一種新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物8e在體內(nèi)和體外對人類結(jié)腸癌細胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機理的探討-課件

一種新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物8e在體內(nèi)和體外對人類結(jié)腸癌細胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機理的探討(2)1、不要輕言放棄，否則對不起自己。2、要冒一次險!整個生命就是一場冒險。走得最遠的人，常是愿意去做，并愿意去冒險的人。“穩(wěn)妥”之船，從未能從岸邊走遠。--戴爾．卡耐基。3、人生就像一杯沒有加糖的咖啡，喝起來是苦澀的，回味起來卻有久久不會退去的余香。4、守業(yè)的最好辦法就是不斷的發(fā)展。5、當愛不能完美，我寧愿選擇無悔，不管來生多么美麗，我不愿失去今生對你的記憶，我不求天長地久的美景，我只要生生世世的輪回里有你。一種新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物8e在體內(nèi)和體外對人類結(jié)腸癌細胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機理的探討(2)一種新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物8e在體內(nèi)和體外對人類結(jié)腸癌細胞的抗增殖活性及其相關(guān)分子機理的探討(2)1、不要輕言放棄，否則對不起自己。2、要冒一次險!整個生命就是一場冒險。走得最遠的人，常是愿意去做，并愿意去冒險的人?！胺€(wěn)妥”之船，從未能從岸邊走遠。--戴爾．卡耐基。3、人生就像一杯沒有加糖的咖啡，喝起來是苦澀的，回味起來卻有久久不會退去的余香。4、守業(yè)的最好辦法就是不斷的發(fā)展。5、當愛不能完美，我寧愿選擇無悔，不管來生多么美麗，我不愿失去今生對你的記憶，我不求天長地久的美景，我只要生生世世的輪回里有你。

Antitumoreffectsofanovelbenzonaphthofurandionederivative(8e)onthehumancoloncancercellsinvitroandinvivothroughcellcyclearrestaccompaniedwiththemodulationofEGFRandmTORsignaling一種新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物（8e）通過調(diào)節(jié)表皮生長因子受體(EGFR)和調(diào)節(jié)雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信號發(fā)送從而誘導(dǎo)細胞周期停滯進而對體外和體內(nèi)的人結(jié)腸癌細胞產(chǎn)生抗癌作用細胞生物學20th宋繼達&郭羽論文信息1.文章所刊登的學術(shù)雜志：Chemico-BiologicalInteractions(化學與生物相互作用)發(fā)表時間：2011年5月3日2.文章作者：韓國首爾國立大學藥學院Hwa-JinChung，SangKookLee韓國首爾梨花女子大學藥學院Hee-KyungRhee，Hea-YoungParkChoo3.關(guān)鍵詞：苯并呋喃并萘二酮衍生物(Benzonaphthofurandionederivative)癌細胞HCL116抗癌活性(Antitumoractivity)G0/G1期的細胞周期停滯(G0/G1cellcyclearrest)表皮生長因子受體/雷帕霉素靶蛋白信號發(fā)送(EGFR/mTORsignaling)隨著信息化時代的到來，教學模式的改革已經(jīng)勢在必行。新的化學課程倡導(dǎo)從學生和社會的需要出發(fā)，發(fā)揮學科自身的優(yōu)勢，將科學探究作為課程改革的突破口。所謂探究式課堂教學是以探究為主的教學，即指在教師的引導(dǎo)下，以學生獨立自主學習和合作討論為前提，以現(xiàn)行教材為基本探究內(nèi)容，為學生提供充分自由地表達、質(zhì)疑、探究、討論問題的機會，學生通過個人、小組、集體等多種解難釋疑嘗試活動，將自己所學的知識應(yīng)用于解決實際問題的一種教學形式。探究式課堂教學特別重視開發(fā)學生的智力，發(fā)展學生的創(chuàng)造能力，培養(yǎng)自學能力，力圖通過自我探究，引導(dǎo)學生學會學習和掌握科學方法，為終身學習和工作奠定基礎(chǔ)。教師作為探究式課堂教學的導(dǎo)師，做到自己能發(fā)現(xiàn)問題、提出問題、分析問題、解決問題。與此同時，教師還要為學生的學習設(shè)置探究的情境，建立探究的氛圍，促進探究的開展，把握探究的深度，評價探究的成敗。在教學過程中，教師通常引導(dǎo)學生按科學探究的一般程序“問題――假設(shè)――推理――驗證――結(jié)論”進行探究，但還需對具體課程進行具體分析?，F(xiàn)就《空氣組成》（初三化學）一課中對探究式教學模式的具體運用總結(jié)如下：一、激趣引題，自學探究激趣引題是指教師的課堂導(dǎo)入要引人入勝，要能抓住學生的心，調(diào)動學生的情緒。良好的學習情緒和精神狀態(tài)，是學生自主學習成敗的關(guān)鍵。自學探究則是指教師指導(dǎo)下的學生活動，是影響全局、輻射全課的重要環(huán)節(jié)。在信息社會開放式教育的條件下，教師和學生之間的關(guān)系已不再是教師“單向輸出”和學生“被動接受”的關(guān)系，教師的角色必然轉(zhuǎn)化為既是知識的輸出者又是學生自主學習的引導(dǎo)者。作為學生自主學習的引導(dǎo)者，教師應(yīng)該在學生自學探究的過程中為他們指明方向，傳授方法，關(guān)鍵時刻給予指導(dǎo)和支持。在《空氣組成》一課中，課堂伊始，教師利用簡短、生動的語言向同學們介紹舍勒、普利斯特里和拉瓦錫發(fā)現(xiàn)空氣組成的化學史，在短短一兩分鐘里，吸引學生注意力，調(diào)動學生的情緒，打動學生的心靈，形成良好的課堂氛圍。此后引導(dǎo)學生在5分鐘時間內(nèi)讀書自學，即教師為學生指出讀書的方法和閱讀重點后由學生閱讀。通過自學，學生不但可以熟悉教材，而且可以在讀中感知，在讀中感悟，將學、思、疑、問連接起來。自學完成后，學生會提出很多問題，如：為什么今天我們不用拉瓦錫分解氧化汞的實驗來驗證空氣中氧氣含量？為什么要用紅磷燃燒的實驗來驗證空氣中氧氣含量？可不可以選用其他物質(zhì)的燃燒來驗證空氣中氧氣含量？紅磷燃燒之后，水為什么會進入集氣瓶？紅磷燃燒時什么樣？（因剛學化學，學生還不習慣于用“實驗現(xiàn)象”一詞）……有些問題生生之間可以互相解答，解答不了的問題，我告訴學生：不能等老師告訴你們，你們要像科學家一樣自己進行實驗探究。二、引導(dǎo)點撥，實驗探究化學是一門以實驗為基礎(chǔ)的自然科學。教師應(yīng)改變傳統(tǒng)的實驗教學模式，一切以學生的發(fā)展為本。初中階段的各類化學實驗，對學生都極具誘惑力，充分利用實驗，對培養(yǎng)學生的創(chuàng)新意識是極有價值的。在實驗教學過程中，既要重視技能訓(xùn)練，同時還要重視創(chuàng)新能力的培養(yǎng)。因此應(yīng)將書本中的一些驗證性實驗改成探索性實驗，從而激發(fā)學生求知、探究的欲望，培養(yǎng)他們自我發(fā)現(xiàn)問題、解決問題的能力。在這一課中，為了解決是否其他物質(zhì)燃燒也可測定空氣中氧氣的含量這一問題，我給了學生紅磷、木炭、鐵、硫四種物質(zhì)，在他們自學的基礎(chǔ)上，我引導(dǎo)他們作了類似于紅磷燃燒的四個實驗。學生自己看到了實驗現(xiàn)象，得出結(jié)論：鐵在空氣中不燃燒，木炭、硫能燃燒，但無法測定空氣中氧氣的含量，只有紅磷燃燒才能驗證空氣中氧氣的含量。實驗本身又給學生增加了繼續(xù)探究的樂趣和動力。他們不免又要問：“為什么只有紅磷能測定空氣中氧氣的含量？而且測定的結(jié)果為什么會少于五從之一呢？”這些問題中有的不屬于這節(jié)課的內(nèi)容，可以給學生留一些懸念，由此調(diào)動學生的胃口，對后面的學習又增添了新的樂趣。學生提出的大多數(shù)問題（包括實驗中出現(xiàn)的問題）則需師生共同討論解決。三、解疑導(dǎo)撥，合作探究學生通過實驗解決問題，同時又在實驗中發(fā)現(xiàn)問題。以往問題的解答全由教師包辦代替，得出的結(jié)論學生被動地接受后死記硬背，造成學生只知其然，而不知其所以然，只能繼承前人積累下來的知識、經(jīng)驗、原則和方法，復(fù)制書本上的“條條”、“框框”，而無法培養(yǎng)學生解決實際問題的能力，特別是創(chuàng)造性地解決實際問題的能力。因此在現(xiàn)代教學中，教師完全可以盡可能地創(chuàng)造機會引導(dǎo)學生在邊學邊探中解決問題，讓學生親自動手、動腦，互相合作，利用各種方式方法合作探究。在這一環(huán)節(jié)中，教師可以先用幾分鐘把解決不了的問題進行一下綜合，然后讓學生進行合作探究，形式可采取生生討論探究、小組討論探究、整班集體討論探究（包括師生間互相探究）。通過對話、爭論、答辯等方式，發(fā)揮學生的學探優(yōu)勢，利用他們集思廣益、思維互補、思路開闊、分析透徹、各抒已見的特點，使問題的結(jié)論更清楚、更準確。教師做到眼觀六路、耳聽八方，隨時引導(dǎo)、點撥學生共同解決問題。在《空氣組成》一課中主要采用同桌生生討論探究和整班集體討論探究的方式，經(jīng)過合作討論探究，在這一課中學生充分理解了“為什么水會進入集氣瓶？為什么只能用紅磷燃燒來驗證空氣的組成？為什么進入的水小于集氣瓶體積的五分之一？”等問題。四、激勵評價，引申探究問題解決之后，教師還應(yīng)該以問題解決活動為基礎(chǔ)，有意識地指導(dǎo)學生對活動進行反思概括，進行反省性提煉整合。同時對學生的積極主動學習和探究給予充分的肯定和表揚。反思概括具有以下意義：1、將新知識和原有的理解聯(lián)系起來，有意識地提煉出概括性的知識，防止知識變成惰性的，過于受情境限制；2、理解如何應(yīng)用不同的方法、策略解決問題。對學生進行適當?shù)谋頁P和鼓勵有利于提高學生自主學習的積極性。對于知識的引申，教師可以提出一些有深度的問題，這些問題當堂解決不了，可以留在課下讓學生思考。運用探究式教學可以改變課堂教學機械沉悶的現(xiàn)狀，讓課堂充滿生機，使師生雙方處于平等、民主、自由、公正、寬容、鼓勵和幫助的“伙伴”關(guān)系，雙方互相接納、互相敞開、互相理解，從而達到共享知識、共享智慧、共享人生的價值和意義，真正擺正了教學過程中教師的主導(dǎo)地位和學生的主體地位，使課堂教學達到理想的效果。教育學告訴我們“學習興趣是指個人對學習的一種積極的認識傾向與情緒狀態(tài)。學生若對某一學科有興趣,就會持續(xù)、專心致志地鉆研它,從而能大大提高學習效果”。宋代教育家朱熹也曾說過:“教人未見其趣,必不樂學?！盵1]這句話充分說明興趣對學習的重要意義,學生的興趣是提高教學質(zhì)量的關(guān)鍵。心理學認為,興趣是人認識需要的情緒表現(xiàn)。它是在過去知識經(jīng)驗、尤其在愉快體驗經(jīng)驗積累的基礎(chǔ)上形成的使人樂于積極而持久地去接觸、認識某一類新事物的一種意識傾向,作為活動的動機是不可缺少的。[2]興趣會激勵學生主動掌握知識、開闊眼界、同時克服困難和障礙。同學們對自己有興趣的課程,通常能激發(fā)學習本課程的愿望,使教學達到良好的效果,學生學到所需的知識。如果教師在教學中能使學生把教師對他們提出的要求變?yōu)樽约旱膬?nèi)在要求,使學生從沒有學習需要到產(chǎn)生迫切的學習需要,從而調(diào)動學生主動學習的積極性。“有興趣”并認為“老師講得好”,往往是學生喜愛某一門課程的重要因素。[3]為此,教師應(yīng)根據(jù)課程特點采用相應(yīng)的措施和方法,力爭把課講得通俗易懂。學生在聽課過程中產(chǎn)生樂趣,就會對這門課形成興趣,興趣則可以調(diào)動學生學習的主觀能動性。一、緒論課――首次課的重要性西方諺語說,好的開端是成功的一半(WellBegunisHalfDone),如何在首次課就抓住學生的興趣,對學好本課程至關(guān)重要。在教學過程中將教師自身的工程實踐經(jīng)歷與教學內(nèi)容相結(jié)合,在講授過程中,由于教師以第一人稱方式講述,易于使學生產(chǎn)身臨其境的真實感覺,不僅對相關(guān)基礎(chǔ)理論與工程問題的認識會更深入,同時在激發(fā)與增強學生學習“材料成形技術(shù)”課程興趣方面往往有很好的效果。結(jié)合課程名稱和內(nèi)容,在首次緒論課中明確告知同學們,任何材料只有成形之后才有用途,包括人本身也是材料,也需要成形,而人的成形要經(jīng)過漫長的時間、不斷的學習、付出艱苦的努力才能完成。同時可舉出很多物品需要成形才有使用價值或方便使用的例子,可以說不經(jīng)過成形、沒有恰當?shù)男螤顜缀鯚o法生活和工作。比如人們經(jīng)常使用的各種各樣筆的形狀。無論用途如何、顏色怎樣變化,其形狀都必須適合人來使用;平時穿的衣服,無論是從合身還是到美的享受,都離不開恰當?shù)男螤?使用的工具也大多如此,鏟東西的鏟子的形狀、螺絲刀的形狀、刀具的形狀,小轎車從開始的“馬車型”到目前“流線型”的改進也如此。在緒論課中要涉及相關(guān)學科的知識,任何知識都不是孤立存在的,有其內(nèi)在規(guī)律和聯(lián)系。機械類專業(yè)的幾門主干基礎(chǔ)課程包括工程圖學、工程力學、機械原理、機械設(shè)計、工程材料、材料成形技術(shù)等。課程之間具有密切的關(guān)聯(lián),不可偏廢任何一門,課程之間的聯(lián)系與遞進關(guān)系如圖1所示。通過對已學課程的簡短回顧和課程的不同作用,讓同學們知道課程之間的區(qū)別與聯(lián)系,了解課程之間的遞進關(guān)系,避免出現(xiàn)偏科現(xiàn)象而影響工作以后的全面發(fā)展。在緒論課程中要注意在引起同學們學習興趣和愿望的同時,絕不能讓同學們產(chǎn)生難以學懂的思想,也就是說首次課應(yīng)該盡量避免涉及過多晦澀難懂的術(shù)語和概念,更不能嚇唬學生講該課程十分難學,使同學們從心理上產(chǎn)生畏懼情緒。二、利用歷史和人文典故增強吸引力人的興趣表現(xiàn)在力求更深入地認識世界,可以稱作為認識興趣,而渴望獲得科學知識的狀態(tài)被叫做求知欲。[4]具有認識興趣或求知欲強烈的人常常會廢寢忘食、津津有味地去學習,并在學習過程中得到很大的滿足,產(chǎn)生與更高的認識活動水平相適應(yīng)的新的興趣。所以,認識興趣是推動學生學習的一種最實際的內(nèi)部動力。材料的不斷發(fā)展為成形的對象提供了基礎(chǔ),同時也促進了科學技術(shù)的進步。在講到液態(tài)成形技術(shù)時,首先將古代鑄造技術(shù)成就展示給同學們:北京大鐘寺的永樂大鐘,鑄于明永樂年間,距今已近600年。鐘高6.94米,外徑3.30米,鐘唇厚度18.5厘米,重量46.5噸。鐘身內(nèi)外鑄有佛教經(jīng)典17種,總計22.7萬字,字體工整、堅韌,相傳為明朝書法家沈度的手筆;河北滄州的鐵獅子,鑄于公元953年,距今已有1000余年,獅高5.3米,長6.5米,寬3米,重約40噸。針對班上來自不同地區(qū)的同學,可以及時互動各個省市區(qū)關(guān)于古代材料成形技術(shù)的杰出成就,激發(fā)同學們的民族自豪感和地域上的優(yōu)越性,進而激發(fā)學生對課程學習的積極性。江蘇省鎮(zhèn)江市歷史悠久,是吳文化的主要發(fā)祥地之一,有文字記載的歷史就有3000多年。許多重大歷史事件都在這里發(fā)生,是演繹華夏民族歷史的重要舞臺,孫權(quán)在這里開創(chuàng)霸業(yè)。在抗日戰(zhàn)爭期間,由陳毅在鎮(zhèn)江茅山建立的抗日根據(jù)地,是全國五大山地抗日根據(jù)地之一。鎮(zhèn)江人文薈萃,政治、經(jīng)濟、文化、軍事領(lǐng)域都人才輩出,燦若星河,謝靈運、李白、蘇軾、王安石、范仲淹等文人騷客,都在此留下了不朽之作?！疤煜碌谝唤健笔侨藗儗︽?zhèn)江山水名勝的形容,可見其存在的旅游價值之高,從而也證明了山水名勝乃鎮(zhèn)江之特色。依山(金山、焦山、北固山)傍水(長江水)的鎮(zhèn)江,水陸相連,城置山中,山中有城,真山真水的獨特風貌,風光旖旎多姿。位于沿江夾峙的京口,名揚天下的三山之金山、焦山、北固山,以“江、山、寺、洞、泉、林”景觀著稱,金山寺有“寺裹山”之稱,焦山有“山裹寺”之稱,北固山有“寺冠山”之稱,都是江南建筑藝術(shù)中的瑰寶。從歷史、人文、地理等多方面激發(fā)學生對學習的興趣,并盡量與專業(yè)課程相結(jié)合,進而提高課程學習興趣和學習質(zhì)量。三、利用身邊熟悉的事例引出材料成形的重要性啞鈴是同學們非常熟悉的運動器械,常見啞鈴的形狀如圖2所示。在此可以問同學們,是否有人看到過如圖3所示的啞鈴?或者說為什么市場上看不到圖3所示的啞鈴?難道是沒有人能夠想得到這樣具有吸引眼球的啞鈴嗎?此時會留下懸念,讓同學們自己思考,究竟為什么,然后在講到課程與此有關(guān)的內(nèi)容時再指出問題的根源所在。因為要想生產(chǎn)出這樣的啞鈴所花費的成本很高且質(zhì)量難以保證;從成形的角度看難度較大。采用液態(tài)分模成形時上、下模的“模樣”和型芯如圖4所示。雖然理論上和實際上可以制造出圖3所示的啞鈴,這樣的啞鈴?fù)瑯涌梢云鸬脚c圖2所示啞鈴相同的健身效果,但實際上由于工序繁雜、所需工裝和設(shè)備復(fù)雜,實際中并不會去生產(chǎn)。由此可知,理論上可行和能滿足功能要求的產(chǎn)品在工程實際中并不會全部去實施。四、充分利用各種動畫、圖表、視頻素材展示教學內(nèi)容針對同學們沒有在實際生產(chǎn)中工作經(jīng)歷的現(xiàn)狀,在課程教學過程中除了要采用與教材配套的圖表外,還采用各種教學演示模型和材料成形方面的教學錄像以輔助教學,以此讓同學們了解材料實際的成形過程,使教學內(nèi)容簡明易懂。如果沒有相應(yīng)的圖表和動畫,很難將工程實例講清楚或?qū)⒒ㄙM更多的時間。如圖5所示為低壓鑄造成形過程原理示意圖,圖6所示為砂型鑄造的柴油機缸體,圖7所示為壓力加工中的旋壓成形示意圖。從圖5、圖6、圖7可以看出,若沒有預(yù)先準備的視圖,很難在短時間內(nèi)將成形過程闡述清楚。五、互動緊逼式教學方式通過教學實踐證實,采用互動緊逼式教學方式,可以極大地發(fā)揮同學們的主觀能動性。教師至少提前10~15分鐘到教室,在上課預(yù)備鈴響起之前要求學生到教室,并親筆簽到,在預(yù)備鈴響之后進教室的同學即認為是遲到,給學生灌輸?shù)挠^點就是預(yù)備要在教室而非在路上,讓學生在進教室之前即產(chǎn)生緊迫感,并養(yǎng)成守時和積極向上的良好習慣。上課起立后在全體同學面前與同學們一起關(guān)手機,以減少課堂干擾。在每次課的前5~8分鐘的時間用于課堂交流與前面所學知識的回顧問答,對輔導(dǎo)員老師提出需要重點關(guān)注的同學給予更多的機會。在一門課結(jié)束之前保證每個同學都有課堂發(fā)言的機會,始終讓學生處于緊張狀態(tài),對有意愿闡述自己觀點的同學請其到講臺上充分表達自己的愿望。在課堂講授過程中穿插工程實例講解和生產(chǎn)現(xiàn)場操作視頻,以激發(fā)同學們學習的積極性。有時候?qū)⒆鳂I(yè)超前布置,在未講完此部分教材內(nèi)容時即要求提交作業(yè),目的在于使同學們不得不在課余時間進行預(yù)習和自學,當有問題時會更好地在課堂上聽講,以提高課堂效率。在“課堂教學質(zhì)量調(diào)查表”中有學生寫到“上課的效果很好,聽課效率很高,講課生動,能夠結(jié)合最近工廠的生產(chǎn)工藝和設(shè)備,讓我們大開眼界,同時讓原本枯燥的課程變得栩栩如生,增加了課程的學習興趣、端正了學習態(tài)度”“講課內(nèi)容豐富,方式靈活、幽默,注意與同學之間的互動,極大地調(diào)動了我們學習的積極性。作業(yè)批改認真,講解詳細”。從以上事例可以看出,同學們對互動緊逼式教學方式給予了肯定和認可。課堂教學沒有一定之規(guī),但能將本課程的基本原理、工藝過程、應(yīng)用特點以及零件的結(jié)構(gòu)工藝性講授清楚,讓學生留下較為深刻的印象,本課程就達到了基本目的。在此基礎(chǔ)上,如果還能將書本以外的工程實踐應(yīng)用進行適當補充,以更好地調(diào)動學生學習的主動性,則課堂教學將更加有實效。在整個課程教學過程中,同時應(yīng)該以“潤物細無聲”之法將育人之根本貫穿其中,育人重于教書,或者說教書中育人,使同學們能夠養(yǎng)成守時嚴謹、積極進取的良好習慣。1.Introduction背景：結(jié)腸癌是世界范圍內(nèi)的頭號癌癥殺手之一，每年有大約一百萬的新增病例。盡管全球結(jié)腸癌的發(fā)病率在逐步下降，但近年來由于飲食習慣的西化，亞洲國家結(jié)腸癌患者數(shù)目顯著上升。因此仍有必要開發(fā)新型的抗結(jié)腸癌藥物。阿霉素(Doxorubicin)，一種蒽環(huán)類化合物，是臨床上用來作為治療癌癥的藥物。下面我們來看看8e和阿霉素(Doxorubicin)的化學結(jié)構(gòu)式。

8e的結(jié)構(gòu)式阿霉素(Doxorubicin)【作用與用途】阿霉素是一種廣譜抗腫瘤抗生素，可抑制RNA和DNA的合成，對RNA的抑制作用最強，對多種腫瘤均有作用，屬非周期特異性藥物，對各種生長周期的腫瘤細胞都有殺滅作用。但有一定的毒副作用?！径拘苑磻?yīng)】白細胞和血小板減少，約60%~80%的病人可發(fā)生；100%的病人有不同程度的毛發(fā)脫落，停藥后可以恢復(fù)生長；心臟毒性，表現(xiàn)為心律失常，ST-T改變(ST和T分別指兩種心電波)、惡心、食欲減退；藥物溢出血管外可引起組織潰瘍及壞死。另外，用藥后尿液可出現(xiàn)紅色。2.Methodsandresults2.1化學試劑（Chemicals）（略）2.2合成8e（Synthesisofcompound8e）：按已發(fā)表的文獻提供的化學合成方法人工合成。2.3癌細胞的培養(yǎng)（Cellculture）：人結(jié)腸癌細胞HCL116由美國模式培養(yǎng)物保藏所（ATCC）提供，用加富的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，該培養(yǎng)基另外加入了10%熱滅活的胎牛血清（FBS），100單位/mL青霉素（盤尼西林），100ug/mL鏈霉素，250ng/mL兩性霉素B。置于含5%CO2的控濕氛圍中培養(yǎng)。2.48e和阿霉素對癌細胞抑制效力的測定：癌細胞HCL116(以1×104個/mL的密度植于96孔盤)分別加入不同濃度的8e或阿霉素(Doxorubicin)后置于37℃含5%CO2的控濕氛圍中培養(yǎng)72h。經(jīng)其他步驟處理后用570nm波長測量吸光度以求得存活細胞的數(shù)量，并用非線性回歸分析的方法計算8e和阿霉素對癌細胞的半抑制濃度（IC50）。8e和阿霉素對癌細胞的半抑制濃度，結(jié)果計算結(jié)果表明阿霉素對癌細胞的半抑制濃度為46.2nm/L，而8e對癌細胞的半抑制濃度為52.9nm/L，8e的抑癌效力稍遜于阿霉素。用8e處理癌細胞24h和48h后用倒置相差顯微鏡觀察癌細胞的形態(tài)。雖然癌細胞存活的數(shù)量隨8e濃度增大而遞減，但實驗組的癌細胞與對照組相比并沒有明顯的形態(tài)學變化。倒置相差顯微鏡對8e處理后癌細胞的觀察結(jié)果8e處理后癌細胞變得稀疏，但沒有明顯的形態(tài)學變化。2.58e對癌細胞細胞周期分布的影響

用磷酸鹽緩沖液配制25、50、75nm/L的8e溶液為實驗組，并以磷酸緩沖液為空白對照，分別處理癌細胞，在24h和48h后用流式細胞儀分析癌細胞的細胞周期分布。流式細胞術(shù)分析細胞周期分布的結(jié)果

結(jié)果表明細胞周期停滯在G0/G1時期與8e的濃度有關(guān)2.6蛋白質(zhì)印跡分析將經(jīng)過25、50、75nm/L的8e處理24和48小時后的癌細胞的總蛋白質(zhì)提取出來后，用聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS–PAGE）分離并電轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯薄膜上，薄膜用特制的緩沖液在室溫下處理1h，接著用以磷酸鹽緩沖液稀釋的特異性抗體進一步在4℃下過夜處理。然后用特制的緩沖液洗滌后，薄膜在室溫下用二抗標記的辣根過氧化物酶繼續(xù)處理2h，然后用熒光影像分析儀配合辣根過氧化物酶熒光檢測試劑盒來顯像。

蛋白質(zhì)免疫印跡分析圖譜Ⅰ蛋白質(zhì)免疫印跡分析圖譜Ⅱ

2.7小鼠體內(nèi)腫瘤生長抑制實驗實驗采用6星期大的雄性無胸腺小鼠(athymicmice)。

在第0天將HCL116癌細胞懸液皮下注射到每只小鼠的右側(cè)腹部，當腫瘤體積長到90—95mm3時（約在接種后第7天）開始用8e或阿霉素對小鼠進行治療。實驗之前小鼠被隨機分為6組（5個實驗組和1個對照組），每組6只。5個實驗組：

①阿霉素3mg/kg/day,

②8e2mg/kg/day,

③8e5mg/kg/day,

④8e10mg/kg/day,

⑤8e(5mg/kg/day)＋阿霉素(3mg/kg/day)·8e和阿霉素分別溶于磷酸鹽緩沖液并設(shè)置1個只有溶劑的空白對照。5組藥物都是以腹膜內(nèi)注射的方式給藥，每周3次，持續(xù)3周，每組共給藥9次。小鼠體重和腫瘤體積的變化自接種癌細胞當天起，于第0、9、18、24、28天對小鼠進行體重稱量和腫瘤體積的測量。（在第28天實驗結(jié)束可以將小鼠身上的腫瘤摘取下來通過液體推排法測量腫瘤的體積，但由于實驗過程中在不能摘取腫瘤的情況下也要測量腫瘤的體積，因此本實驗中腫瘤體積的測量是通過較為精準地測量腫瘤的長寬高，然后用公式（體積=長×寬×高×π/6）計算出來的。不同時期的小鼠體重以柱狀圖表示，腫瘤體積以折線圖表示。小鼠與摘取下來的腫瘤小鼠體重的變化腫瘤體積的變化與對照相比的腫瘤抑制率對腫瘤組織進行免疫組化分析用抗Ki-67抗體對腫瘤組織進行免疫組化分析以檢測癌細胞的增殖情況。Ki-67是一種與細胞周期相關(guān)的增殖細胞核抗原（PCNA）。

Ki-67是目前多種惡性腫瘤尤其是乳腺癌研究中的熱門生物標志物，可以通過對Ki-67的檢測了解惡性腫瘤的細胞增殖活性。腫瘤的免疫組化分析結(jié)果分析結(jié)果表明8e抑制了增殖細胞核抗原Ki-67的表達。小鼠治療實驗的結(jié)論經(jīng)過3周的藥物治療之后，10mg/kg/day的那個實驗組與對照組相比，腫瘤的抑制達到58.7%。與對照組相比，實驗組小鼠沒有觀察到明顯的體重變化和副作用。同時，免疫組織學分析表明，在異種移植的癌細胞中，8e抑制了增殖生物標志物Ki-67的表達，表明8e的確有效地抑制了癌細胞在體內(nèi)的增殖。3.Discussion（重點）在最初的研究中作者發(fā)現(xiàn)8e對多種人類癌細胞系都有生長抑制作用，而在固態(tài)腫瘤（實體腫瘤）中人結(jié)腸癌細胞HCL116的生長對8e的抑制活性尤為敏感。因此他們設(shè)計實驗，從細胞周期調(diào)控蛋白的表達和細胞信號傳導(dǎo)途徑兩個方面進一步研究8e對人結(jié)腸癌細胞的作用機理。cyclin與CDK的功能：一般認為細胞周期蛋白（cyclins）和周期蛋白依賴性激酶(CDKs)是細胞周期的的調(diào)控者并通過相互結(jié)合形成cyclin-CDK復(fù)合物來起作用。在細胞周期的不同時期，不同的cyclin-CDK復(fù)合物通過使特異的轉(zhuǎn)錄因子或其他蛋白質(zhì)的磷酸化，開啟或關(guān)閉某些基因的表達，或直接調(diào)節(jié)某些蛋白質(zhì)的活性，從而推動細胞周期的更替。但是癌細胞的細胞周期調(diào)控蛋白失控并導(dǎo)致細胞的異常增殖。Part1細胞周期的一般模式G1/S檢控點CDK4、CDK6與cyclinD形成的復(fù)合物主要在G1期起作用，促進G1/S轉(zhuǎn)變CDK2與cyclinE形成的復(fù)合物作用于S期的起始階段CDK2與cyclinA形成的復(fù)合物的作用貫穿于整個S期CDK1與cyclinA或cyclinB（主要是cyclinB)形成的復(fù)合物則在G2/M轉(zhuǎn)變中發(fā)揮作用G1/S轉(zhuǎn)變的調(diào)控機理在細胞周期G1/S轉(zhuǎn)變過程中，首先由cyclinD（D1、D2、D3）與CDK4和CDK6結(jié)合形成cyclinD-CDK復(fù)合物，然后進入細胞核內(nèi)，CDK的某些位點被CAK（周期蛋白依賴性激酶活性激酶）磷酸化。磷化后具有激酶活性的cyclinD-CDK復(fù)合物使pRb-E2F復(fù)合物（E2F是一種轉(zhuǎn)錄活化因子）中的pRb（視網(wǎng)膜母細胞瘤蛋白，一種細胞周期抑制蛋白）磷酸化為p-pRb，

但pRb上有多個可磷酸化的位點，僅僅靠cyclinD-CDK對其進行磷酸化是不夠的，隨后還需要cyclinE-CDK2繼續(xù)對pRb上的其他位點進行磷酸化，以及cyclinA/B依賴性激酶的活化來維持p-pRb的高度磷酸化狀態(tài)。p-pRb不具有與E2F結(jié)合的活性，因而釋放轉(zhuǎn)錄因子E2F。被釋放的E2F進入核內(nèi)結(jié)合一系列的基因啟動區(qū)（c-myc、b-myb、cdc2等）促進這些基因的轉(zhuǎn)錄，使細胞通過G1/S檢控點，從G1期進入到S期。簡意圖促分裂信號CyclinD水平升高CDK2CDK4cyclinD-CDK2cyclinD-CDK4pRb-E2Fp-pRbpRb磷酸化E2F活化相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄細胞通過G1/S檢控點，從G1期轉(zhuǎn)變到S期cyclinE-CDK2繼續(xù)磷酸化cyclinA/B-CDK維持高度磷酸化不再結(jié)合E2F進入核內(nèi)增殖細胞核抗原PCNAPCNA是一種由三個相同亞基組成的，總相對分子質(zhì)量為29kD的環(huán)狀同源三聚體蛋白，在細胞核內(nèi)合成并分布于細胞核內(nèi)，是真核生物DNA聚合酶的輔助蛋白。PCNA的三聚體環(huán)形結(jié)構(gòu)環(huán)繞著雙鏈DNA，起到滑動發(fā)夾的作用，相當于原核生物DNA聚合酶Ⅲ的β亞基，極大地增強了真核生物DNA聚合酶的持續(xù)合成能力，而且PCNA也參與DNA的損傷修復(fù)。P21的抑制作用P21：一種細胞周期抑制蛋白p21可以與cyclin-CDK復(fù)合物結(jié)合從而抑制CDK的激酶活性，進而使pRb不能維持磷酸化狀態(tài)，而且cyclin-CDK的其他一些生物學活性也不能實現(xiàn)。最終將無法轉(zhuǎn)錄一系列與細胞周期時相轉(zhuǎn)變（如從G1期轉(zhuǎn)變?yōu)镾期）相關(guān)的基因，從而導(dǎo)致細胞周期停滯。P21與PCNA結(jié)合可以抑制PCNA與雙鏈DNA的連接，從而抑制DNA的復(fù)制過程。8e對細胞周期調(diào)控蛋白表達水平的影響如蛋白質(zhì)印跡圖譜Ⅰ所示，（1）表達水平上調(diào)的因子有：細胞周期抑制蛋白p21；（2）表達水平下調(diào)的因子有：cyclinD1、

cyclinA、

cyclinE、CDK2

、CDK4、c-Myc蛋白（原癌基因c-Myc的表達產(chǎn)物）、pRb（視網(wǎng)膜母細胞瘤蛋白，是一種細胞周期抑制蛋白）

、p-pRb（磷酸化的視網(wǎng)膜母細胞瘤蛋白）、PCNA（增殖細胞核抗原）結(jié)論：8e介導(dǎo)的G0/G1期的細胞周期停滯與周期蛋白依賴性激酶抑制蛋白p21的上調(diào)和CDK2、CDK4、cyclinD1、cyclinAandcyclinE的下調(diào)有關(guān)。

Part2名詞解釋11.表皮生長因子受體（EGFR）：一種可被胞外促有絲分裂因子（包括表皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子α、雙調(diào)蛋白和乙胞素）所激活的典型的酪氨酸蛋白激酶受體（RTK，245頁）。很多癌細胞，包括結(jié)腸癌、胃癌、乳腺癌、膀胱癌和頭頸部鱗癌等癌細胞都有EGFR過分表達的現(xiàn)象。2.雷帕霉素靶蛋白（mTOR）：廣泛存在與各種細胞中，在細胞增殖、遷移、分化和生存中發(fā)揮重要作用，而且也是Akt（絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶）促進細胞生存和抑制細胞凋亡的下游靶標。同時mTOR也通過激活激酶P70S6K和抑制翻譯起始因子eIF4E的抑制物4E-BP1來參與許多生存蛋白的起始翻譯。名詞解釋2PIK3：磷脂酰肌醇3激酶（254頁），也就是磷脂酶C（PLC，237頁），可以將磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2，238頁）水解為二脂酰甘油（DAG）和1,4,5-三磷酸肌醇（IP3）。Akt：又稱PKB（蛋白激酶B），是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在細胞存活和凋亡中起重要作用。PI3K-Akt信號途徑是一條經(jīng)典的信號途徑。ERK：細胞外信號調(diào)節(jié)激酶，是絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族中的三大亞族之一，是哺乳類動物中了解的最為清楚的MAPK亞族，其信號傳遞通路為典型的MAPKKK/MAPKK/MAPK三級酶促級聯(lián)反應(yīng)，是調(diào)節(jié)細胞生長、發(fā)育以及分化的信號網(wǎng)絡(luò)的核心。名詞解釋3c-Src

：是一種非受體酪氨酸蛋白激酶（即胞質(zhì)酪氨酸蛋白激酶），其活化機制與受體酪氨酸蛋白激酶（RTKs）相似，同樣需要自身磷酸化和受體二聚化。mTOR：

雷帕霉素靶蛋白，通過與多種蛋白結(jié)合成2種復(fù)合物mTORC1和mTORC2發(fā)揮其生理功能。STAT：信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子，可被特定的酪氨酸激酶（如c-Src）磷酸化為p-STAT，p-STAT發(fā)生聚合形成同源或異源二聚體活化態(tài)，進入核內(nèi)與靶基因啟動子序列的特定位點結(jié)合,促進其轉(zhuǎn)錄。已成功克隆4種JAK(JAK1~3和Tyk2)與7種STAT(STAT1，STAT2，STAT3，STAT4，STAT5a，STAT5b，STAT6