌器連續(xù)攪拌,并保持水浴溫度在(32±0.5)℃。分別在，1，2，4，6，8，12h取樣4ml，同時(shí)補(bǔ)加等量同溫的新鮮接受液。

接受液含量測(cè)定

和累積透皮量的計(jì)算取接受液4ml供試品溶液制備項(xiàng)下操作得到供試品溶液。取10μl進(jìn)樣，在254nm處測(cè)得峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程,得接受液濃度，并按以下公式計(jì)算累積釋藥量

:C1=f(Xi)；Q=(Ci×v∑n-1i=1+Ci×4)/S。其中f(Xi):標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；Ci:接受液中藥物濃度；V:接受液體積；S:擴(kuò)散面積。

體外透皮吸收結(jié)果色譜分離結(jié)果見1。

結(jié)果以累積透皮釋藥量Q對(duì)釋藥時(shí)間t作圖。將數(shù)據(jù)進(jìn)行模型擬合，滲透動(dòng)力學(xué)符合Higuchi函數(shù)方程，即A凝膠：Q=/2+(r=3)，滲透速率為μg·h-1，而B凝膠：Q=/2+(r=7)，滲透速率為μg·h-1。

經(jīng)處方配伍后，大黃中主要成分大黃素的經(jīng)皮滲透效果優(yōu)于其單一藥物大黃制成的凝膠劑。

3討論

實(shí)驗(yàn)全部選擇雄性昆明小鼠可便于取皮操作及結(jié)果數(shù)據(jù)的平行。同時(shí)以高效液相色譜法為離體鼠建立了可靠的體外測(cè)定方法，在滲透實(shí)驗(yàn)中，由于皮膚與介質(zhì)長(zhǎng)時(shí)間接觸，皮膚中蛋白質(zhì)等物質(zhì)易脫落，溶解，會(huì)導(dǎo)致混濁或呈乳光，本文酸化樣液以游離出脂溶性大黃素，然后氯仿提取，從而消除了皮膚中蛋白等成分對(duì)色譜柱的影響。

體外透皮實(shí)驗(yàn)中水浴設(shè)定的溫度為℃系最接近正常人體表皮的溫度。實(shí)驗(yàn)中的接受液pH設(shè)定在也是因其接近人體皮膚的pH值。

本實(shí)驗(yàn)中結(jié)果顯示，由于處方中含有澤蘭、側(cè)柏葉、薄荷等其他成分，使雙柏凝膠劑中大黃素的滲透作用提高，從此角度可以看出雙柏凝膠