風濕病的檢驗知識

風濕病的檢驗知識風濕病的檢驗知識一、抗核抗體測定(Antinuclearantibody,ANA)ANA是抗核多種成自抗體，無種屬及器官特異性。ANA可分為抗DNA抗體、抗組蛋白抗體、抗非組蛋白抗體、抗核仁抗體及其他細胞成抗體共同組成ANA譜?？购丝贵w(ANA)的檢查最常用于篩查全身性風濕病和自身免疫病。ANA的檢查可觀察到能與細胞核內(nèi)的核酸和蛋白抗原起反應的自身抗體。細胞存在對多種抗原起反應的抗只有某種抗體的效價很高時IFA才能加以鑒別。1、homogenous(均質型)又稱彌散型，相應的抗原是雙鏈DNA和組蛋白復合物。常見于SLE，特別是腎臟受累病人。也可見于其締組織病，如：風性關節(jié)炎，MCTD，干燥綜合征皮病，慢性活動炎及原發(fā)性膽汁性肝硬變。2、Peripheral(周邊型)相應的抗原為雙鏈DNA，多見于活動性SLE病人。3、Speckle(斑點型)主要是針對ENA的抗體，包括SmRNP，SSA，SSBS0。一般認為低效價的斑點型ANA不是結締組織病的，實際上不代表臨床異常。高效價的抗Sm抗體多與SLE有關。高效抗RNP身于MCTD，但也見于SLE。抗SSA和抗SSB抗體，見于S.S，也可見于SLE。當病人有抗SSA抗體時，通常以皮膚表現(xiàn)和光過敏為主。，也存在于ANA陰性狼瘡和新生兒狼瘡Scl-70抗體與硬皮病有關。4、Nucleoli(核仁型)其靶抗原是與RNA分子相關的核蛋白。多見于硬皮病。5、Centromere(著絲點型)抗著絲點抗(ACA)，多見于全身性硬皮病的CREST綜。常用檢測方法為IFA、ELISA、免疫印跡法、RIA、免疫斑點法、膠體金標斑點免疫滲濾法等。其中IFA是應用較廣的一種方法。一般采用鼠肝切片或Hep-2細胞為底物抗原片，當加入病人血清時，病人血清中的ANA可與細胞中相應抗原成分結合。再加入熒光標記抗人IgG，在熒光顯微鏡下可見細胞核內(nèi)亮綠色熒光?！紖⒖贾怠?lt;1:10或陰性〖臨床意義〗ANA陽性見于多種疾病，常用于病及自身免疫病斷。SLE患者陽性率在95%以上，且常在180以上。在其他風濕病如RA、系統(tǒng)性硬化癥、皮肌炎、干燥綜合(SS)、混締組織病(MCTD)等也可陽性。其肝病，病毒染等也可呈價陽性?！甲⒁馐马棥皆诖蠹s1%的正常人的體內(nèi)可測到低效價的非特異性抗核抗體，80歲以上老人的檢出率可高達50%。高效價的ANA一般與活動期SLE密切相關。采用Hep-2細胞檢測ANA，可見到不同的染色模型。此外，口服避孕藥的婦女也可檢測到ANA。二、可提取性核抗原(ExtractablenuclearantigenENA)抗體ENA是細胞內(nèi)許多小分子的RNA和多肽組成的非組蛋白的核蛋白顆粒。分布質中的稱為小細胞漿核糖核蛋白(scRNPs);分布在細胞核內(nèi)小細胞核核糖核蛋白(snRNPs)。目前已發(fā)現(xiàn)的有20余種，其中常用的抗ENA抗體有如下幾種。(一)抗Sm抗體Sm是病人Smith的縮寫Sm抗原屬于SnRNP，由5個RNA和多肽組成，抗原表位在29KD28KD和13.5KD多肽上，抗Sm抗體是酸性糖蛋白，是SLE的標記抗體。(二)抗nRNP(u1RNP)抗體u1RNP是u1RNA和蛋白質組成的，抗原表位在73KD、32KD和17.5KD多肽上，是混合結締組織病(MCTD)的重要血標志。(三)抗SSA抗體SS為干燥綜合征的縮寫。此抗體又稱抗RO抗體SSA抗原是RNA和蛋白質復合物，抗原表位在52KD多肽上，主要見于原發(fā)性干燥綜合征患者及SLE。(四)抗SSB抗體SSB抗體常伴隨SSA抗體同時出現(xiàn)，又稱抗La抗體，SSB抗原屬于SnRNP，是含有RNA和50KD蛋白質的復合物。抗原表位在45KD、47KD和48KD多肽上。與SSA抗體并存對診斷SS有特異性。(五)抗Scl-70抗體Scl-70抗原表位在86KD70KD的片段上，是DNA拓撲異構酶I的'降解產(chǎn)物，抗Scl-70抗體幾乎僅見于硬皮病，陽性率30%左右。(六)抗Jo-1抗體Jo-1抗體是組氨酰tRNA合成酶，抗原表位在55KD多肽，抗Jo-1抗體是多發(fā)性肌炎和皮肌炎的標記抗體，陽性率25-40%。(七)抗核糖體抗體核糖體在核成，然后轉入胞漿，抗位在大亞基上的38KD16KD和15KD多肽上?？购颂求w抗體陽性主要見于SLE，陽性率20-30%。檢測以上抗體的方法主要有：對流免疫電泳法(CIE)、雙相免疫擴散法，免疫印跡試驗(IBT)，免疫斑點技術和ELISA法等。一般采用兔胸腺或提取物或細胞提取物作為抗近年來，應用分子重組制備的試劑盒已市場。〖參考值〗陰性〖臨床意義〗1.抗nRNP抗體：見于35-40%的SLE病人，在MCTD病人中陽性率可達95-100%，也可見于其他風濕性疾病。2.抗Sm抗體：主要見于SLE及重疊綜合征，急性期病人75%為陽性。一般SLE者30-40%陽性率。但Sm抗體陽性者90%以上為SLE，故稱之為SLE的標記抗體。3.抗SSA和抗SSB抗體：見于40-45%的SS病人?？筍SA抗體也可見于2%的SLE病人及其他風濕疾病;抗SSA抗體與新生兒狼瘡和先天性傳導阻滯有關?？筍SA抗體也可病毒感等非風濕性疾病?？筍SB抗體對原發(fā)性干燥征較特異，但陽性率僅27%左右。4.抗Scl-70抗體：一般僅見于系統(tǒng)性硬化癥病人性率20-60%。5.抗Jol-1見于30%的多發(fā)性肌炎病人及1%的皮肌炎病人?？笿ol-1抗體與多發(fā)性肌炎質性肺炎的發(fā)生率增加有關。6.抗rRNP抗體：主要見于SLE患者，陽性率20%左右，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變有關，多在疾病現(xiàn)。〖注意事項〗判斷試驗結果時要結合臨床表價，也應根據(jù)試驗方法來作出解釋。疫電泳法和雙相擴散法敏感，但特異性較高;免疫印跡法、斑點免疫法及ELISA方法敏感性提高，但特異性相對減少。三.抗雙鏈DNA抗體(Antidouble-strandedDNA，A-dsDNA，)A-dsDNA對SLE有高度特異性，是針對細胞核脫氧核糖核酸的自身抗體。臨床上常用的檢測方法有：①Frrs法：125I-DNA與待檢標本中的A-dsDNA形成免疫復合物，加飽和使復合物沉淀，以γ計數(shù)器分別測定上清中游離及沉淀物中已結合的125I-DA含量，可出血清中A-dsDNA的結合活性。②EA法：將小牛胸腺DNA包被在微孔板中，加入清，如有A-dsDNA則結合到微孔板上，加入酶標抗人IgG，加入底物顯色后經(jīng)酶標儀比色可知血清中A-dsDNA抗體的量。③免疫熒光法：采用馬疫錐蟲或短膜蟲作為基質，加入病人血清。血清中的dNA與膜上的天然DA結合，加入熒標記抗人IgG。馬疫錐蟲和短膜蟲的動基體會發(fā)出綠色熒光。④金標法：雙鏈DNA包被于硝酸纖維膜上，加入病人，加入金標記抗人IgG，如有A-dsDNA存在，會顯示紅色斑點?！紖⒖贾怠揭婪椒ú煌瑓⒖贾狄灿胁煌?。Farrs法：≤0.20免疫熒光法：<1:10ELISA法：依試劑盒而定，一般<70u金標法：陰性〖臨床意義〗A-dsDNA陽性對SLE有較高的特異性。大約60%的活動性SLE病人會出現(xiàn)A-dsDNA。其他風濕性疾病也會出現(xiàn)，但陽性率非常低，如RA、SS?！甲⒁馐马棥郊訇栃越Y果非常少見，但陰性亦除SLE的診斷。四.抗中性粒細胞胞漿抗體(Antineutrophilcytoplasmicantibody,ANCA)測定ANCA是針對中性粒細胞胞漿多種成分的自身抗體，主要有髓過氧化物酶(PO)和蛋白酶3(Proteinase3，PR3)的抗體。主要用于診斷Wegener肉芽腫和系統(tǒng)性血管炎別是伴有腎病呼吸疾病或其他類型血管炎引起多器官損害的患者檢測方法有IFA、ELISA、IBT等?！紖⒖贾怠疥幮浴！寂R床意義〗免疫熒光法檢查ANCA陽性一般分為兩種熒光類型，一種是胞漿型，稱為cANCA，一種是核周型，稱為pANCAcANCA產(chǎn)生彌漫性細胞漿染色，是針對PR3的抗體，一般見于wegener肉病(WG)，特別是腎和肺受累的病人。pANCA產(chǎn)生核周染色，是針對MPO抗體，主要見于系統(tǒng)性血管炎病人。在WG病人中，cANCA陽性率在活動期可達80%，且有較高的抗體效價。在緩抗體陽性率低，且效價，或完全消失?！甲⒁馐马棥紸NCA陽性也可見于Good-Pastares綜合征和SL