發(fā)育毒性及其評(píng)價(jià)

發(fā)育毒性及其評(píng)價(jià)第1頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月目的與要求：1.掌握基本概念2.掌握Wilson發(fā)育毒理學(xué)基本原理3.了解發(fā)育毒性的作用機(jī)制4.熟悉發(fā)育毒性的評(píng)價(jià)第2頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)概述第3頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月生殖與發(fā)育生殖是對(duì)親代動(dòng)物而言，從配子生成、受精到胎體分娩是一生殖過(guò)程。發(fā)育主要是對(duì)子代而言，從受精卵到性成熟的青春期甚至一直到衰老都屬于發(fā)育過(guò)程。第4頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)育毒理學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史畸胎學(xué)（古代）現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)畸胎學(xué)（19世紀(jì)）發(fā)育毒理學(xué)第5頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月畸胎學(xué)（古代）畸胎學(xué)是發(fā)育毒理學(xué)的基礎(chǔ)。畸胎學(xué)作為一門描述性科學(xué)在文字之前就已經(jīng)存在了，四大文明古國(guó)都有畸胎的記載。最早可以追溯到公元前6500年土耳其的聯(lián)體嬰兒石刻。5000年前埃及壁畫(huà)所描述的唇腭裂和軟骨發(fā)育不全等。當(dāng)時(shí)人們相信出生異常的嬰兒是上天的懲罰、星象的反應(yīng)和未來(lái)的預(yù)兆，有的則以為是人和動(dòng)物之間雜交的結(jié)果。隨著16~17世紀(jì)生物科學(xué)的發(fā)展，才逐漸對(duì)畸胎有了科學(xué)的認(rèn)識(shí)。WilliamHarvey于1651年提出了發(fā)育受阻學(xué)說(shuō)，認(rèn)為畸形起因于器官或結(jié)構(gòu)的不完全發(fā)育。第6頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)畸胎學(xué)（19世紀(jì)）現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)畸胎學(xué)始于19世紀(jì)初，當(dāng)時(shí)的胚胎學(xué)家使用各種物理因素（震動(dòng)、倒置、針刺）和化學(xué)毒物處理雞蛋，產(chǎn)生了畸形小雞，有神經(jīng)管缺陷、無(wú)腦、脊柱裂、獨(dú)眼、心臟缺陷、位置顛倒和聯(lián)體雙胞胎等。他們還注意到作用時(shí)間在決定畸形類型方面比損傷的性質(zhì)更為重要。第7頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月20世紀(jì)早期20世紀(jì)早期發(fā)現(xiàn)多種環(huán)境因素（溫度、微生物毒素、藥物）可以干擾鳥(niǎo)、爬蟲(chóng)類、魚(yú)和兩棲類的發(fā)育。開(kāi)始人們以為哺乳動(dòng)物胚胎對(duì)致畸因子具有耐受性，要么直接致死，要么受母體的保護(hù)，對(duì)胚胎沒(méi)什么影響。1935年，Hale首次報(bào)道維生素A缺乏誘導(dǎo)母豬產(chǎn)下突眼和腭裂的畸形后代。此后又有一些研究發(fā)現(xiàn)母體營(yíng)養(yǎng)缺乏和許多環(huán)境因素，如氮芥、錐藍(lán)、激素、抗代謝藥、烷化劑、缺氧和X射線等可以引起哺乳動(dòng)物畸形。第8頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月重大歷史事件1940年澳大利亞發(fā)生風(fēng)疹大流行，次年出生嬰兒中先天性白內(nèi)障、耳聾、智力發(fā)育不全和先天性心臟病的發(fā)生率顯著增高。1945年日本廣島、長(zhǎng)崎受原子彈核輻射的胎兒出生后患小頭畸形和智力低下，嬰兒一年內(nèi)死亡率高達(dá)25%。1950年日本水俁灣甲基汞中毒發(fā)生先天性水俁病。1960～1962年間沙利度胺作為抗妊娠反應(yīng)藥物應(yīng)用后，出現(xiàn)8000例海豹畸形兒，表現(xiàn)為四肢短缺陷、無(wú)眼、腭裂、骨骼發(fā)育不全、十二指腸和肛門閉鎖等。1968年日本多氯聯(lián)苯污染米糠油事件，孕婦出現(xiàn)死產(chǎn)、早產(chǎn)或產(chǎn)下“油癥兒”。第9頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月重大歷史事件1969年發(fā)現(xiàn)，母親妊娠18周前服用己烯雌酚，可誘發(fā)女性后代青春期陰道和宮頸透明細(xì)胞癌；男性后代則發(fā)生附睪囊腫、睪丸囊性硬結(jié)、小陰莖畸形及精子異常等。1970年Jone等描述了胎兒酒精綜合征，包括面部畸形、宮內(nèi)和產(chǎn)后生長(zhǎng)遲緩、精神運(yùn)動(dòng)和智力發(fā)育障礙及其他畸形。孕期吸煙也可能引起不良妊娠結(jié)局，包括流產(chǎn)、圍生期死亡、嬰兒猝死綜合征的危險(xiǎn)性增加，學(xué)習(xí)和行為及注意力障礙，低出生體重等?？煽ㄒ虮┞犊梢鸲喾N不良發(fā)育效應(yīng)，如胎盤(pán)早期剝離、早產(chǎn)和流產(chǎn)、小腦畸形、異常前腦發(fā)育、低出生體重、新生兒異常睡眠綜合征、震顫、泌尿生殖道畸形等。酒精綜合征第10頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)育毒理學(xué)在經(jīng)歷了一系列重大事件后，人們對(duì)先天出生缺陷與環(huán)境因子之間的關(guān)系才有了深刻的認(rèn)識(shí)，與此同時(shí)，發(fā)育毒理學(xué)也得到迅速地發(fā)展。第11頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第12頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月馬丁·施奈德斯是荷蘭第一個(gè)“反應(yīng)停兒童”第13頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月美國(guó)反應(yīng)停受害女孩第14頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第15頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第16頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第17頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第18頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月浙江某藥廠一女工產(chǎn)后100天的女孩她只有一個(gè)半手指（2003）第19頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月是研究發(fā)育中的生物體從受精卵、妊娠以及出生后直到性成熟期間，由于暴露于外源性理化因素而產(chǎn)生的各種發(fā)育異常及其機(jī)制，為理化因素的危險(xiǎn)度或安全性評(píng)價(jià)和預(yù)防措施提供依據(jù)的一門學(xué)科。發(fā)育毒理學(xué)developmentaltoxicology第20頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)育毒性的危害現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，人類成功妊娠結(jié)局的比率很低，只有不到半數(shù)的受孕能產(chǎn)生完全正常的健康嬰兒。美國(guó)的統(tǒng)計(jì)資料表明，著床后丟失（流產(chǎn)和死胎）占31%，著床前丟失（早早孕丟失）的比例更高。嬰兒出生時(shí)有嚴(yán)重畸形的占2%～3%（到1歲時(shí)因診斷明確使該比率上升為6%～7%

），輕微畸形占14%，低出生體重占7%。1歲前嬰兒死亡率1.4%，神經(jīng)功能異常占16%～17%。我國(guó)29個(gè)省市，1986～1987年1234284例圍生兒調(diào)查結(jié)果，先天畸形率1.3%。以此推算，我國(guó)每年有30萬(wàn)～40萬(wàn)嚴(yán)重先天畸形兒出生，其中很大比例在一年內(nèi)死亡。第21頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月小結(jié)發(fā)育毒理學(xué)(developmentaltoxicology）是研究發(fā)育中的生物體從受精卵、妊娠以及出生后直到性成熟期間，由于暴露于外源性理化因素而產(chǎn)生的各種發(fā)育異常及其機(jī)制，為理化因素的危險(xiǎn)度或安全性評(píng)價(jià)和預(yù)防措施提供依據(jù)的一門學(xué)科。名詞解釋：第22頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)發(fā)育毒理學(xué)的基本原理第23頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、基本概念發(fā)育毒性developmentaltoxicity

指出生前后接觸有害因素，子代個(gè)體發(fā)育為成體之前誘發(fā)的任何有害影響。能造成發(fā)育毒性的物質(zhì)稱為發(fā)育毒物。發(fā)育毒性的主要表現(xiàn)：1.發(fā)育生物體死亡2.生長(zhǎng)改變3.結(jié)構(gòu)異常4.功能缺陷第24頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)育毒性的主要表現(xiàn)：1.發(fā)育生物體死亡：指受精卵未發(fā)育即死亡，或胚泡未著床即死亡，或著床后生長(zhǎng)發(fā)育到一定階段死亡。早期死亡被吸收或自子宮排出（即自然流產(chǎn)），晚期死亡成為死胎。2.生長(zhǎng)改變：一般指生長(zhǎng)遲緩。當(dāng)胎兒生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)低于正常對(duì)照的均值2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差時(shí)，可認(rèn)定為生長(zhǎng)遲緩。3.結(jié)構(gòu)異常：指胎兒形態(tài)結(jié)構(gòu)異常，即畸形。4.功能缺陷：包括生理、生化、免疫、行為、智力等方面的異常。功能缺陷往往要在出生后經(jīng)過(guò)相當(dāng)時(shí)間才被發(fā)現(xiàn)，如聽(tīng)力或視力障礙，生殖功能障礙等。另外，有時(shí)把子代對(duì)某些疾病的易感性增加也歸入發(fā)育毒性，如孕期接觸己烯雌酚，女性后代易患青春期陰道癌。近年來(lái)提出肥胖和糖尿病等成年疾病的胎源學(xué)說(shuō)更增加了這方面的例子。第25頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月胚體毒性（embryotoxicity）是指外源性理化因子對(duì)孕體著床前后直到器官形成期結(jié)束時(shí)的有害影響。胎體毒性或胎兒毒性（fetotoxicity）是指對(duì)孕體器官形成期結(jié)束以后的有害影響。胚胎毒性（embryo-fetaltoxicity）在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)育毒性試驗(yàn)中，往往籠統(tǒng)地將胚體毒性和胎兒毒性叫做胚體-胎體毒性或胚胎毒性。廣義地說(shuō)胚胎毒性包括孕體結(jié)構(gòu)和功能方面的各種損害，但一般情況下胚胎毒性是指孕體的死亡和生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，而不包括結(jié)構(gòu)畸形。一、基本概念第26頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月畸形（malformation）是發(fā)育生物體解剖學(xué)上形態(tài)結(jié)構(gòu)的缺陷。能引起畸形的環(huán)境因子叫致畸物或致畸原，致畸物引起畸形的過(guò)程和特性叫致畸作用和致畸性。變異（variation）指同一種屬的子代與親代之間或子代的個(gè)體之間，有時(shí)出現(xiàn)不完全相同的現(xiàn)象，一般是小的或次要的結(jié)構(gòu)改變。一、基本概念第27頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、基本概念出生缺陷（birthdefect）是指嬰兒出生前即已形成的發(fā)育障礙，包括畸形和功能缺陷。不良妊娠結(jié)局（adversepregnancyoutcomes）指妊娠后不能產(chǎn)生外觀和功能正常的子代，包括所有的不良結(jié)果，如流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)、宮內(nèi)生長(zhǎng)遲緩、發(fā)育異常、新生兒和嬰幼兒期死亡等。第28頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、Wilson發(fā)育毒理學(xué)基本原理（一）對(duì)致畸的易感性取決于孕體的基因型及其與有害環(huán)境因子相互作用的方式。（二）對(duì)致畸的易感性隨著對(duì)有害因素暴露的發(fā)育時(shí)期的不同而變化。（三）致畸物以特異的方式（作用機(jī)制）作用于發(fā)育的細(xì)胞和組織，啟動(dòng)一系列的異常發(fā)育事件（細(xì)胞病理機(jī)制）。（四）有害影響能否接近發(fā)育中的組織取決于有害影響本身的性質(zhì)。（五）異常發(fā)育的四種表型是：死亡、畸形、生長(zhǎng)遲緩和功能缺陷。（六）隨著劑量的增加，異常發(fā)育表型的頻率和程度也隨之增加，從無(wú)毒作用到全部致死。第29頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、Wilson發(fā)育毒理學(xué)基本原理（一）對(duì)致畸的易感性取決于孕體的基因型及其與有害環(huán)境因子相互作用的方式每種致畸物各有其易感物種和品系，易感性取決于機(jī)體的基因型。物種和品系的差異是因代謝變化、胎盤(pán)種類、胚體發(fā)育的速度和方式引起的。外源性化學(xué)物生物轉(zhuǎn)化成活性中間產(chǎn)物的速度和途徑與遺傳有關(guān)，而畸形僅發(fā)生在那些形成活化代謝物的物種中。例如反應(yīng)停4000mg/(kg·d)對(duì)大鼠和小鼠無(wú)致畸作用，而對(duì)人0.5~1.0mg/kg就有極強(qiáng)的致畸作用，這是由于人、猴和兔能將其代謝產(chǎn)生活性中間產(chǎn)物，而其他物種不能產(chǎn)生活性代謝產(chǎn)物。一種化學(xué)物在不同物種中的致畸作用，可能是不一致的，所以在篩選致畸物時(shí)，強(qiáng)調(diào)采用包括非嚙齒類在內(nèi)的兩種動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)，以減少因?qū)嶒?yàn)動(dòng)物不敏感而出現(xiàn)的假陰性。第30頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、Wilson發(fā)育毒理學(xué)基本原理（二）對(duì)致畸的易感性隨著對(duì)有害因素暴露的發(fā)育時(shí)期的不同而變化研究證明器官形成期是發(fā)生形態(tài)結(jié)構(gòu)畸形的關(guān)鍵期，即致畸敏感期。在器官形成期的細(xì)胞分化階段，要發(fā)生多種復(fù)雜易變的生物學(xué)事件，各種組織開(kāi)始快速的細(xì)胞分裂，同時(shí)胚體的代謝能力有限；此階段接觸發(fā)育毒物，最易發(fā)生結(jié)構(gòu)畸形，而一旦胚體的基本結(jié)構(gòu)業(yè)已形成，就很難再改變其結(jié)構(gòu)。人的器官形成期發(fā)生于妊娠的第3~8周。反應(yīng)停致畸事件就在懷孕后的20~35天內(nèi)，在無(wú)一般毒性的“安全劑量”[1mg/(kg·d)]下發(fā)生的，有的母親甚至在這階段內(nèi)只服過(guò)一次藥。第31頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、Wilson發(fā)育毒理學(xué)基本原理（二）對(duì)致畸的易感性隨著對(duì)有害因素暴露的發(fā)育時(shí)期的不同而變化此外，大多數(shù)器官都具有其特殊的致畸敏感期，即“靶窗”。形態(tài)畸形和功能缺陷的敏感期也各不相同。因此，致畸實(shí)驗(yàn)的染毒時(shí)間，必須安排在器官形成期，才有可能觀察到畸形。由于各物種妊娠期長(zhǎng)短不同，敏感期的長(zhǎng)短也不同，致畸試驗(yàn)的染毒時(shí)間需隨動(dòng)物種屬而異。第32頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、Wilson發(fā)育毒理學(xué)基本原理（二）對(duì)致畸的易感性隨著對(duì)有害因素暴露的發(fā)育時(shí)期的不同而變化在細(xì)胞分化之前接觸發(fā)育毒物，則要么導(dǎo)致胚體死亡，要么從損傷中完全恢復(fù)。胎體發(fā)育期是功能成熟的階段，此期接觸發(fā)育毒物，其主要表現(xiàn)為生長(zhǎng)遲緩、發(fā)育阻滯、生理功能紊亂和神經(jīng)行為異常。然而，若毒作用導(dǎo)致局部供血中斷，也同樣可引起結(jié)構(gòu)的退變即畸形。第33頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、Wilson發(fā)育毒理學(xué)基本原理（二）對(duì)致畸的易感性隨著對(duì)有害因素暴露的發(fā)育時(shí)期的不同而變化第34頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、Wilson發(fā)育毒理學(xué)基本原理（三）致畸物以特異的方式（作用機(jī)制）作用于發(fā)育的細(xì)胞和組織，啟動(dòng)一系列的異常發(fā)育事件（細(xì)胞病理機(jī)制）脊椎動(dòng)物的發(fā)育是一個(gè)循序漸進(jìn)、受到精細(xì)調(diào)節(jié)的過(guò)程，從細(xì)胞水平的生長(zhǎng)增殖到組織、器官系統(tǒng)水平的形態(tài)形成無(wú)不是有條不紊的依次完成。每個(gè)過(guò)程或水平的異常改變，均可永久性的改變發(fā)育過(guò)程。一般而言，發(fā)育毒物對(duì)發(fā)育中的胚體的最初效應(yīng)往往是發(fā)生于分子水平，并構(gòu)成該毒物影響發(fā)育的分子機(jī)制。其后的事件則包括細(xì)胞、組織及機(jī)體水平上的發(fā)育偏差，并構(gòu)成發(fā)育異常的細(xì)胞病理機(jī)制。由于脊椎動(dòng)物發(fā)育的復(fù)雜性，一種發(fā)育毒物可能通過(guò)多種機(jī)制在同一時(shí)間、對(duì)同一個(gè)生物體發(fā)揮作用，雖然有可能是某種機(jī)制發(fā)揮主要作用。同樣，發(fā)育毒物還可通過(guò)同種或不同的機(jī)制在不同的器官引發(fā)發(fā)育異常，導(dǎo)致多種畸形。第35頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、Wilson發(fā)育毒理學(xué)基本原理（四）有害影響能否接近發(fā)育中的組織取決于有害影響本身的性質(zhì)有害影響能否接近發(fā)育中的組織一方面與其能否經(jīng)胎盤(pán)轉(zhuǎn)移有關(guān)，另一方面與孕體對(duì)毒物的暴露模式有關(guān)。過(guò)去，人們認(rèn)為母胎血流之間的多層細(xì)胞和細(xì)胞間質(zhì)對(duì)胚體具有保護(hù)作用，并稱之為胎盤(pán)屏障。目前的研究則表明，這種保護(hù)頂多是一般性的，而胎盤(pán)膜事實(shí)上是一種超濾器。此外，還有多種化學(xué)物可利用胎盤(pán)對(duì)氨基酸和葡萄糖的特殊轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制，經(jīng)母體轉(zhuǎn)移進(jìn)入孕體。影響外源性化學(xué)物穿過(guò)胎盤(pán)的因素繁多，包括分子大小、荷電量、脂溶性、離子化程度、形成復(fù)合體、胎盤(pán)代謝和濃度梯度等。因此，胎盤(pán)僅能降低水溶性分子、大分子或電負(fù)性大的分子的轉(zhuǎn)運(yùn)；而X射線、超聲和射頻輻射等可不經(jīng)胎盤(pán)，直接從體外作用于孕體?；瘜W(xué)物的發(fā)育毒性不僅取決于胚體的總暴露量，更取決于暴露速率。因?yàn)楸┞端俾蔬^(guò)低，對(duì)細(xì)胞不能造成顯著的影響，同時(shí)胚體也有足夠的時(shí)間去修復(fù)損傷。第36頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、Wilson發(fā)育毒理學(xué)基本原理（五）異常發(fā)育的四種表型是：死亡、畸形、生長(zhǎng)遲緩和功能缺陷孕體死亡是指受精卵未發(fā)育即死亡，或胚泡未著床即死亡，或著床后生長(zhǎng)發(fā)育到一定階段死亡。早期死亡被吸收或自子宮排出（即自然流產(chǎn)），晚期死亡成為死胎。能引起胚體死亡和畸形的毒物多數(shù)能引起生長(zhǎng)遲緩。一般認(rèn)為胎體的生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)比正常對(duì)照的均值低2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差時(shí)，可認(rèn)定為生長(zhǎng)遲緩。胎鼠胸骨和枕骨骨化遲緩及低出生體重等是生長(zhǎng)遲緩的較敏感指標(biāo)。生長(zhǎng)遲緩造成的局部發(fā)育不全可視為畸形，如腦小畸形和眼小畸形等。功能缺陷則包括器官系統(tǒng)、生化、免疫等功能的變化。功能缺陷往往要在出生后經(jīng)過(guò)相當(dāng)時(shí)間才能診斷，如聽(tīng)力或視力異常、行為發(fā)育遲緩等。結(jié)構(gòu)異常是指胎體形態(tài)結(jié)構(gòu)的異常，即畸形。胚體死亡、畸形及生長(zhǎng)遲緩之間的關(guān)系相當(dāng)復(fù)雜，并且可隨受試化學(xué)物的種類、染毒時(shí)間及劑量不同而發(fā)生改變。第37頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、Wilson發(fā)育毒理學(xué)基本原理（六）隨著劑量的增加，異常發(fā)育表型的頻率和程度也隨之增加，從無(wú)毒作用到全部致死較大劑量致全窩胚胎死亡，一般劑量下正常、畸形和生長(zhǎng)遲緩共存。常見(jiàn)反應(yīng)模式。ABC在遠(yuǎn)低于胚胎致死劑量下即出現(xiàn)致畸，甚至全窩致畸，常伴有生長(zhǎng)遲緩。強(qiáng)致畸劑，少見(jiàn)。低劑量引起生長(zhǎng)遲緩，高劑量引起胚胎死亡。無(wú)畸形發(fā)生。發(fā)育毒性的劑量-反應(yīng)模式致畸作用的劑量反應(yīng)曲線較為陡峭第38頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)育毒性的影響因素1.機(jī)體因素：遺傳因素：種屬差異和個(gè)體差異2.化學(xué)物因素（1）化學(xué)物的理化性質(zhì)（2）化學(xué)物的作用時(shí)間（3）化學(xué)物的劑量自己總結(jié)第39頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、發(fā)育毒性的間接影響因素母體毒性胎盤(pán)毒性父源性發(fā)育毒性其他因素（一）（二）（三）（四）第40頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、發(fā)育毒性的間接影響因素(一)母體毒性母體毒性是指受試物對(duì)妊娠母體的有害效應(yīng)，母體毒性可能特異（直接）的或非特異（間接）的影響發(fā)育過(guò)程，導(dǎo)致發(fā)育毒性。影響發(fā)育毒性的母體因素包括：1.遺傳2.疾病3.營(yíng)養(yǎng)4.應(yīng)激第41頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、發(fā)育毒性的間接影響因素(一)母體毒性母體毒性與發(fā)育毒性之間的關(guān)系常見(jiàn)的有以下幾種：1.具有發(fā)育毒性，但無(wú)母體毒性，表示發(fā)育毒性有特定的機(jī)制，與母體毒性無(wú)關(guān)。如沙利度胺。這類化學(xué)物最容易被忽視也最危險(xiǎn)。2.出現(xiàn)發(fā)育毒性也出現(xiàn)母體毒性，尤其是當(dāng)發(fā)育毒性只在母體毒性存在時(shí)才能被觀察到的時(shí)候，發(fā)育效應(yīng)可能是間接的，往往不具有特定的致畸機(jī)制。許多已知的人類發(fā)育毒物，包括乙醇和可卡因，主要在母體毒性水平對(duì)胚胎/胎兒有有害影響，它們的發(fā)育毒性可能部分歸因于母體生理學(xué)紊亂的繼發(fā)效應(yīng)。如嗜酒者通常營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)不良，而且酒精影響營(yíng)養(yǎng)物的胎盤(pán)轉(zhuǎn)運(yùn)，可增強(qiáng)對(duì)孕體的直接效應(yīng)。3.具有母體毒性，但不具有致畸作用。這類物質(zhì)在妊娠期容易引起警覺(jué)，避而遠(yuǎn)之。4.在一定劑量下，既無(wú)母體毒性，也不表現(xiàn)發(fā)育毒性。第42頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、發(fā)育毒性的間接影響因素(二)胎盤(pán)毒性某些化學(xué)物可對(duì)胎盤(pán)造成損傷，改變胎盤(pán)血流量，降低胎盤(pán)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)，特異地干擾胎盤(pán)的內(nèi)分泌和代謝功能，間接地引起發(fā)育毒性。5-羥色胺引起的小鼠動(dòng)、靜脈狹窄，胎盤(pán)血流量減少，胎盤(pán)轉(zhuǎn)運(yùn)功能障礙，死胎和先天畸形。甲基汞可改變?nèi)颂ケP(pán)滋養(yǎng)層微絨毛對(duì)氨基酸的攝取，導(dǎo)致功能障礙（即先天性水俁?。?，患兒出現(xiàn)嚴(yán)重的神經(jīng)遲鈍、共濟(jì)失調(diào)、步行困難、語(yǔ)言和下咽障礙以及癲癇大發(fā)作。第43頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、發(fā)育毒性的間接影響因素(三)父源性發(fā)育毒性越來(lái)越多的人群流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)某些出生缺陷也與男性因素有關(guān)，被稱為父源性出生缺陷。引起父源性出生缺陷的因素主要有：遺傳缺陷年齡因素外界暴露因素第44頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、發(fā)育毒性的間接影響因素(三)父源性發(fā)育毒性有出生缺陷的男性，其后代出現(xiàn)出生缺陷的幾率是正常人群的2倍，甚至高于母親有出生缺陷的后代，其中患與父親相同缺陷的危險(xiǎn)性是正常人群的7倍。20~24歲的父親所生的后代，與25~29歲的父親所生的后代相比更容易得腹裂畸形，40歲以上父親所生的后代患13號(hào)染色體三體綜合征較少，但患乳腺癌的幾率增加。外界暴露因素包括職業(yè)和環(huán)境暴露、化療和放療、其他藥物以及飲酒、抽煙等不良嗜好。這些因子通過(guò)父親對(duì)發(fā)育個(gè)體產(chǎn)生不良影響，因此叫作父源性發(fā)育毒性。父源性暴露可以引起的子代發(fā)育異常包括流產(chǎn)、死胎、低出生體重、畸形、功能障礙等，甚至可能與兒童腫瘤相關(guān)。第45頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、發(fā)育毒性的間接影響因素(四)其他因素染毒途徑可影響致畸試驗(yàn)的結(jié)果，大鼠受孕等7~14天經(jīng)口給予EDTA，引起70%的胎鼠畸形，但以同樣劑量皮下注射，對(duì)母體毒性增加，卻未見(jiàn)明顯的胎鼠畸形。反應(yīng)停對(duì)大鼠灌胃不引起胎鼠畸形，而經(jīng)飼料染毒幾乎全部肧體致死。第46頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月小結(jié)發(fā)育毒性（developmentaltoxicity）指出生前后接觸有害因素，子代個(gè)體發(fā)育為成體之前誘發(fā)的任何有害影響?；危╩alformation）是發(fā)育生物體解剖學(xué)上形態(tài)結(jié)構(gòu)的缺陷。名詞解釋：第47頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月小結(jié)Wilson發(fā)育毒理學(xué)基本原理（一）對(duì)致畸的易感性取決于孕體的基因型及其與有害環(huán)境因子相互作用的方式。（二）對(duì)致畸的易感性隨著對(duì)有害因素暴露的發(fā)育時(shí)期的不同而變化。（三）致畸物以特異的方式（作用機(jī)制）作用于發(fā)育的細(xì)胞和組織，啟動(dòng)一系列的異常發(fā)育事件（細(xì)胞病理機(jī)制）。（四）有害影響能否接近發(fā)育中的組織取決于有害影響本身的性質(zhì)。（五）異常發(fā)育的四種表型是：死亡、畸形、生長(zhǎng)遲緩和功能缺陷。（六）隨著劑量的增加，異常發(fā)育表型的頻率和程度也隨之增加，從無(wú)毒作用到全部致死。第48頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)發(fā)育毒性的作用機(jī)制第49頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、異常發(fā)育的分子機(jī)制（一）干擾有絲分裂（二）能量供應(yīng)的改變（三）代謝酶的抑制（四）氧化應(yīng)激反應(yīng)（五）干擾核酸代謝（六）基因表達(dá)改變（七）基因突變與染色體畸變（八）細(xì)胞凋亡第50頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、異常發(fā)育的分子機(jī)制（一）干擾有絲分裂肧體發(fā)育過(guò)程中，細(xì)胞增殖率高，但協(xié)調(diào)有序。因此，干擾有絲分裂，即改變細(xì)胞增殖速率是化學(xué)物誘發(fā)發(fā)育異常的一種常見(jiàn)方式。同一組織器官中的各類細(xì)胞的分裂速率不同，導(dǎo)致某些細(xì)胞對(duì)化學(xué)物暴露尤為敏感。一般而言，延遲或阻斷細(xì)胞周期的各種理化因素均可干擾有絲分裂，而暴露毒物后引起的代償性分裂速率增加也同樣與致畸作用有關(guān)。影響細(xì)胞分裂的途徑包括：1.DNA合成的降低；2.干擾細(xì)胞質(zhì)的形成或分離；3.影響紡錘體的形成和維持?？鼓[瘤藥5-氟尿嘧啶抑制S期DNA合成，誘發(fā)結(jié)構(gòu)畸形。第51頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、異常發(fā)育的分子機(jī)制（二）能量供應(yīng)的改變肧體發(fā)育過(guò)程中，生物合成、增殖活動(dòng)旺盛，有氧代謝和氧化磷酸化也在妊娠過(guò)程中不斷增加，因此，改變肧體的能量供應(yīng)可引起發(fā)育異常。鎮(zhèn)靜和催眠藥物苯巴比妥通過(guò)抑制線粒體呼吸，可引起骨骼畸形、枕骨及胸骨骨化延遲。第52頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、異常發(fā)育的分子機(jī)制（三）代謝酶的抑制某些酶因?yàn)閰⑴c體內(nèi)的合成或氧化代謝，尤其是DNA和RNA的合成，可影響細(xì)胞的生長(zhǎng)與增殖，抑制其活性對(duì)肧體發(fā)育過(guò)程有較大的影響?？鼓[瘤藥甲氨蝶呤為二氫葉酸還原酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，宮內(nèi)接觸甲氨蝶呤可引起顱面部畸形、肢體變形和胎體生長(zhǎng)遲緩。第53頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、異常發(fā)育的分子機(jī)制（四）氧化應(yīng)激反應(yīng)用來(lái)治療癲癇發(fā)作及洋地黃引起的心律過(guò)快的苯妥英經(jīng)生物活化在親體和肧體的組織引起脂質(zhì)過(guò)氧化，蛋白質(zhì)氧化和蛋白質(zhì)降解，這些生物化學(xué)的變化可能是化學(xué)致畸的主要原因。第54頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、異常發(fā)育的分子機(jī)制（五）干擾核酸代謝DNA與RNA的合成及正常功能的發(fā)揮對(duì)肧體細(xì)胞的增殖異常重要，因此干擾核酸的代謝可引起發(fā)育毒性?？鼓[瘤藥羥基脲可抑制核糖核苷酸還原酶，從而抑制DNA的復(fù)制，并誘發(fā)大鼠肢體、腭、下頜及尾的畸形和肧體死亡。第55頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、異常發(fā)育的分子機(jī)制（六）基因表達(dá)改變發(fā)育過(guò)程中的基因表達(dá)具有特異性、協(xié)同性；因此，改變基因和蛋白質(zhì)的表達(dá)可導(dǎo)致嚴(yán)重的發(fā)育后果。除基因序列改變以外，非基因序列所致基因表達(dá)水平和基因功能的改變，即表觀遺傳學(xué)改變，也影響胚胎的發(fā)育。第56頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、異常發(fā)育的分子機(jī)制（六）基因表達(dá)改變有報(bào)道在培養(yǎng)的小鼠胚胎中用反義寡核苷酸探針抑制原癌基因Wnt-1或Wnt-3a的表達(dá)，都可產(chǎn)生中腦和后腦，或中腦、后腦和脊髓的畸形。孕鼠飼料中添加染料木黃酮等誘發(fā)DNA甲基化的化合物，可以改變子代皮毛的顏色。第57頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、異常發(fā)育的分子機(jī)制（七）基因突變與染色體畸變胚胎發(fā)育過(guò)程中基因起控制作用，而化學(xué)物可使基因正常的控制過(guò)程發(fā)生轉(zhuǎn)向，嚴(yán)重時(shí)胚胎發(fā)育可完全停止而死亡。已知的誘變劑往往有潛在致畸性，如電離輻射、烷化劑、亞硝酸鹽等；多數(shù)致癌物引起基因突變和染色體畸變，也有致畸作用。有報(bào)道染色體畸變占人類發(fā)育缺陷原因的3%左右。第58頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、異常發(fā)育的分子機(jī)制（八）細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡又叫程序性細(xì)胞死亡（PCD），指肧體在遺傳基因的控制下的特定類型的細(xì)胞死亡。PCD在肧體發(fā)育過(guò)程中可發(fā)揮多種作用，如為肧體提供合適的形態(tài)、除去殘留的結(jié)構(gòu)等。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞在發(fā)育過(guò)程中，約有半數(shù)需通過(guò)PCD清除，以構(gòu)建神經(jīng)連接網(wǎng)絡(luò)。由于PCD對(duì)正常的形態(tài)發(fā)生必不可少，因此，改變PCD的發(fā)生模式是致畸過(guò)程的一種重要機(jī)制；機(jī)體的畸形高發(fā)區(qū)，也常常是PCD的發(fā)生區(qū)域。第59頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、異常發(fā)育的分子機(jī)制（八）細(xì)胞凋亡二惡英可通過(guò)改變PCD的正常模式，而誘發(fā)畸形。小鼠肧體上顎架的中央上皮細(xì)胞通常于妊娠第14~16天停止分裂，對(duì)表皮生長(zhǎng)因子的反應(yīng)性也隨之降低；之后，中央上皮細(xì)胞與基底細(xì)胞脫離，絕大部分細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞凋亡途徑死亡。相反，在妊娠第10天接觸二惡英的上顎架持續(xù)表達(dá)表皮生長(zhǎng)因子受體，不發(fā)生上皮細(xì)胞的凋亡。第60頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、異常發(fā)育的細(xì)胞學(xué)機(jī)制（一）細(xì)胞死亡（二）細(xì)胞增殖（三）細(xì)胞信號(hào)通路的改變（四）影響細(xì)胞遷徙與分化第61頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、異常發(fā)育的細(xì)胞學(xué)機(jī)制（一）細(xì)胞死亡早期肧體細(xì)胞保留較大的分化多能性，因此，發(fā)生細(xì)胞死亡后所存留的細(xì)胞可恢復(fù)因細(xì)胞死亡帶來(lái)的細(xì)胞丟失，并對(duì)后期發(fā)育影響甚少。然而，當(dāng)細(xì)胞死亡數(shù)量超出肧體的恢復(fù)能力時(shí)，則導(dǎo)致肧體死亡或畸形。細(xì)胞死亡的病理學(xué)后果，既取決于受損細(xì)胞的特性和所處的位置，又取決于細(xì)胞死亡的程度與范圍。有很多化學(xué)物通過(guò)誘發(fā)受損的組織、器官的細(xì)胞死亡率增加，而引起發(fā)育異常。第62頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、異常發(fā)育的細(xì)胞學(xué)機(jī)制（一）細(xì)胞死亡不同的組織對(duì)細(xì)胞死亡的敏感性也各不相同，如前腦神經(jīng)上皮細(xì)胞對(duì)高熱引起的細(xì)胞死亡異常敏感，而心臟和卵黃囊則對(duì)細(xì)胞死亡具有耐受性。免疫抑制劑環(huán)磷酰胺等化學(xué)物定向作用于增殖的細(xì)胞，首先導(dǎo)致細(xì)胞周期的改變，進(jìn)而引起細(xì)胞凋亡。反之，維甲酸等發(fā)育毒物通過(guò)增加某些組織區(qū)已有的細(xì)胞程序性死亡，而引起發(fā)育異常。研究表明，接觸維甲酸引起正常細(xì)胞死亡區(qū)域的死亡率增加，過(guò)多的細(xì)胞死亡則導(dǎo)致脊柱裂、指（趾）缺陷、顱面畸形。第63頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、異常發(fā)育的細(xì)胞學(xué)機(jī)制（二）細(xì)胞增殖同細(xì)胞死亡一樣，細(xì)胞增殖速率下降可減少組織細(xì)胞的數(shù)量，并影響后期的生長(zhǎng)與分化。細(xì)胞增殖率下降既可能源于細(xì)胞周期進(jìn)程的趨緩，也可能源于生長(zhǎng)因子的缺乏、誘導(dǎo)因子的不足和細(xì)胞對(duì)外部因子反應(yīng)性的降低。研究表明，抗癲癇藥物丙戊酸、免疫抑制劑環(huán)磷酰胺等可通過(guò)干擾DNA合成而改變細(xì)胞周期的進(jìn)程。小鼠體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)，丙戊酸引起的細(xì)胞周期阻滯可能涉及神經(jīng)上皮核糖核苷酸還原酶的改變，并與丙戊酸引起的神經(jīng)管缺陷有關(guān)。第64頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、異常發(fā)育的細(xì)胞學(xué)機(jī)制（三）細(xì)胞信號(hào)通路的改變細(xì)胞信號(hào)通路是肧體模式形成及分化的基礎(chǔ)，也是決定發(fā)育毒物細(xì)胞病理機(jī)制的重要環(huán)節(jié)。信號(hào)通路通過(guò)分泌時(shí)空特異性分布的細(xì)胞產(chǎn)物來(lái)控制形態(tài)發(fā)生過(guò)程。其下游生物學(xué)事件通常為轉(zhuǎn)錄水平的改變，并導(dǎo)致靶細(xì)胞基因表達(dá)的變化。無(wú)論是改變信號(hào)分子的分泌，還是改變信號(hào)分子的轉(zhuǎn)導(dǎo)，均可引起形態(tài)發(fā)生過(guò)程的實(shí)質(zhì)性改變。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的改變通常包括受體、轉(zhuǎn)錄因子、下游信號(hào)分子等的表達(dá)和間隙連接的分布這兩個(gè)方面。第65頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、異常發(fā)育的細(xì)胞學(xué)機(jī)制（三）細(xì)胞信號(hào)通路的改變發(fā)育毒物可通過(guò)誘發(fā)分化誘導(dǎo)子的缺乏，通過(guò)誘發(fā)影響到細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖、死亡的靶細(xì)胞的缺失，通過(guò)信號(hào)分子生物合成的障礙，或通過(guò)干擾信號(hào)向靶細(xì)胞的傳遞，而改變形態(tài)發(fā)生過(guò)程中的細(xì)胞信號(hào)通路。實(shí)際上，多種環(huán)境化學(xué)物導(dǎo)致的出生缺陷的細(xì)胞病理機(jī)制都牽涉到細(xì)胞信號(hào)通路的改變。細(xì)胞毒藥物可改變多條信號(hào)通路，而某些受體介導(dǎo)的致畸原，如維甲酸，則僅改變特定的信號(hào)通路。維甲酸可改變小鼠肧體的AER-EGF-4-ZPA信號(hào)通路，進(jìn)而誘發(fā)肢體缺陷。第66頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、異常發(fā)育的細(xì)胞學(xué)機(jī)制（四）影響細(xì)胞遷徙與分化在肧體發(fā)育早期，神經(jīng)冠從神經(jīng)褶背側(cè)的神經(jīng)上皮發(fā)育而來(lái)。在囊胚分層及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的過(guò)程中，神經(jīng)冠細(xì)胞脫離神經(jīng)上皮，并開(kāi)始遷徙；其后經(jīng)過(guò)廣泛的遷徙，神經(jīng)冠細(xì)胞逐步分化為面部結(jié)締組織、外周神經(jīng)組織成分及黑素細(xì)胞等。由于神經(jīng)冠細(xì)胞的遷徙分化對(duì)多種組織器官的發(fā)育必不可少，若發(fā)育毒物干擾這一遷徙分化過(guò)程（如抑制細(xì)胞骨架的形成），勢(shì)必會(huì)造成肧體發(fā)育的廣泛性受損。例如，維甲酸通常要參與后腦神經(jīng)冠細(xì)胞命運(yùn)的確定過(guò)程，然而，在較高的濃度下，維甲酸可改變神經(jīng)冠細(xì)胞的特性，導(dǎo)致遷徙模式的變化和靶組織的結(jié)構(gòu)畸形。第67頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月維甲酸維A酸是體內(nèi)維生素A的代謝中間產(chǎn)物。適應(yīng)癥：尋常痤瘡、特別是黑頭粉刺皮損，老年性、日光性或藥物性皮膚萎縮，魚(yú)鱗病及各種角化異常及色素過(guò)度沉著性皮膚病、銀屑病。第68頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第四節(jié)發(fā)育毒性的評(píng)價(jià)第69頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)育毒性的評(píng)價(jià)流行病學(xué)調(diào)查動(dòng)物發(fā)育毒性試驗(yàn)發(fā)育毒性的預(yù)篩試驗(yàn)第70頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、發(fā)育毒性的流行病學(xué)調(diào)查流行病學(xué)研究的目的：尋找出生缺陷的原因有助于了解出生缺陷的發(fā)展趨勢(shì)引起公眾對(duì)出生缺陷的注意第71頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、動(dòng)物發(fā)育毒性試驗(yàn)主要試驗(yàn)方案：1.三段生殖毒性試驗(yàn)主要用于評(píng)價(jià)藥物的生殖發(fā)育毒性。1966年美國(guó)食品與藥品管理局（FDA）首先提出，后經(jīng)多次改進(jìn)，我國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）規(guī)定的新藥生殖發(fā)育毒性試驗(yàn)也參照此方案。2.一代和多代生殖毒性試驗(yàn)主要用于評(píng)價(jià)食品添加劑、農(nóng)藥及其他化學(xué)物的生殖發(fā)育毒性。由美國(guó)環(huán)境保護(hù)局（EPA）首先提出。3.改進(jìn)的大鼠發(fā)育神經(jīng)毒性的試驗(yàn)程序。1988年EPA發(fā)布。第72頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月連續(xù)、完整的生殖發(fā)育過(guò)程的六個(gè)階段A.從交配前到受孕：檢查成年雄性和雌性生殖功能、配子的發(fā)育與成熟、交配行為、受精。B.從受孕到著床：檢查成年雌性生殖功能、胚胎著床前發(fā)育、著床。C.從著床到硬腭閉合：檢查成年雌性生殖功能、肧體發(fā)育、主要器官形成。D.從硬腭閉合到妊娠結(jié)束：檢查成年雌性生殖功能、胎體的發(fā)育與生長(zhǎng)、器官的發(fā)育與生長(zhǎng)。E.從出生到斷乳：檢查成年雌性生殖功能、新生仔對(duì)宮外生活的適應(yīng)性、斷乳前的發(fā)育與生長(zhǎng)。F.從斷乳到性成熟：檢查斷乳后的發(fā)育與生長(zhǎng)、對(duì)獨(dú)立生活的適應(yīng)、達(dá)到完全的性功能。第73頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三段生殖毒性試驗(yàn)主要是根據(jù)以上發(fā)育階段的區(qū)別來(lái)設(shè)計(jì)的，每一段試驗(yàn)大致相當(dāng)于上述兩個(gè)階段。Ⅰ段：生育力和早期胚胎發(fā)育毒性試驗(yàn)（一般生殖毒性試驗(yàn)）Ⅱ段：肧體-胎體毒性試驗(yàn)（致畸試驗(yàn)）Ⅲ段：出生前后發(fā)育毒性試驗(yàn)（圍生期毒性試驗(yàn)）三段生殖毒性試驗(yàn)分別為第74頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2周第75頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Ⅰ段：生育力和早期胚胎發(fā)育毒性試驗(yàn)（一般生殖毒性試驗(yàn)）目的：評(píng)價(jià)受試物對(duì)配子成熟、交配行為、生育力、胚胎著床的影響（前述生殖周期的A和B階段）。給藥期：雄性從交配前4周開(kāi)始染毒，并持續(xù)至交配成功；雌性交配前2周開(kāi)始染毒（以覆蓋3~4個(gè)動(dòng)情周期），至妊娠第6天受精卵著床。第76頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Ⅱ段：肧體-胎體毒性試驗(yàn)（致畸試驗(yàn)）目的：評(píng)價(jià)自胚泡著床到硬腭閉合階段暴露受試物對(duì)妊娠母體和胚胎與胎仔發(fā)育的有害效應(yīng)。包括母體毒性、胚胎或胎兒死亡、生長(zhǎng)改變和結(jié)構(gòu)異常。給藥期：為著床期到硬腭閉合，即器官形成期；大、小鼠為受孕第6~15天，家兔為第6~18天。第77頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Ⅲ段：出生前后發(fā)育毒性試驗(yàn)（圍生期毒性試驗(yàn)）目的：評(píng)價(jià)母體從著床至斷乳期間接觸受試物對(duì)妊娠/哺乳母體和對(duì)胎仔及仔代直至性成熟的有害效應(yīng)。給藥期：著床期開(kāi)始，至仔鼠斷乳。大鼠孕15天至產(chǎn)后28天。第78頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、發(fā)育毒性的預(yù)篩試驗(yàn)（一）體外預(yù)篩試驗(yàn)（二）發(fā)育毒性的體內(nèi)預(yù)篩試驗(yàn)（C.K試驗(yàn)）第79頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、發(fā)育毒性的預(yù)篩試驗(yàn)（一）體外預(yù)篩試驗(yàn)體外發(fā)育毒性試驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)單，可嚴(yán)格控制試驗(yàn)條件，試驗(yàn)結(jié)果與整體動(dòng)物致畸試驗(yàn)有較好的相關(guān)性（有母體毒性者除外）。因此可利用體外試驗(yàn)方法作發(fā)育毒物的初篩，預(yù)測(cè)對(duì)整體動(dòng)物的發(fā)育毒性，發(fā)現(xiàn)毒作用的靶器官，或闡明發(fā)育毒性的作用方式和機(jī)制。體外試驗(yàn)系統(tǒng)使得快速篩選發(fā)育毒物成為可能，但體外模型缺乏發(fā)育過(guò)程的復(fù)雜性，試驗(yàn)結(jié)果外推到人類的發(fā)育毒性風(fēng)險(xiǎn)比整體動(dòng)物試驗(yàn)大。此外，體外系統(tǒng)大多有待標(biāo)準(zhǔn)化和認(rèn)證研究。第80頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、發(fā)育毒性的預(yù)篩試驗(yàn)（一）體外預(yù)篩試驗(yàn)1.大鼠全胚胎培養(yǎng)2.胚胎細(xì)胞微團(tuán)培養(yǎng)3.小鼠胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)第81頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、發(fā)育毒性的預(yù)篩試驗(yàn)（一）體外預(yù)篩試驗(yàn)1.大鼠全胚胎培養(yǎng)將嚙齒動(dòng)物胚胎移植到體外培養(yǎng)，其生長(zhǎng)與分化與在母體子宮內(nèi)發(fā)育的胚胎相似。第82頁(yè)，課件共93頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、發(fā)育毒性的預(yù)篩試驗(yàn)（一）體外預(yù)篩試驗(yàn)2.胚胎細(xì)胞微團(tuán)培養(yǎng)是孕期第11天的大鼠胚胎取得代表中樞神經(jīng)系統(tǒng)的原代中腦細(xì)胞微團(tuán)、肢芽區(qū)或其他區(qū)的細(xì)胞微團(tuán)，在培養(yǎng)瓶中分別加入不同濃度的受試物共同培養(yǎng)5天?？梢杂弥行约t染色判斷細(xì)胞存活；用Alcian藍(lán)染色判斷肢芽軟骨細(xì)胞分化數(shù)量；蘇木素染色判斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞分化數(shù)量。對(duì)結(jié)果進(jìn)行處理，