微生物基礎(chǔ)知識(shí)及檢測(cè)技術(shù)培訓(xùn)班講義

微生物基礎(chǔ)知識(shí)及檢測(cè)技術(shù)培訓(xùn)班講義第1頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第一部分：基礎(chǔ)理論第2頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、食品中微生物的來(lái)源1.食品中微生物的八個(gè)主要來(lái)源：土壤、水——大腸桿菌、李斯特菌、弧菌、梭狀芽孢桿菌等植物產(chǎn)品——不動(dòng)桿菌、檸檬桿菌、腸桿菌、李斯特菌等器皿用具——芽孢桿菌、腸桿菌、腸球菌、嗜冷桿菌等動(dòng)物腸道——彎曲桿菌、腸桿菌、埃希氏菌、沙門(mén)氏菌等生產(chǎn)者——金葡菌、歐文氏菌、微球菌、李斯特菌等畜及畜代謝物——梭狀芽孢桿菌、乳球菌、明串珠菌等塵?！a(chǎn)堿菌、芽孢桿菌、梭狀芽孢桿菌、類(lèi)芽孢桿菌等第3頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月果蔬加工中有害微生物的污染源：

1.原料由于原料在收獲貯藏和加工場(chǎng)所經(jīng)常暴露于許多不衛(wèi)生的環(huán)境中因此很有可能受到外部污染。

2.污垢污染影響微生物數(shù)量的因素有風(fēng)力、濕度、日光、溫度以及飼養(yǎng)和野生的動(dòng)物、灌溉用水、鳥(niǎo)獸糞、收割設(shè)備、工人等。

3.空氣污染

4.害蟲(chóng)污染果蔬在生長(zhǎng)過(guò)程中遭受到害蟲(chóng)的傷害部分易受到腐敗菌和致病菌侵襲；部分傳媒生物蜜蜂、蝴蝶、鳥(niǎo)類(lèi)等攜帶的病菌也容易在害蟲(chóng)傷害部分生長(zhǎng)。

5.加工過(guò)程：分為人為原因和非人為原因

6.貯藏和貨架污染：貯藏的方式、溫度濕度要求、外界環(huán)境、包裝等第4頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、影響微生物生長(zhǎng)的內(nèi)在和外在因素a)PH值：酸性具有很強(qiáng)的抑菌作用，當(dāng)PH<2時(shí)多數(shù)微生物都不能生長(zhǎng);當(dāng)PH<4.2時(shí)微生物可被抑制生長(zhǎng)。大多數(shù)微生物生長(zhǎng)的最適PH值是6.6～7.5,也有少數(shù)微生物在PH4.0以下也能夠生長(zhǎng)。常見(jiàn)的微生物及其生長(zhǎng)的PH范圍如圖第5頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月PH值對(duì)微生物生長(zhǎng)的負(fù)面影響至少二方面：酶的作用細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的輸送其他環(huán)境因素也可與PH相互影響，如溫度鹽度b)含水量微生物對(duì)水分的要求通常用水分活度（Aw）來(lái)表示，水分活度是指食品中水的蒸氣壓和同溫度下純水的飽和蒸氣壓的比值---Aw=P/P0。純水時(shí)Aw=1,完全無(wú)水時(shí)，Aw＝0,食品中結(jié)合水含量越高，水分活度就越低。第6頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

主要微生物生長(zhǎng)的最低水分活度（Aw）

第7頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月c)溫度一方面隨著溫度的上升，細(xì)胞中的生物化學(xué)反應(yīng)速率和生長(zhǎng)速率加快。在一般情況下，溫度每升高10℃，生化反應(yīng)速率增加一倍；另一方面，機(jī)體的重要組成如蛋白質(zhì)、核酸等對(duì)溫度都較敏感，隨著溫度的增高而可能遭受不可逆的破壞。因此，只有在一定范圍內(nèi)，機(jī)體的代謝活動(dòng)與生長(zhǎng)繁殖才隨著溫度的上升而增加，當(dāng)溫度上升到一定程度，開(kāi)始對(duì)機(jī)體產(chǎn)生不利影響，如再繼續(xù)升高，則細(xì)胞功能急劇下降以至死亡。根據(jù)微生物對(duì)溫度要求的不同，微生物可分為嗜冷微生物（最適生長(zhǎng)溫度在20℃～30℃之間），嗜溫微生物（最適生長(zhǎng)溫度在30℃～40℃之間），而在45℃或以上能夠生長(zhǎng)，最適溫度在55℃～65℃之間的微生物稱為嗜熱微生物。第8頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月根據(jù)微生物的生長(zhǎng)特性，在食品加工過(guò)程中，我們可用高溫殺滅微生物或采用低溫方式來(lái)抑制微生物，對(duì)易腐食品而言，操作間的溫度要控制在14℃以下，長(zhǎng)時(shí)間存放半成品、成品的庫(kù)溫控制在0～4℃之間，冷藏溫度一般在-2～-15℃之間，凍藏溫度在-18～-21℃之間。第9頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月d)環(huán)境中的氣體及其濃度在CO2濃度達(dá)到10%以上的氣體中貯藏食品稱為“可控氣體”貯藏或氣調(diào)（MA）貯藏。CO2的抑菌作用也與溫度有關(guān)，抑制能力的大小隨溫度的降低而增加。革蘭氏陰性菌要比革蘭氏陽(yáng)性菌更加敏感，其中假單孢菌最為敏感，而乳酸菌和厭氧菌則最具抗性。e)微生物的一般干涉（微生物的競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng)）微生物的一般干涉是批在同一環(huán)境或棲息地中其他微生物對(duì)某種微生物產(chǎn)生的一般性的、非特異的抑制或破壞。干涉菌通常是不同源微生物引起的，常見(jiàn)的干涉現(xiàn)象有乳酸拮抗作用、殺細(xì)菌素、PH抑制、有機(jī)酸、過(guò)氧化氫、雙乙酰抑制作用等。第10頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月15℃條件下熟制禽肉中啤酒足球菌與胚芽乳桿菌對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用C－純培養(yǎng)，P-與啤酒足球菌共同培養(yǎng)，L-與胚芽乳桿菌共同培養(yǎng)，M-混合培養(yǎng)干涉作用的機(jī)理主要有1、對(duì)營(yíng)養(yǎng)物的競(jìng)爭(zhēng);2、吸附或附著點(diǎn)位的競(jìng)爭(zhēng);3、提供不良環(huán)境;4、上述幾個(gè)因素的加成。第11頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、微生物的營(yíng)養(yǎng)要素微生物生長(zhǎng)所需要的元素主要以相應(yīng)的有機(jī)物與無(wú)機(jī)物的形式提供的，也有小部分可以由分子態(tài)的氣體物質(zhì)提供。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按照它們?cè)跈C(jī)體中的生理作用不同，可以將它們區(qū)分成碳源、氮源、能源、生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽和水。1. 碳源在微生物生長(zhǎng)過(guò)程中能為微生物提供碳素來(lái)源的物質(zhì)稱為碳源。碳源物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)經(jīng)過(guò)一系列復(fù)雜的化學(xué)變化后成為微生物自身的細(xì)胞物質(zhì)（如糖類(lèi)、脂類(lèi)、蛋白質(zhì)等）和代謝產(chǎn)物，碳可占一般細(xì)菌細(xì)胞干重的一半。同時(shí)絕大部分碳源物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)生化反應(yīng)過(guò)程中還能為機(jī)體提供維持生命活動(dòng)所需的能源，因此碳源物質(zhì)通常也是能源物質(zhì)。第12頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月微生物利用碳源物質(zhì)具有選擇性，糖類(lèi)是一般微生物較容易利用的良好碳源和能源物質(zhì)，但不同微生物對(duì)不同糖類(lèi)物質(zhì)的利用有其選擇性。微生物利用的碳源物質(zhì)主要有糖類(lèi)、有機(jī)酸、醇、脂類(lèi)、烴、CO2及碳酸鹽等。2.氮源--凡是能被用來(lái)構(gòu)成菌體物質(zhì)中或代謝產(chǎn)物中氮素來(lái)源的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)稱為氮源。氮對(duì)微生物的生長(zhǎng)發(fā)育有重要的作用，它們主要用來(lái)合成細(xì)胞中的含氮物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、核酸等。一般不作為能量。能被微生物利用的氮源物質(zhì)包括蛋白質(zhì)及其不同程度的降解產(chǎn)物（胨、肽、氨基酸等）、銨鹽、硝酸鹽、分子氮、嘌呤、嘧啶、脲、胺、酰胺、氰化物等。第13頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．能源能為微生物的生命活動(dòng)提供最初能量來(lái)源營(yíng)養(yǎng)物或輻射能?；墚愷B(yǎng)微生物的能源就是碳源。所有真菌、放線菌和大部分細(xì)菌是化能異養(yǎng)型微生物。化能自養(yǎng)微生物的能源主要是無(wú)機(jī)物，如細(xì)菌、硝化細(xì)菌、硫細(xì)菌、氫細(xì)菌等。光能自養(yǎng)和異養(yǎng)微生物的能源主要是太陽(yáng)能，如藍(lán)細(xì)菌、紫色非硫細(xì)菌等。4．生長(zhǎng)因子：通常指那些微生物生長(zhǎng)所必需而且需要量很小，但微生物自身不能合成的或合成量不足以滿足機(jī)體生長(zhǎng)需要的有機(jī)化合物。各種微生物需求的生長(zhǎng)因子的種類(lèi)和數(shù)量是不同的。第14頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月生長(zhǎng)因子分為維生素、氨基酸及和嘌呤及嘧啶堿基三大類(lèi)。

5．無(wú)機(jī)鹽：①參加微生物中氨基酸和酶的組成。②調(diào)節(jié)微生物的原生質(zhì)膠體狀態(tài)，維持細(xì)胞的滲透與平衡。③酶的激活劑。根據(jù)微生物對(duì)礦質(zhì)元素需要量大小可以把它分成大量元素和微量元素。大量元素：Na、K、Mg、Ca、S、P等。微量元素是指那些在微生物生長(zhǎng)過(guò)程中起重要作用，而機(jī)體對(duì)這些元素的需要量極其微小的元素，通常需要量在10-6--10-8mol/L：鋅、錳、鈉、氯、鉬、硒、鈷、銅、鎢、鎳、硼等。

第15頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

微量元素一般參與酶的組成或使酶活化（見(jiàn)下表）6．水：①起到溶劑與運(yùn)輸介質(zhì)的作用，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收與代謝產(chǎn)物的分泌必須以水為介質(zhì)才能完成；②參與細(xì)胞內(nèi)一系列化學(xué)反應(yīng)；③維持蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子穩(wěn)定的天然構(gòu)象；④因?yàn)樗谋葻岣?，是熱的良好?dǎo)體，能有效地吸收代謝過(guò)程中產(chǎn)生的熱并及時(shí)地將熱迅速散發(fā)出體外，大而有效地控制細(xì)胞內(nèi)溫度的變化；⑤通過(guò)水合作用與脫水作用控制由多亞基組成的結(jié)構(gòu)，如微管、鞭毛的組裝與解離。第16頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月對(duì)數(shù)期遲緩期

分為四期：遲緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期、衰退期細(xì)菌生長(zhǎng)曲線0515202530105.56.08.58.07.57.06.59.0衰退期總菌數(shù)活菌數(shù)細(xì)菌數(shù)的對(duì)數(shù)次小時(shí)穩(wěn)定期細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的四個(gè)時(shí)期第17頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月四、培養(yǎng)基的分類(lèi)：1．按成分不同劃分（1）天然培養(yǎng)基：常用的天然有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括牛肉膏、蛋白胨、酵母浸膏、豆芽汁、玉米粉、牛奶等。（2）合成培養(yǎng)基：是人工添加化學(xué)成分完全了解的物質(zhì)配制而成的培養(yǎng)基。2．根據(jù)物理狀態(tài)劃分（1）固體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑，使其成為固體狀態(tài)即為固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中的瓊脂含量一般為1.5%-2.0%。在實(shí)驗(yàn)室中，固體培養(yǎng)基一般加入平皿或試管中，制成培養(yǎng)微生物的平板或斜面。固體培養(yǎng)基常用來(lái)進(jìn)行微生物的分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)及菌種保藏。第18頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（2）半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基中凝固劑的含量少比固體培養(yǎng)基少，培養(yǎng)基中瓊脂含量一般為0.2%-0.7%。半固體培養(yǎng)常用來(lái)觀察微生物的運(yùn)動(dòng)特征、分類(lèi)鑒定及噬菌體效價(jià)滴定等。（3）液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基常用于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)及在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物增菌、生化、傳代等。3．按用途劃分（1）基礎(chǔ)培養(yǎng)基盡管不同微生物的營(yíng)養(yǎng)需求不同，但大多數(shù)微生物所需的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是相同的?；A(chǔ)培養(yǎng)基是含有一般微生物生長(zhǎng)繁殖所需的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基。第19頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（2）加富培養(yǎng)基也稱為營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基、富集培養(yǎng)基，即在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)制成的一類(lèi)營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基。這些特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括血液、血清、酵母浸膏、動(dòng)植物組織液等。（3）鑒別培養(yǎng)基用于鑒別不同類(lèi)型微生物的培養(yǎng)基。在培養(yǎng)基加入某種特殊化學(xué)物質(zhì)，某種微生物在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)后能產(chǎn)生某種代謝產(chǎn)物，而這咱代謝產(chǎn)物可以與培養(yǎng)基中的特殊化學(xué)物質(zhì)發(fā)生特定的化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化，根據(jù)這種特征性變化，可將該種微生物與其他微生物區(qū)別開(kāi)來(lái)。（4）選擇培養(yǎng)基用來(lái)將某種或某類(lèi)微生物從混雜的微生物群體中分離出來(lái)的培養(yǎng)基。根據(jù)不同種類(lèi)微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)需求或?qū)δ撤N化學(xué)物質(zhì)的敏感不同，在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，有利于所需微生物的生長(zhǎng)。第20頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月五、微生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)技術(shù)（1）消毒與滅菌消毒：消滅病原菌和有害微生物的營(yíng)養(yǎng)體滅菌：殺滅一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體，芽胞和孢子。滅菌方法：一、物理的方法：加熱、過(guò)濾、輻射二、化學(xué)的方法：用化學(xué)試劑抑制或殺滅微生物。主要破壞細(xì)菌代謝機(jī)能。如重金屬離子，磺胺類(lèi)藥物及抗生素等。第21頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月干熱法：火焰灼燒滅菌和熱空氣滅菌。1、火焰灼燒適用于接種環(huán)、接種針和金屬用具如鑷子等，試管口和瓶口，涂布用玻璃棒。2、熱空氣滅菌利用高溫干燥空氣（160－170C）加熱滅菌1－2h，適用于玻璃器皿和培養(yǎng)皿等。

滅菌原理：加熱使蛋白質(zhì)變性。滅菌效率與水的含量有關(guān)，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞含水量越大，凝固越快。

注意事項(xiàng)：

1）培養(yǎng)基、橡膠制品、塑料制品不能用此法；

2）玻璃器皿不要與箱壁、箱底接觸，以防暴裂；

3）物品不能太擠；

4）滅菌過(guò)程中不要開(kāi)箱，滅菌結(jié)束后要等溫度降至70°時(shí)再開(kāi)箱門(mén)，防止器皿驟冷碎裂。第22頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月濕熱法：1.原理：濕熱滅菌作用要強(qiáng)于干熱滅菌，主要因?yàn)樗钟欣诘鞍踪|(zhì)的凝固，水分越多，凝固蛋白質(zhì)所需的溫度越低。另外，濕熱滅菌的穿透性比干熱強(qiáng)，因?yàn)樗谋葻幔?.0）比空氣的比熱（0.24）要大，還由于蒸氣在凝結(jié)時(shí)是一個(gè)放熱過(guò)程，要增加額外的熱量。所在滅菌效果好。濕熱滅菌的方式：1.煮沸法；2.間歇滅菌法；3.巴氏滅菌法；4.高壓蒸氣滅菌法；5.超高溫殺菌（135-150°C和2-8s對(duì)牛乳和其它液態(tài)食品）。第23頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月高壓蒸氣滅菌法

適用范圍：培養(yǎng)基、工作服、橡膠物品等、玻璃器皿。

注意的問(wèn)題：

1.冷空氣的排放要徹底壓力表讀數(shù)蒸氣溫度0.07MPA1150.105MPA1210.210MPA132飽和蒸氣壓力與溫度的對(duì)應(yīng)關(guān)系但如果冷空氣只排除50%，0.105MPA時(shí)，溫度只能升至112度，為保證冷空氣的徹底排除，要求滅菌器的密封性要好、排氣管道通暢、排氣時(shí)間充分。第24頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.物品的包裝要正確滅菌物品的包裝材料要具有良好的通透性，并可防止各種微生物的進(jìn)入?？刹捎玫陌b材料有雙層細(xì)棉布、牛皮紙等。也可使用專(zhuān)門(mén)的容器。3.滅菌物品的擺放要合理滅菌物品間要留有間隙，空玻璃管要側(cè)放或倒放。如有金屬物品，要放置于底層。滅菌對(duì)培養(yǎng)基成分的影響：a.pH值普遍下降。b.產(chǎn)生混濁或沉淀，這主要是由于一些離子發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生混濁或沉淀。例如Ca2＋與PO43-化合，就會(huì)產(chǎn)生磷酸鈣沉淀。c.不少培養(yǎng)基顏色加深。d.體積和濃度有所變化。e.營(yíng)養(yǎng)成分有時(shí)受到破壞。部分添加物質(zhì)（如受熱易分解的抗生素）不能采用這種方法。第25頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月高壓蒸汽滅菌效果的監(jiān)測(cè)（一般性了解）生物法：（GB15981－1995）菌株選擇：選用耐熱的非致病性細(xì)菌芽胞作指示菌。一般選用嗜熱脂肪桿菌，本菌芽胞對(duì)熱的抗力較強(qiáng)，其熱死亡時(shí)間與病原微生物中抗力最強(qiáng)的肉毒桿菌芽胞相似。檢測(cè)時(shí)應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包，每個(gè)包中心部位置生物指示劑2個(gè)，放在滅菌柜室的5個(gè)點(diǎn)，即上、中層的中央各一個(gè)點(diǎn)，下層的前、中、后各一個(gè)點(diǎn)。滅菌后，取出生物指示劑，接種于溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，置55－60℃溫箱中培養(yǎng)48小時(shí)至7天，觀察最終結(jié)果。若培養(yǎng)后顏色未變，澄清透明，說(shuō)明芽胞已被殺滅。達(dá)到了滅菌要求。若變?yōu)辄S色混濁，說(shuō)芽胞未被殺滅，滅菌失敗。化學(xué)法：滅菌指導(dǎo)膠帶、化學(xué)指示劑等。第26頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

（2）微生物的分離、純化及培養(yǎng)技術(shù)分離與純化：從混雜的微生物群體中獲得只含某一種或某一株微生物的過(guò)程。純培養(yǎng)的目的：純化菌落，使其有唯一正確的生化、血清反應(yīng)。

方法：點(diǎn)植、劃線、傾注平板、涂布等第27頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月保藏的菌種通過(guò)斜面、穿刺或皰肉培養(yǎng)基（用于厭氧細(xì)菌）培養(yǎng)好后，待其充分生長(zhǎng)后，用牛皮紙將棉塞部分包扎好（棉塞換成膠塞效果更好），置4C?冰箱中包藏。保藏時(shí)間：霉菌、放線菌及芽孢菌保存2－4個(gè)月移種一次，酵母菌間隔兩個(gè)月，普通細(xì)菌一個(gè)月，假單胞菌兩周傳代一次。此法優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、使用方便，缺點(diǎn)是保藏時(shí)間短、易被污染。附加石蠟：附加石蠟可延長(zhǎng)菌種保藏時(shí)間。將無(wú)菌石蠟加在已長(zhǎng)好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端1CM為準(zhǔn)，使菌種與空氣隔絕。霉菌、放線菌、芽孢菌可保藏兩年以上，酵母菌可保藏1－2年，普通細(xì)菌也可保藏1年左右。1、傳代培養(yǎng)法

（3）菌種保藏第28頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2、載體法使生長(zhǎng)合適的微生物吸附在一定的載體上進(jìn)行干燥。常用的載體有土壤、砂土、硅膠、明膠、麩皮、磁珠和濾紙片等。3、懸液法將細(xì)菌、酵母菌細(xì)胞懸浮在一定的溶液中保存。溶液包括蒸餾水、糖溶液、磷酸緩沖液、食鹽水等。4、冷凍法使菌種始終存放在低溫環(huán)境下的保藏方法。包括低溫法和液氮法。5、真空干燥法這類(lèi)方法包括冷凍真空干燥法和L－干燥法。冷凍真空干燥法是將要保藏的微生物樣品先經(jīng)低溫預(yù)凍，然后在低溫狀態(tài)下進(jìn)行減壓干燥。L-干燥法則不需要低溫預(yù)凍樣品，只是使樣品維持在10－20C?范圍內(nèi)進(jìn)行真空干燥。第29頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（4）染色：

1、革蘭氏復(fù)染色法所用試劑：結(jié)晶紫、乙醇脫色劑、碘液媒染劑、沙黃（蕃紅花紅）原理：細(xì)菌基于細(xì)胞壁多糖結(jié)構(gòu)的不同吸附電荷的能力不同。步驟：固定→結(jié)晶紫(60S)→碘液媒染（60S）→乙醇脫色（30S）→沙黃復(fù)染（60S）→鏡檢第30頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2、芽孢染色：芽孢染色法是利用細(xì)菌的芽孢和菌體對(duì)染料的親合力不同的原理，用不同染料進(jìn)行著色，使芽孢和菌體呈不同的顏色而便于區(qū)別。通?？捎每兹妇G或堿性品紅對(duì)菌體和芽孢進(jìn)行染色。水洗使菌體脫色，再用復(fù)染液沙黃等進(jìn)行菌體著色。第31頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3、莢膜染色由于莢膜與染料間的親和力弱，不易著色，通常采用負(fù)染色法染莢膜，即設(shè)法使菌體和背景著色而莢膜不著色，從而使莢膜在菌體周?chē)室煌该魅?。由于莢膜的含水量在90%以上，故染色時(shí)一般不加熱固定，以免莢膜皺縮變形。第32頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

1.一般質(zhì)量檢查生產(chǎn)廠必須提供的文件：

—培養(yǎng)基名稱、各種成分名稱和增補(bǔ)劑名稱以及產(chǎn)品編號(hào)；

—培養(yǎng)基使用前的pH；

—儲(chǔ)藏條件和有效期；

—所有性能評(píng)價(jià)和所用的測(cè)試菌種；

—技術(shù)數(shù)據(jù)清單；

—質(zhì)控證書(shū)；

—必要的安全及危害數(shù)據(jù)。

2.實(shí)驗(yàn)室檢查項(xiàng)目：

—培養(yǎng)基的名稱和批號(hào)；

—接收日期；

—有效期；

—包裝的情況和完整性驗(yàn)收記錄應(yīng)包括上述信息。（5）培養(yǎng)基的驗(yàn)收與制備第33頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.培養(yǎng)基的使用前應(yīng)進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)室測(cè)試：包括：PH值、色澤、透明度、雜質(zhì)、穩(wěn)定性、濕度。根據(jù)培養(yǎng)基批號(hào)的不同，同批培養(yǎng)基還要進(jìn)行相應(yīng)的菌株測(cè)試，測(cè)試菌株必須是來(lái)自標(biāo)準(zhǔn)菌種保藏中心或其認(rèn)可的機(jī)構(gòu)如(ATCC)等提供的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試菌株，菌株必須在其活性有效期限內(nèi)，最好采用非特異性菌株以保證生化反應(yīng)的正常進(jìn)行。如有必要或條件許可，可同時(shí)接種一兩種干擾菌株作空白對(duì)照。測(cè)試菌株在所用培養(yǎng)基上至少可分離出一株活菌。不能分離出活性菌株或分離過(guò)程中產(chǎn)生其它非正常菌株的培養(yǎng)基視為不合格產(chǎn)品。《培養(yǎng)基驗(yàn)收記錄》第34頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月例子：以EMB平板驗(yàn)收為例此培養(yǎng)基呈紫色，可有細(xì)微沉淀。接種質(zhì)控菌株后，35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)，觀察結(jié)果應(yīng)如下表所示：第35頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4、培養(yǎng)基的制備記錄培養(yǎng)基在每次時(shí)要保有記錄，記錄內(nèi)容包括：培養(yǎng)基名稱批號(hào)及其來(lái)源最終pH值消毒的溫度和制備時(shí)間、日期制備者記錄應(yīng)隨制好的培養(yǎng)基一同存放第36頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月5、培養(yǎng)基的異常現(xiàn)象和可能原因培養(yǎng)基不能凝固：

—制備過(guò)程中過(guò)度加熱

—低pH值造成培養(yǎng)基發(fā)生酸水解

—稱量不正確

—瓊脂未完全溶解

—培養(yǎng)基成分未充分混勻pH值不正確：

—制備過(guò)程中過(guò)度加熱

—水質(zhì)不佳

—外部化學(xué)物質(zhì)污染

—測(cè)Ph值時(shí)溫度不正確

—pH計(jì)未正確校準(zhǔn)第37頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月顏色異常：

—制備過(guò)程中加熱過(guò)度

—水質(zhì)不佳

—脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差

—外部化學(xué)物質(zhì)污染pH不正確產(chǎn)生沉淀：

—制備過(guò)程中過(guò)度加熱

—水質(zhì)不佳

—脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差

—pH值未正確控制培養(yǎng)基出現(xiàn)抑制/重復(fù)性差：

—制備過(guò)程中過(guò)度加熱

—水質(zhì)不佳

—脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差

—使用成分不正確，如成分稱量不準(zhǔn)、添加物濃度不正確第38頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月選擇性差：

—制備過(guò)程中過(guò)度加熱

—配方使用不對(duì)

—脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差

—添加成分不正確，如加入成分時(shí)培養(yǎng)基過(guò)熱或錯(cuò)誤的添加濃度。第39頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二部分：檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)第40頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、細(xì)菌總數(shù)1.細(xì)菌總數(shù)測(cè)定的注意事項(xiàng)1）細(xì)菌總數(shù)反映的30－35度有氧條件下培養(yǎng)的細(xì)菌。一些特殊要求的細(xì)菌、厭氧菌、微需氧菌、非嗜中溫菌等，均難以反映出來(lái)。實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)某項(xiàng)菌如單增李氏菌計(jì)數(shù)多于細(xì)菌總數(shù)的現(xiàn)象。2）蔓延菌落的判斷3）鑒于細(xì)菌細(xì)胞以單個(gè)、雙個(gè)、鏈狀、葡萄狀或成堆的形式存在，因此在平板上出現(xiàn)的菌落可能來(lái)源于單個(gè)細(xì)菌也可能來(lái)自細(xì)菌菌群，故細(xì)菌總數(shù)的單位通常以CFU加重量單位來(lái)表示。4）細(xì)菌總數(shù)應(yīng)做空白對(duì)照?？瞻讟悠钒灞┞稌r(shí)間應(yīng)與樣品板暴露時(shí)間相同?？瞻装蹇刹捎孟♂屢?瓊脂35度培養(yǎng)也可采用樣品液+瓊脂4度放置不培養(yǎng)對(duì)照法第41頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)菌形態(tài)第42頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)菌形態(tài)第43頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月瓊脂平板上菌群的形態(tài)蠟樣芽孢桿菌菌落枯草芽孢桿菌菌落第44頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌1.什么是大腸菌群：大腸菌群并非細(xì)菌學(xué)分類(lèi)命名，而是衛(wèi)生細(xì)菌領(lǐng)域的用語(yǔ)，它不代表某一個(gè)或某一屬細(xì)菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，這些細(xì)菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致，其定義為：需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。一般認(rèn)為該菌群細(xì)菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷伯氏菌和陰溝腸桿菌等。大腸菌群與其它腸桿菌、腸球菌的生活環(huán)境類(lèi)似，因此它是檢驗(yàn)糞便污染的指標(biāo)菌。糞便污染指標(biāo)菌的要求1.特異性：即是人與動(dòng)物腸道的特有菌。2.對(duì)環(huán)境耐受力強(qiáng)，對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高。3.繁殖周期短，可以在短時(shí)期內(nèi)大量培養(yǎng)。4.檢測(cè)方法可靠。5.檢測(cè)成本及技術(shù)要求低。指標(biāo)菌第45頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2、大腸桿菌大腸埃希氏菌(E.coli)通常稱為大腸桿菌，是Escherich在1885年發(fā)現(xiàn)的。根據(jù)不同的生物學(xué)特性將致病性大腸桿菌分為5類(lèi)：致病性大腸桿菌(EPEC)、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌(ETEC)、腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)、腸出血性大腸桿菌(E．I"IEC)、腸黏附性大腸桿菌(EAEC)。大腸桿菌電鏡圖大腸桿菌為革蘭氏陰性短桿菌，大小0.5×1～3微米。周身有鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，無(wú)芽孢?？砂l(fā)酵多種糖類(lèi)產(chǎn)酸、產(chǎn)氣。第46頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月大腸桿菌的抗原成分復(fù)雜，可分為菌體抗原（O）：化學(xué)成分——多糖-磷脂-蛋白質(zhì)復(fù)合物。可在121℃耐受2h。不被乙醇或0.1%石炭酸破壞。每個(gè)菌株只含有一種O抗原，決定o型原特異性的是脂多糖中的多糖側(cè)鏈部分，通常以1、2、3等阿拉伯?dāng)?shù)字表示。例如：乙型副傷寒桿菌有4、5、12三個(gè)O抗原。鼠傷寒桿菌有1、4、5、12四個(gè)O抗原；豬霍亂桿菌有6、7二個(gè)O抗原。根據(jù)菌體抗原的不同，可將大腸桿菌分為150多型，其中有16個(gè)血清型為致病性大腸桿菌，常引起流行性嬰兒腹泄和成人肋膜炎。第47頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月鞭毛抗原（H）

鞭毛抗原的組成部分為蛋白質(zhì)，1個(gè)菌株僅有1種H抗原，不耐熱，60℃加熱15分鐘或乙醇處理可破壞。加熱至80℃時(shí)出現(xiàn)蛋白變性反應(yīng)。具有鞭毛的細(xì)菌經(jīng)甲醇液固定后，其o抗原全部被h抗原遮蓋，而不能與相應(yīng)抗o抗體反應(yīng)。h抗原的特異性取決于多肽鏈上氨基酸的排列順序和空間構(gòu)型。表面抗原（K）即莢膜抗原；個(gè)別位于菌毛中。不耐熱，后者有抗機(jī)體吞噬和抗補(bǔ)體的能力。

O不凝集性：具有K抗原的菌株不會(huì)被其相應(yīng)的抗O血清凝集

第48頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月大腸菌群檢驗(yàn)中常用的抑菌劑有膽鹽、十二烷基硫酸鈉、苯磺酸鈉、煌綠、龍膽紫、孔雀綠等大腸桿菌對(duì)熱的抵抗力較其他腸道桿菌強(qiáng)，55℃經(jīng)60分鐘或60℃加熱15分鐘仍有部分細(xì)菌存活。在自然界的水中可存活數(shù)周至數(shù)月，在溫度較低的糞便中存活更久。最適生長(zhǎng)溫度37℃,PH7.4-7.6，普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，菌落特征為圓形，直徑2－3mm,凸起、光滑、濕潤(rùn)、半透明、灰白色。某些菌株有β溶血現(xiàn)象。伊紅美藍(lán)平板上為藍(lán)紫色，中國(guó)藍(lán)瓊脂為藍(lán)色、SS瓊脂上為紅色。營(yíng)養(yǎng)肉湯生長(zhǎng)均勻。第49頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月SN0169大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌檢測(cè)方法樣品液LST增菌液，37℃,48hBGLB,37℃,48hEC，44.5℃產(chǎn)氣大腸菌群糞大腸菌群色氨酸甲基紅VP檸檬酸鹽伊紅美藍(lán)平板營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面大腸桿菌產(chǎn)氣第50頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月伊紅美藍(lán)平板上的大腸桿菌普通大腸桿菌與O157的熒光試驗(yàn)O157不發(fā)酵山梨醇第51頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫羧成乙酰甲基甲醇，在強(qiáng)堿環(huán)境下，被空氣中氧氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱V－P反應(yīng)V－P試驗(yàn)第52頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月腸桿菌屬分解葡萄糖過(guò)程中產(chǎn)生丙酮酸，進(jìn)一步分解后，可產(chǎn)生乳酸，琥珀酸、醋酸、甲酸等大量酸性產(chǎn)物，可使培養(yǎng)基PH值下降至pH4.5以下，使甲基紅指示劑變紅。甲基紅（MethylRed）試驗(yàn)第53頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月靛基質(zhì)（Imdole）試驗(yàn)

靛基質(zhì)試驗(yàn)也稱色氨酸或吲哚試驗(yàn)。某些細(xì)菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基質(zhì)，進(jìn)一步脫水生成吲哚。吲哚與顯色劑——對(duì)二甲基氨基苯醛結(jié)合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。第54頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月西蒙氏枸椽酸鹽試驗(yàn)?zāi)承┘?xì)菌能利用枸椽酸鹽作為碳源，及磷酸銨作為氮源，將枸椽酸鹽分解為二氧化碳，培養(yǎng)基反應(yīng)后成堿性，由于指示劑的作用，培養(yǎng)基變?yōu)樘m色。第55頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、沙門(mén)氏菌沙門(mén)氏菌屬于腸桿菌科，有2300多個(gè)血清型。腸道沙門(mén)氏腸炎亞種有三種血清型（豬霍亂、甲型副傷寒和傷寒沙門(mén)氏菌）可導(dǎo)致嚴(yán)重病癥，其它血清型大多引起腸胃炎，表現(xiàn)輕微。沙門(mén)氏菌為革蘭氏陰性桿菌，需氧或兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度為35～37℃，最適pH值為6.8～7.8。雞白痢、雞傷寒、羊流產(chǎn)和甲型副傷寒等沙門(mén)氏菌在普通瓊脂不易生長(zhǎng)，血清、葡萄糖、硫代硫酸鈉、胱氨酸、腦心浸液和甘油等有助于本菌生長(zhǎng)。麥康凱上，大多形成無(wú)色菌落（不發(fā)酵乳糖）；SS平板上，形成黑色菌落。除雞白痢和雞傷寒沙門(mén)氏菌外，其余各菌：周生鞭毛，絕大多數(shù)具有菌毛。第56頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月沙門(mén)氏菌不分解乳糖（亞利桑那菌除外）。分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣（傷寒沙門(mén)氏菌產(chǎn)酸不產(chǎn)氣）。多數(shù)產(chǎn)生H2S，不產(chǎn)生靛基質(zhì)，不液化明膠，不分解尿素，不產(chǎn)生乙酰甲基甲醇，多數(shù)能利用枸櫞酸鹽，能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在氰化鉀培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。本菌屬有S-R變異。名詞解釋?zhuān)篠-R變異細(xì)菌菌落可歸納為兩種類(lèi)型：光滑型（SMOOTH.S）與粗糙型（ROUGH，R）。S型菌落一般表面光滑、濕潤(rùn)，邊緣整齊；R型菌落表面粗糙，干而有皺紋，邊緣不整齊。當(dāng)細(xì)菌從S→R時(shí)，其毒力、抗原性往往發(fā)生全面的改變。第57頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月光滑型與粗糙型細(xì)菌特性的比較*某些致病菌如炭疽、鼠疫桿菌與化膿性鏈球菌的毒力菌株為R型。第58頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月沙門(mén)氏菌屬（包括亞利桑那菌）檢驗(yàn)方法

SN0170樣品緩沖胨水（BPW）四硫磺酸鹽煌綠（TTB）亞硒酸鹽胱氨酸（SC）37℃4hor20～24h直接選擇性增菌亞硒酸鹽胱氨酸（SC）四硫磺酸鹽煌綠（TTB）37℃24±2h

BS&DHL(亞利桑那菌瓊脂)

前增菌37℃24～48hTSI&賴氨酸脫羧酶TSI&尿素酶37℃24～48h生化試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)（“O”抗原，“Vi”抗原）42℃20±2h37℃24～48h結(jié)果判定第59頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月樣品（20類(lèi)）25g225mL乳糖肉湯（LB）or胰酪胨大豆肉湯（TSB）or煌綠溶液（BG）or通用前增菌肉湯（UPB）or營(yíng)養(yǎng)肉湯（NB）or再造脫脂奶粉or四硫酸鹽煌綠（TT）pH6.8±0.224±2h35℃RVTT

43±0.2℃or35±2.0℃24±2h

24±2h42±0.2℃BS&XLD&HE24±2h35℃TSI&LIA非沙門(mén)氏菌沙門(mén)氏菌非沙門(mén)氏菌LIA+LIA－TSIK/ALIA－TSIA/A&尿素酶，H抗原（多價(jià)H抗血清或Spicer-Edwardsflagellar(H)test），賴氨酸脫羧酶，酚紅衛(wèi)矛醇肉湯，色氨酸肉湯（KCN，丙二酸鹽，吲哚），O抗原酚紅乳糖肉湯，酚紅蔗糖肉湯，MR－VP,西蒙氏檸檬酸鹽5種商業(yè)生化鑒定系統(tǒng)（API20E,EnterotubeII,

EnterobacteriaceaeII,MICRO-ID,orVitekGNI）&O抗原&H抗原沙門(mén)氏菌屬FDA檢驗(yàn)方法

（BAM）細(xì)菌學(xué)分析手冊(cè)第60頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月25g樣品225mLBPW35℃or37℃16~20h0.1mL+10mLRV10mL+100mLSC42℃24h35℃or37℃24h&48h酚紅煌綠瓊脂（亮綠瓊脂）&第二種選擇性平板

phenolred/brilliantgreenagar國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)或?qū)嶒?yàn)室方法35℃or37℃20~24h無(wú)典型菌落再培養(yǎng)18～24h典型菌落（pinkred）營(yíng)養(yǎng)瓊脂純化可疑菌落每個(gè)平板選5個(gè)菌落35℃or37℃18~24hTSI，尿素酶，賴氨酸脫羧酶，ONPG，VP，吲哚血清學(xué)試驗(yàn)（O抗原，Vi抗原，H抗原）報(bào)告結(jié)果送參考實(shí)驗(yàn)室分型ISO6579:2002第61頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月沙門(mén)氏菌的生化試驗(yàn)三糖鐵TSI尿素酶試驗(yàn)右為陽(yáng)性（紅）左為陰性對(duì)照（黃）第62頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)從左往右依次為對(duì)照、陽(yáng)性（紫）、陰性（黃）丙二酸鹽試驗(yàn)左側(cè)為陽(yáng)性（蘭）右為陰性對(duì)照（綠）第63頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月ONPG試驗(yàn)左為陽(yáng)性（黃）右為空白對(duì)照第64頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月沙門(mén)氏菌的血清學(xué)試驗(yàn)O抗原：沙門(mén)氏菌根據(jù)O抗原的共同性可分為a～z、o51～o63、o65～o67等42組。使人類(lèi)致病的沙門(mén)氏桿菌大多屬于a～e組。H抗原：沙門(mén)氏桿菌的h抗原有兩種，稱為第1相和第2相。第1相特異性高，又稱特異相，用a、b、c等表示，第2相特異性低，為數(shù)種沙門(mén)氏桿菌所共有，也稱非特異相，用1、2、3等表示。具有第1相和第2相h抗原的細(xì)菌稱為雙相菌，僅有一相者稱單相菌。每一組沙門(mén)氏桿菌根據(jù)h抗原不同，可進(jìn)一步分種或型。vi抗原因與毒力有關(guān)而命名為vi抗原。由聚-n-乙酰-d-半乳糖胺糖醛酸組成。不穩(wěn)定，經(jīng)60℃加熱、石碳酸處理或人工傳代培養(yǎng)易破壞或丟失。新從患者標(biāo)本中分離出的傷寒桿菌、丙型副傷寒桿菌等有此抗原。第65頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月左側(cè)凝集，右側(cè)為陰性對(duì)照第66頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月四、金黃色葡萄球菌典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8μm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。無(wú)芽胞、鞭毛，多數(shù)無(wú)莢膜，革蘭氏染色陽(yáng)性。金黃色葡萄球菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，需氧或兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度37°C，最適生長(zhǎng)pH7.4。血平板菌落周?chē)纬赏该鞯娜苎h(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10~20%NaCl肉湯中生長(zhǎng)。可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽(yáng)性，VP反應(yīng)弱陽(yáng)性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抵抗力，對(duì)磺胺類(lèi)藥物敏感性低，但對(duì)青霉素、紅霉素等高度敏感。第67頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月金黃色葡萄球檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)SN0172樣品10%NaCl胰蛋白胨大豆肉湯37℃,48hBaird-Parker瓊脂37℃,48h營(yíng)養(yǎng)肉湯37℃,24h兔血漿凝固酶（6h)第68頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

（1）α-溶血：菌落周?chē)?-2mm寬的草綠色溶血環(huán)，也稱甲型溶血

（2）β-溶血：菌落周?chē)纬梢粋€(gè)2-4mm寬、界限分明、完全透明的無(wú)色溶血環(huán)

（3）γ-溶血：不產(chǎn)生溶血素，菌落周?chē)鸁o(wú)溶血環(huán)，也稱為丙型

α溶血β-溶血第69頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Baird-Parker瓊脂：該瓊脂含卵黃和亞碲酸鹽，金黃色葡萄球菌可還原亞碲酸鹽，產(chǎn)生黑色菌落，可與其他凝固酶陽(yáng)性的葡萄球菌區(qū)分。Baird-Parker瓊脂另外一個(gè)鑒別特征是金葡菌有產(chǎn)生卵磷脂酶的能力，在培養(yǎng)基上產(chǎn)生卵黃清除反應(yīng)，但需要注意的是包括部分凝固酶陽(yáng)性的菌株在內(nèi)的金葡菌也可能卵磷脂酶為陰性。第70頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月凝固酶試驗(yàn)的判斷證實(shí)實(shí)驗(yàn)：耐熱核酸酶試驗(yàn)（甲苯胺藍(lán)試驗(yàn)）

對(duì)于凝固酶試驗(yàn)不確定的，要做耐熱核酸酶試驗(yàn)，耐熱核酸酶試驗(yàn)，凝固酶試驗(yàn)，B－P生化試驗(yàn)有二個(gè)以上符合者為金黃色葡萄球菌陽(yáng)性典型菌→15MLBHL肉湯中35-37度培養(yǎng)18-24h,加熱煮沸15分鐘取10μl接種到甲苯胺藍(lán)瓊脂玻片的小孔中，在潮濕的培養(yǎng)箱35-37度培養(yǎng)4小時(shí)陽(yáng)性菌產(chǎn)生明亮的粉紅色暈圈，延伸至小孔外圍至少1mm第71頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月五、單增李斯特菌單增李斯特氏菌廣泛存在于自然界中，不易被凍融，能耐受較高的滲透壓，在土壤、地表水、污水、廢水、植物、青儲(chǔ)飼料、爛菜中均有該菌存在，所以動(dòng)物很容易食入該菌，并通過(guò)口腔-糞便的途徑進(jìn)行傳播。健康人糞便中單增李氏菌的攜帶率為0.6-16%,有70%的人可短期帶菌，4-8%的水產(chǎn)品、5-10%的奶及其產(chǎn)品、30%以上的肉制品及15%以上的家禽均被該菌污染。人主要通過(guò)食入軟奶酪、未充分加熱的雞肉、未再次加熱的熱狗、鮮牛奶、巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、羊排、卷心菜色拉、芹菜、西紅柿、法式餡餅、凍豬舌等而感染，約占85-90%的病例是由被污染的食品引起的。1979年單增的致病性首次為人們發(fā)現(xiàn)。單增是僅次于沙門(mén)氏菌的細(xì)菌污染物。第72頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月李斯特菌屬共有七個(gè)種屬：1、單核細(xì)胞增生李斯特菌(L.monocytohenes)2、綿羊李斯特菌(L.iuanuii)3、英諾克李斯特菌(L.innocua)4、威爾斯李斯特菌(L.innocua)5、西爾李斯特菌(L.seeligeri)6、格氏李斯特菌(L.grayi)7、默氏李斯特菌(L.murrayi)其中單增李斯特菌是唯一能引起人類(lèi)疾病的。單核細(xì)胞增生李斯特氏菌是一種人畜共患病的病原菌。它能引起人、畜的李氏特菌病，感染后主要表現(xiàn)為敗血癥、腦膜炎和單核細(xì)胞增多。第73頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月單增李斯特菌是一種革蘭氏陽(yáng)性短桿菌，大小約為0.5μmх1.0-2.0μm,直或稍彎，兩端鈍圓，常呈V字型排列，偶有球狀、雙球狀。兼性厭氧、無(wú)芽胞，一般不形成莢膜，但在營(yíng)養(yǎng)豐富的環(huán)境中可形成莢膜，在陳舊培養(yǎng)中的菌體可呈絲狀及革蘭氏陰性。該菌有4根周毛和1根端毛，但周毛易脫落。單增營(yíng)養(yǎng)要求不高，在20--25℃培養(yǎng)有動(dòng)力，穿刺培養(yǎng)2－5天可見(jiàn)倒立傘狀生長(zhǎng)，肉湯培養(yǎng)物在顯微鏡下可見(jiàn)翻跟斗運(yùn)動(dòng)。該菌的生長(zhǎng)范圍為2--42℃（也有報(bào)道在0℃能緩慢生長(zhǎng)），最適培養(yǎng)溫度為35--37℃，在pH中性至弱堿性（pH9.6）生長(zhǎng)良好，在pH3.8－4.4能緩慢生長(zhǎng)，在6.5%NaCl肉湯中生長(zhǎng)良好。單增無(wú)芽孢，適于低氧生長(zhǎng)，對(duì)普通消毒劑、高溫和乳鏈菌肽類(lèi)抗菌劑敏感，其在常溫下，生長(zhǎng)能力競(jìng)爭(zhēng)不過(guò)大腸菌群等正常菌群。第74頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月典型生化特征包括：觸酶陽(yáng)性、氧化酶陰性、V－P陽(yáng)性、水解七葉苷、發(fā)酵鼠李糖、葡萄糖、乳糖、水楊素、麥芽糖，不發(fā)酵木糖和甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、側(cè)金盞花醇、棉子糖、衛(wèi)矛醇和纖維二糖。40%膽汁不溶解，吲哚、硫化氫、尿素、明膠液化、硝酸鹽還原、賴氨酸、鳥(niǎo)氨酸均陰性，VP、甲基紅試驗(yàn)和精氨酸水解陽(yáng)性。血清型根據(jù)菌體（O）抗原和鞭毛(H)抗原，將單增李氏菌分成13個(gè)血清型，分別是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e和“7”13個(gè)血清型。致病菌株的血清型一般為1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和4b,后兩型尤多。溶血：?jiǎn)卧隼钏固貫棣氯苎?，溶血環(huán)小于綿羊李斯特菌。

第75頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月檢樣前增菌方法直接增菌方法消毒乳、乳制品、水產(chǎn)品等加工制品，25g樣品加225mlhalfFraser肉湯生乳等未加工樣品，25g樣品加225mlEB肉湯1ml接種到10mlFraser肉湯OXA、PALCAM平板挑取可疑菌落，接種TSA-YETSB-YE藍(lán)色菌落檢驗(yàn)典型運(yùn)動(dòng)檢驗(yàn)過(guò)氧化氫酶檢驗(yàn)革蘭氏菌染色溶血試驗(yàn)動(dòng)力試驗(yàn)生化試驗(yàn)CAMP試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)小鼠毒力試驗(yàn)?zāi)蛩孛杆?，硝酸鹽還原，MR-VP，TSI，葡萄糖，甘露醇，麥芽糖，鼠李糖，七葉苷、木糖報(bào)告結(jié)果第76頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第77頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第78頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月糖酵解試驗(yàn)葡萄糖：左為陽(yáng)性，右為陰性對(duì)照麥芽糖：左為陽(yáng)性，右為陰性對(duì)照單增不發(fā)酵甘露醇第79頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月單增發(fā)酵鼠李糖：左為陽(yáng)性單增木糖實(shí)驗(yàn)，右為對(duì)照七葉苷試驗(yàn)，李斯特菌屬都發(fā)酵七葉苷硝酸鹽還原試驗(yàn)，左為陰性第80頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月菌落－平板－1滴3％的過(guò)氧化氫。左為陽(yáng)性過(guò)氧化氫酶：過(guò)氧化氫酶又稱接觸酶，能催化過(guò)氧化氫分解成水和氧。第81頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第82頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于202