植物油脂中苯并(a)芘的測(cè)定

植物油脂中苯并（a）芘的測(cè)定-高效液相色譜法本方法參考國(guó)標(biāo)方法：動(dòng)植物油脂苯并（a）芘的測(cè)定反相高效液相色譜法，GBT22509-2008；該國(guó)標(biāo)源自ISO15302:2007，MOD方法。相關(guān)技術(shù)差異為：對(duì)儀器設(shè)備作了改動(dòng)；氧化鋁柱采用天津博納艾杰爾科技有限公司的商品氧化鋁固相萃取柱；將洗脫溶劑改為采用重蒸后的石油醚；待測(cè)液定容體積改為300pL,采用儀器自動(dòng)進(jìn)樣，進(jìn)樣量為20pL；采用外標(biāo)法定量計(jì)算。方法內(nèi)容：1．適用范圍本方法適用于動(dòng)植物油脂中苯并（a）芘的檢測(cè)。本方法的最低檢出限為0.3-0.5pg/Kg，該最低檢出限為對(duì)應(yīng)所使用的儀器的檢出限，因此儀器熒光檢測(cè)器的靈敏度對(duì)應(yīng)檢出限。2．方法原理樣品經(jīng)石油醚溶解，通過商品氧化鋁固相萃取柱（活度為W級(jí)，粒徑大小為100-200目）吸附脂肪酸等，用石油醚洗脫苯并（a）芘，采用反相高效液相色譜法分離，熒光檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，采用峰面積外標(biāo)法定量。3．試劑與材料3.1色譜純正己烷；石油醚，每升加4g氫氧化鉀重蒸；3.2氧化鋁固相萃取柱：100-200目，brockmann活度W級(jí)，在室溫下避光保存，天津博納艾杰爾科技有限公司；3.3苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取10mg標(biāo)準(zhǔn)品于10ml容量瓶中，用正己烷定容，配制的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為1000mg/L；3.4標(biāo)準(zhǔn)工作液：用正己烷稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，稀釋的濃度為10pg/L。4．儀器和設(shè)備旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，大于150ml的圓底旋蒸瓶或雞心瓶，勿用平底旋蒸瓶；氮吹儀；4.3渦旋混合器；QL-866江蘇海門產(chǎn)；2ml色譜瓶；250pL色譜瓶玻璃內(nèi)插管；高效液相色譜儀，配自動(dòng)進(jìn)樣器，熒光檢測(cè)器。5．樣品前處理5.1樣品凈化稱取約0.300g的油樣，用5ml石油醚溶解渦旋混合器上充分混勻。首先采用約30ml石油醚將氧化鋁柱預(yù)先活化，活化的程度：按氧化鋁柱末端正己烷自然滴下約5ml，滴出的過程要不斷添加石油醚，千萬注意不能讓正己烷低于柱子的上篩板，這樣會(huì)使空氣進(jìn)入柱子導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確！將5ml滴出的石油醚去除。將溶解好的油樣添加到預(yù)活化好的氧化鋁柱子中開始上樣，不斷添加石油醚約80ml用150ml的旋蒸瓶接收，直到80ml的石油醚完全自然滴出。上述過程不允許加壓或抽真空加快流速，只能讓其自然洗脫。將收集的洗脫液在45°C水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干；用10ml的石油醚分三次淋洗旋蒸瓶，合并10ml的石油醚到氮吹管中，用氮?dú)獯蹈?，如果還有油存在而導(dǎo)致無法吹干，則說明氧化鋁柱不合格，需要進(jìn)行二次凈化；添加300pL的正己烷到氮吹管中，用渦旋混合器充分混勻；氮吹過程避免氣流過大濺出；渦旋過程避免正己烷蒸發(fā)。將上述300pL的正己烷轉(zhuǎn)移至色譜瓶?jī)?nèi)插管中，進(jìn)樣分析。色譜條件色譜柱：SB-C18，250mmx4.6mmx5.0pm；或多環(huán)芳烴專用柱：PAH250mmx4.6mmx5.0pm；流動(dòng)相為乙腈：水88%：12%；流速為1.0ml/min；進(jìn)樣量為20pL；熒光檢測(cè)器：發(fā)射波長(zhǎng)406nm，激發(fā)波長(zhǎng)384nm。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制將標(biāo)準(zhǔn)工作液稀釋到濃度分別為：0.5，1.0，2.0，3.5，5.0，7.5，10.0pg/L，根據(jù)峰面積建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)實(shí)際油樣可以將標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸到50pg/L。6.樣品分析將5.1的樣品進(jìn)樣分析，采用外標(biāo)法定量。7．測(cè)試結(jié)果的表示苯并（a）芘含量按下式計(jì)算：mcwX=其中:w為樣品中苯并（a）芘含量，單位為pg/Kg；c為從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的待測(cè)液中苯并（a）芘的濃度，單位為pg/L；V為待測(cè)液體積，單位為pL,本方法為300pL；m為稱取的樣品質(zhì)量，單位為g，本方法要求不能超過0.3100g；8?采用本方法的所得到的圖譜￡I?卅nI/82610mli!\ii|128&127￡I?卅nI/82610mli!\ii|128&127&FLD1A.Ex=364.Em=406(BAP'.W10^702.0)Noim1265圖10.5pg/L苯并（a）芘的標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜圖FLD1A:Ex=384.Em=406i：BAP\10W^702D：