豬肉中瘦肉精的檢測(cè)法

關(guān)于豬肉中瘦肉精的檢測(cè)法第1頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三目錄一、背景事件二、概述1、瘦肉精2、克倫特羅三、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-ＭＳ）檢測(cè)克倫特羅1、檢測(cè)方法選擇2、實(shí)驗(yàn)具體方案3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析四、杜絕措施五、參考文獻(xiàn)第2頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三

2011年3?15特別行動(dòng)中，央視曝光了雙匯“瘦肉精”養(yǎng)豬一事。河南省孟州市等地養(yǎng)豬場(chǎng)采用違禁動(dòng)物藥品“瘦肉精”飼養(yǎng)生豬，有毒豬肉流入雙匯食品中。一、“雙匯”瘦肉精事件第3頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三

瘦肉精是一類動(dòng)物用藥，有數(shù)種藥物被稱為瘦肉精，例如萊克多巴胺（Ractopamine）及克倫特羅（Clenbuterol）等。將瘦肉精添加于飼料中，可以增加動(dòng)物的瘦肉量、減少飼料使用、使肉品提早上市、降低成本。但因?yàn)榭紤]對(duì)人體會(huì)產(chǎn)生副作用，各國(guó)開放使用的標(biāo)準(zhǔn)不一。二、概述

1、瘦肉精肉質(zhì)對(duì)比第4頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三2.1在中國(guó)，通常所說(shuō)的瘦肉精是指克倫特羅。其學(xué)名是鹽酸克倫特羅，是一種平喘藥。結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)式：

CAS號(hào)：37148-27-9分子式：C12-H18-Cl2-N2-O理化特性：白色或類白色的結(jié)晶粉末，無(wú)臭、味苦，熔點(diǎn)161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。2、克倫特羅第5頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三2.2人在食用超過(guò)鹽酸克倫特羅殘留限量的肉后會(huì)出現(xiàn)心率失常、酮癥酸中毒或乳酸中毒、急性中毒癥狀如面色潮紅、頭痛、頭暈、乏力、胸悶、心悸、骨骼肌震顫、四肢麻木等。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，每克肉中瘦肉精含量不能超過(guò)1納克。

2.2人在食用超過(guò)鹽酸克倫特羅殘留限量的肉后會(huì)出現(xiàn)心率失常、酮癥酸中毒或乳酸中毒、急性中毒癥狀如面色潮紅、頭痛、頭暈、乏力、胸悶、心悸、骨骼肌震顫、四肢麻木等。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，每克肉中瘦肉精含量不能超過(guò)1納克。

第6頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三三、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-ＭＳ）檢測(cè)克倫特羅1、檢測(cè)方法選擇

GC-MS法優(yōu)點(diǎn)：把色譜高效快速的分離效果和質(zhì)譜高靈敏度的定性分析有機(jī)合起來(lái)，能在多種殘留物同時(shí)存在的情況下對(duì)某種特定的殘留物進(jìn)行定性、定量分析，而且具更高的檢測(cè)極限。GC-MS法與HPLC法相比，檢測(cè)靈敏度更高，假陽(yáng)性率更低，常用作篩選后陽(yáng)性樣品的確證。第7頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三2.1分析方法

用C18小柱和聚（甲基丙烯酸－乙二醇二甲基丙烯酸酯）整體柱進(jìn)一步富集凈化，經(jīng)N,O-雙三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)衍生，選擇離子監(jiān)測(cè)方式進(jìn)行氣相色譜質(zhì)譜測(cè)定。該方法以克倫特羅同位素(Clenbuterol-D9)為內(nèi)標(biāo)，內(nèi)標(biāo)法定量。C18小柱2、實(shí)驗(yàn)具體方案第8頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三2.2儀器與試劑儀器：島津GCMS-QP2010Plus高速離心機(jī)（轉(zhuǎn)速可達(dá)到12000r/min以上）漩渦混合器超聲波清洗器氮吹儀固相萃取裝置C18固相萃取小柱（100mg,3mL）混合型陽(yáng)離子交換固相萃取柱第9頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三試劑：鹽酸克倫特羅（Clenbuterol，CLB）標(biāo)準(zhǔn)溶液1μg/mL內(nèi)標(biāo)溶液（Clenbuterol-D9，CLB-D9）1μg/mLN,O-雙三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）甲醇(分析純）20mmol/L磷酸溶液甲苯（分析純）第10頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三2.3分析條件色譜柱：Rtx-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)進(jìn)樣口溫度：220℃柱溫程序：70℃(0.6min)-25℃/min-220℃(6min)-25℃/min-280℃(5min)恒線速度方式,柱流量0.9mL/min不分流進(jìn)樣檢測(cè)波長(zhǎng)：244nm檢測(cè)離子：CLB：檢測(cè)m/z86,187,243,262，CLB-D9：檢測(cè)m/z95,187,262以克倫特羅(m/z86)與內(nèi)標(biāo)峰(m/z95)的峰面積比校準(zhǔn)定量。第11頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三2.4實(shí)驗(yàn)流程稱取(2±0.01)g己絞碎的豬肉4mL0.1mol/L鹽酸旋渦振蕩5min超聲10min離心5min上清液C18小柱0.8mL甲醇：20mmol/L磷酸=1：1(v/v）解析，調(diào)ph=7，定容2mL毛細(xì)管整體柱0.2mL的甲醇解析+50μL的內(nèi)標(biāo)使用液100μL甲苯100μLBSTFA渦旋30s衍生5min300μL甲苯混勻按操作規(guī)程使GC-MS儀到工作狀態(tài)，基線平直時(shí)進(jìn)樣質(zhì)譜圖第12頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三3.1鹽酸克倫特羅的GC-MS測(cè)定

圖1為衍生化克倫特羅和內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜圖，以克倫特羅碎片離子(m/z86)與內(nèi)標(biāo)碎片離子(m/z95)的濃度比值為橫坐標(biāo)，峰面積比值為縱坐標(biāo)進(jìn)行定量。

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析第13頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三第14頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2為空白豬肉和添加2.5μg/kg克倫特羅的豬肉樣品提取液的離子流圖，內(nèi)標(biāo)(Peak1)和克倫特羅(Peak2)的保留時(shí)間分別為9.83min和9.92min,空白豬肉樣品在被測(cè)物及內(nèi)標(biāo)處均無(wú)干擾第15頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三第16頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三相關(guān)性分析

分別添加不同體積的克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液(1μg/mL)和50μL內(nèi)標(biāo)溶液于2g豬肉樣品中(其中克倫特羅的質(zhì)量分別為1、5、10、20、40和100ng)，樣品的處理方法如上所述。以克倫特羅與內(nèi)標(biāo)的峰面積的比值對(duì)濃度比值進(jìn)行線性回歸，發(fā)現(xiàn)克倫特羅在0.5-50μg/kg的濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)大于0.999。第17頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三3.3檢測(cè)限及精密度

以信噪比的3倍和10倍分別計(jì)算檢測(cè)限和定量限，方法檢測(cè)限為0.13μg/kg,定量限為0.43μg/kg。該方法有較好的日內(nèi)及日間精密度，在定量限附近，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于20%（見(jiàn)表1），可滿足分析要求。表1.克倫特羅的方法學(xué)數(shù)據(jù)第18頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三相關(guān)部門要對(duì)瘦肉精的流通進(jìn)行嚴(yán)加監(jiān)管，實(shí)行購(gòu)買登記制度。養(yǎng)牲畜者自律，監(jiān)管人嚴(yán)格監(jiān)督。對(duì)責(zé)任人加大處罰力度，完善法律法規(guī)實(shí)。

四、杜絕措施第19頁(yè)，講稿共21頁(yè)，2023年5月2日，星期三[1]氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)測(cè)定豬肉中的瘦肉精的含量.食品與發(fā)酵工業(yè)．2011年03期．[2]DengRuiguang，ZhangHaitang，WangZiliang，ZhongHua，ZhangGaiping．DevelopmentofGC-MSMethodforDetectingClenbuterolResiduesandConfirmationofSelf-madeStripPerformance．CHINESE