血紅蛋白的提取與分離PPT

關(guān)于血紅蛋白的提取與分離PPT第1頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三一、課題目標(biāo)本課題通過嘗試對(duì)血液中血紅蛋白的提取和分離，使學(xué)生能夠體驗(yàn)從復(fù)雜體系中提取生物大分子的基本過程和方法，并了解色譜法、電泳法等分離生物大分子的基本原理，為今后學(xué)習(xí)運(yùn)用這些技術(shù)打下基礎(chǔ)。第2頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三二、課題重點(diǎn)與難點(diǎn)課題重點(diǎn)：凝膠色譜法,電泳法的原理。課題難點(diǎn)(自學(xué))：樣品的預(yù)處理；色譜柱填料的處理和色譜柱的裝填。第3頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三思考1

為什么要分離蛋白？

科研生產(chǎn)思考2

蛋白質(zhì)的分離和提取的原理是什么？

根據(jù)蛋白質(zhì)各種特性的差異，如分子的形狀和大小、所帶電荷的性質(zhì)和多少、溶解度、吸附性質(zhì)和對(duì)其他分子的親和力等等，可以用來分離不同蛋白質(zhì)。第4頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三什么是色譜法，

它的用途是什么？利用混合物中各組分的理化生性質(zhì)的不同（有哪些？），使各組分以不同程度分布到兩相中的分離技術(shù)。葉綠素的分離。第5頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三一、基礎(chǔ)知識(shí)：㈠凝膠色譜法（分配色譜法）1、凝膠

一些微小多孔的球體（內(nèi)含許多貫穿的通道，由多糖類化合物構(gòu)成,如葡聚糖、瓊脂糖，具多孔的凝膠就叫分子篩）。2、凝膠色譜法的概念

根據(jù)被分離的蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的大小，利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，來進(jìn)行蛋白質(zhì)分離。第6頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三第7頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三第8頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三第9頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三第10頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三第11頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三第12頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三第13頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三討論:

為什么小分子必須走空隙第14頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三3、原理：當(dāng)不同的蛋白質(zhì)通過凝膠時(shí)，相對(duì)（）的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程（），移動(dòng)速度（）；而(）的蛋白質(zhì)無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在（）移動(dòng)，路程（），移動(dòng)速度（），相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)因此得以分離。分子質(zhì)量較小較長(zhǎng)較慢相對(duì)分子質(zhì)量較大凝膠外部較短較快第15頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三第16頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三課后思考:

怎樣選擇交聯(lián)度？第17頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三層析系統(tǒng):每一部件的作用第18頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三思考:凝膠層析應(yīng)該用那種柱子?第19頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三

電泳1、概念：指帶電粒子在電場(chǎng)的作用下發(fā)生遷移的過程。第20頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三2、原理：許多重要的生物大分子，如（）等都具有()在()下，這些基團(tuán)會(huì)帶上（）。在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其（）電極移動(dòng)。電泳利用了待分離樣品中各種分子（）以及分子本身的（）、（）的不同使帶電分子產(chǎn)生不同的（），從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。多肽、核酸可解離的基團(tuán)正電或負(fù)電所帶電荷相反的帶電性質(zhì)的差異大小形狀遷移速度一定的PH第21頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三思考:電泳與凝膠層析驅(qū)動(dòng)力的不同第22頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三聚丙烯酰胺凝膠：

是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在引發(fā)劑(過硫酸銨）和催化劑（四甲基已二胺）的作用下聚合交聯(lián)成的具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。3、分類瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳。

測(cè)定（）時(shí)，通常用十二烷基硫酸鈉(SDS)-聚丙烯酰胺凝膠電泳。蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量第23頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三

為了消除凈電荷對(duì)遷移率的影響可以在凝膠中加入()。SDS能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性。由幾條肽鏈組成的蛋白質(zhì)復(fù)合體在SDS的作用下會(huì)解聚成單條肽鏈，因此測(cè)定的結(jié)果只是()。SDS能與各種蛋白質(zhì)形成蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物，SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量。因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷差別，使電泳遷移率完全取決于()。

蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于它所帶凈電荷的多少以及分子的大小等因素。SDS單條肽鏈的分子量分子的大小第24頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS）

polyacrylamidegelelectrophoresis

使用含有十二烷基硫酸鈉（SDS）和還原劑（通常為巰基乙醇）的樣品處理液對(duì)蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行處理（一般煮沸3～5分鐘），通過加熱和SDS可以使蛋白質(zhì)變性，多亞基的蛋白質(zhì)也將解離為單亞基。同時(shí)還原劑可以切斷蛋白質(zhì)中的二硫鍵（使二硫鍵還原）。經(jīng)過這樣處理的樣品中的肽鏈都是處于無二硫鍵連接的，分離的狀態(tài)。由于SDS是帶有負(fù)電荷的分子，同時(shí)它有一個(gè)長(zhǎng)的疏水尾巴，SDS通過疏水尾巴與肽鏈中的氨基酸的疏水側(cè)鏈結(jié)合，結(jié)合SDS的比率大約是一個(gè)蛋白質(zhì)分子中每?jī)蓚€(gè)氨基酸殘基結(jié)合一分子的SDS。第25頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三第26頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三

垂直板電泳裝置加樣樣品遷移方向第27頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三電泳過程中分子遷移的規(guī)律，小分子走在前頭，大分子滯后。電泳凝膠相當(dāng)于凝膠過濾中的一個(gè)帶孔膠粒?；旌蠘悠穾Э啄z

按分子大小分離電泳方向

電泳

小分子大分子第28頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三夾在兩塊玻璃板之間的凝膠

電泳緩沖液

電泳緩沖液

加在槽中的經(jīng)SDS處理的樣品分子量小分子量大電源第29頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子量未知蛋白在一定的凝膠濃度下，多肽鏈分子量的對(duì)數(shù)與多肽鏈的相對(duì)遷移率成線性關(guān)系，所以可以通過標(biāo)準(zhǔn)曲線求未知多肽鏈分子量。

相對(duì)遷移率第30頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三電泳后的凝膠徑考馬斯亮籃染色、脫色后的凝膠照片第31頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三第32頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三

聚丙烯酰胺凝膠電泳對(duì)分離大分子具有較高的分辨率，但核酸比蛋白質(zhì)分子大得多，只能采用較大孔徑的瓊脂糖凝膠電泳。核酸分子本身含有大量的磷酸根，核酸帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。溴化乙啶熒光染料對(duì)核酸染色在紫外線的照射下，發(fā)出橙紅色熒光。根據(jù)熒光條帶的粗細(xì)和分布的位置，可以用在對(duì)PCR擴(kuò)增效果的鑒定上。

說明第33頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三思考凝膠層析和SDS的原理有那些相似性第34頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三謝謝第35頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三二、實(shí)驗(yàn)操作蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：1.樣品處理水分固體物質(zhì)血漿蛋白無機(jī)鹽磷脂葡萄糖等血液血漿血細(xì)胞白細(xì)胞血小板紅細(xì)胞（最多）血紅蛋白（）兩個(gè)α-肽鏈兩個(gè)β-肽鏈樣品處理—粗分離—純化—純度鑒定90％

第36頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三①目的：去除（），以利于后續(xù)步驟的分離純化。②方法：（）離心（速度越高和時(shí)間越長(zhǎng)會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等一同沉淀達(dá)不到分離的效果），然后用膠頭吸管吸出上層透明的（），將下

每條肽鏈環(huán)繞（），此基團(tuán)可攜帶（）。血紅蛋白因含有（）而呈紅色。一個(gè)亞鐵血紅素基團(tuán)一分子氧或一分子CO2血紅素(1)紅細(xì)胞的洗滌雜蛋白低速短時(shí)間黃色血漿1.樣品處理第37頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三層（）的紅細(xì)胞液體倒入燒杯，再加入五倍體積的（）（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9％的氯化鈉溶液），緩慢攪拌10min，低速短時(shí)間離心，如此重復(fù)洗滌（）次，直至上清液中沒有（），表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。生理鹽水三黃色暗紅色第38頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三(2)血紅蛋白的釋放

加（）到（）體積，再加40％體積的（）（溶解細(xì)胞膜），置于（）上充分?jǐn)嚢?0分鐘（加速細(xì)胞破裂）,細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白。(3)分離血紅蛋白溶液：將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以2000r/min的速度離心10min，試管中的溶液分為4層:原血液甲苯磁力攪拌器蒸餾水第39頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三第1層（最上層）：（）甲苯層第2層（中上層）：（）的沉淀層，（）色薄層固體第3層（中下層）：

（）的水溶液層（）的液體

第4層（最下層）：其它雜質(zhì)（）的沉淀層無色透明脂溶性物質(zhì)白血紅蛋白紅色透明暗紅色第40頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三

用濾紙過濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體。有機(jī)溶劑脂類物質(zhì)血紅蛋白溶液紅細(xì)胞破碎物沉淀第41頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三

取1mL的血紅蛋白溶液裝入（）中，將透析袋放入盛有300mL的物質(zhì)的量濃度為20mmol/L的（）中，pH為（），透析12小時(shí)。目的是（）或用于更換樣品中的（）。透析袋一般用硝酸纖維素（玻璃紙）制成。除去樣品中分子量較小的雜質(zhì)透析袋磷酸緩沖液7.0緩沖液(4)透析第42頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三2.凝膠色譜操作1）凝膠色譜柱的制作①取長(zhǎng)40厘米，內(nèi)徑1.6厘米的玻璃管，兩端需用砂紙磨平。②柱底部的制作：打孔

挖出凹穴安裝移液管頭部覆蓋尼龍網(wǎng)，再用100目尼龍紗包好。a、選擇合適的的橡皮塞，中間打孔；b、在橡皮塞上部切出鍋底狀的（），在0.5mL的（）頭部切下（）長(zhǎng)的一段，插入橡皮塞孔內(nèi)，上部不得超過橡皮塞的凹穴底面。凹穴移液管5cm第43頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三

底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否則難以鋪實(shí)尼龍網(wǎng)，還會(huì)導(dǎo)致液體殘留，蛋白質(zhì)分離不徹底。第44頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三c.剪尼龍網(wǎng)小圓片覆蓋在橡皮塞的凹面上，用100目的尼龍紗將橡皮塞上部包好，插到玻璃管一端。d、色譜柱下端用移液頭部做出口部位，連接一細(xì)的尼龍管，并用螺旋夾控制尼龍管的打開與關(guān)閉，另一端放入收集色譜流出液的收集器內(nèi)。第45頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三⑤安裝其他附屬結(jié)構(gòu)。③頂塞的制作：插入安裝了玻璃管的橡皮塞④組裝：將上述三者按相應(yīng)位置組裝成一個(gè)整體。第46頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三2）凝膠色譜柱填料的處理（1）凝膠的選擇：（）（G-75）“G”表示凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及分離范圍。

75表示凝膠的得水值，即每克凝膠膨脹時(shí)吸水7.5克。（2）方法：配置凝膠懸浮液：計(jì)算并稱取一定量的凝膠浸泡于（）中充分溶脹后，配成（）。蒸餾水凝膠懸浮液交聯(lián)葡聚糖凝膠第47頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三①固定：將色譜柱垂直固定在支架上。②裝填：

將（）一次性的緩慢倒入（）內(nèi)，裝填時(shí)輕輕敲動(dòng)色譜柱，使凝膠填裝均勻。（3）凝膠色譜柱的裝填方法凝膠懸浮液色譜柱注意：凝膠裝填時(shí)盡量緊密，以降低凝膠顆粒之間的空隙。裝填凝膠柱時(shí)不能有氣泡存在：因?yàn)闅馀輹?huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果。

第48頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三

你能從凝膠色譜的分離原理分析為什么凝膠的裝填要緊密、均勻嗎？

凝膠實(shí)際上是一些微小的多孔球體，小球體內(nèi)部有許多貫穿的通道。相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)分子不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，只能分布在顆粒之間，通過的路程較短，移動(dòng)速度較快；相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)分子比較容易進(jìn)入凝膠內(nèi)的通道，通過的路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較慢。因此，樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)先流出，相對(duì)分子質(zhì)量中等的分子后流出，相對(duì)分子質(zhì)量最小的分子最后流出，從而使各種相對(duì)分子質(zhì)量不同的分子得以分離。如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會(huì)在色譜柱內(nèi)形成無效的空隙，使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的樣品分子從這些空隙中通過，攪亂洗脫液的流動(dòng)次序，影響分離的效果。第49頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三③洗滌平衡裝填完畢后，立即連接緩沖液洗脫瓶，在約()高的操作壓下，用300mL的20mmol/L的磷酸緩沖液（pH為7.0）充分洗滌平衡12小時(shí)，使凝膠裝填緊密。50cm第50頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三3）樣品的加入與洗脫①加樣前

打開下端流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到與凝膠面平齊，關(guān)閉出口。第51頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三②加透析樣品3）樣品加入與洗脫第52頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三①調(diào)整緩沖液面：與凝膠面平齊。②滴加透析樣品：用吸管將1mL透析后的樣品加到色譜柱的頂端。③樣品滲入凝膠床：樣品完全進(jìn)入凝膠層。④洗脫：打開下端，用磷酸緩沖液洗脫。⑤收集：待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集流出液，每5mL收集一試管，連續(xù)收集。第53頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三3.SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳（選做）

判斷純化的蛋白質(zhì)是否達(dá)到要求，需要進(jìn)行蛋白質(zhì)的鑒定。

血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時(shí)可以通過觀察顏色來判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集洗脫液。這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作。思考：與其他真核細(xì)胞相比，紅細(xì)胞有什么特點(diǎn)？這一特點(diǎn)對(duì)你進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離有什么意義？第54頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三3.SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳

——鑒定血紅蛋白純度（1）試劑的配制①丙烯酰胺和N,N-甲叉雙丙烯酰胺

用去離子水配制29%（29g/100mL，下同）的丙烯酰胺和1%的N,N-甲叉雙丙烯酰胺的貯存液②十二烷基硫酸鈉（SDS）

用去離子水配成10%的貯存液，于室溫保存。③用于制備分離膠和濃縮膠的Tris緩沖液④TEMED：作用通過催化過硫酸銨形成自由基而加速丙烯酰胺與雙丙烯酰胺的聚合。第55頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三⑤用去離子水配制10%

過硫酸銨：作用提供驅(qū)動(dòng)丙烯酰胺和雙丙烯酰胺聚合所必需的自由基。此溶液須配制新鮮液。⑥Tris—甘氨酸電泳緩沖液

25mmol/LTris，250mmol/L甘氨酸(pH8.3)，0.1%的SDS。⑦樣品處理液

50mmol/LTris—HCl(pH6.8)，100mmol/LDTT(巰基蘇糖醇)或用5%的巰基乙醇，2%的SDS，0.1%的溴酚藍(lán)，10%的甘油。⑧染色液

0.1%的考馬斯亮藍(lán)R250，40%的甲醇，10%的冰醋酸⑨脫色液

10%的甲醇和10%的冰醋酸。第56頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三

由于制備凝膠的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性，并且容易被皮膚吸收，因此操作必須在通風(fēng)櫥內(nèi)或通風(fēng)處進(jìn)行。TEMED和過硫酸胺對(duì)黏膜和上呼吸道組織、眼睛、皮膚等有很大的破壞作用，吞服可致命。因此在進(jìn)行電泳操作時(shí)一定按照實(shí)驗(yàn)要求和步驟完成。操作時(shí)要戴好一次性手套。第57頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三聚丙烯酰胺凝膠電泳裝置及其原理示意圖第58頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三①SDS-聚丙烯酰胺分離膠制備1)根據(jù)廠家說明書安裝電泳用的玻璃板2）SDS—聚丙烯酰胺凝膠制備

用去離子水4.6mL，30%的丙烯酰胺2.7mL，1.5mol、pH8.8的Tris緩沖液2.5mL，10%的SDS0.1mL，10%的過硫酸胺0.1mL，TEMED0.006mL，混合均勻，迅速灌注在兩玻璃板的間隙中間，要留出灌注濃縮膠所需空間(梳子的齒長(zhǎng)再加0.5cm)，再在膠液面上小心注入一層水（約高2—3mm），以阻止氧氣進(jìn)入凝膠溶液。（2）電泳方法步驟第59頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三③配制SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳濃縮膠溶液。用去離子水2.7mL，30%的丙烯酰胺0.67mL，1.0mol、pH6.8的Tris緩沖液0.5mL，10%的SDS0.041mL，10%的過硫酸胺0.04mL，TEMED0.004mL，混合均勻，直接灌注在聚合的分離膠上，并立即在濃縮膠溶液中插入干凈的梳子。整個(gè)操作過程應(yīng)注意避免氣泡的產(chǎn)生。然后再補(bǔ)加濃縮膠溶液，使其充滿梳子之間的空隙，將凝膠垂直放置于室溫下聚合。②分離膠聚合完全后（約30min），傾出覆蓋水層，再用濾紙吸凈殘留水。3）樣品處理第60頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三5)加樣在電泳樣品中按1∶1體積比加入樣品處理液，在100℃溫度下加熱3min，以使蛋白質(zhì)變性。

按順序加樣，加樣量通常為10—25μL。樣品可以多加幾個(gè)，例如，血漿樣品紅細(xì)胞破碎后(即進(jìn)行凝膠色譜分離之前)的樣品和凝膠色譜分離之后的樣品。4）濃縮膠聚合完全后（30min），小心移出梳子。把凝膠固定于電泳裝置上，上下槽各加入Tris—甘氨酸電泳緩沖液。必須設(shè)法排出凝膠底部?jī)刹ＡО逯g的氣泡。第61頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三7）剝膠

從電泳裝置上卸下玻璃板，用刮刀撬開玻璃板。將緊靠最左邊一孔（第一槽）凝膠下部切去一角，以標(biāo)注凝膠的方位。8）染色

將電泳凝膠片放在考馬斯亮藍(lán)染色液中染色1-2h。6)電泳將電泳裝置與電源相接，凝膠上所加電壓為8V/cm。當(dāng)染料前沿進(jìn)入分離膠后，把電壓提高到15V/cm，繼續(xù)電泳直至溴酚藍(lán)到達(dá)分離膠底部上方約1cm處，關(guān)閉電源。第62頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三10)觀察結(jié)果：SDS電泳的成功關(guān)鍵之一是電泳過程中，待別是樣品制備過程中蛋白質(zhì)與SDS的結(jié)合程度。9)脫色：染色完畢，傾出染色液,換脫色液脫色3-10h，其間需多次更換脫色液至背景清楚。第63頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三

觀察你處理的血液樣品離心后是否分層（見教科書圖5-18），如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋白的原因。此外，離心速度過高和時(shí)間過長(zhǎng)，會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià)1.你是否完成了對(duì)血液樣品的處理？你能描述處理后的樣品發(fā)生了哪些變化嗎？第64頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三

由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。此外，還可以加入大分子的有色物質(zhì)，例如藍(lán)色葡聚糖—2000或紅色葡聚糖，觀察色帶移動(dòng)的情況。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的性能良好。如果色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時(shí)要重新裝柱。2.你填裝的凝膠色譜柱中是否有氣泡產(chǎn)生？你的色譜柱裝填得成功嗎？你是如何判斷的？第65頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三

如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩慢流出；如果紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬，說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)。3.你能觀察到蛋白質(zhì)的分離過程中，紅色區(qū)帶的移動(dòng)嗎？請(qǐng)描述紅色區(qū)帶的移動(dòng)情況，并據(jù)此判斷分離結(jié)果。第66頁，講稿共71頁，2023年5月2日，星期三練習(xí)1

凝膠色譜法也稱為分配色譜法，它是根據(jù)分子量的大小分離蛋白質(zhì)的方法之一。所用的凝膠