細胞檢測技術

T細胞檢測技術機體接受外來抗原及自身抗原刺激后，通過細胞免疫和體液免疫及相關系統(tǒng)協(xié)同作用，對抗原產(chǎn)生應答。T細胞應答：T細胞增殖分泌細胞因子細胞毒效應表達特定表面標志淋巴細胞DNA合成分化母細胞刺激物細胞變大細胞漿擴大空泡核仁明顯核染色質(zhì)疏松一、淋巴細胞增殖實驗1、原理（1）形態(tài)學檢測2、檢測方法方法學評價優(yōu)點：形態(tài)學方法簡便易行，普通光學顯微鏡便能觀察結(jié)果，適于基層實驗室應用。缺點：是依靠肉眼觀察形態(tài)學變化，判斷結(jié)果易受主觀因素影響，重復性和準確性較差。（2）3H-TdR摻入法（MTT法）PHA淋巴細胞（54h）3HTdR摻入（MTT被還原）收集細胞，檢測β射線（490nm吸光度）優(yōu)點：3H-TdR摻入法敏感性高，客觀性強，重復性好。缺點：但需一定設備條件，同時還存在放射性核素污染問題。

原理：CFSE等染料可連結(jié)到細胞內(nèi)蛋白的氨基酸群（PKH26能插入脂膜），并隨細胞分裂而分配到子代細胞中，每分裂一次，熒光強度減少一倍。方法學評價優(yōu)點：操作簡單；重復性強；安全；缺點：CFSE可能干擾細胞增殖（3）CFSE（PKH26等）染色法二、T細胞分泌功能的檢測T細胞經(jīng)各種絲裂原或特異性抗原刺激后,分泌的各種細胞因子,可借助免疫學、細胞生物學及分子生物學技術分別檢測細胞因子含量、生物學活性或基因表達水平，從而間接反映T細胞功能。1、生物活性檢測對于依賴于該細胞因子而增殖的細胞，細胞增殖程度與細胞因子含量呈正相關。方法學評價優(yōu)點：敏感（pg）；顯示細胞因子的活性；缺點：影響因素多（同一細胞分泌多種細胞因子，多種細胞因子呈現(xiàn)相同功能，細胞因子及其相應受體同時分泌）；2、免蘇疫學被檢測（1）EL矩IS彩A:操作烘簡單腥，非番特異杏性影堤響大粉；（2）EL告IS鼻PO哨T:高度鏈的敏吐感性睜，可賞重復長性強蔥，抗綿原特值異性事精確壯；（3）IC邊S：可普同時唇檢測岔產(chǎn)生餓細胞題因子體的細匠胞表啞型；形需要寨樣本育量大月于EL嶺IS料PO淡T，破請膜后戀的細嫂胞不啞能做既進一織步功凍能檢伐測；優(yōu)點涉：簡蝕單，放適用理性廣讓，應方用特姿異的拔單克筑隆抗適體，登可檢押測單解一細貞胞因省子的屢含量丑；缺點脅：無促法反歐應細蘋胞因垮子的身生物螺活性戴；不很同單錘克隆政抗體拖檢測畜的結(jié)鵲果不萌同；狡敏感鈴性稍腫差（10長0p炭g）方法孫學評崖價（1）Re址al鞋ti爸me孫-P輩CR（2）分勵子雜晴交2、分梳子生層物學廳檢測三、T細胞股介導園的細犯胞毒蠅實驗特異絲式性細幣胞毒菠性T淋巴悟細胞察（CT錘L）識講別靶格細胞壘表面仆特異絞性抗抹原，霸通過Fa美s途徑網(wǎng)及顆須粒酶呼途徑依，介欠導靶半細胞嫁溶解田。1、51Cr釋放獄實驗鉻酸繳鈉（Na251Cr矛O4）中狡的六芝價鉻忘能被果活細慨胞攝亡取，街并在囑細胞毫溶解系后以效三價獲鉻的激形式匠被釋窯放。方法吳學評涌價優(yōu)點渠：靈延敏、逆特異幟，是CT袖L活性寇測定摧的經(jīng)銳典方梅法；缺點逝：操卷作繁姥瑣；放電射性歡；靶精細胞51Cr自發(fā)梨釋放悲；2、IC嚇A貞ss辨ay（In秘v嶄iv滋o征cy條to漁to擇xi仇ci技ty啟A販ss富ay）表達要特定森抗原盆的腫餅瘤細甲胞系棒經(jīng)CF咐SE標記喂后，就皮下竹注射魔入小踐鼠，蠢被小扣鼠體飯內(nèi)抗相原特拐異性CT溉L作用24小時醒后，之取出掩腫瘤阻細胞再，檢拳測其CF黎SE含量螞。方法刻學評雙價優(yōu)點溫：反搶應體料內(nèi)殺添傷效尤果；缺點化：影貧響因飛素多；四、T細胞豆表面獨標志挎的檢積測特異壺性T淋巴衰細胞量活化浙需要德第一崖信號蒸和第常二信染號。俘因此饒檢測CT置L表面好特異咐性受堅體或械相關掛的表街面標祖志可翁以反只映CT擾L的活讓化狀雞態(tài)。1、Te警tr使am異er技術模擬T細胞百活化會的第商一信藏號，賣構建戶熒光星標記援的MH悟C-肽復肅合物友，被娘特異坑性T細胞周識別栗。通廣過檢漁測標夢記的也熒光膊，反煉應活熱化的映特異照性T細胞山。方法寶學評太價優(yōu)點糕：簡故便，莖快速紙，敏押感缺點飯：成軋本高尋，受HL元A型別云的限事制2、表廈面標酸志CD稱10約7a邁/b的檢述測CD槍10哄7a避/b表達折于T細胞抄內(nèi)的浙質(zhì)膜塵上，燈隨著骨脫顆跡粒作高用，逝一過撐性表冶達于姓細胞茫表面槐；T細胞啟表面CD瘦10雁7a英/b的檢