血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶測定_第1頁
血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶測定_第2頁
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文檔簡介

關(guān)于血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶測定第1頁,講稿共19頁,2023年5月2日,星期三實(shí)驗(yàn)提綱實(shí)驗(yàn)?zāi)康?酶活性測定原理與方法2比色分析法原理與公式計(jì)算3722分光光度計(jì)操作方法與注意事項(xiàng)4

思考題5第2頁,講稿共19頁,2023年5月2日,星期三1實(shí)驗(yàn)?zāi)康?234掌握血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的原理熟悉血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的方法熟悉比色分析法了解722分光光度計(jì)的使用方法第3頁,講稿共19頁,2023年5月2日,星期三2酶活性測定原理與方法酶活性測定原理+2,4-二硝基苯肼

(黃色)丙酮酸二硝基苯腙(紅棕色)NaOHα-酮戊二酸丙氨酸谷氨酸丙酮酸+GPT丙酮酸第4頁,講稿共19頁,2023年5月2日,星期三酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法1試管號標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)空白管測定管測定空白管丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液(ml)(1ml=100μg)0.1---新鮮血清(ml)--0.10.1底物液(37℃)(ml)0.50.50.5-0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(ml)(pH=7.4)-0.1--

此前三管置于37℃保溫30分鐘2,4-二硝基苯肼(ml)0.50.50.50.5底物液(ml)---0.5充分混合,置于37℃保溫20分鐘0.4mol/LNaOH(ml)555523第5頁,講稿共19頁,2023年5月2日,星期三酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)空白管測定管測定空白管顏色深淺不一第6頁,講稿共19頁,2023年5月2日,星期三酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法試管號標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)空白管測定管測定空白管丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液(ml)(1ml=100μg)0.1---新鮮血清(ml)--0.10.1底物液(37℃)(ml)0.50.50.5-0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(ml)(pH=7.4)-0.1--

此前三管置于37℃保溫30分鐘2,4-二硝基苯肼(ml)0.50.50.50.5底物液(ml)---0.5充分混合,置于37℃保溫20分鐘0.4mol/LNaOH(ml)5555第7頁,講稿共19頁,2023年5月2日,星期三酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)空白管測定管測定空白管如何排除干擾?真正丙酮酸定量?顏色深淺不一:還有其他酮酸的影響第8頁,講稿共19頁,2023年5月2日,星期三3比色分析法原理與公式計(jì)算比色分析法原理定義——通過比較有色物質(zhì)溶液顏色的深淺,測知該物質(zhì)濃度的方法。12原理——Lambert-Beer定律第9頁,講稿共19頁,2023年5月2日,星期三3比色分析法原理與公式計(jì)算比色分析法公式推導(dǎo)2A標(biāo)/A測=C標(biāo)/C測數(shù)學(xué)表達(dá)式——A=K×C×L溶液吸光度溶液吸光系數(shù)溶液濃度液層厚度1公式推導(dǎo)第10頁,講稿共19頁,2023年5月2日,星期三本實(shí)驗(yàn)公式計(jì)算3比色分析法原理與公式計(jì)算A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白0.1ml血清所產(chǎn)生的丙酮酸μg數(shù)=A測定-A測定空白C標(biāo)準(zhǔn)×谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性單位的定義:1ml血清于37℃與底物作用30分鐘,產(chǎn)生2.5μg丙酮酸為1個GPT活性單位?;盍挝?ml=0.1ml血清所產(chǎn)生的丙酮酸μg數(shù)×102.512第11頁,講稿共19頁,2023年5月2日,星期三上述各管靜置10分鐘后,使用722分光光度計(jì),在520nm處,以蒸餾水校正零點(diǎn),測定各管相應(yīng)吸光度值。標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)空白管測定管測定空白管酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法第12頁,講稿共19頁,2023年5月2日,星期三4722分光光度計(jì)使用方法及注意事項(xiàng)使用方法接通電源前,檢查儀器部件是否完好,工作電壓是否正常。將比色杯內(nèi)放好空白液(蒸餾水)、標(biāo)準(zhǔn)液、標(biāo)準(zhǔn)空白液、測定液、測定空白液,置于比色池中(由下向上的順序放置)。(見圖)1234蓋上暗箱蓋,選擇儀器自動校正空白液“A”=0,并由下向上的順序讀取各管“A”(即A標(biāo)準(zhǔn)、A標(biāo)空、A測定、A測空)。(見圖)start接通電源打開暗箱蓋,進(jìn)入光度測量界面。選擇測定的波長(520nm)。(見圖)GOTOλ第13頁,講稿共19頁,2023年5月2日,星期三4722分光光度計(jì)使用方法及注意事項(xiàng)使用方法第14頁,講稿共19頁,2023年5月2日,星期三4722分光光度計(jì)使用方法及注意事項(xiàng)使用方法第15頁,講稿共19頁,2023年5月2日,星期三4722分光光度計(jì)使用方法及注意事項(xiàng)使用方法第16頁,講稿共19頁,2023年5月2日,星期三注意事項(xiàng)4722分光光度計(jì)使用方法及注意事項(xiàng)手持比色杯磨砂面,比色杯光面對準(zhǔn)光路。比色杯內(nèi)液體體積占總體積2/3,比色杯外壁不可有液體,則需擦鏡紙沾去。與比色杯由下向上所放位置對應(yīng),儀器所報(bào)數(shù)據(jù)順序則由1-5。123第17頁,講稿共19頁,2023年5月2日,星期三5思考題123實(shí)驗(yàn)操作中第一次37℃保溫30分鐘和第二次37℃保溫20

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