生物安全柜的正確使用和維護(hù)

生物安全柜的

正確使用和維護(hù)

浙江省疾病預(yù)防控制中心

翁景清

生物安全柜的正確使用和維護(hù)第一節(jié)選型原則1、根據(jù)工作性質(zhì)病原微生物危害程度有無毒揮發(fā)性氣體是否涉及放射性物質(zhì)2、具備醫(yī)療器械注冊證3、產(chǎn)品質(zhì)量與品牌生物安全柜的正確使用和維護(hù)醫(yī)療器械分類生物安全柜的正確使用和維護(hù)醫(yī)療器械注冊證生物安全柜的正確使用和維護(hù)BIBASE生物安全柜(B2型)生物安全柜的正確使用和維護(hù)前言生物安全柜（BiosafetyCabinet,BSC)：在生物因子操作過程中用來保護(hù)操作人員、環(huán)境和（或）實(shí)驗(yàn)物品，防止其暴露于實(shí)驗(yàn)中（可能）產(chǎn)生的危險(xiǎn)性或潛在危險(xiǎn)性生物氣溶膠或?yàn)R出物的負(fù)壓通風(fēng)裝置。是微生物實(shí)驗(yàn)室的重要設(shè)備，保護(hù)操作者和環(huán)境，有些保護(hù)物品，屬一級安全隔離屏障，關(guān)系人體生命安全，要求非常嚴(yán)格。在SARS后，大量使用安全柜。生物安全柜的正確使用和維護(hù)安全柜標(biāo)準(zhǔn)EN12469:2000Biotechnology-Performancecriteriaformicrobiologicalsafetycabinets(生物技術(shù)微生物安全柜性能標(biāo)準(zhǔn))NSF/ANSI49:2004ClassⅡ(laminarflow)biosafetycabinetry(Ⅱ級（層流）生物安全柜)制定我國的標(biāo)準(zhǔn):國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《生物安全柜》YY0569-2005(行業(yè)標(biāo)準(zhǔn))

發(fā)布:2005-07-18實(shí)施:2006-06-01生物安全柜（ＪＧ170-2005）中華人民共和國建設(shè)部發(fā)布（建筑工業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)）（2006-06-01實(shí)施）生物安全柜的正確使用和維護(hù)

第二節(jié)

中國標(biāo)準(zhǔn)和歐美標(biāo)準(zhǔn)比較2006年6月1日，中國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY0569-2005正式實(shí)施了，這是國家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）于2005年7月18日發(fā)布的醫(yī)藥行業(yè)關(guān)于生物安全柜的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)，據(jù)行業(yè)人士認(rèn)為，這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施將會引發(fā)中國生物安全柜行業(yè)的重新洗牌。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)YY0569-2005正式實(shí)施，是國家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）于2005年7月18日發(fā)布的醫(yī)藥行業(yè)關(guān)于生物安全柜的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)，不同于2005年6月1日實(shí)施的由建設(shè)部編制的《生物安全柜》JG170-2005的建設(shè)工業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。醫(yī)藥行業(yè)的YY0569-2005標(biāo)準(zhǔn)的編制是參照歐洲標(biāo)準(zhǔn)化委員會(CEN)頒布的生物安全柜歐洲標(biāo)準(zhǔn)EN12469:2000和由美國國家標(biāo)準(zhǔn)學(xué)會（AmericanNationalStandardInstitute,ANSI）官方認(rèn)可的美國NSF49生物安全柜標(biāo)準(zhǔn)。生物安全柜的正確使用和維護(hù)YY0569-2005的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)積極吸收采納了EN12469和NSF49這兩個(gè)生物安全柜標(biāo)準(zhǔn)中的重要部分，并將這兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)中相對薄弱的部分作出了提高修改，使中國的YY0569-2005標(biāo)準(zhǔn)成為世界上生物安全柜領(lǐng)域最權(quán)威的標(biāo)準(zhǔn)。生物安全柜的正確使用和維護(hù)一．安全柜型號方面，中國YY0569-2005采取了和美國NSF49-2002相同的規(guī)定：將二級安全柜細(xì)分成四個(gè)型號

首先，這三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對生物安全柜的大分類以及性能要求方面都有相同的規(guī)定：

對于二級生物安全柜的分類標(biāo)準(zhǔn)方面，中國YY0569-2005標(biāo)準(zhǔn)和美國NSF49標(biāo)準(zhǔn)一樣，不同于歐洲EN12469標(biāo)準(zhǔn)：

生物安全柜的正確使用和維護(hù)從最基本的方面來說，三種類型安全柜都可以提供對操作人員、試驗(yàn)品和工作環(huán)境的保護(hù)；工作原理也相同。最大的區(qū)別是EN12469只對“二級生物安全柜”有一個(gè)基本的定義，而YY0569同NSF49一樣，將二級生物安全柜依照前窗操作口流入氣流風(fēng)速、排氣方式和循環(huán)方式等分為4個(gè)類型：A1型，A2型(原B3型),B1型和B2型。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)二．對于安全柜的柜體結(jié)構(gòu)、性能和測試方面，中國標(biāo)準(zhǔn)充分吸收了歐美標(biāo)準(zhǔn)的優(yōu)點(diǎn)，采用的是兩者中最嚴(yán)格的測試標(biāo)準(zhǔn)。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)對于柜體結(jié)構(gòu)，EN12469和NSF49都是以規(guī)范性能為基礎(chǔ)，不是通過細(xì)節(jié)規(guī)格要求去規(guī)定生產(chǎn)商如何制作安全柜；相反，生產(chǎn)商擁有很大的自由去設(shè)計(jì)自己的安全柜，只要能符合性能測試標(biāo)準(zhǔn)就可以。生物安全柜的正確使用和維護(hù)而中國的YY0569則明確規(guī)定了安全柜的柜體結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)：II級A2、B1、B2型安全柜的工作區(qū)均應(yīng)該采用四面（左右兩面、后部、底部）雙層結(jié)構(gòu)。三個(gè)類型安全柜的所有污染部位均應(yīng)處于負(fù)壓狀態(tài)或被負(fù)壓通道和負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)包圍。II、III級安全柜裸露工作區(qū)內(nèi)三面?zhèn)缺诎鍛?yīng)為一體成型結(jié)構(gòu)，內(nèi)表面的拼接處必須做密封處理等等?？梢钥闯鲋袊腨Y0569標(biāo)準(zhǔn)相比歐美的標(biāo)準(zhǔn)更加明確規(guī)范了安全柜的柜體結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，更符合現(xiàn)在生物、化學(xué)等方面的實(shí)驗(yàn)要求。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)三．物理性能測試和合格標(biāo)準(zhǔn)

YY0569、EN12469和NSF49都詳細(xì)規(guī)定了安全柜的各項(xiàng)測試方法和合格標(biāo)準(zhǔn)，三者的區(qū)別和聯(lián)系介紹如下：

生物安全柜的正確使用和維護(hù)1.人員、試驗(yàn)品和環(huán)境保護(hù)的微生物挑戰(zhàn)測試

在對人員、產(chǎn)品和環(huán)境以及產(chǎn)品的防交叉污染保護(hù)項(xiàng)目測試中，三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的測試方法、合格標(biāo)準(zhǔn)基本相同，即用微生物挑戰(zhàn)法來測試。但在人員保護(hù)測試中，中國的YY0569標(biāo)準(zhǔn)采用了同歐洲EN12469標(biāo)準(zhǔn)一樣的，被認(rèn)為是常規(guī)微生物挑戰(zhàn)測試基礎(chǔ)上更為方便快捷的物理測試方案(KI-Discus測試)。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)這種測試方法可以在1分鐘內(nèi)完成檢測結(jié)果，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于微生物法的48小時(shí)以上的培養(yǎng)所需要的時(shí)間，這就使得安全柜的生產(chǎn)廠家對出廠前的每臺安全柜都進(jìn)行檢測變成了可能，保證了每臺出廠產(chǎn)品的安全性，遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于采用微生物挑戰(zhàn)法對產(chǎn)品抽檢的廠家。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)2.下降氣流流速測試

下降氣流流速對安全柜試驗(yàn)樣品保護(hù)和交叉感染防護(hù)性能起到重要的影響，例如氣流流速太小將導(dǎo)致試驗(yàn)樣品失去保護(hù)。YY0569和EN12469都規(guī)定了二級安全柜下降氣流流速的許可范圍為0.25-0.5m/s，而NSF49沒有給出任何下降氣流速率要求。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)在下降氣流流速的測試方法上，YY0569則采用了和NSF49相似的方法（原理是一致的）。YY0569和NSF49都規(guī)定了多個(gè)測試點(diǎn)，這代表更高的測量精度要求；其中YY0569使用的的熱式風(fēng)速儀，NSF49使用的是溫差式風(fēng)速儀，而EN12469則沒有對測量儀器的準(zhǔn)確度和類型進(jìn)行規(guī)定。生物安全柜的正確使用和維護(hù)同時(shí)，YY0569和NSF49都通過規(guī)范有關(guān)測試儀器的精度和型號來提高測試的精度，并且YY0569還把安全柜的下降氣流分為更細(xì)的均勻下降和非均勻下降兩種模式，比NSF49的要求又提高一步。這說明在氣流流速側(cè)測試方面YY0569要優(yōu)于美國的NSF49，更優(yōu)于歐洲的EN12469標(biāo)準(zhǔn)。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)3.流入氣流流速測試

在流入氣流測試方面，YY0569采用的標(biāo)準(zhǔn)同歐標(biāo)EN12469一樣，通過外排氣流估算流入氣流流速，美國標(biāo)準(zhǔn)采用的是直接流入氣流流速測試方法。這兩種方法測試的原理雖然不同但結(jié)果一樣。同時(shí)YY0569、EN12469和NSF49都對最低流入氣流流速有規(guī)定。在這里我們比較A2型二級生物安全柜和歐洲“普通型”二級生物安全柜的要求：YY0569和NSF49對A2型二級生物安全柜的最低流入氣流速率的要求是0.5m/s，而EN12469對二級安全柜的要求是0.4m/s。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)4.工作舒適度有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)：噪音、光強(qiáng)和震動(dòng)測試

在這幾個(gè)方面測試上YY0569、NSF49和EN12469有類似的測試方法，這里就不再討論。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)5.高效過濾器完整性測試

YY0569-2005和NSF49都規(guī)定過濾器完整性測試中使用的是氣溶膠噴發(fā)劑(例如DOP,PAO等)；歐洲EN12469標(biāo)準(zhǔn)（使用一樣的測試方法）使用另一種自然氣溶膠(自然空氣)的測試方法。大量的研究表明使用自然氣溶膠測試方法不能確保檢測到所有漏隙。因?yàn)槭褂脷馊苣z發(fā)生器噴發(fā)產(chǎn)生的氣溶膠顆粒，在發(fā)生器壓力的作用下能很容易的抵達(dá)和擴(kuò)散到安全柜內(nèi)任何規(guī)定的位置，并且能使氣溶膠均勻分布在柜內(nèi)規(guī)定的位置，特別是能完全覆蓋到高效過濾器和柜體結(jié)合的部位。生物安全柜的正確使用和維護(hù)而靠自然空氣使氣溶膠在柜內(nèi)擴(kuò)散的方法，由于柜內(nèi)自然空氣比較穩(wěn)定，流動(dòng)性和動(dòng)力很差，所以氣溶膠不會很均勻的擴(kuò)散到柜內(nèi)規(guī)定的部位，從而就可能有過濾器和柜體結(jié)合的部位沒有被氣溶膠完全覆蓋的可能導(dǎo)致測試結(jié)果不精確。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)6.柜體泄漏的測試方法

在柜體泄漏的測試方法上，YY0569采用了不同于歐美兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的壓力衰減法，這個(gè)方法用到了壓力計(jì)或壓力傳感器系統(tǒng)來顯示柜內(nèi)壓力，可以定量的檢測安全柜柜體的密閉性，非常具有說服力。而NSF49規(guī)定用簡單的皂泡法泄漏測試為生產(chǎn)商對所有安全柜的例行檢測，EN12469規(guī)定為獨(dú)立的認(rèn)證實(shí)驗(yàn)室的檢測項(xiàng)目，而不是要求廠家在出廠時(shí)進(jìn)行檢測。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)7.其他各類測試

在其他各個(gè)類型性能測試上，這三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)基本采用了相同的測試方法，如馬達(dá)和風(fēng)機(jī)性能測試、工作區(qū)溫升測試、柜體穩(wěn)定性測試（包括柜體抗翻倒、柜體抗變形、工作臺面抗變形、柜體抗向前傾倒）等，這里就不在過多的描述。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)結(jié)論

盡管這三種標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施時(shí)間和內(nèi)容不盡相同，但是在大體上擁有很大的相似性。在一些關(guān)鍵測試方法上，中國的標(biāo)準(zhǔn)在吸收了歐美標(biāo)準(zhǔn)中最佳方法的基礎(chǔ)上，又開發(fā)了更精確嚴(yán)密的測試方法，所以說中國安全柜檢測標(biāo)準(zhǔn)是目前世界上最嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)。正確的選擇生物安全柜，并且按照操作守則正確使用、維護(hù)安全柜是確保實(shí)驗(yàn)室生物安全的基本原則。生物安全柜的正確使用和維護(hù)第三節(jié)凈化工作臺和生物安全柜

的差別是兩個(gè)不同的概念不能以凈化工作臺代替生物安全柜，反之則可。保護(hù)對象不同生物安全柜的正確使用和維護(hù)凈化工作臺類型水平層流垂直層流生物安全柜的正確使用和維護(hù)水平層流的“潔凈臺”原理圖生物安全柜的正確使用和維護(hù)一、水平層流的“潔凈臺”水平層流的潔凈臺不是生物安全柜。

他們通過工作表面排放HEPA高效過濾的空氣并直接吹向操作者。這些設(shè)備僅僅提供產(chǎn)品保護(hù)。他們可以用于某些潔凈的工作，諸如無菌設(shè)備或電子設(shè)備的無塵組裝。當(dāng)處理細(xì)胞培養(yǎng)材料或藥物合成時(shí)或當(dāng)操作可能傳染的材料時(shí)，這些潔凈臺是絕對不能使用的。操作人員在使用潔凈臺操作這些材料時(shí)（包括蛋白抗原）可能暴露于這些材料中，它可能導(dǎo)致過敏。水平層流的潔凈臺決不能代替生物安全柜用在生物醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)垂直層流“潔凈臺”原理圖生物安全柜的正確使用和維護(hù)二、垂直層流“潔凈臺”

垂直層流的潔凈臺同樣不是生物安全柜。微生物實(shí)驗(yàn)室中使用，例如細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的無菌操作需要一個(gè)潔凈的區(qū)域。由于這些設(shè)備一般有一個(gè)觀察窗，空氣通常從觀察窗下排放到房間。它和水平層流的潔凈臺一樣會導(dǎo)致同樣的潛在危險(xiǎn)。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)三、生物安全柜（BSCs）提供人員、環(huán)境和產(chǎn)品的保護(hù)

生物安全柜的正確使用和維護(hù)HEPA高效空氣過濾器

關(guān)鍵HEPA過濾器清除粒子等于和大于0.3um粒子（這個(gè)粒徑基本上包括了所有的細(xì)菌、孢子和病毒）的效率為99.999%。

典型的HEPA過濾器的介質(zhì)是單層的硼硅酸鹽纖維。摺皺的濾材又用鋁蓋板分開。濾材被粘合到木頭、金屬或塑料框架上。粗心的處理濾器（例如，不合適的儲藏或摔落）能損壞粘接的濾材，或者造成漏洞或破裂導(dǎo)致破漏這就是安全柜在初次安裝和重新移位后必須進(jìn)行濾器整體檢驗(yàn)的原因。生物安全柜的正確使用和維護(hù)一）生物安全柜的分型：

ClassI級生物安全柜

ClassII級生物安全柜，其又具體分為：

1.ClassIITypeA1型生物安全柜

2.ClassIITypeA2型生物安全柜

3.ClassIITypeB1型生物安全柜

4.ClassIITypeB2型生物安全柜

ClassIII級生物安全柜生物安全柜的正確使用和維護(hù)生物安全柜的選擇及適用性

表1通過危害評估選擇生物安全柜

估計(jì)的生物危險(xiǎn)級別提供的保護(hù)應(yīng)選用的生物安全柜級別人員產(chǎn)品環(huán)境BSL1-3是不是IBSL1-3是是是II（A1，A2，

B1，B2）

BSL4是是是IIIB1，B2生物安全柜的正確使用和維護(hù)I級生物安全柜

樣品沒有得到保護(hù)操作者得到保護(hù)操作環(huán)境得到保護(hù)經(jīng)過樣品區(qū)的空氣，經(jīng)過高效過濾器的過濾之后，100%地排放到實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中用途：在許多情況下，I級生物安全柜被用作特殊的密封設(shè)備（例如，離心、收獲設(shè)備或小的發(fā)酵設(shè)備）或可能產(chǎn)生氣溶膠的操作過程（例如倒籠子的垃圾，通氣培養(yǎng)或組織攪拌）。相當(dāng)于安全通風(fēng)柜生物安全柜的正確使用和維護(hù)A前窗操作口B觀察窗C排氣過濾器D負(fù)壓排氣系統(tǒng)(腔體產(chǎn)生亂流)

圖1Ⅰ級安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖生物安全柜的正確使用和維護(hù)

I級生物安全柜改進(jìn)型

反向的水平層流氣體流速:≥0.4m/s

YY0569-2005:0.7~1.0m/s生物安全柜的正確使用和維護(hù)有前窗操作口的安全柜，操作者可以通過前窗操作口在安全柜內(nèi)進(jìn)行操作。操作口流入氣流保護(hù)人員高效過濾器過濾的下降氣流保護(hù)產(chǎn)品被污染氣流經(jīng)高效過濾器過濾后排出保護(hù)環(huán)境Ⅱ級安全柜生物安全柜的正確使用和維護(hù)Ⅱ級安全柜的分類Ⅱ級安全柜根據(jù)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和氣流模式的不同分為A1、A2、B1、B2四種類型生物安全柜的正確使用和維護(hù)Ⅱ級A1型安全柜前窗操作口流入氣流的最低速率為≥0.40m/s；下降氣流為安全柜的部分流入氣流和部分下降氣流的混合氣體，經(jīng)過高效過濾器過濾后送至工作區(qū)；70%氣體循環(huán)使用;30%排到室內(nèi)或室外;

生物安全柜的正確使用和維護(hù)Ⅱ級A1型安全柜污染氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后可以排到實(shí)驗(yàn)室或經(jīng)安全柜的外排接口通過排風(fēng)管道(軟連接)排到大氣中；安全柜內(nèi)的污染部位可以處于正壓狀態(tài)，且這些正壓區(qū)域可以沒有負(fù)壓區(qū)域包圍。A1型安全柜不能用于揮發(fā)性有毒化學(xué)品和揮發(fā)性放射性核素的實(shí)驗(yàn)。生物安全柜的正確使用和維護(hù)A前窗操作口B觀察窗C排氣過濾器

D下降氣流過濾器E壓力排氣系統(tǒng)F風(fēng)機(jī)

圖2Ⅱ級A1型安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖（側(cè)視圖）生物安全柜的正確使用和維護(hù)Ⅱ級A2型安全柜操作口流入氣流的最低速率為≥0.50m/s。下降氣流為部分流入氣流和部分下降氣流的混合，經(jīng)過高效過濾器過濾后送至工作區(qū)。污染氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后可以排到實(shí)驗(yàn)室或經(jīng)安全柜的外排接口通過排風(fēng)管道(軟連接)排到大氣中。氣流70%循環(huán)使用，30%外排生物安全柜的正確使用和維護(hù)Ⅱ級A2型安全柜安全柜內(nèi)所有污染部位均處于負(fù)壓狀態(tài)或者被負(fù)壓通道和負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)環(huán)繞。安全柜用于進(jìn)行以微量揮發(fā)性有毒化學(xué)品和痕量放射性核素為輔助劑的微生物實(shí)驗(yàn)時(shí)，必須連接功能合適的排氣罩。生物安全柜的正確使用和維護(hù)A前窗操作口B觀察窗C排氣過濾器

D下降氣流過濾器E壓力排氣系統(tǒng)F風(fēng)機(jī)

圖3Ⅱ級A2型安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖生物安全柜的正確使用和維護(hù)Ⅱ級B1型安全柜操作口流入氣流的最低平均速率為≥0.5氣流循環(huán)提供，經(jīng)過高效過濾器過濾后送至工作區(qū)。大部分被污染的下降氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后通過專用的排氣管道(硬連接)排入大氣中；70%氣流經(jīng)過濾后外排（要求排到室外）需要70%外界空氣補(bǔ)充30%氣流經(jīng)過濾后循環(huán)使用生物安全柜的正確使用和維護(hù)Ⅱ級B1型安全柜安全柜內(nèi)所有被污染部位均處于負(fù)壓狀態(tài)或者被負(fù)壓通道和負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)包圍。如果揮發(fā)性有毒化學(xué)品或放射性核素隨空氣循環(huán)不影響實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)在安全柜的直接排氣區(qū)域進(jìn)行，B1型安全柜可以用于以微量揮發(fā)性有毒化學(xué)品和痕量放射性核素為輔助劑的微生物實(shí)驗(yàn)。生物安全柜的正確使用和維護(hù)

B觀察窗C排氣過濾器D下降氣流過濾器

E負(fù)壓排氣系統(tǒng)F風(fēng)機(jī)G下降氣流過濾器

圖4Ⅱ級B1型安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖生物安全柜的正確使用和維護(hù)Ⅱ級B2型安全柜（全排式）前窗操作口流入氣流的最低平均速率為≥0.50m/s；下降氣流來自經(jīng)過高效過濾器過濾的實(shí)驗(yàn)室或室外空氣(即安全柜排出的氣體不再循環(huán)使用)；流入氣流和下降氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后通過專用排氣管道(硬連接)排到大氣中，不允許回到安全柜和實(shí)驗(yàn)室中；100%氣流經(jīng)過濾后外排進(jìn)入環(huán)境100%外界空氣補(bǔ)充無循環(huán)使用的氣流生物安全柜的正確使用和維護(hù)Ⅱ級B2型安全柜所有污染部位均處于負(fù)壓狀態(tài)或者被直接排氣（不在工作區(qū)循環(huán)）的負(fù)壓通道和負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)包圍。B2型安全柜可以用于以揮發(fā)性有毒化學(xué)品和放射性核素為輔助劑的微生物實(shí)驗(yàn)。適用于生物安全危害程度1、2、3級的樣品生物安全柜的正確使用和維護(hù)A前窗操作口B觀察窗C排氣過濾器

D下降氣流過濾器E負(fù)壓排氣系統(tǒng)F風(fēng)機(jī)G散流氣

圖5Ⅱ級B2型安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖生物安全柜的正確使用和維護(hù)ClassII級生物安全柜–A/B3型樣品得到保護(hù)操作者得到保護(hù)操作環(huán)境得到保護(hù)氣流經(jīng)過過濾，從操作區(qū)頂部，由上往下，垂直地流向操作臺面單向氣流減少工作區(qū)內(nèi)氣流的擾動(dòng)并且使交叉污染的可能性降到最小。30%氣流經(jīng)過濾后外排進(jìn)入環(huán)境30%外界空氣補(bǔ)充70%氣流經(jīng)過濾后循環(huán)使用允許有微量揮發(fā)性有毒化學(xué)物質(zhì)及痕量的揮發(fā)性放射核素適用于生物安全1、2、3級樣品生物安全柜的正確使用和維護(hù)III級生物安全柜（全排封閉式）樣品得到保護(hù)操作者得到保護(hù)（操作時(shí)戴全密封手套）操作環(huán)境得到保護(hù)氣流經(jīng)過過濾，從操作區(qū)頂部，由上往下，垂直地流向操作臺面100%氣流經(jīng)過濾后外排進(jìn)入環(huán)境100%外界空氣補(bǔ)充無循環(huán)使用的氣流風(fēng)速：≥0.7m/s生物安全柜的正確使用和維護(hù)III級生物安全柜

III級生物安全柜是為操作4級生物安全水平的微生物病原體而設(shè)計(jì)的，對環(huán)境和操作者提供最大的保護(hù)。它是一個(gè)沒有開放式觀察窗的氣密性的結(jié)構(gòu)。長臂耐磨的橡膠手套以一種氣密性的方式安裝到安全柜的袖套孔上，可以在與內(nèi)部隔離的條件下對柜內(nèi)的材料進(jìn)行操作，防止操作者與這些危險(xiǎn)的材料直接接觸。III級安全柜通常只是在最高圍護(hù)功能的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)安裝，這些實(shí)驗(yàn)室具有控制出入和特殊通風(fēng)要求或其它支持系統(tǒng)（例如高壓蒸汽）。生物安全柜的正確使用和維護(hù)第四節(jié)生物安全柜的使用

生物安全柜的正確使用和維護(hù)

一、操作程序生物安全柜的正確使用和維護(hù)一）II級生物安全柜內(nèi)的準(zhǔn)備工作

在開始工作之前，準(zhǔn)備一張?zhí)貏e的活動(dòng)所需的材料檢查清單，在生物安全柜內(nèi)的放置必要的材料。因?yàn)榘踩竦臍饽环雷o(hù)屏障是很脆弱的，做好充分的準(zhǔn)備是為了在正式工作時(shí)減少手臂穿越氣幕的運(yùn)動(dòng)次數(shù)。操作者手臂橫向快速地進(jìn)出安全柜會干擾氣幕，并損害安全柜所提供的局部防護(hù)屏障。手臂垂直于安全柜的操作口，進(jìn)出時(shí)緩慢的移動(dòng)，將減少這種危險(xiǎn)。房間其他人員的活動(dòng)（例如，迅速運(yùn)動(dòng)，開、關(guān)房間門等）也同樣可以干擾安全柜的空氣保護(hù)屏障。生物安全柜的正確使用和維護(hù)在開始工作之前，操作者應(yīng)該調(diào)整凳子高度，使自己的臉在前操作口之上。在手臂放進(jìn)安全柜內(nèi)大約一分鐘之后，才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。這樣可以使安全柜穩(wěn)定，并且能讓氣流“清掃”掉手和臂表面的微生物污染物。當(dāng)操作者的胳膊橫放在前面的格柵上的時(shí)候，房間空氣可能直接流動(dòng)到安全柜的工作區(qū)域，而不是通過前面的格柵進(jìn)風(fēng)。輕微地提高胳膊會緩和這個(gè)問題。前面的格柵絕對不能讓研究記錄、廢棄的塑料包裝和吸液裝置等阻擋。所有的操作應(yīng)該在距離前面的格柵4英寸里面的工作面上進(jìn)行。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)二）工作前的凈化在開始工作之前要讓安全柜的風(fēng)機(jī)至少運(yùn)行3-5分鐘使安全柜內(nèi)的空氣進(jìn)行凈化。安全柜的工作臺面、內(nèi)壁（不包括送風(fēng)濾器擴(kuò)散板）和觀察窗的內(nèi)表面用消毒劑擦拭。再用無菌蒸餾水進(jìn)行擦拭以清除殘余的消毒劑。

放到安全柜的容器和材料的表面應(yīng)該以70%的乙醇擦拭，以減少將環(huán)境的雜菌帶到安全柜內(nèi)。定期的對孵箱和冰箱進(jìn)行消毒生物安全柜的正確使用和維護(hù)三）生物安全柜內(nèi)部材料的放置在安全柜的工作臺面上可以放一塊塑料襯底的能吸水的毛巾。所有的材料應(yīng)該放在離安全柜前面的格柵和后面工作臺面的邊緣盡可能遠(yuǎn)的位置（圖11）。容易產(chǎn)生氣溶膠的設(shè)備（例如，旋轉(zhuǎn)攪拌器，臺式離心機(jī)）應(yīng)該靠近安全柜的后部放置。操作時(shí)的動(dòng)作應(yīng)該從工作臺面的清潔區(qū)到污染區(qū)。生物安全柜的正確使用和維護(hù)生物安全柜的正確使用和維護(hù)安全柜內(nèi)材料的放置潔凈培養(yǎng)物（左邊）可以進(jìn)行接種（中心）；用過的污染吸管放在淺的平底盤里，而其它污染的材料可以放在生物危害包（右邊）中。這安排對于習(xí)慣于左手操作的人要顛倒過來。

潔凈污染生物安全柜的正確使用和維護(hù)四）II級生物安全柜內(nèi)的操作

在生物安全柜內(nèi)所進(jìn)行的許多普通過程可能產(chǎn)生噴濺或氣溶膠。應(yīng)該始終采用良好的微生物學(xué)技術(shù)，減少噴濺和氣溶膠產(chǎn)生。II級生物安全柜的設(shè)計(jì)可以使水平方向噴出的孢子在14英寸的傳播距離以內(nèi)被安全柜向下流動(dòng)的氣流所俘獲。因此，保持干凈的材料離開產(chǎn)生氣溶膠的活動(dòng)至少1英尺以外將會減少交叉污染的可能性。生物安全柜的正確使用和維護(hù)生物安全柜的正確使用和維護(hù)生物安全柜的正確使用和維護(hù)生物安全柜的正確使用和維護(hù)五）消毒

表面消毒

工作完成時(shí)，所有的容器和設(shè)備應(yīng)該進(jìn)行表面消毒并拿出安全柜。在每天工作結(jié)束時(shí)，應(yīng)該對安全柜進(jìn)行最后的表面消毒，包括工作臺面、安全柜的邊壁、后壁和觀察窗玻璃內(nèi)部的擦拭。如果必要，安全柜也應(yīng)該進(jìn)行放射性檢測并進(jìn)行必要的消毒。作為安全的微生物學(xué)操作的最后步驟，操作者應(yīng)該摘下手套、脫下工作服并且洗手。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)生物安全柜的正確使用和維護(hù)六）發(fā)生少量的噴灑時(shí)的消毒在生物安全柜內(nèi)發(fā)生少量的噴灑時(shí)，應(yīng)該用污染清除吸收紙巾立即進(jìn)行處理，并將使用過的紙巾放到這個(gè)生物危害包里。對安全柜內(nèi)的所有物品和安全柜內(nèi)部，用浸滿消毒液的毛巾立即進(jìn)行擦洗。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)生物安全柜的正確使用和維護(hù)七）發(fā)生大量的溢出當(dāng)發(fā)生大量的溢出時(shí)，液體會通過前面或后部的格柵流到下面去，這時(shí)要求更廣泛的消毒。安全柜內(nèi)的所有的物品應(yīng)該進(jìn)行表面消毒并拿出安全柜。應(yīng)該使消毒液維持20-30分鐘的適當(dāng)接觸時(shí)間如果溢出的液體含有放射性材料，可采取類似的程序。并應(yīng)該與輻射安全人員聯(lián)系，尋求特殊的指導(dǎo)。生物安全柜的正確使用和維護(hù)八）氣體消毒在更換HEPA過濾器或進(jìn)行內(nèi)部維修之前，要對生物安全柜必須進(jìn)行消毒。生物安全柜的正確使用和維護(hù)第五節(jié)生物安全柜檢測根據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（WS233-2002）微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則的相關(guān)規(guī)定：

有下列情況之一時(shí)，必須對Ⅱ級生物安全柜進(jìn)行現(xiàn)場檢測:1、實(shí)驗(yàn)室施工時(shí)，Ⅱ級生物安全柜搬放到指定位置后。

2、Ⅱ級生物安全柜被移動(dòng)位置后。

3、對Ⅱ級生物安全柜進(jìn)行檢修后。

4、Ⅱ級生物安全柜更換高效過濾器后。

5、Ⅱ級生物安全柜一年一度的常規(guī)現(xiàn)場檢測。生物安全柜的正確使用和維護(hù)一、現(xiàn)場檢測的必測項(xiàng)目和方法

垂直氣流速度斷面測定

儀器：準(zhǔn)確度為讀數(shù)±3％的熱風(fēng)速計(jì)。

方法：測點(diǎn)位于柜內(nèi)送風(fēng)口下方0.15m處，為均勻測點(diǎn)。測點(diǎn)間距不大于0.15m。測點(diǎn)布置不少于三行，靠內(nèi)壁的行距柜內(nèi)壁0.15m，每行不少于7個(gè)測點(diǎn)。

判定：垂直氣流均勻區(qū)所測平均風(fēng)速與生產(chǎn)廠給定值之差小于±0.025m／s，且單點(diǎn)風(fēng)速與所測平均風(fēng)速之差不大于20％為合格。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)二、工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)速測定

方法：

首先測定工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量，再除以生物安全柜工作窗口面積計(jì)算出進(jìn)風(fēng)風(fēng)速。

工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量通過測定生物安全柜的排風(fēng)風(fēng)量而求出。對于僅從工作窗口進(jìn)風(fēng)的生物安全柜，生物安全柜的排風(fēng)風(fēng)量就等于工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量；對于除從工作窗口進(jìn)風(fēng)外，還有單獨(dú)的進(jìn)風(fēng)管的生物安全柜，則從排風(fēng)管的總排風(fēng)量扣除進(jìn)風(fēng)管進(jìn)風(fēng)風(fēng)量即為工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量。

采用JGJ7l—1990中所規(guī)定方法測定生物安全柜的(進(jìn))排風(fēng)管風(fēng)量。

判定：所測進(jìn)風(fēng)風(fēng)速與生產(chǎn)廠給定值之差小于±0.025m／s為合格。

生物安全柜的正確使用和維護(hù)三、煙霧試驗(yàn)：使用發(fā)煙物作直觀判斷。在工作表面中線上方高于工作窗口上沿0.15m處從側(cè)板一端到另一端發(fā)煙，應(yīng)為垂直流線，不得有死角和回流。

1、距觀察窗內(nèi)表面0.025m，高于工作窗口上沿0.15m處從一端到另一端發(fā)煙，應(yīng)為垂直流線，不得有死角和回流，也無煙霧從安全柜逸出。

2、距工作窗口0.04m沿窗口