外源化學(xué)物的一般毒性作用

外源化學(xué)物的一般毒性作用第1頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1急性毒性作用新外源化合物首先需必須闡明其急性毒性的強(qiáng)度及特征。1.1基本概念1.2急性毒性試驗(yàn)的目的1.3急性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)1.4急性毒性替代試驗(yàn)1.5LD50應(yīng)用中的有關(guān)問題1.6急性毒性評(píng)價(jià)2023/7/102第2頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.1基本概念急性毒性（acutetoxicity）是指機(jī)體一次接觸或在24小時(shí)內(nèi)多次接觸外來化學(xué)物后所引起的快速劇烈的中毒效應(yīng)（結(jié)構(gòu)與功能變化）。一次接觸因給予途徑不同定義不同：口服和注射指瞬間將受試物給予機(jī)體；吸入和皮膚接觸指在特定期間內(nèi)（24小時(shí)）機(jī)體持續(xù)接觸受試物。2023/7/103第3頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.2急性毒性試驗(yàn)的目的確定受試物使一種或幾種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡的劑量水平（LD50，LD100，LD01

），以初步估計(jì)該化合物對(duì)人類毒害的危險(xiǎn)性。為進(jìn)一步的蓄積毒性試驗(yàn)、亞慢性與慢性毒性試驗(yàn)及特殊毒性試驗(yàn)提供劑量和判斷指標(biāo)的依據(jù)。闡明一種化合物的相對(duì)毒性、作用方式和特殊毒性表現(xiàn)，找出量-效關(guān)系，以便其毒性包括臨床癥狀、生理生化和病理變化、毒性性質(zhì)和可能的靶器官等有初步了解。為毒理學(xué)機(jī)制研究的初步探索。確定機(jī)體在環(huán)境中接觸的受試物侵入機(jī)體的途徑，研究受試物的代謝動(dòng)力學(xué)過程。研究受試物急性中毒的預(yù)防和急救治療措施。2023/7/104第4頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3急性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)1.3.1試驗(yàn)動(dòng)物的選擇1.3.2動(dòng)物分組及樣本例數(shù)1.3.3動(dòng)物喂養(yǎng)環(huán)境1.3.4劑量選擇1.3.5染毒途徑1.3.6試驗(yàn)周期1.3.7觀察指標(biāo)2023/7/105第5頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.1試驗(yàn)動(dòng)物的選擇原則是所選動(dòng)物應(yīng)使試驗(yàn)的結(jié)果能反映或預(yù)測(cè)人體接觸時(shí)的反應(yīng)。要求動(dòng)物健康，體重差異不超過10%，試驗(yàn)前應(yīng)禁食16小時(shí)。同時(shí)盡量選用飼養(yǎng)管理方便、成本低的動(dòng)物。1.3.1.1動(dòng)物種屬選擇1.3.1.2動(dòng)物品系選擇1.3.1.3動(dòng)物性別選擇1.3.1.4動(dòng)物年齡與體重選擇2023/7/106第6頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.1.1動(dòng)物種屬選擇嚙齒類動(dòng)物貓和犬豬和靈長(zhǎng)目2023/7/107第7頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月嚙齒類動(dòng)物因缺乏嘔吐反射而利于經(jīng)口接觸受試物的吸收，但不適于研究經(jīng)口能引起嘔吐的化學(xué)毒物的毒性。大鼠和小鼠繁殖力強(qiáng)、壽命短、食譜與人類似、便于分析比較明確的生物學(xué)指標(biāo)，且價(jià)格低、易管理。大鼠在代謝和毒性反應(yīng)上與人類較為接近，用于急性毒性試驗(yàn)占第一位。小鼠占第二位。家兔因盲腸較長(zhǎng)，經(jīng)口接觸毒物在腸道的吸收充分，結(jié)果往往毒性大于其他動(dòng)物。2023/7/108第8頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月貓和犬因試驗(yàn)成本較高，不適于樣本量大的試驗(yàn)如測(cè)定LD50。僅僅用來驗(yàn)證對(duì)毒性或?qū)κ茉囄锏亩拘?yīng)做深入研究時(shí)以及對(duì)某些毒作用的種屬敏感性進(jìn)行比較。貓和犬有高度發(fā)達(dá)的嘔吐反射系統(tǒng)，有催吐效應(yīng)的化合物在經(jīng)口接觸時(shí)應(yīng)注意。2023/7/109第9頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月豬和靈長(zhǎng)目豬的食譜及皮膚結(jié)構(gòu)與人接近，是一種用來估計(jì)外來化合物對(duì)人急性毒性危害水平較好的試驗(yàn)動(dòng)物。但其飼養(yǎng)管理不便，價(jià)貴，也不適于樣本量大的試驗(yàn)。靈長(zhǎng)目動(dòng)物在種系上與人類最接近，結(jié)果最能反映人體的反應(yīng)。但其價(jià)格昂貴，獲得較難?；静挥糜诩倍驹囼?yàn)。2023/7/1010第10頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.1.2動(dòng)物品系選擇動(dòng)物品系是指源于一個(gè)共同祖先而具有特定基因型的一群生物。不同品系的同種動(dòng)物，可對(duì)同一被檢物發(fā)生不同反應(yīng)，即存在品系差異。為了在同種動(dòng)物中減少這種遺傳特性所決定的品系差異，在毒性試驗(yàn)中，最好采用同品系動(dòng)物，即純種動(dòng)物。2023/7/1011第11頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.1.3動(dòng)物性別選擇性別的選擇依試驗(yàn)?zāi)康摹⒁蠖?。如需要著重觀察受試驗(yàn)物對(duì)雄性動(dòng)物生殖功能的影響，應(yīng)選用雄性動(dòng)物。如為受試物的致畸形試驗(yàn)作準(zhǔn)備，則可只選用雌性動(dòng)物。如一般地闡明受試物毒性的大小與性質(zhì)，則應(yīng)雌雄各半。2023/7/1012第12頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.1.4動(dòng)物年齡與體重選擇動(dòng)物年齡一般選用初成年者。最常用的是出生2-3月齡、體重分別為200克和20克左右的大、小鼠；犬則需喂養(yǎng)1年左右；豚鼠體重200-250克；家兔2000-2500克；貓1500-2000克。如需研究受試物急毒作用的年齡差別，則應(yīng)選用不同年齡組動(dòng)物。2023/7/1013第13頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.2動(dòng)物分組及樣本例數(shù)試驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)按年齡、性別和體重進(jìn)行分層隨機(jī)分組。隨機(jī)方法可用抽簽法和隨機(jī)數(shù)字表法，即先將動(dòng)物編號(hào)后，進(jìn)行抽簽或查隨機(jī)數(shù)字表。注意隨機(jī)不等于隨意！每組樣本例數(shù)小鼠10至20只，大鼠12至16只，家兔8至12只。2023/7/1014第14頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.3動(dòng)物喂養(yǎng)環(huán)境實(shí)驗(yàn)動(dòng)物喂養(yǎng)室室溫應(yīng)控制在22±3℃，家兔可控制在20±3℃，相對(duì)濕度30%-70%，無(wú)對(duì)流風(fēng)。每籠動(dòng)物數(shù)以不干擾動(dòng)物個(gè)體活動(dòng)及不影響試驗(yàn)觀察為度，必要時(shí)單籠喂養(yǎng)。飼養(yǎng)室采用人工晝夜為好，早6點(diǎn)至晚6點(diǎn)進(jìn)行12小時(shí)光照，其余時(shí)間黑暗。一般食用常規(guī)試驗(yàn)飼料，自由飲水。2023/7/1015第15頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.4劑量選擇一般采用查文獻(xiàn)和預(yù)試驗(yàn)（少量動(dòng)物試驗(yàn)），估計(jì)LD50的范圍。然后以此劑量為中間劑量，然后以4倍數(shù)上下各推兩個(gè)劑量組，共5組，使相鄰兩對(duì)數(shù)劑量的差值相等。如P90表6-3。2023/7/1016第16頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.5染毒途徑接觸途徑的選擇應(yīng)以人在生產(chǎn)生活環(huán)境中接觸該化合物的方式為出發(fā)點(diǎn)。主要有：1.3.5.1經(jīng)口接觸1.3.5.2經(jīng)呼吸道接觸1.3.5.3經(jīng)皮膚接觸2023/7/1017第17頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.5.1經(jīng)口接觸其是指將受試物經(jīng)口攝入或用機(jī)械直接送入胃的過程。具體包括：灌胃：接觸量和時(shí)間準(zhǔn)確，但操作相對(duì)不便。摻入飼料：是將受試物摻入飼料或飲水中，讓動(dòng)物自行攝入的方法，其操作簡(jiǎn)便，但接觸量和時(shí)間不夠準(zhǔn)確。吞咽膠囊：是將受試物裝入膠囊內(nèi)，放入動(dòng)物舌咽部迫使動(dòng)物咽下。本法操作不便，僅適于較大的動(dòng)物。2023/7/1018第18頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.5.2經(jīng)呼吸道接觸其適于在常溫、常壓下生產(chǎn)生活中以氣態(tài)、蒸汽態(tài)、氣溶膠、煙霧與粉塵狀態(tài)存在的受試物的急性毒性試驗(yàn)。具體接觸方式有：吸入（將試驗(yàn)動(dòng)物置于含有一定濃度的受試物的染毒柜或其它容器中，讓動(dòng)物自然吸入）和注入（將受試物直接注入試驗(yàn)動(dòng)物的氣管或肺內(nèi)）。該途徑接觸的持續(xù)時(shí)間可依據(jù)試驗(yàn)要求而定。毒性大的接觸時(shí)間可短些，毒性小的可長(zhǎng)些。國(guó)內(nèi)一般在求LC50時(shí)為2小時(shí)。2023/7/1019第19頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.5.3經(jīng)皮膚接觸液態(tài)、粉塵態(tài)和氣態(tài)外來化學(xué)物均有接觸皮膚的機(jī)會(huì)。不僅與外露皮膚接觸并被吸收，有的還能穿透衣服經(jīng)皮膚吸收。外來化學(xué)物經(jīng)皮膚吸收是指角質(zhì)層完整的皮膚，若皮膚破損，化學(xué)物經(jīng)真皮直接吸收，而與靜脈吸收的機(jī)制相似。2023/7/1020第20頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.6試驗(yàn)周期急性毒性試驗(yàn)除計(jì)算受試物的LD50/LC50外，還需要通過觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的中毒癥狀判斷受試物的毒作用性質(zhì)，推斷中毒的靶器官等。因此，試驗(yàn)周期一般為2周。2023/7/1021第21頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.7觀察指標(biāo)應(yīng)根據(jù)急毒試驗(yàn)的目的來確定觀察指標(biāo)。1.3.7.1致死量/濃度1.3.7.2中毒癥狀1.3.7.3死亡及其時(shí)間1.3.7.4體重1.3.7.5其他指標(biāo)2023/7/1022第22頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.7.1致死量/濃度常用LD50/LC50。其計(jì)算一般采用改良寇氏（k?rber）法：

LD50=log－1[Xm－i(∑Pi－0.5)]Xm為最大劑量的對(duì)數(shù)；i為相鄰兩對(duì)數(shù)劑量之差的絕對(duì)值；∑Pi為各組陽(yáng)性反應(yīng)率的總和。毒性較大的用LD5/LC5。毒性劇烈的用LD1/LC1。2023/7/1023第23頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.7.2中毒癥狀在急性毒性試驗(yàn)中，動(dòng)物的中毒癥狀及死亡一般出現(xiàn)在給予受試物24-48小時(shí)內(nèi)，故觀察1周即可。如中毒反應(yīng)出現(xiàn)較遲，主要在給受試物后48小時(shí)-4天，則觀察期也應(yīng)相應(yīng)延長(zhǎng)至2-4周。特別在48-72小時(shí)內(nèi)要仔細(xì)觀察各劑量組動(dòng)物的一般反應(yīng)、臨床表現(xiàn)、死前表現(xiàn)及這些反應(yīng)出現(xiàn)的時(shí)間。具體觀察指標(biāo)見P123表6-1。2023/7/1024第24頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.7.3死亡及其時(shí)間觀察試驗(yàn)動(dòng)物接觸受試物后的死亡過程有利于探討其中毒機(jī)制或死因。在同系化學(xué)物中，有些在致死量下表現(xiàn)出動(dòng)物先興奮后抑制，死亡時(shí)發(fā)生抽搐；而有的則只引起抑制癥狀，表現(xiàn)精神萎靡、反應(yīng)遲鈍，并在抑制狀態(tài)下慢慢死亡，表明同系物之間的毒作用有差別。2023/7/1025第25頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.7.4體重在急毒試驗(yàn)中對(duì)于存活動(dòng)物尤其是低于LD50組的動(dòng)物，應(yīng)觀察動(dòng)物體重變化，以便了解受試物引起的中毒效應(yīng)是短暫的還是較長(zhǎng)期的。盡管引起動(dòng)物體重下降或增長(zhǎng)率減慢的原因較為復(fù)雜，如受試物影響食欲或消化系統(tǒng)功能而使動(dòng)物厭食或拒食可使體重下降，受試物可能會(huì)引起腹瀉而引起食物的吸收利用也可導(dǎo)致體重下降。影響腎功能可使水鹽代謝的紊亂而可影響體重。2023/7/1026第26頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3.7.5其他指標(biāo)根據(jù)上述某些指標(biāo)的陽(yáng)性結(jié)果可進(jìn)一步擴(kuò)大觀察項(xiàng)目，如測(cè)定體溫、心電、腦電等生理學(xué)指標(biāo)或某些生化指標(biāo)，有利于深入探討受試物的毒作用特征。對(duì)死亡動(dòng)物要取部分組織進(jìn)行病理解剖學(xué)檢查，記錄各器官系統(tǒng)肉眼可見的病變；停止觀察后也應(yīng)抽取部分存活的動(dòng)物進(jìn)行病理解剖學(xué)檢查。病理解剖學(xué)檢查對(duì)遲發(fā)性死亡動(dòng)物，尤其是發(fā)生雙峰死亡的現(xiàn)象是必要的。雙峰死亡指早期死亡較多，繼而減少，然后又出現(xiàn)大批死亡的現(xiàn)象。病理解剖學(xué)檢查對(duì)估計(jì)受試物的毒理作用有一定的意義，并可為亞慢性、慢性和其它毒性試驗(yàn)的設(shè)計(jì)提供依據(jù)。2023/7/1027第27頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.4急性毒性替代試驗(yàn)1.4.1固體劑量法（fixeddoseprocedure）1.4.2急性毒性分級(jí)法（acutetoxicclassmethod）1.4.3上下移動(dòng)法（階梯法，up/downmethod）2023/7/1028第28頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.4.1固定劑量法與經(jīng)典方法不同的是它不以動(dòng)物死亡作為觀察終點(diǎn)，可以利用預(yù)先選定的或固定的一系列劑量染毒，從而觀察化學(xué)物的毒性反應(yīng)來對(duì)化學(xué)物的毒性進(jìn)行分級(jí)。實(shí)踐證明可大量節(jié)省試驗(yàn)動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)選擇的劑量范圍是5、50、500mg/kg，最高限量是2000mg/kg。歐共體（EEC）的急性經(jīng)口毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)是：高毒（LD50＜25mg/kg），有毒（LD50為25-200mg/kg），有害（LD50為200-2000mg/kg），不分級(jí)（LD50＞2000mg/kg）4個(gè)等級(jí)。2023/7/1029第29頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.4.2急性毒性分級(jí)法它是以死亡為終點(diǎn)的分階段試驗(yàn)法，每階段3只動(dòng)物，根據(jù)死亡動(dòng)物數(shù)，平均2-4階段即可判定急性毒性。使用動(dòng)物數(shù)量少。首選大鼠進(jìn)行試驗(yàn)，在25、200、2000mg/kg中選擇一個(gè)劑量開始試驗(yàn)，并據(jù)其結(jié)果判斷：不需進(jìn)一步試驗(yàn)進(jìn)行分級(jí)；下階段以相同劑量的另一種性別試驗(yàn)；下階段以較高或較低的劑量水平進(jìn)行試驗(yàn)。動(dòng)物觀察14天，在染毒當(dāng)天觀察體征和死亡至少2次，之后每天觀察1次。染毒前和每周測(cè)體重，所有動(dòng)物進(jìn)行大體解剖，必要時(shí)進(jìn)行組織病理學(xué)檢查（病檢）。2023/7/1030第30頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.4.3上下移動(dòng)法它以死亡為終點(diǎn)但也可用于觀察不同的終點(diǎn)。特點(diǎn)是所需的動(dòng)物數(shù)更少。根據(jù)初步的資料確定第一個(gè)動(dòng)物接受化學(xué)物的劑量，由第一只動(dòng)物染毒后的反應(yīng)決定第二只動(dòng)物接受化學(xué)物的劑量，如果動(dòng)物死亡，則下一個(gè)劑量降低；如存活則下一個(gè)劑量增高。該方法需要選擇一個(gè)合適的劑量范圍，使大部分動(dòng)物所接受的化學(xué)物劑量都在真正的平均致死量左右。2023/7/1031第31頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.5LD50應(yīng)用中的有關(guān)問題LD50具有重要的毒理學(xué)意義：在藥物研究中，評(píng)價(jià)藥物急毒的大小，比較不同藥物毒性的大?。挥?jì)算藥物的治療指數(shù)；為后續(xù)的重復(fù)給藥毒理學(xué)試驗(yàn)提供劑量參考；比較不同途徑的LD50值，獲得生物利用度的信息；試驗(yàn)中毒量及其體征為臨床不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)提供參考。LD50的局限性：評(píng)價(jià)新藥及化學(xué)物時(shí)提供的信息較少，實(shí)用性有限；影響因素多，如性別、年齡、身體狀況及環(huán)境因素等；物種差異性影響大；經(jīng)典試驗(yàn)所需的動(dòng)物數(shù)量多。2023/7/1032第32頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.6急性毒性評(píng)價(jià)在生產(chǎn)、運(yùn)輸、貯存和銷售使用過程中也需要根據(jù)外來化學(xué)物的毒性分級(jí)，采取相應(yīng)的防護(hù)措施。為評(píng)價(jià)外來化學(xué)物急毒的強(qiáng)弱及對(duì)人類的潛在危害程度，國(guó)際上提出了化學(xué)物急毒的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)用以對(duì)急毒進(jìn)行評(píng)價(jià)。為便于比較化學(xué)物的毒性及有毒化學(xué)物的管理，國(guó)內(nèi)外根據(jù)LD50的大小提出了許多分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。WHO公布的《全球化學(xué)品統(tǒng)一分類和標(biāo)簽制度》（GHS）中關(guān)于急性毒性危險(xiǎn)類別和標(biāo)簽的要求見P125表6-2。注意：急毒不大，慢毒可能很大。因此不能將急毒分級(jí)與慢毒分級(jí)混淆。2023/7/1033第33頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2局部刺激試驗(yàn)?zāi)康脑谟诹私饣瘜W(xué)物對(duì)眼和皮膚的局部刺激性和腐蝕性。2.1眼刺激試驗(yàn)（eyeprimaryirritationtest）2.2皮膚原發(fā)性刺激試驗(yàn)（skinprimaryirritationtest）2.3皮膚致敏試驗(yàn)（skinsensitizationtest,allergiccontactdermatitistest）2023/7/1034第34頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.1眼刺激試驗(yàn)其觀察終點(diǎn)為眼刺激和眼腐蝕。眼刺激（eyeirritation）指眼前表面接觸受試物后產(chǎn)生的局部可逆性炎癥變化。眼腐蝕（eyecorrosion）指眼前表面接觸受試物后產(chǎn)生的局部不可逆性組織損傷。方法用Draize試驗(yàn)：家兔4只，滴眼后觀察結(jié)膜（紅、腫、分泌物）、角膜（混濁度及范圍）和虹膜（紅、腫）的反應(yīng)，按規(guī)定的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。一般觀察7天，必要時(shí)延長(zhǎng)至21天。2023/7/1035第35頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.2皮膚原發(fā)性刺激試驗(yàn)皮膚刺激（dermalirritation）指皮膚接觸受試物后產(chǎn)生的局部可逆性炎癥變化。皮膚腐蝕（dermalcorrosion）指皮膚接觸受試物后產(chǎn)生的局部不可逆性組織損傷。不宜進(jìn)行皮膚刺激試驗(yàn)的情況:構(gòu)效關(guān)系及理化性質(zhì)推測(cè)可能有腐蝕性物質(zhì);急毒經(jīng)皮試驗(yàn)有強(qiáng)系統(tǒng)毒性的物質(zhì);急毒經(jīng)皮試驗(yàn)染毒量達(dá)2000mg/kg仍未產(chǎn)生皮膚刺激體征的物質(zhì)。試驗(yàn)采用家兔或豚鼠，觀察時(shí)間應(yīng)足以觀察到可逆或不可逆刺激作用，一般不超過14天。影響試驗(yàn)的因素：皮膚的完整性受破壞；固態(tài)物的物理性狀；受試物在皮膚表面封閉染毒的嚴(yán)密程度；動(dòng)物的年齡與皮膚結(jié)構(gòu)的關(guān)系；種屬差異（一般敏感順序?yàn)椋和茫倦嗍螅救耍矩i）。2023/7/1036第36頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.3皮膚致敏試驗(yàn)皮膚致敏是一種對(duì)化學(xué)物免疫介導(dǎo)的皮膚反應(yīng)，人體這類反應(yīng)表現(xiàn)為：瘙癢、紅斑、水腫、丘疹、水皰等。試驗(yàn)動(dòng)物常選豚鼠。試驗(yàn)分兩個(gè)階段：誘導(dǎo)接觸（inductionexposure）：是以較低或中等濃度受試物對(duì)皮膚重復(fù)染毒（涂皮或皮下注射），一般需14天。激發(fā)接觸（challengeexposure）：是間隔10-14天后，用激發(fā)劑量（低于誘導(dǎo)時(shí)的劑量）受試物處理未染過毒的皮膚部位，然后觀察24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)后皮膚反應(yīng)。以皮膚反應(yīng)程度進(jìn)行評(píng)分，比較誘導(dǎo)及激發(fā)后皮膚反應(yīng)情況，以判斷受試物能否產(chǎn)生皮膚過敏反應(yīng)。2023/7/1037第37頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3蓄積毒性作用及其評(píng)價(jià)3.1基本概念3.2實(shí)驗(yàn)方法及其評(píng)價(jià)3.2.1蓄積系數(shù)法3.2.2生物半衰期法3.2.3蓄積率3.3相關(guān)機(jī)體耐受性2023/7/1038第38頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.1基本概念蓄積作用指反復(fù)多次接觸同一化學(xué)物時(shí)，因前次接觸時(shí)未完全自機(jī)體清除，使其多次接觸后在體內(nèi)的總量不斷增加的現(xiàn)象。蓄積性指化學(xué)物具有蓄積作用的性質(zhì)。貯庫(kù)指容易蓄積化學(xué)物的組織部位。常見的有血漿蛋白、脂肪組織、肝、腎及骨骼。蓄積作用一方面包括化學(xué)物在體內(nèi)量的增加，另一方面是組織結(jié)構(gòu)和功能改變的累積。2023/7/1039第39頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.2實(shí)驗(yàn)方法及其評(píng)價(jià)任何毒物都可在體內(nèi)蓄積。有些毒物分次進(jìn)入的量雖小，但長(zhǎng)期接觸仍可產(chǎn)生毒性；有些毒物雖然毒性較小，但大量接觸也可產(chǎn)生毒性。化學(xué)物在體內(nèi)的蓄積現(xiàn)象是發(fā)生慢性中毒的物質(zhì)基礎(chǔ)。蓄積毒性試驗(yàn)是檢測(cè)外來化學(xué)物蓄積性大小的試驗(yàn)，以了解某種外來化學(xué)物在體內(nèi)的蓄積情況和程度，并可為慢毒實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提供依據(jù)。短期試驗(yàn)（Short-termtest）指在數(shù)日內(nèi)（7-14天），每天使試驗(yàn)機(jī)體接觸一次受試物的試驗(yàn)。以探討較大劑量和較短時(shí)間的毒性作用。其與急性毒性試驗(yàn)不同。2023/7/1040第40頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.2.1蓄積系數(shù)法本法是一種生物效應(yīng)的試驗(yàn)方法。原理是在一定期限內(nèi)以低于致死量（LD50

）間隔分次給予受試動(dòng)物，直至出現(xiàn)預(yù)計(jì)的毒性效應(yīng)為止。計(jì)算達(dá)到預(yù)計(jì)效應(yīng)的總蓄積劑量，求出此蓄積劑量與一次接觸該化學(xué)物產(chǎn)生相同效應(yīng)所需劑量的比值-蓄積系數(shù)K：ED50（n）/ED50（l）n-多次接觸產(chǎn)生相同效應(yīng)的劑量總和；l-單次接觸產(chǎn)生相同效應(yīng)的劑量。K越大表明蓄積性越小。K＜1表示高度蓄積，1≤K＜3表示明顯蓄積，3≤K＜5表示中等蓄積，K≥5表示輕度蓄積。蓄積系數(shù)的具體試驗(yàn)方法有：固定劑量法定期遞增劑量法20天試驗(yàn)法2023/7/1041第41頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月固定劑量法先按常規(guī)方法測(cè)定LD50

。然后用另一批條件相同的動(dòng)物，分成2-4組，每組10-20只，雌雄各半。試驗(yàn)組每日定時(shí)定量（1/20-1/5LD50之間）并以相同途徑給予受試動(dòng)物，試驗(yàn)期間每日記錄動(dòng)物的蓄積死亡數(shù)至累計(jì)發(fā)生一半動(dòng)物死亡（異外死亡除外），即可計(jì)算K值。若接觸蓄積劑量已達(dá)到5個(gè)LD50量，也可停止試驗(yàn)，表明K大于5。單次接觸量應(yīng)根據(jù)動(dòng)物體重作相應(yīng)調(diào)整。試驗(yàn)期最長(zhǎng)100天（每次接觸量1/20LD50

），最短25天（每次接觸量1/5LD50

）。2023/7/1042第42頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月定期遞增劑量法在測(cè)出LD50后，同上法選擇相同條件的動(dòng)物，分為接觸組和對(duì)照組。試驗(yàn)以4天為一期，每天給相同劑量受試物。開始按1/10LD50給予。此后每期給予量按等比級(jí)數(shù)遞增1.5倍。連續(xù)接觸20天即可結(jié)束試驗(yàn)。若試驗(yàn)期中只要受試物引起一半動(dòng)物蓄積死亡，也可結(jié)束試驗(yàn)。2023/7/1043第43頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月20天試驗(yàn)法本法是我國(guó)對(duì)農(nóng)藥及食品安全性的毒理學(xué)評(píng)價(jià)中提出的方法。采用體重200克左右的成年大鼠，也可用小鼠。每個(gè)劑量組雌雄動(dòng)物各10只。各組受試物劑量分別為L(zhǎng)D50的1/20、1/10、1/5及1/2，另設(shè)對(duì)照組。每天染毒1次，連續(xù)20天，各組染毒累量可達(dá)1、2、4和10LD50

。再繼續(xù)觀察7天。若1/20LD50組有動(dòng)物死亡，且有量效關(guān)系，則為強(qiáng)蓄積性，應(yīng)放棄繼續(xù)試驗(yàn)。若到1/2LD50組才有動(dòng)物死亡，則為弱蓄積性。2023/7/1044第44頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.2.2生物半衰期法生物半衰期（t1/2）是指外來化學(xué)物在體內(nèi)消除一半所需要的時(shí)間。其可反應(yīng)化學(xué)物在體內(nèi)的蓄積量。蓄積量越大毒性反應(yīng)越強(qiáng)，但不一定呈平行關(guān)系。t1/2的測(cè)定可用作圖法，先求出消除速率常數(shù)K。即以時(shí)間為橫坐標(biāo)，一級(jí)動(dòng)力學(xué)消除物質(zhì)以血漿對(duì)數(shù)濃度為縱坐標(biāo)，零級(jí)動(dòng)力學(xué)消除物質(zhì)以血漿濃度為縱坐標(biāo)，其斜率為K。再根據(jù)不同動(dòng)力學(xué)消除特性求t1/2

：一級(jí)消除t1/2=0.693/k；零級(jí)消除=0.5C0/K。多數(shù)物質(zhì)以一級(jí)消除。有零級(jí)消除特性的物質(zhì)在接觸量很小時(shí)，也以一級(jí)消除，但累積到一定程度后轉(zhuǎn)變?yōu)榱慵?jí)消除。除吸入接觸外，蓄積極限值可按下列公式估計(jì)：L=1.44X每日吸收量Xt1/2

（日）。2023/7/1045第45頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.2.3蓄積率蓄積率是指在一定時(shí)間內(nèi)，外來化學(xué)物在體內(nèi)的蓄積量與同一期進(jìn)入機(jī)體總量的百分比。其越高該化學(xué)物的蓄積性越大。其測(cè)定可用化學(xué)測(cè)定法測(cè)定，但較困難。實(shí)際采用生物測(cè)量法進(jìn)行測(cè)定：將動(dòng)物分為試驗(yàn)組和對(duì)照組。試驗(yàn)組先在一定時(shí)期（蓄積期）內(nèi)每日給予一定量的受試物，但不得有動(dòng)物死亡。蓄積一定量后同時(shí)與對(duì)照組進(jìn)行LD50的測(cè)定，再按下列公式計(jì)算蓄積率。蓄積率=（對(duì)照組LD50-試驗(yàn)組LD50

）/蓄積期試驗(yàn)組給予受試物的總量2023/7/1046第46頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.3相關(guān)機(jī)體耐受性耐受性是指在一定劑量下未出現(xiàn)或出現(xiàn)程度較預(yù)期低的反應(yīng)的現(xiàn)象。在蓄積試驗(yàn)中，有時(shí)常于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)將存活的動(dòng)物給予一次沖擊劑量（一般為L(zhǎng)D50

），然后與未進(jìn)行預(yù)先化學(xué)處理的對(duì)照組的死亡率進(jìn)行比較，以確定是否具有耐受性。若試驗(yàn)組較對(duì)照組的死亡率低，則具有一定的耐受性，若高于或與對(duì)照組的死亡無(wú)差別，則無(wú)耐受性。蓄積性與耐受性往往同時(shí)存在，有些以蓄積性為主，而有些以耐受性為主。2023/7/1047第47頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4亞慢性和慢性毒性作用及其評(píng)價(jià)4.1基本概念及試驗(yàn)?zāi)康?.2亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)4.3慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)4.4亞慢性、慢性毒性作用評(píng)價(jià)2023/7/1048第48頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.1基本概念及試驗(yàn)?zāi)康?.1.1亞慢性、慢性毒性作用的概念4.1.2亞慢性毒性作用的試驗(yàn)?zāi)康?.1.3

慢性毒性作用的試驗(yàn)?zāi)康?023/7/1049第49頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.1.1亞慢性、慢性毒性作用的概念亞慢性毒性作用指試驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)多日接觸較大劑量的外來化學(xué)物所出現(xiàn)的中毒效應(yīng)。連續(xù)多日約相當(dāng)于受試動(dòng)物壽命的1/30-1/10。一般環(huán)境毒理學(xué)和食品毒理學(xué)要求連續(xù)接觸3-6個(gè)月，工業(yè)毒理學(xué)要求3個(gè)月。呼吸道接觸主張30-90天試驗(yàn)，每天6小時(shí)，每周5天；皮膚接觸試驗(yàn)為30天。較大劑量上限應(yīng)小于急毒試驗(yàn)的LD50

。慢性毒性作用指以低劑量外來化學(xué)物長(zhǎng)期給予試驗(yàn)動(dòng)物接觸，其對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。2023/7/1050第50頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.1.2亞慢性毒性作用的試驗(yàn)?zāi)康哪康闹饕菫槁驹囼?yàn)提供設(shè)計(jì)依據(jù)：探討試驗(yàn)動(dòng)物長(zhǎng)期接觸外來化學(xué)物可引起有害效應(yīng)的劑量，以估計(jì)該化學(xué)物慢性接觸的危險(xiǎn)性，為進(jìn)一步進(jìn)行慢毒試驗(yàn)提供接觸劑量的設(shè)計(jì)范圍；探討亞慢性毒性的閾劑量/濃度，確定對(duì)動(dòng)物的毒作用性質(zhì)、發(fā)生毒效應(yīng)的類型和靶器官，并初步確定最大無(wú)作用量，從而確定慢性毒性作用的觀察指標(biāo)；根據(jù)亞慢性毒性的閾劑量和無(wú)作用量，估計(jì)慢性接觸的危險(xiǎn)性，為接觸該化學(xué)物的安全限量標(biāo)準(zhǔn)提供初步依據(jù)，以確定是否需進(jìn)一步進(jìn)行慢毒試驗(yàn)；了解受試物對(duì)動(dòng)物繁殖及對(duì)子代的致畸作用，為評(píng)價(jià)受試物能否應(yīng)用于食品提供依據(jù)。2023/7/1051第51頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.1.3

慢性毒性作用的試驗(yàn)?zāi)康穆驹囼?yàn)是外來化學(xué)物一般毒性評(píng)價(jià)程序中最后階段的觀察，其目的是為了評(píng)價(jià)動(dòng)物長(zhǎng)期接觸某受試物后可能出現(xiàn)的毒性作用，尤其是進(jìn)行性或不可逆的毒性作用以及致癌作用，以確定外來化學(xué)物的毒性下限，即長(zhǎng)期接觸該化學(xué)物可以引起機(jī)體危害的閾劑量和最大無(wú)作用量，為最終評(píng)價(jià)受試物能否應(yīng)用于食品提供依據(jù)，為進(jìn)行該受試物的危險(xiǎn)評(píng)價(jià)與制定人接觸該物質(zhì)的安全限量提供毒理學(xué)依據(jù)，如最高允許濃度和每日允許攝入量等。2023/7/1052第52頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.2亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)4.2.1試驗(yàn)動(dòng)物的選擇4.2.2試驗(yàn)動(dòng)物的喂養(yǎng)環(huán)境4.2.3劑量的選擇與分組4.2.4染毒途徑4.2.5試驗(yàn)周期4.2.6觀察指標(biāo)2023/7/1053第53頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.2.1試驗(yàn)動(dòng)物的選擇原則上要求對(duì)受試物代謝過程基本與人類相似,應(yīng)當(dāng)是急性毒性試驗(yàn)已證明的對(duì)受試物敏感的種屬和品系,同時(shí)還應(yīng)考慮與慢性毒作用試驗(yàn)中預(yù)計(jì)使用的動(dòng)物種屬和品系相同。若無(wú)法掌握這一情況，則應(yīng)有兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，一種為嚙齒類，另一為非嚙齒類，以便了解受試物毒性特征。也應(yīng)參考觀察指標(biāo)的需要而選擇，如需多次抽血檢查則不宜用小鼠。性別選擇一般雌雄兼用，特殊試驗(yàn)可選用單性別動(dòng)物。如對(duì)性腺影響試驗(yàn)。年齡選擇大鼠4周，重50克；小鼠3周，重10克。2023/7/1054第54頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.2.2試驗(yàn)動(dòng)物的喂養(yǎng)環(huán)境在亞慢性試驗(yàn)期間，動(dòng)物飼養(yǎng)條件及環(huán)境可能影響毒性效應(yīng)，應(yīng)注意營(yíng)養(yǎng)平衡和環(huán)境的穩(wěn)定，必須有營(yíng)養(yǎng)合理的飼料、充足干凈的飲水和清潔的生活環(huán)境。并保持適宜的溫度和濕度，以保證動(dòng)物健康。當(dāng)受試驗(yàn)物在飼料中的比例較高（大于5%）時(shí)，須考慮其可食性及營(yíng)養(yǎng)平衡問題，還要避免經(jīng)胃腸代謝后的毒物又被動(dòng)物攝取而影響試驗(yàn)結(jié)果。不同物種的動(dòng)物應(yīng)分室飼養(yǎng)，籠具要保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可自由活動(dòng)，必要時(shí)單籠飼養(yǎng)，且應(yīng)有人工晝夜設(shè)施。2023/7/1055第55頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.2.3劑量的選擇與分組所選劑量上限應(yīng)在試驗(yàn)期不引起動(dòng)物死亡或個(gè)別死亡，但要有明顯的中毒效應(yīng)或靶器官出現(xiàn)明顯損傷?？蓞⒖技倍驹囼?yàn)的閾劑量為其上限，也可用1/20-1/5LD50。亞慢性試驗(yàn)應(yīng)求量-效關(guān)系，因此至少設(shè)置3-4個(gè)劑量組、1個(gè)正常對(duì)照組，必要時(shí)加1個(gè)溶劑對(duì)照組。每組動(dòng)物大鼠20-40只、家兔10-20只、狗6-8只、猴2-4只，若試驗(yàn)中期需處死部分動(dòng)物作病理解剖檢查時(shí)應(yīng)相應(yīng)增加動(dòng)物例數(shù)。2023/7/1056第56頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.2.4染毒途徑染毒途徑先要盡量模擬人類在環(huán)境中接觸該受試物的途徑和方式，其次應(yīng)與后來預(yù)期要進(jìn)行的慢毒試驗(yàn)的接觸途徑一致。經(jīng)口接觸一般采用飼喂法。但應(yīng)注意動(dòng)物厭食或拒食。經(jīng)呼吸道吸入接觸的時(shí)間隨所接觸受試物而定，如為工業(yè)毒物可接觸1-4小時(shí)，環(huán)境污染則可適當(dāng)延長(zhǎng)至4-8小時(shí)。每日接觸受試物應(yīng)定時(shí)，以減小接觸量和反應(yīng)誤差。2023/7/1057第57頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.2.5試驗(yàn)周期試驗(yàn)周期一般占實(shí)驗(yàn)動(dòng)物壽命的1/10。因?yàn)椴煌瑒?dòng)物的壽命不同導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)周期有所不同，從幾個(gè)月至1年不等。一般對(duì)長(zhǎng)周期、經(jīng)常接觸的受試物可選擇90天試驗(yàn)周期，而對(duì)階段性接觸的受試物可選擇30天。2023/7/1058第58頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.2.6觀察指標(biāo)亞慢性試驗(yàn)中觀察指標(biāo)比較廣泛，其選擇十分重要。常根據(jù)急性、蓄積性試驗(yàn)提供的線索及相關(guān)資料，選擇一些特異和非特異指標(biāo)，包括一般性指標(biāo)、血液和行為學(xué)檢查、生理生化指標(biāo)、病理解剖學(xué)與病理組織學(xué)檢查及器官系數(shù)測(cè)定等。4.2.6.1一般指標(biāo)4.2.6.2病理學(xué)檢查4.2.6.3特異指標(biāo)2023/7/1059第59頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.2.6.1一般指標(biāo)為非特異指標(biāo)，是外來化學(xué)物對(duì)機(jī)體毒性作用的綜合性總體反映。主要包括：動(dòng)物體重：反映化學(xué)物對(duì)消化系統(tǒng)和代謝的影響。食物利用率：攝食量與體重的增長(zhǎng)比率。同樣反映化學(xué)物對(duì)消化系統(tǒng)和代謝的影響。癥狀：主要有毛色、眼分泌物、呼吸、神態(tài)及行為。臟器系數(shù)：臟器濕重與體重的比率。可反映具體受損的器官。一般生化指標(biāo)：主要是血象和肝腎功能指標(biāo)。2023/7/1060第60頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.2.6.2病理學(xué)檢查凡是在染毒過程中死亡的動(dòng)物，均應(yīng)即使解剖進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，必要時(shí)作組織化學(xué)或電鏡檢查。檢查時(shí)所選臟器應(yīng)參照急性毒性試驗(yàn)的臟器改變或亞慢性毒性試驗(yàn)的中毒癥狀而定。必要時(shí)可進(jìn)行所有臟器的病理組織學(xué)檢查。2023/7/1061第61頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.2.6.3特異指標(biāo)特異指標(biāo)是指對(duì)機(jī)體亞慢性毒性作用本質(zhì)的特征性指標(biāo)。其與受試物的中毒機(jī)制密切相關(guān)。指標(biāo)選定一是全面分析受試物急性毒作用特征，初步發(fā)現(xiàn)主要危害的系統(tǒng)、器官和組織，來發(fā)現(xiàn)一些敏感或特異性指標(biāo)；另一方面是通過文獻(xiàn)檢索，參考一些化學(xué)物的同系物、某些特殊基團(tuán)具有的特定毒性，利用構(gòu)效關(guān)系的共性來選擇特異性指標(biāo)。2023/7/1062第62頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.3慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)慢毒試驗(yàn)是制定人體日允許攝入量所需的關(guān)鍵性資料。4.3.1試驗(yàn)動(dòng)物的選擇4.3.2試驗(yàn)動(dòng)物的喂養(yǎng)環(huán)境4.3.3劑量的選擇與分組4.3.4染毒途徑4.3.5試驗(yàn)期限4.3.6觀察指標(biāo)2023/7/1063第63頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.3.1試驗(yàn)動(dòng)物的選擇因慢毒試驗(yàn)為動(dòng)物的大部分生命周期甚至終身，因此只能選用生命周期較短(2~3年)的動(dòng)物。又要對(duì)飼養(yǎng)條件、生化系統(tǒng)、繁殖、自發(fā)性疾病均有比較系統(tǒng)的了解，故傳統(tǒng)上選用大鼠（3-4周，50-70克）、小鼠（3周，10-12克）。并要求品系明確一致（取決于被檢物的毒作用部位及毒劑量的總的敏感性，一般選對(duì)致癌物敏感的品系），雌雄各半。動(dòng)物數(shù)量要求與亞慢性毒性試驗(yàn)相似。2023/7/1064第64頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.3.2試驗(yàn)動(dòng)物的喂養(yǎng)環(huán)境飼養(yǎng)條件和飼養(yǎng)環(huán)境要求與亞慢性毒性試驗(yàn)相同，如應(yīng)保證試驗(yàn)動(dòng)物有溫濕度適宜的生活環(huán)境及合理的營(yíng)養(yǎng)。注意動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)成分可影響慢毒試驗(yàn)的結(jié)果，如半合成飼料可增加致癌物的敏感性，黃酮類及大蒜素相反。2023/7/1065第65頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.3.3劑量的選擇與分組試驗(yàn)分零劑量組、預(yù)期無(wú)作用劑量組、閾劑量組、發(fā)生輕微但有明確毒效應(yīng)劑量組和發(fā)生明顯的毒效應(yīng)甚至亞致使死水平劑量組，以求量效關(guān)系。必要時(shí)加溶劑對(duì)照組。劑量選擇參考：①亞慢毒試驗(yàn)結(jié)果：高劑量組為1/5-1/2閾劑量，輕微毒效應(yīng)組為1/20-1/10閾劑量，慢毒閾劑量組為1/50-1/20閾劑量，預(yù)期無(wú)作用劑量組為1/10最大無(wú)作用量、1/100閾劑量或10-50倍人群實(shí)際最大攝入量。②急毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果：高劑量組為1/10LD50，慢毒閾劑量組為1/100LD50，預(yù)期無(wú)作用劑量組為1/1000LD50。③美國(guó)環(huán)保局建議：0.125MTD和0.25MTD。MTD(最大耐受量):試驗(yàn)組動(dòng)物較對(duì)照組動(dòng)物體重減輕不超過10%、無(wú)死亡、無(wú)中毒癥狀和病理?yè)p傷的最大量。2023/7/1066第66頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.3.4染毒途徑慢毒試驗(yàn)多采用經(jīng)胃腸道與呼吸道接觸。經(jīng)胃腸道接觸一般將受試物與食物或飲水混合，由動(dòng)物自然攝入。但若受試物有異味或易水解時(shí)可采用每日定時(shí)灌胃。經(jīng)呼吸道接觸，依試驗(yàn)要求定每日接觸時(shí)間，如為工業(yè)毒物的試驗(yàn)通常要求每日吸入4-6小時(shí)，如為環(huán)境污染物一般要求每日吸入8小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間。2023/7/1067第67頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.3.5試驗(yàn)期限其依試驗(yàn)的要求和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種類而定。使用大、小鼠時(shí)，工業(yè)毒理學(xué)要求6個(gè)月；食品和環(huán)境毒理學(xué)一般要求1年以上至2年。若與致癌試驗(yàn)結(jié)合進(jìn)行，則最好長(zhǎng)達(dá)接近動(dòng)物的預(yù)期壽命，甚至終生。有人認(rèn)為大鼠90天試驗(yàn)即可確定慢性無(wú)作用水平；也有主張終生接觸才能全面反映受試物的慢毒效應(yīng)及求出閾劑量或無(wú)作用量。2023/7/1068第68頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.3.6觀察指標(biāo)應(yīng)以亞慢毒試驗(yàn)的觀察指標(biāo)為基礎(chǔ)，選擇亞慢毒試驗(yàn)中已呈現(xiàn)有意義的變化指標(biāo)。一般常規(guī)觀察指標(biāo)包括肝、腎功能，健康狀況、體重、血液及其它生化指標(biāo)。對(duì)死亡動(dòng)物及試驗(yàn)結(jié)束時(shí)應(yīng)作病檢。為減小誤差和排除漏檢，應(yīng)注意：試驗(yàn)前應(yīng)對(duì)觀察指標(biāo)進(jìn)行正常值檢查，剔除差異大的動(dòng)物；觀察應(yīng)與對(duì)照組同步進(jìn)行并作對(duì)比；檢測(cè)方法應(yīng)穩(wěn)定，并有質(zhì)量控制；應(yīng)在不同間隔（于6、12、18個(gè)月）處死部分動(dòng)物檢測(cè)，以了解是否有進(jìn)行性和可逆性變化。2023/7/1069第69頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.4亞慢性、慢性毒性作用評(píng)價(jià)了解受試物毒性的大小及靶器官并找出敏感的毒效應(yīng)指標(biāo)，即最早出現(xiàn)在最低劑量組并與對(duì)照組比較差異有顯著性的毒效應(yīng)指標(biāo)。4.4.1基本評(píng)價(jià)參數(shù)4.4.2亞慢毒資料評(píng)價(jià)4.4.3慢毒資料評(píng)價(jià)4.4.4綜合結(jié)論2023/7/1070第70頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.4.1基本評(píng)價(jià)參數(shù)閾劑量是敏感毒效應(yīng)指標(biāo)出現(xiàn)改變的最小劑量（Limch)。用最低有害作用水平（lowestobservedadverseeffectlevel，LOAEL）或最小作用量（MED）表達(dá)。最大無(wú)作用量（maximalno-effectdose）是不引起機(jī)體某種毒效應(yīng)的最大劑量。用無(wú)明顯作用水平（NOEL）或無(wú)明顯有害水平（NOAEL）表達(dá)。LOAEL或NOAEL是評(píng)價(jià)化學(xué)物對(duì)機(jī)體損害的主要指標(biāo)，但應(yīng)注明動(dòng)物、試驗(yàn)條件及觀察指標(biāo)。以此為基本可制定化學(xué)物的接觸極限。2023/7/1071第71頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.4.2亞慢毒資料評(píng)價(jià)我國(guó)《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》中規(guī)定：亞慢毒試驗(yàn)中，最大無(wú)作用劑量小于或等于人可能攝入量的100倍，則表示毒性很強(qiáng)，應(yīng)放棄該化學(xué)物的使用；若最大無(wú)作用劑量在100-300倍之間，可進(jìn)行慢毒試驗(yàn)；若大于或等于300倍，則不必進(jìn)行慢毒試驗(yàn)，可直接進(jìn)行毒性評(píng)價(jià)。2023/7/1072第72頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.4.3慢毒資料評(píng)價(jià)如慢毒試驗(yàn)中未發(fā)現(xiàn)致癌性：最大無(wú)作用劑量小于或等于人群的可能攝入量的50倍，表示毒性較強(qiáng)，應(yīng)放棄該化學(xué)物的使用；最大無(wú)作用劑量在50-100倍之間者，需相關(guān)專家共同評(píng)議；最大無(wú)作用劑量大于或等于100倍者，則可考慮允許使用于食品，并制訂衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（限量）。若任何一個(gè)劑量組有致癌作用，且有量-效關(guān)系，多不允許用于食品。前述結(jié)合急毒試驗(yàn)結(jié)果，慢毒作用帶（Zch=Limac/Limch）越寬，慢毒風(fēng)險(xiǎn)越大，否則風(fēng)險(xiǎn)越小。2023/7/1073第73頁(yè)，課件共82頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.4.4綜合結(jié)論可能出現(xiàn)于食品中的外來化學(xué)物，在各種毒性試驗(yàn)中，一般都可表現(xiàn)出