高效液相色譜法

2023/7/3第三章

高效液相色譜法一、HPLC的特點(diǎn)featureofHPLC二、高效液相色譜儀instrumentofHPLC三、流程及主要部件generalprocessandmainassemblyofHPLC第一節(jié)

高效液相色譜

的特點(diǎn)與儀器highperformanceliquidchromatography(HPLC)featureandinstrumentofHPLC2023/7/3一、高效液相色譜法的特點(diǎn)

featureofHPLC

特點(diǎn)：高壓、高速、高效、高靈敏度高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。2023/7/3二、高效液相色譜儀器instrumentsofHPLC2023/7/3液相色譜儀（2）2023/7/3液相色譜儀（3）2023/7/3液相色譜儀（4）2023/7/3三、流程及主要部件

processandmainassemblyofHPLC1.流程圖動(dòng)畫演示2023/7/32.主要部件高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)和檢測(cè)系統(tǒng)；此外還有一些附屬設(shè)備，如梯度洗脫、自動(dòng)進(jìn)樣及數(shù)據(jù)處理裝置。(1)

高壓輸液系統(tǒng)高壓輸液泵：恒流泵和恒壓泵壓力：150～350×105

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2023/7/3（a）恒流泵：往復(fù)式柱塞泵要求：應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性。動(dòng)畫演示20寄23鈔/6灑/2店6特點(diǎn)敘：流觀動(dòng)相冬無脈病沖、像流量睛穩(wěn)定搶；液堡缸的促體積寸大，息更換桂流動(dòng)爭(zhēng)相不氏易，醬不適阿宜梯岸度洗刷脫。（b）恒輸壓泵架：氣污動(dòng)放低大泵p1SA=p2SB動(dòng)畫粘演示20久23鄉(xiāng)豐/6燈/2紡6(c)梯度蘋洗脫犬裝置轟（梯倚度洗雄提、詠梯度宴淋洗程）所謂重梯度選洗脫疏就是杯流動(dòng)辱相含誰有兩邊種或箏兩種揀以上不同吉極性的溶藍(lán)劑，在蟻分離堂過程蜂中按康一定程序連續(xù)殖改變流動(dòng)朵相的配比伙和極愉性，以立此來改變流被分?jǐn)囯x組云分的容量腸因子k和選愛擇性逆因子，達(dá)申到縮短尼分析魔時(shí)間梯和提級(jí)高分務(wù)離效艱果的目雪的。20糞23蘿/6嫁/2士6高壓曠梯度班洗脫訴:綿內(nèi)梯笨度利用慢兩臺(tái)廚高壓有輸液緒泵，硬將兩逐種不強(qiáng)同極踐性的墳溶劑各按一沾定的株比例稻送入劃梯度財(cái)混合臺(tái)室，血混合響后進(jìn)湊入色萄譜柱牧。低壓監(jiān)梯度袋洗脫祝:幸外梯暑度一臺(tái)澆高壓凈泵，褲通過心比例批調(diào)節(jié)卷閥，鐮將兩魔種或施多種腥不同臉極性卵的溶疲劑按小一定較的比喇例抽副入混要合器墾中混繞合。20糕23究/6動(dòng)/2舉6（2）進(jìn)酸樣系侵統(tǒng)注射爆器進(jìn)援樣、鳥高壓儲(chǔ)六通虹閥進(jìn)繩樣。動(dòng)畫候演示20齒23漂/6映/2臥6(3)分離懲系統(tǒng)柱體算為直錄型不床銹鋼赤管，堅(jiān)內(nèi)徑2～6mm煙，柱長(zhǎng)10～50陵c獅m。發(fā)展瘋趨勢(shì)禍?zhǔn)菧p豈小填翅料粒享度和余柱徑路以提惡高柱紀(jì)效。20篩23鴨/6洲/2倒6在液球相色儉譜中翅，有奧兩種婆基本拘類型居的檢屠測(cè)器敬。一洞類是溶質(zhì)懶性檢扛測(cè)器，它列僅對(duì)閃被分撒離組景分的猴物理斧或化窯學(xué)特升性有耕響應(yīng)課，比翼如紫同外、燈熒光銳等檢芽測(cè)器妥。另貸一類桐是總體戶型檢叢測(cè)器，它趁對(duì)試妨樣和醬流動(dòng)猛相總隔的物邊理或裝化學(xué)涼性質(zhì)偽有響雙應(yīng)，劉比如擦示差訓(xùn)折光氏，電藝導(dǎo)檢貧測(cè)器巨等。(4)檢測(cè)味系統(tǒng)20遲23掠/6剝/2羞6應(yīng)用柄最廣背，對(duì)傭大部詠分有以機(jī)化君合物鳴有響煌應(yīng)。靈敏想度高內(nèi)，10-9g/虎mL門;流通眨池可毯做的陽很小伴（1mm捏×窩1須0m樹m管，容積傷8μL統(tǒng)）；對(duì)流紛動(dòng)相地的流牽速和漿溫度跨變化腐不敏圓感；界可用宅于梯岡度洗迎脫。臨波長(zhǎng)可可選右，易酷于操鄰作。動(dòng)畫辯演示a.紫外江光度色檢測(cè)客器ul董tr源av汗io粉le略t送ph短ot禾om祖et椒ri糠c矮de況te領(lǐng)ct眾or20紗23燙/6血/2輔620奇23泛/6診/2津6b.光電雀二極允管陣譽(yù)列檢危測(cè)器ph夕ot攀od祥io輸de攔a洋rr層ay滋d被et箏ec登to贊r紫外棒檢測(cè)行器的原重要表發(fā)展奏；由擺10蠅24公個(gè)二仇極管見組成園，各戶檢測(cè)異特定攪波長(zhǎng)覺，計(jì)臉?biāo)銠C(jī)幫快速述處理豪，三爭(zhēng)維立袍體譜心圖，姐如圖隨所示內(nèi)。20善23像/6圓/2胖6光電貍二極蛾管陣替列檢柱測(cè)器洗獲得爸的色競(jìng)譜圖20各23助/6熟/2芳6c.熒光捎檢測(cè)麗器fl復(fù)uo斗re糕sc套en折ce盞d喬et遺ec蜂to替r高靈唯敏度鄭、高賴選擇桃性；對(duì)多散環(huán)芳伯烴，節(jié)維生謎素B、黃曲釣霉素復(fù)、卟給啉類卻化合熱物、盈農(nóng)藥村、氨熊基酸旋類化俱合物語等有欄響應(yīng)晚。激光昌誘導(dǎo)帆熒光(L賞IF拆)Las粒erInd檢uc案edFlu士or完es勤ce渣nc動(dòng)e體積執(zhí)小，謹(jǐn)適合宋毛細(xì)財(cái)管柱20艙23愛/6扭/2趟6d.示差融折光丟檢測(cè)葛器di抗ff壟er哲en仗ti脂al喂r代ef掛ra揚(yáng)ct閣iv誕e票in矩de梢x尚de概te眾ct圍or除紫藥外檢憂測(cè)器匯之外門應(yīng)用清最多艦的檢由測(cè)器初；通用針型檢委測(cè)器（每搭種物浙質(zhì)具穩(wěn)有不市同的笑折光嗓指數(shù)誕）；可連檢續(xù)檢觀測(cè)參遭比池昌和樣界品池唐中流皆動(dòng)相份的折政光指背數(shù)差料值，大差值慎與濃儲(chǔ)度呈炕正比惡。靈敏浸度低腔、對(duì)野溫度勸敏感快、不田能用扎于梯配度洗冶脫；偏轉(zhuǎn)宗式、辮反射俯式和跑干涉麗型三饞種；動(dòng)畫際演示20稀23貞/6鈴/2鴨6e.電導(dǎo)灰檢測(cè)皮器el壁ec毒tr很ic尚al苦c頌on贊du幼ct叉iv圣it盒y腸de跌te糊ct憲or根據(jù)跡物質(zhì)婆在某遠(yuǎn)些介拒質(zhì)中礙解離趟后所領(lǐng)產(chǎn)生松電導(dǎo)團(tuán)變化傳來測(cè)賴定解拒離物俱質(zhì)的及含量娛。常知用于始離子咱色譜歸分離渾系統(tǒng)垃中的存檢測(cè)滅器。20肢23陷/6渴/2頃6f.蒸發(fā)披光散秋射檢裳測(cè)器ev兼ap紹or最at忙iv躁e蒸li手gh責(zé)t得sc循at奧te聚ri攪ng據(jù)d刃et項(xiàng)ec盛to愧r基于耽不揮嶼發(fā)溶冊(cè)質(zhì)對(duì)況光的雷散射旅現(xiàn)象搏來測(cè)暴定物昆質(zhì)的最含量順。通善用型甚檢測(cè)謝器。溶劑督（流黨動(dòng)相墨）易糕揮發(fā)挽，靈朝敏度亦高，扎響應(yīng)魄信號(hào)黎不受玩溶劑餃和溫奶度的弱影響泛，可稀以用嘴于梯均度洗踐脫。20盯23糕/6淚/2調(diào)6請(qǐng)選具擇內(nèi)杏容第一搜節(jié)雷高效想液相困色譜觀的特誘點(diǎn)與鑒儀器fe夫at婚ur校e察an宿d盛in刑st似ru運(yùn)me戀nt自o瞧f糠HP子LC第二罷節(jié)動(dòng)主要焦的分感離類槽型和伐原理ma京in卷s鵲ep暑ar云at砌in串g幻玉ty貌pe扣s各an量d音pr保in禍ci炎pl盾e第三許節(jié)熔影響匯分離工的因質(zhì)素與提操作箭條件窗選擇fa沃ct長(zhǎng)or挑s終in辰fl躁ue殊nc說ed顯s魂ep輩ar拆at倚io竿n乎an援d雷ch肚oi導(dǎo)ce討o摧f槐op忠er普at聾io美n漢co朋nd秩it昌io孔n第四柿節(jié)逼液相銀制備萌色譜Pr境ep誰ar烏at群iv繼e揭li哥qu戒id朽c隨hr鏟om壁at回og朵ra菊ph疑y第五炭節(jié)鴿毛細(xì)材管電邪泳Ca惑pi致ll最ar雪y叢el針ec烘tr孕op頸ho白re點(diǎn)si影s,候C橡E20降23忽/6哄/2桂6第三剃章次高效義液相周色譜過法一、長(zhǎng)液-候液分課配色蒜譜li朵qu焰id譯-l吧iq枝ui籮d昏pa陵rt刷it潤(rùn)io溜n丸ch宜ro甲ma聲to瓦gr舉ap過hy二、閘液-遙固吸障附色陣譜li弄qu霞id術(shù)-s蔑ol幣id淚a勢(shì)ds投or沈pt散io孟n償ch桐ro達(dá)ma代to始gr曉ap茂hy三、喪離子圣對(duì)色鍛譜Io柱n數(shù)pa摩ir籮c洲hr殼om溝at思o(jì)g乓ra拉ph謝y四、侍離子注交換翅色譜io坊n討ex拉ch加an第ge侄c家hr育om敵at珍og鏟ra什ph腎y五、洋離子缺色譜Io俊n副ch永ro畝ma噴to巾gr廚ap慌hy六、災(zāi)尺寸綢（空棍間）爐排阻惰色譜si隨ze耍-e撞xc瘋lu嗎si鼠on注c逆hr徑om消at怒og柳ra醉ph建y七、呀親和癥色譜Af如fi纖ni架ty木c草hr竟om撫at頃og評(píng)ra共ph擾y第二掀節(jié)鎮(zhèn)主要廣類型飄和分撤離原遼理hi很gh鴨p黑er羽fo溉rm準(zhǔn)an傾ce發(fā)l放iq前ui覽d恥ch繁ro首ma縣to恒gr系ap險(xiǎn)hy葬(H加PL磚C)ma疤in巴t揚(yáng)yp擋es扶a饞nd剖s偉ep擦ar元at政io址n急pr慕in姓ci鳥pl密e20蕩23半/6盡/2悶6一、券液川－液響分配浪色譜li齒qu款id舞-l表iq緣瑞ui戰(zhàn)d幕pa搶rt顫it活io盲nch測(cè)ro鍋ma戶to寇gr喝ap象hy固定慢相與勇流動(dòng)邊相均拋為液扶體（剩互不謠相溶格）1.基本麥原理斜：組分榜在兩榨相上擔(dān)的分哄配系煙數(shù)不慣同組分蔥的分眨離順包序取酷決于懇分配已系數(shù)K的大犬小。與氣皆相色軌譜不按同的投是，院液相磨色譜章中的孤流動(dòng)似相對(duì)騾分配屢系數(shù)元影響井較大寫。20雄23黃/6嗚/2冶62.固定逃相：表面壟多孔付型和良全多媽孔型。它們鬼具有液填料務(wù)均勻鍵、粒透度小州的優(yōu)置點(diǎn)。20節(jié)23章/6殺/2紙6（1）涂桶漬固借定液由于勉液－題液分擔(dān)配色曲譜中流動(dòng)咽相參與徒選擇亡競(jìng)爭(zhēng)面，因且此對(duì)兩固定例相選習(xí)擇較冠簡(jiǎn)單頌。只表需使支用幾豆種極休性不業(yè)同的揪固定苗液即醋可解鵲決分從離問堤題。最常毀用的謝強(qiáng)極暖性固遮定液β,瘋β－－氧二瞇丙睛曾，中螞等極險(xiǎn)性的邪聚乙股二醇惱，非洋極性嚴(yán)的角棍鯊?fù)楹薜取?0掩23騰/6說/2釀6（2）化寺學(xué)鍵們合固私定相秧：將不填同基設(shè)團(tuán)通循過化筍學(xué)反急應(yīng)鍵憤合到刪硅膠遭（載當(dāng)體）望表面少的游膊離羥部基上付。1.疏水鏡基團(tuán)虎：如塊烷烴C8、C18和苯洪基等2.親水趟基團(tuán)?。喝缁卑被?、氰漆基等20遇23茫/6跑/2啊63．鍵差合固苗定相偽的制羞備（l）硅喪酸酯槐（≡Si一OR）鍵狼合固殘定相例，它券是最拼先用糠于液疏相色馳譜的戒健合飯固定合相。腔用醇佩與硅毛醇基榜發(fā)生魔酯化崇反應(yīng)倦：≡Si－OH＋RO堤H?！鷦潯許她i－OR＋H2O由于戰(zhàn)這類穿鍵合要固定旁相的轎有機(jī)啟表面似是一肚些單零體，肯具有林良好閣的傳熄質(zhì)特巾性，盒但這向些酯揪化過寨的硅礎(chǔ)膠填公料易潔水解撲且受局熱不擺穩(wěn)定擊，因籮此僅做適用錯(cuò)于不筐含水伸或醇殊的流靠動(dòng)相撐。20樸23糟/6幼/2她6這類萍鍵合瀉固定偵相（耽十八撒烷基殘鍵合姐相）間具有戀熱穩(wěn)懷定好輝，不忍易吸腫水，供耐有梨機(jī)溶敵劑的保優(yōu)點(diǎn)據(jù)。能性在70皮℃以下搭，pH＝2～8范圍指內(nèi)正捉常使語用，傳應(yīng)用緣瑞較廣奸泛。（2）硅京烷化眉（≡Si－O－Si－C）鍵欲合固樂定相制備完反應(yīng)渡如下卻：20鍬23卸/6荷/2港6對(duì)于裹親水病性固蔬定液膜，通貝常采川用疏申水性賤流動(dòng)澇相，溝即固使定相嘗的極銷性大縮慧于流初動(dòng)相掙的極奧性，替稱為正相到色譜狗；反之霜，固莖定相吊的極督性小端于流院動(dòng)相你的極掠性的炒稱為反相微色譜。4.流動(dòng)料相：20塑23柱/6私/2精6正相訊色譜適用扮于極寶性化哥合物叉的分型離。獨(dú)其流遣出順族序是囑極性漲小的傾先流廟出，嚼極性排大的爐后流將出。反相勻色譜適用晨于非皂極性鴿化合撫物的木分離縫，其旨流出攻順序蠶與正某相色英譜恰孤好相壤反。20閣23誓/6佩/2堆65.正相避鍵合英相色盯譜法固定憐相采用昂極性涼的有堤機(jī)基牢團(tuán)，CN、NH2、雙團(tuán)羥基愧等鍵笛合在驗(yàn)硅膠臉表面敘；流動(dòng)診相采用通非極怠性或午極性租小的廚溶劑伶（如熄烴類幟）中劃加入活適量塞的極答性溶攜劑（接如氯謹(jǐn)仿、欺醇、攻乙醇抖等）棉。它多喚用于忽分離坡異構(gòu)怠體、扁極性晚不同仰的化換合物載，此壁時(shí)，曉組分嬸的分粒配比k值隨購(gòu)其極趙性的惜增加扭而增窩大，閑但隨我流動(dòng)竹相極蘋性的哈增加芳而降斧低。20光23鍬/6盲/2傾66．反暈相健沃合相賴色譜稀法固定夢(mèng)相是采偷用極蒸性較喇小的幅鍵合紅固定憂相，拉如硅加膠－C18H37、硅淺膠－概苯基誦等；流動(dòng)勁相是采青用極厲性較蔬強(qiáng)的欲溶劑艱，如的甲醇爛、乙纖睛－詳水、死水和稍無機(jī)遍鹽的欄緩沖臥溶液乞等。多用先于分喇離多雨環(huán)芳額烴等鄉(xiāng)豐低極疾性化同合物液；反莊相鍵層合相樂色譜顫法具凝有柱雪效高憤，能跡獲得徹?zé)o拖留尾色霞譜峰任的優(yōu)煎點(diǎn)。20褲23防/6撥/2鼓6鍵合垃相色認(rèn)譜的林優(yōu)點(diǎn)：通替過改皂變流右動(dòng)相古的組針成和侵種類控，可單有效賤地分摘離各卻種類懶型化柄合物約（非民極性療、極紐奉性和達(dá)離子稍型）殘。此虧外，吃由于辰鍵合陣到載截體上獄的基半團(tuán)不膠易流濃失，速特別獸適用賢于梯內(nèi)度淋秤洗。最大漫缺點(diǎn)冊(cè)：不能敗用于鹿酸度便、堿牲度過馬大或包存在辭氧化潤(rùn)劑的鋼緩沖藝溶液勞作流蜓動(dòng)相共的體芳系?？偨Y(jié)啊：20梨23黨/6豆/2鉤6二、庭液撲－固袋吸附袋色譜li灑qu姜id島-s璃ol蚊id獨(dú)a父bs幣or準(zhǔn)pt猜io置nch委ro陪ma含to謊gr暑ap涌hy液固倍色譜底實(shí)質(zhì)探是根侍據(jù)待譜分離齊的組嬸分在蜓固定曬相上乎的吸墾附作持用不選同來狡進(jìn)行染分離擴(kuò)的。其作舟用機(jī)項(xiàng)制是右溶質(zhì)譽(yù)分子拾和溶謠劑分抬子對(duì)器吸附券劑活拐性表獅面的孟吸附哀競(jìng)爭(zhēng)鳥。20胖23滑/6鄭/2貌6當(dāng)流剃動(dòng)相剖通過芒固定疑相（潮吸附找劑）部時(shí)，素吸附袋劑表勤面的凈活性睡中心某就要基吸附性流動(dòng)刊相分松子（M）。載當(dāng)待起測(cè)試粗樣分工子（X）被練流動(dòng)波相帶臭入色提譜柱兔內(nèi)，屯就要飾取代和數(shù)目機(jī)相當(dāng)島的已嚴(yán)被吸狼附的宣流動(dòng)爹相分須子，脂于是期，在朽固定巾相表覺面發(fā)更生交埋換（梢競(jìng)爭(zhēng)桶）吸破附:Xm＋n湯Mad＝Xad＋nMm1．分要離原瀉理20腦23僻/6告/2嘉6其中Kad為吸推附平糞衡常得數(shù)，珠值大餃表示獲組分弟在吸互附劑啟上保京留強(qiáng)索，難異于洗區(qū)脫。Kad值小馬，則罷保留伙值弱凳，易嫂于洗辱脫，群試樣障中各吼組分呈據(jù)此哨得以環(huán)分離攻。競(jìng)爭(zhēng)囑吸附走達(dá)平喬衡時(shí)左，有20環(huán)23獵/6干/2松62．固龍定相由于廊硅膠糾的優(yōu)房誠(chéng)點(diǎn)，安如線歉性容彼量高同，機(jī)鋤械性衛(wèi)能好痕，與便大多富數(shù)試幕樣不絮發(fā)生疑化學(xué)事反應(yīng)朵等，洞因此棋，以燙硅膠肢用得懷最多堵。20按23珍/6柿/2虹63.流動(dòng)似相一般量把吸尼附色偶譜中和流動(dòng)眼相稱枝作洗閃脫劑談。在留吸附騎色譜挨中對(duì)蟻極性昆大的擊試樣懼往往李采用匆極性論強(qiáng)的安洗脫猶劑；剛對(duì)極咽性弱石的試布樣宜袖用極暖性弱刺的洗遭脫劑取。洗脫臂劑的箱極性廈強(qiáng)弱拆可用廊溶劑抽強(qiáng)度余參數(shù)違（0）來窯衡量街。0越大終，表名示洗扛脫劑退的極鈴性越醫(yī)強(qiáng)。課本p8悔1，常睛用溶概劑的啄極性衰順序刪。20崖23杏/6輩/2候6液固首吸附全色譜防適用司于分顯離那驕些能掃溶解插在非妄極性絮溶劑睛中、悅具有散中等倒分子續(xù)質(zhì)量開的非有離子信型（惕油溶叮性）呀的試粒樣；耳對(duì)具奸有相雄同官術(shù)能團(tuán)耕但數(shù)弱目不遙同的伍化合菊物或嗚者異習(xí)構(gòu)體灑也有挎較高彎選擇基性；缺點(diǎn)：非妹線形海等溫冒吸附著常引益起峰渴的拖娛尾；20恭23下/6態(tài)/2而6將一法種或設(shè)多種姐與溶導(dǎo)質(zhì)離踢子電荷笛相反的離植子加緞入到伍流動(dòng)貴相或罷固定產(chǎn)相中減，使含其與疼溶質(zhì)乓離子六結(jié)合跟形成疏水蛾性的題離子搶對(duì)化合繳物，從墻而控貫制溶宅質(zhì)的條保留閃行為禍的一沃種色悟譜分撞離方營(yíng)法。三、齡離叔子對(duì)稼色譜徹法io歪n錦pa病ir批c心hr窯om國(guó)at躺og纖ra賊ph鎮(zhèn)y對(duì)強(qiáng)僑極性移的有追機(jī)酸濾和有舒機(jī)堿墨的分貌離？20溪23貧/6恰/2戲6烷基觀銨鹽秤離子海對(duì)試劑飛，用權(quán)于陰球離子奧的分粘離；烷基燦磺酸巡壽鹽離午子對(duì)試劑斑，用繡于陽比離子探的分爬離。固定硬相：正相游鍵合沾固定福相；反相尋鍵合陳固定詳相。流動(dòng)遠(yuǎn)相：一般健含有趨適當(dāng)破有機(jī)飯反離蜂子的毒溶劑鐘。1．固群定相群和流盼動(dòng)相20賢23烤/6淘/2君62．分我離原絡(luò)理固定野相為葵非極蔬性鍵徒合相監(jiān)，流趟動(dòng)相舊為水賽溶液腐，于丈流動(dòng)暴相中御加入輩與待圍測(cè)離店子X+相反鄉(xiāng)豐電荷叼的離暈子Y-：20盞23東/6頌/2苦6由于斜離子集對(duì)X+Y-具有筋疏水幻玉性，竿因而書被非偽極性質(zhì)固定置相提苗取。印其它掛待測(cè)轎離子X1，X2，X3……寇..因與Y-離子先間的灣成對(duì)嗓能力蜂不同收，而再形成晴不同案疏水刊性的眼離子撒對(duì)，版使得塘各待玩測(cè)物章在柱皆內(nèi)的紋保留攔值不謹(jǐn)同，街從而瀉達(dá)到臭分離唯的目沖的。20晨23裙/6糖/2櫻6組分?jǐn)车谋Ｍ搅糁迪Q娃于組森分離葡子和塞離子毒對(duì)試間劑生罵成配合納物的紛平衡貞常數(shù)和反離獎(jiǎng)子的痕濃度。根據(jù)畏分配豎系數(shù)斑的定采義：20柿23崇/6襪/2星620拼23斃/6紙/2匠6離子稻對(duì)色粱譜對(duì)忍一些神生化抹試樣糞，如塔核酸歌、核物苷、牧兒茶淚酚胺蒸類物胳質(zhì)具造有良恐好的敘分離答效果冶。尤寒其是雄可以始借助并離子峰對(duì)的亮生成戀引入腹紫外爽吸收騙或熒忙光基腳團(tuán)。20幻玉23土/6短/2網(wǎng)6四、壟離乖子交級(jí)換色念譜io酬n-株ex天ch蜂an胖gech厚ro讀ma灑to區(qū)gr怖ap撲hy固定項(xiàng)相：陰離兆子交鑄換樹確脂或析陽離盈子交氧換樹等脂；流動(dòng)具相：鹽類觀緩沖射溶液都（一獎(jiǎng)定pH和離恩子強(qiáng)協(xié)度）修。1．固紙定相夏和流寇動(dòng)相20保23擊/6建/2忙6基本末原理避：組分箏在固麻定相然上發(fā)改生離煌子交顆換反涉應(yīng)；掃組分議與離曠子交盟換劑找之間籍親和如力的矩大小宣與離曠子半醫(yī)徑、態(tài)電荷宗多少吳等有費(fèi)關(guān)。涼親和圈力大旗，保鮮留時(shí)時(shí)間長(zhǎng)門。陽離炒子交揀換反水應(yīng)：R-感SO3-Na++M+＝R-樣SO3-M++Na+陰離啊子交瞞換反頁應(yīng)：R-兆NR3+Cl-＋X-＝R-體NR3+X-＋Cl-2．分惠離原承理動(dòng)畫紅演示20丹23蛾/6頑/2球6在離隙子交殘換色帖譜中嗓，常記通過功改變流動(dòng)齊相的pH、離打子強(qiáng)山度等膽條件填來控平制分驢配比k，改恭變離韻子交周換劑壞的選站擇性壟，進(jìn)燒而影占響待蔥測(cè)物屠的分過離。pH值：影響嚼酸或份堿的戶離解醫(yī)平衡唉，控戚制組孕分離偷子形黃式所斬占的接分?jǐn)?shù)俱。離慌子分鈴數(shù)越礦高，磨保留丈值越糞大。沸常用增的有嫁檸檬言酸鹽障、磷鳴酸鹽連、乙漆酸鹽安和氨問水等資。20治23勵(lì)/6希/2幼6離子朋強(qiáng)度I：組分著保留吳值受儲(chǔ)流動(dòng)將相中錢鹽類默總濃乳度控襯制。攏額外怠增加督陽離月子或車陰離就子將踐增加游它們丙對(duì)R-連SO3-Na+或R-壺NR3+Cl-的交駐換競(jìng)長(zhǎng)爭(zhēng)力此，使跳組分蚊保留痰值減櫻小。啟通過死加入催不同筒種類譜的鹽抓，可件影響矮柱的貓選擇抱性，釣因?yàn)榛筒煌缥镔|(zhì)評(píng)對(duì)交哲換劑適的親煙和能個(gè)力不切同。應(yīng)用牢：它既犯適于駛無機(jī)手離子倡，也阿適于血有機(jī)拴物分獄離，艦如蛋囑白質(zhì)成、氨移基酸曉、核勤酸等拳。20頂23陣/6餡/2求6五、送離湖子色棵譜法io紡n斗ch族ro渡ma援to劈燕gr擔(dān)ap緞hy傳統(tǒng)易離子護(hù)交換銅色譜柿存在要著兩茅個(gè)難志于解橋決的嘉問題朝：（1）需安要高敵濃度直淋洗太液且望洗脫參時(shí)間娃很長(zhǎng)爬；（2）洗凱脫后槳的組沸分缺宿乏靈均敏、責(zé)快速活的在湖線檢籌測(cè)方網(wǎng)法。20逝23聽/6寇/2兆61.正離雅子色馳譜流哭程圖20餅23威/6藏/2分6在離米子交黎換分篇離柱清后加焰一根抑制柔柱，抑岔制柱扁中裝熟填與藝分離艷柱電荷殖相反的離捷子交荷換樹賺脂。悲通過串分離丑柱后灶的樣救品再客經(jīng)過藥抑制拍柱，鋤使具萄有高誕背景聯(lián)電導(dǎo)銳的流返動(dòng)相絕轉(zhuǎn)變勢(shì)成低諸背景干電導(dǎo)餡的流士動(dòng)相逃，從鍋而用電導(dǎo)蔬檢測(cè)恭器可直醒接檢酷測(cè)各恨種離堵子的盈含量忽。這患種色科譜技媽術(shù)稱帖為離子墻色譜鎖法。2.罵離仗子色沉譜法胃原理20法23異/6針/2摟6若樣如品為爽陽離泳子，土用無錘機(jī)酸廟（HC乞l）作蝦流動(dòng)漢相，狠抑制際柱為匪高容濫量的強(qiáng)堿腰性陰語離子榆交換吩劑（OH-）。當(dāng)價(jià)試樣柄經(jīng)陽我離子骨交換善劑的彎色譜饒柱分羞離后雪，隨字流動(dòng)裕相進(jìn)俊入抑環(huán)制柱瓜，在漫抑制毛柱中意發(fā)生萍兩個(gè)或重要猜反應(yīng)舒：R+－OH-＋H+Cl-→R+－Cl-＋H2OR+－OH-＋M+Cl-→翁R+－Cl-＋M+OH-20咳23波/6著/2補(bǔ)6由反啟應(yīng)可趙見：專經(jīng)抑固制柱易后，酒一方理面將黑大量妨酸轉(zhuǎn)調(diào)變?yōu)樵妼?dǎo)猾很小貢的水儲(chǔ)，消央除了土流動(dòng)堆相本懲底（HC拜l）電仇導(dǎo)的弊影響轎。同糾時(shí)，范又將芳樣品趨陽離樓子M+轉(zhuǎn)變售成相鏟應(yīng)的世堿，財(cái)由于OH-離子欠的淌萍度為Cl-離子湊的2.喉6倍，溝提高馬了所結(jié)測(cè)陽電離子參電導(dǎo)名的檢轟測(cè)靈印敏度認(rèn)。同理陳對(duì)于龍陰離父子樣掏品也忽有相暖似的剃作用欲機(jī)理嗚。20烈23刻/6怖/2涉6在分顏離柱狼后加夜一個(gè)旗抑制予柱的沾離子浪色譜鑒亦稱乒為抑制當(dāng)型離嗎子色筍譜或是稱雙曲柱離陵子色悠譜。由于犯抑制逗柱要魯定期兔再生劫，而霧且譜栗帶在銷通過雨抑制減柱后柜會(huì)加功寬，覆降低醫(yī)了分撫離度財(cái)。后來礙，F(xiàn)r拿it安s等提登出不響用抑雁制柱諸的離進(jìn)子色萍譜體憶系，苦而采干用了鞠電導(dǎo)緞率極晌低的佩溶液瘦，例比如1～5×饑10-4mo船l·任L-1苯甲盲酸鹽峰或鄰件苯二庸甲酸統(tǒng)鹽的乒稀溶染液作神為流河動(dòng)相待，稱談為非抑扁制型杠離子冒色譜呼或單惠柱離惕子色樣譜。20倍23啦/6密/2笛620鋒23計(jì)/6妙/2盛6六、匙空磨間排松阻（帆尺寸燭排斥害）色象譜st姐er督ic緊-e逮xc革lu屠si藏on蔬c丹hr未om患at等og罩ra啞ph繡y原理：按分憐子大樓小分睛離。斧小分勸子可杯以擴(kuò)騙散到少凝膠底空隙特，由忠其中制通過氧，出齡峰最搏慢；振中等杜分子常只能鈴?fù)ㄟ^嗓部分濟(jì)凝膠詳空隙涌，中嚼速通懂過；便而大培分子糧被排片斥在他外，乓出峰禍最快君。動(dòng)畫降演示20車23央/6齊/2展6尺寸際排阻間色譜情被廣留泛應(yīng)引用于舊大分沾子物汪質(zhì)相仰對(duì)分油子量戰(zhàn)的分揚(yáng)布。（1）保事留時(shí)抗間是呢分子適尺寸譽(yù)的函遮數(shù)，紡有可逝能提具供分融子結(jié)互構(gòu)的冊(cè)某些濱信息史；（2）固拼定相伍與分摟子間初作用辛力極陪弱，沾趨于探零。昨由于商柱子把不能璃很強(qiáng)雅保留這分子球，因蘆此柱寇壽命蹲長(zhǎng)；（3）不報(bào)能分且辨分托子大須小相露近的槽化合視物，盤相對(duì)遇分子腸質(zhì)量斤差別茫必須祖大于10％才蕩能得蜓以分副離。20得23雜/6摩/2堆6排阻嘆色譜鏈固定紅相種羞類很黨多，舍一般鑼可分菌為軟性、半剛讓性和剛性奴凝膠三類附。所謂遲凝膠狹，指搶含有邀大量誕液體膊（一記般是宰水）身的柔芹軟而疊富于哨彈性旅的物豆質(zhì)，危它是柿一種遺經(jīng)過督交聯(lián)啄而具省有立衡體網(wǎng)淚狀結(jié)雄構(gòu)的臉多聚陸體。1．固帽定相20歌23科/6航/2莖6如葡樹聚糖暑凝膠方、瓊獄脂糖隔凝膠隊(duì)都具帖有較訴小的粗交聯(lián)猾結(jié)構(gòu)血，其難微孔秋能吸艱入大雜量的套溶劑電，并森能溶閘脹到叢它們伍干體概的許載多倍閥。它脫們適確用以宣水溶青性溶刑劑作瞇流動(dòng)地相，綁一般鍬用于寧小分形子質(zhì)膛量物羊質(zhì)的扯分析丙，不幫適宜近用在牛高效本液相酷色譜麻中。（1）軟傳性凝喊膠20絡(luò)23特/6殘/2彈6如高涼交聯(lián)橋度的舉聚苯怖乙烯陵（St唇y(tǒng)r檔ag膨el）比內(nèi)軟性當(dāng)凝膠電稍耐甘壓，跪溶脹雷性不各如軟輔性凝流膠。常以杏有機(jī)前溶劑激作流例動(dòng)相以。用羊于HP破LC時(shí)，拌流速卸不宜蔥過大片。（2）半思剛性鹿凝膠20儲(chǔ)23旅/6炒/2兵6如多頂孔硅醬膠、打多孔勒玻璃測(cè)等它處們既棄可用男水溶心性溶木劑，柄又可歡用有刮機(jī)溶皇劑作和流動(dòng)噸相，糕可在陣較高擱壓強(qiáng)屋和較屋高流沸速下秩操作洲。一般炸控制蛙壓強(qiáng)啦小于7M該P(yáng)a，流恨速＜1c家m3·s-1；否柳則將梨影響秀凝膠輪孔徑劑，造烈成不秋良分壯離。（3）剛習(xí)性凝侍膠20聽23袖/6軋/2毫6排阻姐色譜襖所選欺用的貨流動(dòng)卸相必還須能妻溶解花樣品壘，而鹽且與盞凝膠壓本身啊非常撇相似稼，這陡樣才種能潤(rùn)學(xué)濕凝行膠。劣當(dāng)采黑用軟浴性凝漫膠時(shí)趙，溶腰劑也酬必須拴能溶否脹凝版膠。福另外疏，溶倉(cāng)劑的侵粘度拳要小贏，因在為高繁粘度皆溶劑頸往往艱限制象分子勝擴(kuò)散叛作用蒜而影耗響分膝離效墾果。子這對(duì)婆于具潔有低斑擴(kuò)散房誠(chéng)系數(shù)交的大速分子胞物質(zhì)援分離賊，尤析需注峽意。2．流撒動(dòng)相20管23損/6虧/2孫6選擇梯溶劑串還必棗須與爸所用素的檢脹測(cè)器耽相匹徐配。懂常用恐的流日動(dòng)相倉(cāng)有四劃氫呋尼喃、息甲苯卻、氯器仿、騰二甲存基酸妙胺和銀水等倒。描以水渣溶液輩為流才動(dòng)相新的凝頭膠色赴譜適熟用于蹤蝶水溶趣性樣鎮(zhèn)品，策以有瞇機(jī)溶隸劑為嘆流動(dòng)固相的羅凝膠興色譜刷適用捎于非枯水溶體性樣束品。20嗎23感/6決/2疏6請(qǐng)選原擇內(nèi)碧容第一辣節(jié)謀高效嶄液相棍色譜蕩的特顛點(diǎn)與拖儀器fe越at閃ur寇e駛an幸d術(shù)in談st覽ru閉me笑nt勸o怎f某HP纖LC第二宮節(jié)攀主要彩的分陣離類握型和訊原理ma塊in商s下ep日ar莫at非in倒g宴ty靜pe朵s作an陷d禍pr還in惕ci招pl潔e第三烘節(jié)吹影響理分離威的因虧素與來操作眨條件鳥選擇fa歌ct竿or哭s乖in桶fl炸ue江nc牙ed瓶s托ep綱ar喚at扯io烈n提an西d攝ch退oi鑰ce斯o纏f栽op沒er療at怖io沉n丈co傻nd蚊it碎io熊n第四圾節(jié)抬液相膀制備肯色譜Pr散ep餡ar洲at祖iv揉e稍li瓦qu臣id礎(chǔ)c擇hr屑o(jì)m昏at精og吃ra濤ph筋y第五抖節(jié)尿毛細(xì)死管電搭泳Ca敗pi叫l(wèi)l爆ar肯y蜂el灣ec紋tr汪op與ho鉛re依si督s,坡C橡E20屋23賣/6砌/2腔6第三琴章辣高效偏液相拿色譜勤法一、影響譯分離雜的因邊素in嘩fl征ue驚nc躬ed見f償ac培to肢rs際o蕩f超se蒜pa粱ra妄ti隙on二、蠟分離乘類型棉的選稍擇ch糟oi摟ce宮o微f誘se違pa啟ra涌ti岔on端t稻yp擱es三、膚液相碰色譜券的應(yīng)易用ap墾pl雞ic謙at立io遇n疏of擴(kuò)H爬PL泡C第三傭節(jié)紀(jì)影響破分離漫的因腎素象與操絡(luò)作條星件的擊選擇hi徑gh基p煉er爛fo蘿rm子an排ce禁l爭(zhēng)iq箏ui央d型ch剛ro會(huì)ma揪to鬼gr畢ap健hy他(H頭PL玩C)In倦fl筋ue富nc植ed乖f壯a(bǔ)c寧to蠻rs廉o害f吩se姓pa改ra戰(zhàn)ti鳳on車a度nd戴c霞ho膛ic妄e溝of姿o斑pe數(shù)ra遠(yuǎn)ti擦on舌c養(yǎng)on莖di冊(cè)ti冒on20的23洽/6勻/2粥6一、影響嘩分離猴的因路素in柄fl谷ue刃nc魄edfa潮ct住or帖s勵(lì)to懲s哨ep誦ar著at議io笨n在HP庭LC中，旱液體古的擴(kuò)區(qū)散系偵數(shù)僅餓為氣時(shí)體的趙萬分捷之一稠，則敏速率拔方程喉中的夏分子擇擴(kuò)散妥項(xiàng)B/戀u較小然，可攤以忽島略不慌計(jì)，充即：H＝A＋C·u故液娃相色工譜H-桂u曲線賽與氣寧相色遼譜的蓄形狀風(fēng)有所萌差別倆，如躍右圖蔽。1.劑影響循分離親的因軟素與卵提高冤柱效佛的途狹徑20暴23武/6辜/2擇6液體侵的黏翼度比靈氣體攪大一吳百倍嚇，密巴度為勻氣體譯的一陵千倍淹，故漁降低還傳質(zhì)程阻力典是提持高柱允效主揀要途暢徑。咬由速羊率方越程可枝知，提高誓柱內(nèi)筒填料軍裝填旬的均癢勻性燙和減逢小固概定相旨粒度可提隆高柱塞效。液相銜色譜奪中，非不可筋能通朱過增煩加柱穿溫來織改善科傳質(zhì)凈。恒盒溫改蒙變淋柳洗液畢組成徐、極絨性是羞改善陳分離錫的最紛直接脆的因織素（梯度繞洗脫）。H妄=硬2dp+焦Cu20芒23永/6后/2銳62.悅流速流速私大于釋0.菠5cm帽/s時(shí)，H～宰u(yù)曲線布是一由段斜垃率不蕉大的重直線蜜。降哀低流且速，貼柱效捧提高厚不是芽很大己。20枕23咽/6耕/2自6氣相極色譜圾中的嘗固定播液原郵則上貼都可膚以用牙于液拼相色活譜，歇其選乖用原俯則與瞇氣相副色譜療一樣決。但推在高宿效液南相色濱譜中劉，分折離柱搶的制編備是縱一項(xiàng)波技術(shù)渠要求卸非常越高的供工作摘，一斯般很樂少自寫行制典備。3.便固科定相跌及分罵離柱20快23妹/6康/2吳6二、莫分離吃類型清選擇ch抄oi炎ce映o爐f廈se張pa衣ra桐ti診on優(yōu)t前yp淋es20贊23扣/6襲/2諒6三、HP貪LC的應(yīng)用（自貧行學(xué)紙習(xí)）ap盜pl益ic焦at青io保n嘩of贏H虧PL雞C1.曠環(huán)場(chǎng)境中慕有機(jī)食氯農(nóng)擔(dān)藥殘蹦留量怨分析固定接相：薄殼跨型硅備膠（肆37～5迫0m）流動(dòng)蘇相：博正己胃烷流甜速篩：1邊.5mL膏/m躍in色譜濤柱：部50cm2悼.5芝mm（內(nèi)蘇徑）檢測(cè)夜器：季差示株折光洲檢測(cè)撕器可對(duì)銀水果捉、蔬童菜中基的農(nóng)傳藥殘掙留量知進(jìn)行浙分析耍。20炸23壯/6破/2發(fā)62.財(cái)稠鏟環(huán)芳娛烴的弱分析固定溉相：十八鄭烷基鼻硅烷撇化鍵宴合相流動(dòng)豪相：芬20誼%甲裹醇-水揚(yáng)～1麥00菜%甲徑醇線立性梯父度淋獄洗，2%滑/mi親n流扶速寺：1mL般/m夕in柱澤溫憂：5預(yù)0oC柱妄壓陽：7.0×1唉05Pa檢測(cè)抵器：擔(dān)紫外爐檢測(cè)玻器20撥23軌/6黎/2復(fù)6請(qǐng)選繼擇內(nèi)記容第一狂節(jié)練高效舞液相略色譜或的特站點(diǎn)與染儀器fe是at江ur傲e堅(jiān)an脈d竟in柱st閣ru要me弟nt竄o蛇f洽HP墊LC第二炒節(jié)太主要堪的分航離類戒型和吵原理ma缺in站s州ep羽ar題at墊in院g葵ty含pe殿s贏an摔d且pr伐in付ci派pl潮e第三蟲節(jié)博影響危分離焦的因待素與竟操作吃條件返選擇fa圖ct常or櫻s扁in遭fl詞ue箱nc客ed朝s展ep藝ar干at魂io緩n傘an楊d寨ch鞋oi勁ce易o(hù)虎f私op絨er農(nóng)at夜io顏n嶄co躁nd茫it桿io趙n第四護(hù)節(jié)笑液相恭制備恢色譜Pr看ep車ar躲at經(jīng)iv鹽e受li當(dāng)qu填id驚c巡壽hr蠟om柄at承og允ra炮ph雨y第五掀節(jié)禍毛細(xì)補(bǔ)管電嘩泳Ca修pi棚ll艘ar友y瀉el蜜ec綢tr采op妖ho雄re莊si強(qiáng)s,匆C送E20沿23言/6筐/2潔6第三遙章貌高效蜜液相無色譜擺法一、截色譜棍柱的價(jià)柱容盾量in弊fl郵ue險(xiǎn)nc有ed總f躁ac略to裳rs滾t籍o狠se兄pa撫ra耽ti久on二、廈液相茫制備晉色譜殖方法ch雷o(hù)i握ce肌o條f猛se朗pa牢ra妙ti證on失t沉yp額es三、雄液相音制備蚊色譜健儀ap曠pl紛ic陣at福io找n至of耕H勁PL慌C第四館節(jié)為液相桐制備下色譜hi曾gh遍p鳥er惱fo贊rm窗an刮ce員l傾iq檢ui撞d側(cè)ch滋ro眼ma肯to還gr綿ap尊hy釘(H禿PL網(wǎng)C)Pr進(jìn)ep幻玉ar鄉(xiāng)豐at驚iv碌e景l(fā)i地qu蹤蝶id淡c露hr背om追at濫og贏ra啄ph惹y20蛾23個(gè)/6擾/2婆6制備昌色譜應(yīng)是一威種分秧離純來化手醉段?？职迅吆靶б和庀嗌V的看色譜炮柱換羽成制薦備柱估，就假是制氧備液倉(cāng)相色甘譜，尊兩者災(zāi)的區(qū)早別在絲式于一倍種以寄分析座為目艦的，烏追求東的是降檢測(cè)淚精度季，樣件品承慮載量砌非常獄??；標(biāo)制備畢色譜唐以分計(jì)離純槳化為鞋目的乓，它誼追求嚴(yán)的是樣品訊承載芬量，檢峰測(cè)精源度很殲低，鳳檢測(cè)燥只用歐作鑒劫別即甜可。20仙23糾/6盾/2各6獲得傘高純凳物質(zhì)訪（色忌譜純亮）的瞇有效碑方法唐。收集太分離蠅后的厚柱后出流出綁部分話，色過譜峰累越寬嬸越好咳。必男要時(shí)冰進(jìn)行鞠二次捆分離潑和純席化。對(duì)分憂析柱抄：不影個(gè)響柱傘效時(shí)的去最大喪進(jìn)樣輩量；對(duì)制毒備柱鋸：不影拋響收嘆集物愧純度時(shí)的常最大朗進(jìn)樣鋸量；超載陽：進(jìn)隊(duì)樣量它超過貝柱容順量。昌柱效根迅速卵下降興，峰獲變寬漿。超載鍬可提逆高制附備效搜率，耀以柱底效下旺降一熱半或武容量母因子k降低10臭%為宜島。1.色譜換柱的搭柱容嘗量（鎖柱負(fù)副荷）2.液相制豎備色俘譜的奶方法收集兆組分隸時(shí)，浪通常表有以鳥下情蕉況：（1）可題獲得厚良好餐分離漆，欲糕分離歉的組劉分呈桶現(xiàn)一敏個(gè)主漿峰使用微制備露柱，進(jìn)超載端提高鳳效率訪；（2）兩助個(gè)或需多個(gè)差主組裝分；（3）兩撓主成暴分之肥間的棍小組蛾分；超載聾，分邁離切憲分使泰待分偶離組交分成禁為主浪成分港（富螺集）惑后，泊再次務(wù)分離軍制備苦。20錢23也/6欄/2杏620排23番/6火/2輸63.液相制伙備色譜酬儀制備號(hào)型液俗相色俱譜：勤結(jié)構(gòu)赴與分漠析型回一樣勉，但參泵流非量大似、進(jìn)院樣量舌大、價(jià)采用暗制備果柱；充柱后憐餾分跳收集喘器。半制密備柱端（內(nèi)世徑10承mm，長(zhǎng)踢度15～30疏cm），材一次窄制備刷量0.禮1～1.萄0m橋g；工業(yè)慎制備崗柱（裙內(nèi)徑50吵0m扮m，長(zhǎng)富度不瞎一）經(jīng)。20連23漢/6至/2騙6請(qǐng)選將擇內(nèi)講容第一顯節(jié)紅高效箱液相舌色譜追的特造點(diǎn)與夏儀器fe陪at榜ur錄e彩an筒d根in刑st惰ru世m(xù)e量nt多o狠f屋HP欄LC第二辭節(jié)揉主要徒的分劇離類桌型和綢原理ma尊in毅s佳ep伶ar喪at眨in錯(cuò)g越ty帶pe觀s危an籍d想pr萬in霸ci返pl斗e第三悉節(jié)話影響藥分離腹的因榮素與抹操作翻條件貍選擇fa櫻ct諷or么s剖in慈fl菊ue瞞nc篩ed炒s孫ep壇ar橫at填io接n判an遷d渠ch忌oi建ce詢o介f蟲op績(jī)er狠at怠io扇n囑co陽nd團(tuán)it某io揭n第四謊節(jié)利液相雜制備掩色譜Pr謀ep萍ar菠at咱iv譽(yù)e筑li獎(jiǎng)qu膨id呀c院hr姑om鮮at瘡og據(jù)ra歪ph愉y第五匙節(jié)稠毛細(xì)另管電咳泳Ca鎮(zhèn)pi星ll膽ar甩y襯el利ec第tr動(dòng)op墾ho杏re忽si糊s,佩C蚊E20絡(luò)23溝/6膠/2乖6第三匠章骨高效產(chǎn)液相持色譜姜法一、卷概述ge撐ne婆ra消li洞za任ti郵on二、奏基本織原理Ba孝si脈c應(yīng)pr殃in裳ci徐pl肉e三、串毛細(xì)稀管電襲泳儀ap磨pl宏ic拘at形io覽n累of避H譜PL健C四、系分離輝模式Se近pa零ra旦ti榆on敗t和yp傷es治o投f元CE第五格節(jié)塔毛細(xì)椒管電嚇泳hi找gh用p疑er廁fo渾rm架an偶ce乓l將iq蠟ui樸d盾ch田ro慎ma癢to艇gr宿ap羅hy慌(H激PL積C)Ca訴pi報(bào)ll留ar薄y濕el觸ec擺tr聽op菜ho濱re賣si廢s,言C劣E20摟23岔/6張/2穩(wěn)6一、榨概述ge洞ne作ra蹦li炕za虧ti磨on19跡37壟年，Ti短se販li福us（瑞作典）守將蛋晝白質(zhì)不混合應(yīng)液放疤在兩武段緩林沖溶第液之弓間，境兩端匯施加釘電壓伏，第獻(xiàn)一次孟將人朱血清衰提取暢的蛋灰白質(zhì)材混合四液分袋離出結(jié)白蛋套白和α、各β、省γ球蛋駁白。試樣身的遷移方向和速父率由其電癢荷和喝淌度餡決定翼。第一墳次的自仿由溶昨液電惡泳；第一炮臺(tái)電尤泳儀。肅獲1像94抬8年諾貝生爾化齡學(xué)獎(jiǎng)。20扮23呈/6暖/2軍6經(jīng)典涌電泳啞分析仗，操哀作煩亞瑣，兩分離翁效率蕩低，回定量遮困難首，無牽法與襲其他刮分析匹方法裁相比離。19舒81漁年，Jo煮rg艷en趟so畝n和Lu剖ck敞as熊，用7訪5m內(nèi)徑廈石英兩毛細(xì)閃管進(jìn)疾行電碰泳分植析，旁柱效販高達(dá)鉛40紀(jì)萬/m，促進(jìn)汪電泳盆技術(shù)鍬發(fā)生國(guó)了根宇本變挽革，波迅速算發(fā)展拌成為斗可與GC，HP躲LC相媲馳美的械嶄新蠻的分賢離分聰析技蘆術(shù)——高效綠毛細(xì)房誠(chéng)管電暗泳。20瓶23區(qū)/6型/2舉6（1）雙僑電層與電徒滲流在pH＞3的溶課液中嬸，毛開細(xì)管驢內(nèi)壁那與溶終液間師出現(xiàn)輸雙電欣層。蠶管內(nèi)百壁帶兵負(fù)電男荷，李柱內(nèi)謊溶液圖表面和帶正嘆電荷羨。電場(chǎng)摟作用冠下，帖毛細(xì)毛管柱游中出亮現(xiàn)：電泳懼現(xiàn)象緞和電炮滲流持現(xiàn)象(el重ec克tr沉oo膨sm替ot卵ic補(bǔ)f包lo渴w，協(xié)EO塘F)餓。電滲導(dǎo)流現(xiàn)濱象：柱內(nèi)掏溶液底整體扯向負(fù)權(quán)極移辯動(dòng)。二、項(xiàng)毛細(xì)永管電勇泳基移本原燙理20脂23網(wǎng)/6挖/2涼6（2）分冊(cè)離過避程帶電苗粒子炎的遷移任速率是=遵電絹泳傻+帝電滲塞流，兩證種速態(tài)度的矢量唱和。（動(dòng)閉畫）20董23幸/6透/2辯6正離套子：兩遠(yuǎn)種效閑應(yīng)的掩方向盞一致蘆，在負(fù)極求流出。中性粒子胳：無電泳些現(xiàn)象物，受棄電滲境流影耍響，屢在陽離川子之液后流蛛出；陰離姻子：兩色種效樹應(yīng)的枝運(yùn)動(dòng)噴方向騾相反注。v電滲壺流<v電泳時(shí)，愿在陽極淡流出。v電滲閃流>v電泳時(shí)，餐陰離額子隨貪電滲密流在負(fù)極會(huì)流出，在這離種情譯況下伐，不順但可裕以按俗種類儀分離統(tǒng)帶電疫粒子寇，同域類離殼子由縣于受珍到的芳電場(chǎng)鑒力不衣一樣河也被戴分離算。20堤23斬/6協(xié)/2梯61.遷移炭速率恩：μep：電泳貸淌度抵，μep：電滲直淌度輛，單牢位：cm2·V-1·s-1；E：電預(yù)場(chǎng)強(qiáng)屯度；V：電竭壓；L：毛細(xì)傅管總宗長(zhǎng)度。（3）基本碎關(guān)系殺式淌度μ：?jiǎn)翁J位時(shí)文間和委單位踐場(chǎng)強(qiáng)毫下移曠動(dòng)的旱距離魚。其閱大小扁與粒分子的層凈電煩荷、感半徑盟及介尼質(zhì)黏情度有滋關(guān)。20棍23協(xié)/6叮/2佳6當(dāng)毛脾細(xì)管肌長(zhǎng)度蓋一定槳時(shí)，洪帶電終離子嶺的遷仍移速討度與辣溶質(zhì)賞離子糕的電旅荷、夢(mèng)施加飼的電煤壓、弊緩沖意液黏荒度及會(huì)帶電緞離子蓄的大芝小有屋關(guān)。電滲論流的尼速率楚約等甲于一倡般離焦子電離泳速步率的濱5～岡7倍納；各種似電性備離子傾在毛冬細(xì)管勉柱中墨的遷爭(zhēng)移速壘度為齡：v+=ve+veo陽離牙子運(yùn)動(dòng)密方向梁與電波滲流一致；v-=veo-ve陰離儀子運(yùn)動(dòng)殲方向歸與電滲流一致；v0=veo中性粒子討運(yùn)動(dòng)謹(jǐn)方向陵與電些滲流一致。20天23飯/6庭/2渡62.遷移良時(shí)間（保工留時(shí)法間）CE兼具侍有電碼化學(xué)走的特滿性和繼色譜殺分析根的特邊性。V—外加身電壓猾；L—毛細(xì)熊管總仙長(zhǎng)度烤；l宰—毛細(xì)簡(jiǎn)管有伏效長(zhǎng)娃度；=ep+鋪eo。20井23臭/6拋/2飽63.分離侍效率癥（塔哲板數(shù)躍）在CE中，肆僅存訴在縱袖向擴(kuò)由散。從上判式可充以看雷出，提高巨分離赴電壓是增拉加分休離效凱率的址主要聚途徑昏。擴(kuò)散煙系數(shù)箭小的句溶質(zhì)僻比擴(kuò)犬散系泊數(shù)大謙的分僅離效背率高，分跑離生參物大捎分子途（擴(kuò)仗散系驢數(shù)小慣）的玩依據(jù)條。20煮23食/6視/2費(fèi)64.分離噴度影響古分離辨度的銷主要鼓因素:工作鋤電壓V；有效河淌度不差。提高裳毛細(xì)客管電喚泳的吹分辨讀率有亞兩條靜途徑趨：一匯是通臭過增冒大分蝦離電嘉壓來腿提高犯柱效由；二脾是控免制電椅滲流健。20榴23荒/6穩(wěn)/2辯6主要致由高弱壓電臉源、膜緩沖嘉液池滾、毛本細(xì)管求柱、炎檢測(cè)雙器及斗數(shù)據(jù)番處理饞等五照部分里組成陜。三、液高效川毛細(xì)航管電貿(mào)泳儀1.結(jié)構(gòu)寄流程20猾23冒/6砌/2算62.主要部件（1）羽高壓垂電源（1絹）0訴～30kV穩(wěn)定偽、連鉆續(xù)可計(jì)調(diào)的景直流輸電源炮；（2得）具截有恒墊壓、命恒流抄、恒宗功率護(hù)輸出脆；（3爪）電趨場(chǎng)強(qiáng)筆度程況序控提制系賴統(tǒng)；（4猾）電醋壓穩(wěn)戀定性奧：0答.1予%；（5躍）電麻源極盾性易旬轉(zhuǎn)換榜。20壩23餐/6浪/2委6（1在）材烘料：塑石英榜，各筋項(xiàng)性旦能好少；玻金璃，棉光學(xué)戴、機(jī)發(fā)械性醋能差道。（2銹）規(guī)心格：舅內(nèi)徑放20韻～7息5μm，外徑軋35書0～養(yǎng)40歪0μm；長(zhǎng)度姥≤1m。（2放）泊毛細(xì)切管柱20援23類/6蛾/2慰6（3慣）緩擠沖液很池（4清）檢鋤測(cè)器要求尋：具改有極勻高靈菜敏度睛，可曬柱端麻檢測(cè)舟；化學(xué)哨惰性夾，機(jī)零械穩(wěn)判定性吹好。20秒23型/6請(qǐng)/2階6四、槐分離鑼模式Se緞pa亡ra馬ti瀉on稈t屢yp添es浪o肌f豈CE八種姿分離承類型容，根麻據(jù)試像樣性插質(zhì)不段同，秩采用輔不同籃的分討離類摘型；疑每種拋機(jī)理瞎的選直擇性聞不同錦。1.毛細(xì)卻管區(qū)首帶電老泳ca晃pi源ll脊ar捕yzo染ne膛e扁le戀ct格ro則ph持or終es念is賄，膚CZ格E最基租本、性應(yīng)用凡最廣長(zhǎng)的分須離模辱式20輝23霉/6軋/2建62串.毛細(xì)齡管凝揮膠電首泳Ca狡pi讓ll右ar微y徒ge天l踢el禽ec畫tr剩op賴ho等re茂si瘋s鐮，C掘GE將聚丙祖烯酰蹤蝶胺或海瓊脂釣等在毛貪細(xì)管誤柱內(nèi)啦交聯(lián)橋生成袋凝膠編。其濾具有戀多孔而性，購(gòu)試樣葬分子按體竿積（陡分子盲量）調(diào)大小者分離迫的區(qū)難帶電皇泳技坐術(shù)。蛋白閉質(zhì)、DN沾A等的蹲荷/蓬質(zhì)比遣與分玻子大施小無捆關(guān)，CZ磚E模式指很難習(xí)分離宴，采先用CG打E能獲規(guī)得良盤好分樓離。無膠律篩分墻技術(shù)：采燥用低挪黏度殃的線湖性聚斯合物購(gòu)溶液西代替悅高黏叛度交健聯(lián)聚筆丙烯售酰胺舌。柱鳳便宜沒，易或制備寒。20敘23茅/6猶/2齒61.緩沖雷溶液中加抬入離厘子型拘表面蜓活性曾劑，肅其濃晝度達(dá)論到臨批界濃湊度，聚徹集成艱一疏踏水內(nèi)楚核，外部緒帶負(fù)案電的球差形膠鮮束。3.膠束扇電動(dòng)松毛細(xì)蟻管色色譜（ME哀CC忘，后ME巨KC蒜）mi露ce么ll蛛ar紐奉e還le庸ct板ro啊ki粒ne筑ti降c姑ca括pi四ll頑ar度y宮ch提ro鞠ma姑to挑gr咐ap躲hy在電資場(chǎng)力鞏的作泡用下桐，膠抬束在倚柱中冶緩慢艷移動(dòng)責(zé)（準(zhǔn)固靠定相）。20顏23漠/6邊/2尼62