細(xì)菌分離培養(yǎng)

關(guān)于細(xì)菌分離培養(yǎng)第1頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三細(xì)菌的分離純化技術(shù)分離純化：使微生物共生群體分離開，得到純培養(yǎng)物的過程稱微生物的純分離技術(shù)。得到的純培養(yǎng)物稱純種。純種：指一種或一株微生物培養(yǎng)物中所有的細(xì)胞只來源同一個(gè)細(xì)胞的后代。分離純化技術(shù)是細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)中最基本的技術(shù)之一臨床送檢樣品或混雜的樣品分離受雜菌污染的菌種細(xì)菌純培養(yǎng)物第2頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三試驗(yàn)內(nèi)容：1.需氧菌的分離移植和增菌平板劃線分離營養(yǎng)（普通）斜面接種營養(yǎng)（普通）肉湯增菌

2.厭氧菌的分離培養(yǎng)方法（本次試驗(yàn)不做）生物學(xué)方法、化學(xué)方法、物理學(xué)方法第3頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三實(shí)驗(yàn)要求：掌握：掌握細(xì)菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)和方法掌握無菌操作程序掌握細(xì)菌在培養(yǎng)基上生長特點(diǎn)認(rèn)識：認(rèn)識菌落形態(tài)第4頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三

無菌操作工具第5頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三接種工具第6頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三分離純化法：（細(xì)菌分離純化）1、平板劃線法

2、稀釋涂布平板法3、稀釋混合（傾注）平板法4、顯微操作器單細(xì)胞挑取法5、棋盤格劃線法

第7頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三1.平板劃線：將蘸有混合細(xì)菌的接種環(huán)在平板表面多方向連續(xù)劃線，使混雜的微生物細(xì)胞在平板表面分散，濃度變稀，經(jīng)培養(yǎng)得到由單個(gè)細(xì)胞繁殖而成的菌落，從而達(dá)到純化。第8頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三1.平板劃線：平板劃線的原則和目的：第9頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三

圖1平板畫線法

A、B、C分別為1、2、3次畫線ABC第10頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三注意手勢

1.培養(yǎng)皿與酒

精燈的距離

2.左手打開培

養(yǎng)皿的動作

3.右手握接種

棒的姿勢

4.右手劃線的

運(yùn)作姿勢第11頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三分區(qū)劃線：

多用于糞便等含菌量較多的標(biāo)本。

每劃一個(gè)區(qū)域，將接種環(huán)燒灼一次，待冷卻后再劃下一個(gè)區(qū)域。每一區(qū)域的劃線應(yīng)接觸上一區(qū)域接種線的2~3次，使菌量逐漸減少，以形成單個(gè)菌落。

第12頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三連續(xù)劃線（曲線劃線）：分離含菌量較少的培養(yǎng)物右手持接種環(huán)，通過火焰滅菌，冷卻后，挑取標(biāo)本或培養(yǎng)物少許第13頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三1.平板劃線：第14頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三1432第15頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中的生長情況：

單個(gè)菌落（S型）菌苔菌落（R型）第16頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三

細(xì)菌的培養(yǎng)特征：

不同種類的細(xì)菌在固體、半固體和液體培養(yǎng)基中可表現(xiàn)出各自特有的培養(yǎng)特征?？梢宰?/p>

為細(xì)菌鑒別的特征之一。

第17頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三

細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中生長表現(xiàn)：

1、大小（mm表示。1mm以內(nèi)露滴狀；1-2mm小菌落。

2--4mm中等大菌落；4-6mm以上稱大菌落或巨大菌落）

2、形狀（圓形、不規(guī)則形）

3、邊緣（整齊、鋸齒狀）

4、表面性狀（光滑、粗糙）

5、隆起度（扁平、隆起、中凸）

6、顏色及透明度（黃色、灰白、光澤、透明）

7、硬度（干燥、濕潤、粘液）

8、溶血（在血培養(yǎng)基上的表現(xiàn)）

第18頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三2.斜面移植法：培養(yǎng)，保存菌種及其它。第19頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三手執(zhí)塑料桿處手執(zhí)試管底露出斜面試管口離火焰1cm小指夾棉塞第20頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三第21頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三培養(yǎng)后生長的斜面菌種第22頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三液體培養(yǎng)基接種法：

用于增菌及純培養(yǎng)細(xì)菌的生長特點(diǎn)觀察，如表面生長，沉淀生長，均勻混濁生長等。

第23頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中生長的三種不同現(xiàn)象

混濁：細(xì)菌均勻彌漫擴(kuò)散，出現(xiàn)不同程度混濁。

沉淀：細(xì)菌由下沉。肉眼可見沉淀物（顆粒絮狀）

菌膜：需氧菌易在液面生長，形成可見的菌膜，菌環(huán)。第24頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三第25頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三操作順序：

接種環(huán)滅菌

勾取細(xì)菌

取棉塞

接種

塞棉塞

接種環(huán)滅菌

標(biāo)記

培養(yǎng)。第26頁，講稿共30頁，2023年5月2日，星期三思考題：1、劃線分離時(shí)為什么每次都要講接種環(huán)上多余的菌體燒掉？劃線時(shí)為何不能重疊？2、在恒溫箱培養(yǎng)微生物時(shí)為何培養(yǎng)皿均需倒置？3、如何進(jìn)行菌落形狀的檢查？檢查時(shí)應(yīng)注意觀察菌落的哪些性狀？4、分離培養(yǎng)的目的是什么？經(jīng)一次分離的菌種是否皆為純種？何為純種？