有機(jī)溶劑殘留量的測(cè)定

有機(jī)溶劑殘留量的測(cè)定第1頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月殘留溶劑（ResidualSolvent）定義：藥物中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)過(guò)程中，以及在制劑制備過(guò)程中使用或產(chǎn)生的，但在工藝過(guò)程中未能完全去除的有機(jī)溶劑。（OrganicVolatileImpurities）研究的性質(zhì)：雜質(zhì)研究的范疇第2頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月國(guó)內(nèi)外主要相關(guān)指導(dǎo)原則和文件ICHQ3c雜質(zhì)：殘留溶劑的指導(dǎo)原則FDA：GuidenceforIndustry:Q3cImpurities:ResidualSolventsEMEA:PositionPaperonSpecificationfroClass1andClass2ResidualSolventsinActiveSubstances化學(xué)藥物有機(jī)溶劑殘留量研究技術(shù)指導(dǎo)原則第3頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月國(guó)內(nèi)研究現(xiàn)狀：越來(lái)越重視，但仍存在很多不規(guī)范之處原因：時(shí)間短、經(jīng)驗(yàn)少、對(duì)本質(zhì)認(rèn)識(shí)不夠，對(duì)國(guó)際新研究結(jié)果跟蹤不及時(shí)，對(duì)已有指導(dǎo)原則內(nèi)涵領(lǐng)會(huì)不深刻本講目標(biāo)：通過(guò)分析和總結(jié)，明確一些問(wèn)題，使研究更科學(xué)、更規(guī)范。第4頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月各國(guó)藥典中殘留溶劑測(cè)定收載情況USP35版——ChemicalTests/<467>ResidualSolvents185EP7.0版——2.4.24.IdentificationandcontrolofresidualsolventsChP2010年版——附錄ⅧP殘留溶劑測(cè)定法

以上藥典方法是殘留溶劑研究的重要參考依據(jù)第5頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月ICH指導(dǎo)原則人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議(InternationalConferenceofHarmonizitionICH)ICH將藥品生產(chǎn)及純化過(guò)程中常用的69種有機(jī)溶劑按照對(duì)人體和環(huán)境的危害程度分為4類。第6頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月殘留溶劑分類第1類溶劑:指已知可以致癌并被強(qiáng)烈懷疑對(duì)人和環(huán)境有害的溶劑,其殘留量必須控制在規(guī)定的范圍內(nèi);第2類溶劑:指無(wú)基因毒性但有動(dòng)物致癌性的溶劑;第3類溶劑:指對(duì)人體低毒的溶劑。在無(wú)需論證的情況下,殘留溶劑的量不高于0.5%是可接受的,但高于此值則須證明其合理性;第4類:尚無(wú)足夠毒理學(xué)資料的溶劑。第7頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月有機(jī)溶劑的分類類別毒性PDE（mg/天）第一類溶劑人體致癌物、疑為人體致癌物或環(huán)境危害物0.1以下(1,1,1)三氯乙烷除外第二類溶劑有非遺傳致癌毒性或其他不可逆毒性、或其他嚴(yán)重的可逆毒性0.5-50第三類溶劑對(duì)人體低毒>50第四類溶劑沒(méi)有足夠毒性資料第8頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月限度的制定殘留量表示方法：濃度限度計(jì)算公式：濃度限度（%）＝PDE/(1000×劑量)×100%其中：PDE：mg/天劑量：一般為10g/天第9頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂和修訂PDE、濃度限度的比較PDE值：絕對(duì)值，控制精確，但可能忽略多種溶劑的綜合影響。濃度限度：以PDE為基礎(chǔ)，并采用比較大的每天給藥量計(jì)算，給出了一個(gè)比較大的安全系數(shù)。目前情況下，采用濃度限度比較簡(jiǎn)便，而且只要日攝入總量不超過(guò)10g，就無(wú)需進(jìn)一步計(jì)算。第10頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月藥物中有機(jī)溶劑的引入研究對(duì)象：原料藥/輔料、制劑原料藥/輔料：合成過(guò)程中引入包括：作為合成原料或反應(yīng)溶劑引入作為反應(yīng)副產(chǎn)物引入由其他合成原料或其他溶劑帶入制劑各種成份（原料藥、輔料）帶入制劑制備過(guò)程中引入制劑制備過(guò)程中引入（緩、控釋微丸包衣過(guò)程使用有機(jī)溶劑；難溶性藥物固體分散）他克莫司溶于無(wú)水乙醇和二氯甲烷中分散。第11頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月藥物中有機(jī)溶劑的引入研究集中在：原料藥的第一種情況影響因素：有機(jī)溶劑在合成過(guò)程中使用的步驟后續(xù)溶劑的影響中間體的影響其他（如副反應(yīng)等）有機(jī)溶劑的使用和殘留與合成工藝密不可分，是評(píng)價(jià)合成工藝優(yōu)劣，篩選、確定合成工藝的重要因素之一。第12頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月藥物中有機(jī)溶劑的引入第一類溶劑原則：考慮其毒性，建議盡量避免使用。當(dāng)合成路線涉及此類溶劑時(shí)合成化學(xué)發(fā)展水平判斷使用是否合理合理不合理嚴(yán)格控制殘留量替代研究臨床研究前臨床研究期間產(chǎn)品上市后第13頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月確定何種溶劑需進(jìn)行研究的原則意義和目的保障臨床用藥安全，控制產(chǎn)品質(zhì)量與其他方面研究工作密不可分進(jìn)一步驗(yàn)證工藝控制的合理性為確定合理可行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供數(shù)據(jù)支持思考的出發(fā)點(diǎn)有機(jī)溶劑的毒性產(chǎn)品的合成工藝第14頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月確定何種溶劑需進(jìn)行研究的原則EMEA第一類溶劑：不宜使用。一旦作為起始原料、溶劑，或者反應(yīng)副產(chǎn)物，或者由其他溶劑帶入時(shí)，殘留量需符合ICH相關(guān)規(guī)定。殘留量控制方法：隨引入情況不同而不同直接控制終端產(chǎn)品控制中間體控制引入第一類溶劑的物質(zhì)第15頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月確定何種溶劑需進(jìn)行研究的原則EMEA第二類溶劑：可直接對(duì)終產(chǎn)品進(jìn)行控制，可對(duì)中間體進(jìn)行控制，結(jié)果需符合ICH相關(guān)規(guī)定當(dāng)6批試生產(chǎn)規(guī)?；蛘?批生產(chǎn)規(guī)模的中間體檢測(cè)結(jié)果顯示殘留量低于ICH規(guī)定限度的十分之一時(shí)，可不對(duì)終產(chǎn)品進(jìn)行控制。第16頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月確定何種溶劑需進(jìn)行研究的原則研究原則：考慮到各類有機(jī)溶劑有毒性和在終產(chǎn)品中殘留的可能性，建議：第一類溶劑：無(wú)論任何步驟使用，均需進(jìn)行檢測(cè)第二類溶劑：無(wú)論任何步驟使用，均需進(jìn)行檢測(cè)第三類溶劑：建議可僅對(duì)用于終產(chǎn)品精制的此類溶劑進(jìn)行研究。第17頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月確定何種溶劑需進(jìn)行研究的原則研究原則：第四類溶劑若結(jié)構(gòu)與毒性大的溶劑非常接近，建議盡量不使用注意中間體的處理，盡量除盡根據(jù)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，參考其他的有機(jī)溶劑的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)和控制注意檢測(cè)圖譜中未知峰的情況，盡量進(jìn)行歸屬，若無(wú)法歸屬，可以控制揮發(fā)性雜質(zhì)總量。第18頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月若國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中未控制殘留溶劑，建議根據(jù)起始原料的制備工藝，對(duì)可能存在的殘留溶劑一并在終產(chǎn)品中進(jìn)行控制。如果采用尚未批準(zhǔn)的原料藥、化工中間體等作為起始原料，建議根據(jù)起始原料的制備工藝，對(duì)可能存在的殘留溶劑一并在終產(chǎn)品中進(jìn)行控制。第19頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月9質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立

附錄中無(wú)限度規(guī)定和未收載的有機(jī)溶劑:如在藥物的制備過(guò)程中使用到了這類溶劑， 建議藥物研發(fā)者盡量檢索有關(guān)的毒性等研 究資料，關(guān)注其對(duì)臨床用藥安全性和藥物 質(zhì)量的影響。第20頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月表1藥品中常見的殘留溶劑及限度第一類溶劑（應(yīng)該避免使用）

溶劑名稱 英文名 限度（ppm) 苯 Benzene 2 四氯化碳 Carbontetrachloride 4 1，2－二氯乙烷 1,2-Dicloroethane 5 1，1-二氯乙烯 1,1-Dichloroethene8 1，1，1－三氯乙烷1,1,1-Trichloroethane1500

第21頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二類溶劑（應(yīng)該限制使用）溶劑名稱 英文名 濃度限度（ppm)乙腈 Acetonitrile 410 氯苯 Chlorobenzene 360 氯仿 Chloroform 60 環(huán)己烷 Cyclohexane 3880 1，2－二氯乙烯 1,2-Dichloroethene 1870 二氯甲烷 Dichloromethane 600 1，2－二甲氧基乙烷 1,2-Dimethoxyethane100

第22頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二類溶劑（應(yīng)該限制使用）N,N-二甲氧基乙酰胺N,N-Dimethylacetamide 1090 N,N-二甲氧基甲酰胺N,N-Dimethylformamide 880 1，4－二氧六環(huán) 1,4-Dioxane 380 2－乙氧基乙醇 2-Ethoxyethanol 160 乙二醇 Ethyleneglycol 62 甲酰胺 Formamide 220 正己烷 Hexane 290 甲醇 Methanol 3000 2－甲氧基乙醇 2-Methoxyethanol 50 甲基丁基酮 Methylbutylketone 50 甲基環(huán)己烷 Methylcyclohexane 1180

第23頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二類溶劑（應(yīng)該限制使用）N-甲基吡咯烷酮 N-Methylpyrrolidone 4840 硝基甲烷 Nitromethane 50 吡啶 Pyridine 200 四氫噻砜 Sulfolane 160 四氫化萘 Tetralin 100 四氫呋喃 Tetrahydrofuran 720 甲苯 Toluene 890 1，1，2－三氯乙烯 1,1,2-Trichloroethene80 二甲苯﹡ Xylene 2170 ﹡通常含有60％間二甲苯，14％對(duì)二甲苯，9％鄰二甲苯和17％乙苯 第24頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第三類溶劑（GMP或其它質(zhì)控要求限制使用）溶劑名稱 英文名 濃度限度 （ppm) 乙酸 Aceticacid 5000 丙酮 Acetone 5000 甲氧基苯 Anisole 5000 正丁醇 1-Butanol 5000 仲丁醇 2-Butanol 5000 乙酸丁酯 Butylacetate 5000 叔丁基甲基醚 tert-Butylmethylether 5000 異丙基苯 Cumene 5000 二甲亞砜 Dimethylsulfoxide 5000 乙醇 Ethanol 5000 乙酸乙酯 Ethylacetate 5000 乙醚 Ethylether 5000 甲酸乙酯 Ethylformate 5000 第25頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第三類溶劑（GMP或其它質(zhì)控要求限制使用）甲酸 Formicacid 5000 正庚烷 Heptane 5000 乙酸異丁酯 Isobutylacetate 5000 乙酸異丙酯 Isopropylacetate 5000 乙酸甲酯 Methylacetate 5000 3－甲基－1－丁醇 3-Methyl-1-butanol 5000 丁酮 Methylethylketone 5000 甲基異丁基酮 Methylidobutylketone 5000 異丁醇 2-Methyl-1-propanol 5000 正戊烷 Pentane 5000 正戊醇 1-Pentanol 5000 正丙醇 1-Propanol 5000 異丙醇 2-Propanol 5000 乙酸丙酯 Propylacetate 5000 第26頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第四類溶劑（尚無(wú)足夠毒理學(xué)資料）溶劑名稱 英文名

1，1－二乙氧基丙烷 1，1－Diethoxypropane 1，1－二甲氧基甲烷 1,1-Dimethoxymethane 2，2－二甲氧基丙烷 2,2-Dimethoxypropane 異辛烷 Isooctane 異丙醚 Isopropylether 甲基異丙基酮 Methylisopropylketone 甲基四氫呋喃 Methyltetrahydrofuran 石油醚 Petroleumether 三氯乙酸 Trichloroaceticacid 三氟乙酸 Trifluoroaceticacid

第27頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月殘留溶劑測(cè)定方法干燥失重：專屬性差GC法(普通)：首選方法頂空進(jìn)樣法直接進(jìn)樣法HPLC法：例如測(cè)定吡啶離子色譜法：測(cè)定N-甲基吡咯烷酮?dú)赓|(zhì)聯(lián)用第28頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定方法分類1.直接進(jìn)樣法適用范圍：沸點(diǎn)高溶劑或受熱不易分解樣品。優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便、無(wú)需專用設(shè)備，絕對(duì)進(jìn)樣量大。缺點(diǎn)：污染進(jìn)樣口及柱子，溶劑峰響應(yīng)大，樣品分解產(chǎn)物或溶劑雜質(zhì)峰可能影響測(cè)定，對(duì)溶劑的純度要求高。第29頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.頂空進(jìn)樣法（HeadspaceAnalysis)2.1靜態(tài)頂空技術(shù)

2.2動(dòng)態(tài)頂空技術(shù)（吹掃捕集法）適用范圍：沸點(diǎn)低溶劑或樣品本身對(duì)測(cè)定有影響。優(yōu)點(diǎn)：在較低溫度下進(jìn)行，避免組分分解；減少溶解樣品的溶劑量和樣品本身對(duì)色譜系統(tǒng)的干擾和污染，增加色譜柱的壽命。缺點(diǎn)：需要特定的頂空進(jìn)樣裝置，成本較高，對(duì)沸點(diǎn)較高的溶劑檢測(cè)靈敏度不夠，一般多應(yīng)用于沸點(diǎn)100℃以下的溶劑。第30頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月頂空進(jìn)樣法的原理頂空分析是通過(guò)樣品基質(zhì)上方的氣體成分來(lái)測(cè)定這些組分在原樣品中的含量。這是一種間接的分析方法，其基本理論是在一定條件下氣相和凝聚相（液相或固相）之間存在著分配平衡。所以氣相的組成能反映凝聚相的組成。第31頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第32頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第33頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第34頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第35頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月當(dāng)樣品的蒸氣壓相當(dāng)?shù)蜁r(shí)，色譜峰面積(Ai)與揮發(fā)性組分（i）的蒸氣壓（Pi)成正比

Ai=CiPiCi與物質(zhì)種類及檢測(cè)器有關(guān)的特定常數(shù)。第36頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月對(duì)于理想混合體系，依據(jù)拉烏爾定律：

Pi=γiP0iXiP0i為純組分（i）的蒸氣壓，Xi為組分（i）的摩爾分?jǐn)?shù),γi組分的活度系數(shù)。第37頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

服從拉烏爾定律的混合體系，其峰面積與濃度成線性關(guān)系。但在高濃度區(qū)域內(nèi)分壓的變化與濃度變化不成線性關(guān)系，有時(shí)甚至與濃度無(wú)關(guān)。如果不注意這一點(diǎn)，頂空分析會(huì)得到錯(cuò)誤的結(jié)果。因此分析中定量校正尤為重要。在很多情況下，樣品溶液若能充分稀釋，則能使其接近理想體系，服從拉烏爾定律。第38頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第39頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月頂空進(jìn)樣法的特點(diǎn)１、樣品不需要前處理，它只取氣相部分進(jìn)行分析，大大減少了樣品基質(zhì)對(duì)分析的干擾。２、進(jìn)樣量大，靈敏度高，可用于痕量有機(jī)揮發(fā)性物質(zhì)的測(cè)定。３、對(duì)于易揮發(fā)或易分解和無(wú)法直接進(jìn)樣分析的液體或固體樣品而言，更有它的實(shí)用價(jià)值。除分析中草藥中揮發(fā)性成分外，還常用于固體藥物、包裝材料、藥物的殘留溶劑分析第40頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月頂空分析可以看成是一種氣相萃取方法，即用氣體作“溶劑”來(lái)萃取樣品中的揮發(fā)性成分，因而頂空分析就是一種理想的樣品凈化方法。傳統(tǒng)的液液萃取及SPE都是將樣品溶解在液體中，不可避免地會(huì)有一些共萃取物干擾分析。第41頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月靜態(tài)頂空分析裝置手動(dòng)進(jìn)樣裝置第42頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月采用手動(dòng)進(jìn)樣時(shí)，所需設(shè)備簡(jiǎn)單，只要有一個(gè)控溫精確的恒溫槽和頂空瓶。將裝有樣品的頂空瓶置于恒溫槽中，在一定的溫度下達(dá)到平衡后，就可用注射器從容器中抽取頂空氣體，注入GC進(jìn)行分析。第43頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月手動(dòng)進(jìn)樣的的兩個(gè)缺點(diǎn)1.壓力控制難以實(shí)現(xiàn)。2.溫度的控制，注射器的溫度低時(shí)，某些沸點(diǎn)高的樣品組分很容易冷凝。由于上述原因，手動(dòng)進(jìn)樣的準(zhǔn)確度差，分析重現(xiàn)性難以保證。在只作定性分析時(shí)，手動(dòng)進(jìn)樣不失為一種經(jīng)濟(jì)的方法，要作精確的定量分析最好用自動(dòng)頂空進(jìn)樣裝置。第44頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月自動(dòng)頂空進(jìn)樣裝置第45頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月自動(dòng)頂空進(jìn)樣裝置第46頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月頂空進(jìn)樣器工作原理第47頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第48頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第49頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第50頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第51頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第52頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第53頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第54頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第55頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第56頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月影響頂空分析的因素1.樣品的性質(zhì)頂空氣體中單個(gè)組分的含量既與其本身的揮發(fā)性有關(guān)，又與樣品基質(zhì)有關(guān)。特別是那些在樣品基質(zhì)中溶解度大（分配系數(shù)大）的組分，“基質(zhì)效應(yīng)”更為明顯。標(biāo)準(zhǔn)溶液必須有與原樣品相同或相似的基質(zhì)，否則，定量誤差將會(huì)很大。第57頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一些消除或減少基質(zhì)效應(yīng)的方法（1）利用鹽析作用在水溶液中加入無(wú)機(jī)鹽（如硫酸鈉）來(lái)改變揮發(fā)性組分的分配系數(shù)。但當(dāng)鹽濃度小于5%時(shí)幾乎沒(méi)有作用，故常用高濃度的鹽，甚至用飽和濃度。鹽析作用對(duì)極性組分的影響大于非極性組分的影響。此外，在水溶液中加入鹽之后，溶液體積會(huì)變化，定量線性范圍可能變窄。第58頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一些消除或減少基質(zhì)效應(yīng)的方法（2）在有機(jī)溶液中加入水，當(dāng)然，水要與有機(jī)溶劑相溶。這可以減少有機(jī)物在有機(jī)溶劑中的溶解度，增大其在頂空氣體的含量。分析靈敏度可增加幾倍～數(shù)百倍。（3）調(diào)節(jié)溶液的pH對(duì)于堿和酸，通過(guò)控制pH可使其解離度改變，或使其待測(cè)物的揮發(fā)性變的更大，從而有利于分析。（4）樣品應(yīng)溶解在合適的溶劑中，一般可用水、DMF、DMSO或其混合溶劑作溶媒。第59頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.樣品體積頂空瓶中的樣品體積對(duì)分析結(jié)果影響很大，因?yàn)樗苯記Q定相比β。

Cg=Co/(K+β)

其中β=Vg/VL

，K=CL/Cg

對(duì)于一個(gè)給定的氣液平衡系統(tǒng)，K和Co為常數(shù)，β與頂空氣體中的濃度成正比。樣品體積VL增大，β減少，Cg增大，靈敏度增加。但對(duì)于具體的樣品體系，還要看K的大小。當(dāng)K》β時(shí)，樣品體積的改變對(duì)分析靈敏度影響小。當(dāng)K《β時(shí)，影響就很大。第60頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

頂空分析是只從樣品瓶中取樣一次，每份樣品體積是否重現(xiàn)影響分析結(jié)果。待測(cè)組分的分配系數(shù)越?。ㄔ谀巯嘀腥芙舛仍酱螅?，樣品體積波動(dòng)所造成的結(jié)果誤差越大；反之越小。第61頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.平衡溫度樣品的平衡溫度與蒸氣壓直接相關(guān)，它影響分配系數(shù)。溫度越高，蒸氣壓越高，頂空氣體的濃度越高，分析靈敏度越高。待測(cè)組分的沸點(diǎn)越低，對(duì)溫度越敏感。因此，頂空分析特別適合于分析樣品中的低沸點(diǎn)成分。第62頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月溫度對(duì)頂空分析靈敏度的影響☆水中溶解性越好,平衡溫度越敏感。第63頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.平衡時(shí)間平衡時(shí)間取決于組分分子從樣品基質(zhì)到氣相的擴(kuò)散速度。擴(kuò)散速度越快，所需時(shí)間越短。擴(kuò)散系數(shù)與分子大小、介質(zhì)黏度及溫度有關(guān)。溫度越高，黏度越低，擴(kuò)散系數(shù)越大。所以，提高溫度可以縮短平衡時(shí)間。第64頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月與樣品瓶有關(guān)的因素1.樣品瓶要求體積準(zhǔn)確，能承受一定的壓力，密封性能好，對(duì)樣品無(wú)吸附。樣品瓶的體積有5～20ml多種，具體選用那種，要根據(jù)儀器及樣品情況而定。頂空瓶若要反復(fù)使用，可用洗液浸泡，然后用蒸餾水沖洗，最后置烘箱中烘干。第65頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.密封墊密封墊的材料主要有三種：硅橡膠、丁基橡膠、氟橡膠。硅橡膠墊耐高溫、丁基橡膠墊價(jià)格低、氟橡膠墊惰性好。為防止密封墊對(duì)樣品組分的吸附，現(xiàn)在多用內(nèi)襯聚四氟乙烯或鋁的密封墊。選用時(shí)要看分析條件（溫度）和樣品具體情況而定。常規(guī)分析可用價(jià)格低的丁基橡膠墊，痕量分析則最好選用有內(nèi)襯的硅橡墊膠。第66頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月頂空分析方法開發(fā)的步驟1.確定如何處理樣品。如待測(cè)組分揮發(fā)性太低，則可用直接進(jìn)樣測(cè)定?？紤]用何種溶劑溶解。2.根據(jù)待測(cè)組分確定分析條件---色譜柱、檢測(cè)器、及操作條件。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)樣分析來(lái)優(yōu)化分離條件。3.確定平衡時(shí)間和平衡溫度。4.樣品的分析，主要考察靈敏度是否滿足要求。通過(guò)改變分流比、頂空取樣條件（改變進(jìn)樣時(shí)間或定量管）來(lái)控制信號(hào)的大小。改變平衡溫度、相比、消除基質(zhì)效應(yīng)以提高分析靈敏度。5.對(duì)測(cè)定方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證——線性、回收率、精密度、最低檢測(cè)量第67頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第68頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第69頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第70頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月聚苯乙烯（PS）中單體苯乙烯的測(cè)定2-甲氧基乙醇作內(nèi)標(biāo)（2）第71頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月醫(yī)療設(shè)備中環(huán)氧乙烷（EO）的測(cè)定環(huán)氧乙烷（EO）用于醫(yī)療設(shè)備的消毒，它是一種已知的致癌物質(zhì)。有關(guān)法規(guī)要求用頂空法測(cè)定經(jīng)消毒的醫(yī)療設(shè)備中EO的含量?？捎脴?biāo)準(zhǔn)加入法測(cè)定聚苯乙烯（PVC）和高密度聚乙烯（HDPE）制成的醫(yī)療設(shè)備經(jīng)消毒后殘留的EO。第72頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月頂空分析條件：HP7694自動(dòng)頂空進(jìn)樣器，平衡溫度：100℃，平衡時(shí)間：60min，輸送管和連接管溫度：105℃，瓶壓：10psi，加壓時(shí)間0.5min，定量管體積1ml，沖樣時(shí)間0.15min，進(jìn)樣時(shí)間：2.3min。第73頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月多點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)加入法第74頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月兩種方法的原理方法A和B是正交處理方法。在兩種方法中都有共流出現(xiàn)象，但是方法A中的共流出峰在方法B中得到了解決，反之亦然。最終通過(guò)方法C進(jìn)行定量分析。USP殘留量測(cè)定介紹第75頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月USP:方法A第76頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月頂空進(jìn)樣器操作條件操作參數(shù)123平衡溫度（℃）8010580平衡時(shí)間（min)604545轉(zhuǎn)移管溫度（℃）80-90105-11580-90加壓時(shí)間（s）≥60≥60≥60進(jìn)樣體積（ml）111第77頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月水溶性物質(zhì)方法A的制備第78頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法A系統(tǒng)適用性第79頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法A-1類溶劑第80頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法A-二類溶劑，混合液A第81頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法A-二類溶劑，混合液B第82頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法A-3類溶劑第83頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法B第84頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法B第85頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法B：系統(tǒng)適用性第86頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法B－1類第87頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法B-2類第88頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法B-2類第89頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法B-3類溶劑第90頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法C第91頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法C與方法A相同再加上：標(biāo)準(zhǔn)溶液:在方法A和B中已定性的峰用USP溶劑標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)稀釋增敏溶液供試品與標(biāo)準(zhǔn)品的混合液第92頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法C:系統(tǒng)適用性1類標(biāo)準(zhǔn)溶液–信噪比S/N:1,1,1–三氯乙烷>51類系統(tǒng)適用性溶液–信噪比S/N:所有的峰>3

2類MixtureAStandardSolution–分離度:乙腈與二氯甲烷>1.0如果用方法B的話，按照它的系統(tǒng)適用性要求。第93頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月計(jì)算每個(gè)殘留溶劑的量ppm=5(C/W)[ru/(rst-ru)]C=濃度,ppm,標(biāo)準(zhǔn)溶液的相關(guān)美國(guó)對(duì)照品濃度W=質(zhì)量,g,為供試品貯備液中供試品的重量r=供試品溶液的殘留溶劑的峰響應(yīng)rst=加入標(biāo)準(zhǔn)溶液供試品溶液的殘留溶劑的峰響應(yīng)方法C:計(jì)算第94頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月供試液制備——水溶性樣品供試品儲(chǔ)備溶液：取250mg供試品，置25ml量瓶中，用水并稀釋至刻度。供試品溶液：取上述儲(chǔ)備液5ml，置頂空瓶中，加水1ml，加塞，加蓋。第95頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月供試液制備——非水溶性樣品供試品溶液儲(chǔ)備液:轉(zhuǎn)移500mg的待測(cè)物質(zhì),精確稱取,至一個(gè)10ml量瓶,用二甲基甲酰胺稀釋至刻度，混勻。供試品溶液:轉(zhuǎn)移供試品儲(chǔ)備液1.0ml至一合適的頂空進(jìn)樣瓶中，包含有5.0ml的水，加塞，壓蓋，混勻。標(biāo)記溶液:轉(zhuǎn)移1.0ml供試品儲(chǔ)備液到一合適的頂空進(jìn)樣瓶中，再加入1ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和4.0ml的水，加塞，壓蓋，混勻(制備在方法A和方法B中已經(jīng)定性的各峰的增敏溶液)第96頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月可選的方法

USP-NF總要求:也可選用別的在準(zhǔn)確度、靈敏度、精密度、選擇性或適用性方面有一定優(yōu)勢(shì)的方法，以滿足自動(dòng)化或減少數(shù)據(jù)處理或其它特殊的要求。這種方法應(yīng)該得到驗(yàn)證……當(dāng)出現(xiàn)不同或爭(zhēng)議時(shí)，只有按藥典方法獲得的結(jié)果為決定性結(jié)果USP-NF:GeneralChapter<1225>第97頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月USP固定相組成推薦G1二甲基聚硅氧烷油DB-1G2二甲基聚硅氧烷膠DB-1G350%苯基-50%甲基聚硅氧烷HP-50+G53-氰丙基聚硅氧烷DB-23G6三氟丙基甲基聚硅氧烷DB-210G750%氰丙基聚硅氧烷-50％苯甲基硅氧烷DB-225G14聚乙二醇（平均分子量950-1050）WaxG15聚乙二醇（平均分子量3000-3700）WaxG16聚乙二醇（平均分子量15000）WaxUSP固定相（26種）第98頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月USP固定相組成推薦G1925%苯基-25％氰丙基甲基硅氧烷DB-225G20聚乙二醇（分子量380-420）WaxG25聚乙二醇TPA(20M對(duì)苯二甲酸)FFAPG275％苯基-95%甲基聚硅氧烷DB-5G2825％苯基-75%甲基聚硅氧烷DB-35G3220％苯甲基-80%二甲基聚硅氧烷DB-35G35聚乙二醇硝基對(duì)苯二甲酸酯雙環(huán)氧化物FFAPG361%乙烯基-5％苯甲基聚硅氧烷DB-5G38G1固定相，加拖尾抑制劑DB-1USP固定相第99頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月USP固定相組成推薦G361%乙烯基-5％苯甲基聚硅氧烷DB-5G38G1固定相，加拖尾抑制劑DB-1G39聚乙二醇（平均分子量1500）WaxG41苯甲基二甲基聚硅氧烷(10％苯取代)DB-5G4235％苯基-65％二甲基乙烯基硅烷DB-35G436％氰丙基苯-94％二甲基聚硅氧烷1301624G45二乙烯基苯-乙二醇-二丙烯酸酯PLOTUG4614％氰丙基苯基-86％甲基聚硅氧烷DB-1701USP固定相第100頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月歐洲藥典有關(guān)殘留溶劑的內(nèi)容溶劑分類同ICH測(cè)定方法為頂空進(jìn)樣法，分A、B兩個(gè)系統(tǒng)。下列溶劑不宜用頂空法測(cè)定：甲酰胺（formamide）2-乙氧基乙醇（2-methylethanol)四氫噻砜（sulfolane)2-甲氧基乙醇（2-methoxyethanol)乙二醇（ethyleneglycol)N-甲基吡咯啉（N-methylpyrrolidone)第101頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月歐洲藥典殘留量測(cè)定－樣品制備根據(jù)樣品的溶解性選擇合適的溶劑水溶性樣品用水作溶劑，非水溶性樣品用二甲基甲酰胺作溶劑。測(cè)定二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺時(shí)用1、3-dimethyl-2-dimethyl-2-imidazolidinone(DMI)作溶劑。供試液制備：取0.2g樣品，用上述溶劑溶解，稀釋至20ml。測(cè)定溶液:

取供試液5.0ml，加1.0ml空白溶劑。第102頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月對(duì)照溶液的制備對(duì)照儲(chǔ)備液：取待測(cè)溶劑，溶于適量二甲亞砜中，加水稀釋至100ml，取適量用水稀釋至一定濃度。測(cè)試用對(duì)照溶液：取樣品溶液5.0ml，置頂空瓶中，加1.0ml對(duì)照儲(chǔ)備液，加蓋，密封。第103頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月歐洲藥典殘留量測(cè)定色譜條件－A色譜柱：30m×0.32（0.53）mm×1.8（3.0）μm6%氰丙基苯-94％二甲基聚硅氧烷（HP-624）載氣：N2

或He線速度:35cm/s

分流比：5：1進(jìn)樣口溫度：140℃檢測(cè)器溫度：250℃柱溫：40℃（20min），20℃/min升溫至240℃，維持20min。系統(tǒng)要求：乙腈與二氯甲烷的分離度>1.0，信噪比：>5,RSD<15%第104頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第105頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第106頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月歐洲藥典殘留量測(cè)定色譜條件－B色譜柱：30m×0.32（0.53）mm×0.25μm固定液macrogol20，000（HP-Wax）載氣：N2

或He線速度:35cm/s

分流比：5：1進(jìn)樣口溫度：140℃檢測(cè)器溫度：FID250℃柱溫：50℃（20min），6℃/min升溫至165℃，維持20min。系統(tǒng)要求：乙腈與三氯乙烯的分離度>1.0，信噪比：>5，RSD<15%第107頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第108頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第109頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月結(jié)果判斷測(cè)定溶液色譜峰面積小于對(duì)照溶液峰面積的50％，結(jié)果符合規(guī)定。如需定量測(cè)定，可采用標(biāo)準(zhǔn)加入法測(cè)定。第110頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月中國(guó)藥典2010年版附錄殘留量測(cè)定方法

藥物中常見的殘留溶劑及限度見附表1，除另有規(guī)定外，第一、第二、第三類溶劑的殘留量應(yīng)符合表中的規(guī)定；對(duì)其他溶劑，應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)工藝的特點(diǎn)，制定相應(yīng)的限度，使其符合產(chǎn)品規(guī)范、GMP或其他基本的質(zhì)量要求。第111頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月色譜柱

毛細(xì)管柱

除另有規(guī)定外，極性相近的同類色譜柱之間可以互代使用。（1）非極性色譜柱固定液為100％的二甲基聚硅氧烷的毛細(xì)管柱。（2）極性色譜柱固定液為聚乙二醇（PEG-20M）的毛細(xì)管柱。第112頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

（3）中極性色譜柱固定液為（35%）二苯基-（65%）甲基聚硅氧烷，（50%）二苯基-（50%）二甲基聚硅氧烷，（35%）二苯基-（65%）二甲基聚硅氧烷，（14%）氰丙基苯基-（86%）二甲基聚硅氧烷，（6%）氰丙基苯基-（94%）二甲基聚硅氧烷的毛細(xì)管柱。第113頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（4）弱極性色譜柱固定液為（5%）苯基-（95%）甲基聚硅氧烷，（5%）二苯基-（95%）二甲基聚硅氧烷共聚物的毛細(xì)管柱。第114頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．填充柱以直徑為0.25～0.18mm的乙二烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他適宜的填料作為固定相。第115頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（1）用待測(cè)物的色譜峰計(jì)算，毛細(xì)管色譜柱的理論板數(shù)均應(yīng)大于5000；填充柱法的理論板數(shù)應(yīng)大于1000。（2）色譜圖中，待測(cè)物色譜峰與其相鄰的色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5；（3）以內(nèi)標(biāo)法測(cè)定時(shí)，對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，所得待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)不大于5％；若以外標(biāo)法測(cè)定，所得待測(cè)物峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)不大于10％。第116頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月供試品溶液的制備

1．頂空進(jìn)樣除另有規(guī)定外，精密稱取供試品0.1～1g；通常以水為溶劑；對(duì)于非水溶性藥物，可采用N，N－二甲基甲酰胺、二甲基亞砜或其他適宜溶劑；根據(jù)供試品和待測(cè)溶劑的溶解度，選擇適宜的溶劑且應(yīng)不干擾待測(cè)溶劑的測(cè)定。根據(jù)品種正文中殘留溶劑的限度規(guī)定配制供試品溶液，濃度滿足系統(tǒng)定量測(cè)定的需要。第117頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．溶液直接進(jìn)樣精密稱取供試品適量，用水或合適的有機(jī)溶劑使溶解；根據(jù)品種正文中殘留溶劑的限度規(guī)定配制供試品溶液，其濃度滿足系統(tǒng)定量測(cè)定的需要。第118頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月對(duì)照品溶液的制備

精密稱取各品種項(xiàng)下規(guī)定檢查的有機(jī)溶劑適量，采用與制備供試品溶液相同的方法和溶劑制備對(duì)照品溶液。若為限度實(shí)驗(yàn)，根據(jù)殘留溶劑的限度規(guī)定確定對(duì)照品溶液的濃度；若為定量測(cè)定，為保證定量結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)根據(jù)供試品中殘留溶劑的實(shí)際殘留量確定對(duì)照品溶液的濃度；通常對(duì)照品溶液的色譜峰面積與供試品溶液中對(duì)應(yīng)的殘留溶劑的色譜峰面積以不超過(guò)2倍為宜。必要時(shí)，應(yīng)重新調(diào)整供試品溶液和對(duì)照品溶液的濃度。第119頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月測(cè)定法

第一法毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣等溫法當(dāng)需要檢查的有機(jī)溶劑數(shù)量不多，并極性差異較小時(shí)，可采用此法。色譜條件柱溫一般為40～100℃；常以氮?dú)鉃檩d氣，流速為每分鐘1.0～2.0ml；頂空瓶加熱溫度為70～85℃，頂空瓶加熱時(shí)間30～60分鐘；進(jìn)樣口溫度為200℃；如采用FID檢測(cè)器，溫度為250℃。測(cè)定法取對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣不少于2次，測(cè)定待測(cè)峰的峰面積。第120頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二法毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣系統(tǒng)程序升溫法

當(dāng)需要檢查的有機(jī)溶劑數(shù)量較多并極性差異較大時(shí)，可采用此法。色譜條件如為非極性色譜系統(tǒng)，柱溫一般先在30℃維持7分鐘，再以8℃/min的速度升至120℃，維持15分鐘；如為極性色譜系統(tǒng)，柱溫一般先在60℃維持6分鐘；再以8℃/min的升溫速率升至100℃，維持20分鐘；以氮?dú)鉃檩d氣，流速為2.0ml/min；頂空瓶溫度70～85℃，頂空時(shí)間30～60分鐘；進(jìn)樣口溫度為200℃；如采用FID檢測(cè)器，溫度為250℃。第121頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

具體到單個(gè)藥品的殘留溶劑檢查時(shí)，可根據(jù)該品種項(xiàng)下的殘留溶劑組成調(diào)整程序升溫速率。測(cè)定法取對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣不少于2次，測(cè)定待測(cè)峰的峰面積。第122頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第三法溶液直接進(jìn)樣法

可采用填充柱，亦可采用適宜極性的毛細(xì)管柱。測(cè)定法取對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣不少于3次，每次2μl，測(cè)定待測(cè)峰的峰面積。第123頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月計(jì)算法

（1）限度實(shí)驗(yàn)：以內(nèi)標(biāo)法測(cè)定時(shí)，計(jì)算單位重量樣品中的色譜峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比；供試品溶液所得的峰面積比的平均值不得大于由對(duì)照品溶液所得的峰面積比的平均值。以外標(biāo)法測(cè)定時(shí)，供試品溶液所得的單位重量中樣品待測(cè)物峰的平均面積不得大于由標(biāo)準(zhǔn)溶液所得的待測(cè)物峰的平均峰面積。（2）定量測(cè)定：按內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法計(jì)算各殘留溶劑的量。第124頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月頂空進(jìn)樣法測(cè)定應(yīng)注意問(wèn)題A．應(yīng)根據(jù)供試品中殘留溶劑的沸點(diǎn)選擇頂空溫度。對(duì)沸點(diǎn)較高的殘留溶劑，通常選擇較高的頂空溫度；但此時(shí)應(yīng)兼顧供試品的熱分解特性，盡量避免供試品產(chǎn)生的揮發(fā)性熱分解產(chǎn)物對(duì)測(cè)定的干擾。第125頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月B．頂空時(shí)間一般為30～45分鐘，以保證供試品溶液的氣-液兩相有足夠的時(shí)間達(dá)到平衡。頂空時(shí)間通常不宜過(guò)長(zhǎng)，如超過(guò)60分鐘，可能引起頂空瓶的氣密性變差，導(dǎo)致定量準(zhǔn)確性的降低。

C．對(duì)照品溶液與供試品溶液必須使用相同的頂空條件。第126頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月定量方法的驗(yàn)證

當(dāng)采用頂空色譜系統(tǒng)測(cè)定時(shí)，供試品與對(duì)照品處于不完全相同的基質(zhì)中，故應(yīng)考慮氣液平衡過(guò)程中的基質(zhì)效應(yīng)。由于標(biāo)準(zhǔn)加入法可以消除供試品溶液基質(zhì)與對(duì)照品溶液基質(zhì)不同所致的基質(zhì)效應(yīng)的影響，故通常采用標(biāo)準(zhǔn)加入法驗(yàn)證定量方法的準(zhǔn)確性。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)加入法與其他定量方法的結(jié)果不一致時(shí)，應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)加入法的結(jié)果為準(zhǔn)。第127頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月干擾峰的排除

供試品中的未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解物易對(duì)殘留溶劑的測(cè)定產(chǎn)生干擾。干擾作用包括在測(cè)定的色譜系統(tǒng)中未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解物與待測(cè)物的保留值相同（共出峰）；或熱降解產(chǎn)物與待測(cè)物的結(jié)構(gòu)相同（如甲氧基熱裂解產(chǎn)生甲醇）。第128頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

當(dāng)測(cè)定的有機(jī)溶劑殘留量超出限度，但未能確定供試品中是否有未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解物對(duì)測(cè)定有干擾作用時(shí)，應(yīng)通過(guò)試驗(yàn)排除干擾作用的存在。對(duì)第一類干擾作用，通常采用在另一種極性相反的色譜柱系統(tǒng)中對(duì)相同樣品再進(jìn)行測(cè)定，比較不同色譜系統(tǒng)中測(cè)定結(jié)果的方法。如二者結(jié)果一致，則可以排除測(cè)定中有共出峰的干擾；如二者結(jié)果不一致，則表明測(cè)定中有共出峰的干擾。對(duì)第二類干擾作用，通常要通過(guò)測(cè)定已知不含該溶劑的對(duì)照樣品來(lái)加以判斷。第129頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月含氮堿性化合物的測(cè)定

普通氣相色譜的不銹鋼管路、進(jìn)樣器的襯管等對(duì)有機(jī)胺等含氮堿性化合物具有較強(qiáng)的吸附作用，致使其檢出靈敏度降低。當(dāng)采用頂空進(jìn)行系統(tǒng)測(cè)定此類化合物時(shí)，應(yīng)采用惰性的硅鋼材料或鎳鋼材料管路；或采用溶液直接進(jìn)樣法測(cè)定。供試品溶液應(yīng)不呈酸性，以免待測(cè)物與酸反應(yīng)后不易氣化。第130頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

通常采用弱極性的色譜柱或經(jīng)堿處理過(guò)的色譜柱分析含氮堿性化合物，如果采用胺分析專用柱進(jìn)行分析，效果更好。對(duì)不宜采用氣相色譜法測(cè)定含氮堿性化合物，如N-甲基吡咯烷酮等可采用其他方法如離子色譜法等測(cè)定。第131頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

檢測(cè)器的選擇對(duì)含鹵素元素的殘留溶劑如氯仿等，采用ECD檢測(cè)器，易得到高的靈敏度。由于不同的實(shí)驗(yàn)室在測(cè)定同一藥品時(shí)可能采用了不同的實(shí)驗(yàn)方法，當(dāng)測(cè)定結(jié)果處于合格不合格邊緣時(shí)，以采用內(nèi)標(biāo)及標(biāo)準(zhǔn)加入法為準(zhǔn)。甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等不宜用頂空進(jìn)樣方式測(cè)定。第132頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月原料藥中有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定

以下簡(jiǎn)單介紹在新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中開發(fā)的一些測(cè)定實(shí)例。辛伐他汀原料殘留溶劑的檢測(cè)第133頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月對(duì)照溶液和供試品溶液的制備內(nèi)標(biāo)溶液的制備：精密量取丁酮適量，加80%DMSO溶液稀釋制成1ml含80μg的溶液。對(duì)照品溶液的制備：取上述溶劑適量，用內(nèi)標(biāo)溶液稀釋制成每1ml中含甲醇79μg、乙醇79μg、丙酮79μg、乙醚36μg、二氯甲烷40μg、正己烷13μg、四氫呋喃44μg、苯0.35μg、環(huán)己烷38μg、甲苯17μg的溶液作為對(duì)照溶液。第134頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月供試品溶液的制備：取樣品約0.5g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加內(nèi)標(biāo)溶液5ml，加蓋封密，即得。第135頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月頂空進(jìn)樣器條件頂空爐溫：80℃，熱平衡時(shí)間：30分鐘，充樣時(shí)間：0.2分鐘，進(jìn)樣時(shí)間：1分鐘。第136頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月辛伐他汀原料殘留溶劑的檢測(cè)1.甲醇2.乙醇3.丙酮4.乙醚5.二氯甲烷6.正己烷7.四氫呋喃8.苯9.環(huán)己烷10.甲苯混合對(duì)照溶液第137頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月四川某公司（Y-01-050801）第138頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月四川某公司（Y01-051101）第139頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月浙江某公司（050302）第140頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月樣品名：替米沙坦色譜柱：HP-624柱溫：50℃分流比：1：1溶劑：稀硫酸平衡溫度：80℃第141頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月替米沙坦樣品測(cè)定色譜圖第142頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月抗愛滋病新藥司他夫定（色譜柱：HP-INNOWAX柱溫：45℃）第143頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月司他夫定樣品測(cè)定色譜圖注意：樣品分解產(chǎn)物對(duì)測(cè)定的影響第144頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月樣品名：佐米曲普坦色譜柱：HP-50柱溫：50℃（10min），15℃/min至180℃（5min）溶劑：50%DMF平衡溫度：95℃第145頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月佐米曲普坦樣品測(cè)定色譜圖第146頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月鹽酸阿扎司瓊?cè)軇埩袅繙y(cè)定：對(duì)照溶液依次為氯仿、二氯乙烷、甲苯第147頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月鹽酸阿扎司瓊樣品溶液：RT4.287min為氯仿第148頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第149頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第150頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月殘留溶劑研究基本內(nèi)容1、確定被測(cè)殘留溶劑2、確定殘留溶劑類別3、限度確立4、確定測(cè)定方法5、選擇色譜柱和檢測(cè)器6、制備供試品和對(duì)照品溶液7、測(cè)定條件的優(yōu)化8、方法學(xué)驗(yàn)證9、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立10、其他第151頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1確定被測(cè)殘留溶劑一般原則(1)工藝中使用二類以上和重結(jié)晶用溶劑，及根 據(jù)工藝特點(diǎn)要求其它溶劑進(jìn)行殘留量研究。(2)建議對(duì)合成最后三步使用的三類溶劑也進(jìn)行研究。建議原則——仔細(xì)分析，別落下(1)申報(bào)資料合成工藝中用到所有有機(jī)溶劑(2)液態(tài)催化劑等(3)趨勢(shì):胺類和羧酸類第152頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2確定殘留溶劑類別☆鹽酸克林霉素棕櫚酸酯舉例?使用溶劑(６種):乙醇、丙酮(精制)、二氯甲烷、三氯甲烷、吡啶與DMF。?分類:測(cè)定方法確認(rèn)：考慮DMF沸點(diǎn)較高，吡啶頂空條件下檢測(cè)靈敏度較低，故上述兩種溶劑采用直接進(jìn)測(cè)定，其余溶劑采用頂空進(jìn)樣測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)制定：按照ICH規(guī)定將二類有機(jī)溶劑二氯甲烷、三氯甲烷、吡啶與DMF訂入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，限度參照ICH規(guī)定。同時(shí)將精制溶劑丙酮列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，限度為不得過(guò)0.1%。第153頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4確定定量方法選擇定量方法外標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)加入法:利用加入該組分前后色譜峰響應(yīng)信號(hào)的變化而計(jì)算被測(cè)組分含量的方法 操作:測(cè)定供試品,測(cè)定供試品＋對(duì)照品 使用:邊緣產(chǎn)品以標(biāo)準(zhǔn)加入法結(jié)果為準(zhǔn);頂空方式基質(zhì)效應(yīng)。第154頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月5選擇色譜柱和檢測(cè)器色譜柱分類填充柱和毛細(xì)管柱毛細(xì)管柱WCOT或PLOT極性大?。ò垂潭ㄒ簶O性分類）按內(nèi)徑分液膜厚度第155頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月填充柱大口徑毛細(xì)管柱常用毛細(xì)管柱5%OV101on80/100Chromosorb30m×0.53mm×0.88m30m×0.32mm×0.25m不同色譜柱類型分離效果的比較第156頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月5選擇色譜柱和檢測(cè)器填充柱和毛細(xì)管柱填充柱?柱效低，分離復(fù)雜樣品的能力差。?以直徑為0.25～0.18mm的乙二烯苯-乙基乙 烯苯型高分子多孔小球或其他適宜的填料作 為固定相。毛細(xì)管柱：柱效高，靈敏度高，分離好。第157頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月5選擇色譜柱和檢測(cè)器選擇合適色譜柱樣品與待測(cè)溶劑按照相似相溶原理選擇色譜非極性柱:各組分按沸點(diǎn)順序流出色譜柱，沸點(diǎn)低者先出。若試樣中有極性組分，相同沸點(diǎn)的極性組分先出峰。中等極性柱:各組分基本仍按沸點(diǎn)順序流出色譜柱，沸點(diǎn)低者先出。但沸點(diǎn)相同極性與非極性組分，極性組分后出峰。第158頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月5選擇色譜柱和檢測(cè)器毛細(xì)管柱—按液膜厚度分類薄膜比厚膜洗脫組分快，峰分離好、溫度低，適用高沸點(diǎn)、組分密集或熱敏化合物。大口徑柱保持分離度和保留時(shí)間，都只有厚膜。0.1～0.2μm薄膜和0.25～0.5μm標(biāo)準(zhǔn)膜適用高沸點(diǎn)化合物。1.0～1.5μm厚膜:測(cè)定適合流出溫度100～200℃。3～5μm超厚膜：分析氣體、溶劑和可吹掃出來(lái)的物質(zhì)。第159頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月5選擇色譜柱和檢測(cè)器選擇合適色譜柱極性柱:各組分按極性順序流出色譜柱，極性低者先出。注意:混合物中組分性質(zhì)差別，如分離極性與非極性混合物，一般選用極性柱。分離沸點(diǎn)差異較大的混合物，一般選用非極性柱。第160頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月5選擇色譜柱和檢測(cè)器選擇合適色譜柱根據(jù)經(jīng)驗(yàn)順序選擇ChP2005中100％的二甲基聚硅氧烷和聚乙二醇EPDB-624和Innowax儀器商手冊(cè)。如：Agilent產(chǎn)品目錄提供DB-1、DB-624和DB-Wax的出峰順序。第161頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月檢測(cè)器樣品類型靈敏度范圍氣體流量(mL/min.)載氣+尾吹氣氫氣空氣FID碳?xì)浠衔?0-100pg20-6030-40200-500TCD15-30n.an.a.

除載氣外的5-100ng其它所有物質(zhì)ECD有機(jī)鹵化物0.05-1pg30-60n.a.n.a.氯化溶劑50ppt-1ppm&農(nóng)藥殘留NPD有機(jī)氮化合物&0.1-10pg20-401-570-100有機(jī)磷化合物5選擇色譜柱和檢測(cè)器

檢測(cè)器的選擇第162頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月6制備供試品和對(duì)照品溶液溶劑選擇要求能同時(shí)溶解供試品和待檢殘留溶劑；當(dāng)樣品在溶解介質(zhì)中未完全溶解時(shí)，結(jié)果通常偏低且精密度差。溶劑自身及其雜質(zhì)不干擾待檢殘留溶劑的測(cè)定；DMSO、DMF和待檢殘留溶劑保持相對(duì)穩(wěn)定；避免使用污染性大、毒性大的溶劑。水是首選溶劑，特別是頂空進(jìn)樣系統(tǒng)。第163頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月6制備供試品和對(duì)照品溶液溶劑的選擇水溶性藥物：水非水溶性藥物：不揮發(fā)的酸、堿液；DMF或DMSO等，不可使用鹽酸液和氨水?？梢詥为?dú)使用，也可以混合使用頂空進(jìn)樣可選擇在80~90℃加熱能溶解樣品的溶劑。第164頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月6制備供試品和對(duì)照品溶液樣品的制備不可研磨樣品，必須原態(tài)取樣；不可超聲、不能加熱溶解樣品（直接進(jìn)樣法）；樣品置頂空瓶中壓蓋后可以超聲、加熱；測(cè)定酯類溶劑時(shí)不能采用酸或堿溶液，以免發(fā)生水解。第165頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月6制備供試品和對(duì)照品溶液樣品的制備

測(cè)定含氮的堿性溶劑時(shí)，供試品溶液應(yīng)不 呈酸性，以免被測(cè)物與酸反應(yīng)不易汽化； 測(cè)定含羧基的酸性溶劑時(shí)，供試品溶液應(yīng) 不呈堿性，以免被測(cè)物與堿反應(yīng)不易汽化。?如：測(cè)定氟伐他汀鈉(pH8.0～10.0)中乙酸 殘留量，不出峰，需對(duì)其甲酯化后測(cè)定。第166頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月6制備供試品和對(duì)照品溶液對(duì)照品溶液的制備對(duì)照品溶液：必須與供試品溶液相同溶劑。苯、甲苯、三氯甲烷等水溶性不好的溶劑，可先用少量DMF等溶解待查溶劑，再用水稀釋?！?010版新增：…采用與制備供試品溶液相同的溶劑制備對(duì)照品溶液。如用水作溶劑，應(yīng)先將待測(cè)有機(jī)溶劑溶解在50％二甲亞砜或N,N-二甲基甲酰胺溶液中，再用水逐步稀釋。第167頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月6制備供試品和對(duì)照品溶液供試品和對(duì)照品溶液濃度確定根據(jù)殘留溶劑的限度規(guī)定配制供試品溶液，濃度應(yīng)能滿足系統(tǒng)定量測(cè)定的需要一般供試品取樣量為0.1～1g限度試驗(yàn)：對(duì)照品溶液的濃度可按殘留溶劑規(guī)定的限度配置；定量測(cè)定：按實(shí)際殘留量配置，濃度相差最好不超過(guò)2倍為宜。必要時(shí)應(yīng)重新調(diào)整。第168頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月6制備供試品和對(duì)照品溶液頂空進(jìn)樣基質(zhì)效應(yīng)頂空氣體中單個(gè)組分的含量既與其本身的揮發(fā)性有關(guān)，又與樣品基質(zhì)有關(guān)。特別是那些在樣品基質(zhì)中溶解度大（分配系數(shù)大）的組分，基質(zhì)效應(yīng)更為明顯。

標(biāo)準(zhǔn)溶液必須有與原樣品相同或相似的基質(zhì)，否則可能導(dǎo)致定量誤差將會(huì)很大。標(biāo)準(zhǔn)加入法可以有效地排除基質(zhì)效應(yīng)的影響；當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)加入法結(jié)果與內(nèi)標(biāo)法結(jié)果系統(tǒng)偏差約10%時(shí)，可以認(rèn)為方法存在明顯的基質(zhì)效應(yīng)。第169頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月6制備供試品和對(duì)照品溶液☆鹽酸克林霉素棕櫚酸酯舉例?直接進(jìn)樣(吡啶與DMF):樣品在甲醇和乙醇中溶 解性均較好，考慮在極性柱中甲醇出峰較快， 干擾較少，故采用甲醇為溶解樣品的溶劑。?頂空進(jìn)樣:樣品在水中溶解性較好，故首選。同 時(shí)考慮三氯甲烷在水中溶解性較差，最后采用

5%DMF水溶液作為頂空測(cè)定溶解樣品溶劑。第170頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月7測(cè)定條件的優(yōu)化頂空條件優(yōu)化柱溫優(yōu)化進(jìn)樣口溫度優(yōu)化進(jìn)樣襯管氣路優(yōu)化第171頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月7測(cè)定條件的優(yōu)化頂空條件優(yōu)化平衡溫度對(duì)沸點(diǎn)較高殘留溶劑，必須較高的頂空溫度，兼顧供試品熱分解，避免產(chǎn)生揮發(fā)性熱分解產(chǎn)物干擾。溶劑的沸點(diǎn)，一般應(yīng)比溶解用溶劑沸點(diǎn)低10℃以上。在靈敏度能滿足的條件下，盡量采用較低的平衡溫度。第172頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月7測(cè)定條件的優(yōu)化頂空條件優(yōu)化常用平衡溫度水：頂空溫度不宜超過(guò)85℃EP/USP規(guī)定為80℃

頂空溫度為100℃(柱溫低于頂空溫度)，大量的水被蒸發(fā),隨著水蒸汽的凝結(jié)，水中溶解度大溶劑靈敏度明顯下降(如:乙腈)DMSO/DMF：頂空溫度不宜超過(guò)115℃EP/USP規(guī)定為105℃。第173頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月7測(cè)定條件的優(yōu)化

頂空進(jìn)樣提高靈敏度方法 鹽析作用(基質(zhì)效應(yīng))????在水溶液中加入無(wú)機(jī)鹽（如無(wú)水硫酸鈉）來(lái)改變揮發(fā)性組分的分配系數(shù)。但當(dāng)鹽濃度小于5%時(shí)幾乎沒(méi)有作用，故常用高濃度(甚至飽和)。鹽析作用對(duì)極性組分的影響大于非極性組分的影響。在水溶液中加入鹽之后，溶液體積會(huì)變化，定量線性范圍可能變窄。第174頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月7測(cè)定條件的優(yōu)化頂空進(jìn)樣提高靈敏度方法有機(jī)溶液中加入水：水要與有機(jī)溶劑相溶，減少有機(jī)物在有機(jī)溶劑中的溶解度，增大其在頂空氣體的含量?！盥确略贒MF頂空法中由于二者結(jié)合能力強(qiáng)， 致使其檢測(cè)靈敏度降低，當(dāng)加入等量的水 后，檢測(cè)靈敏度顯著增加。即使加水后樣品 重新析出，不影響氯仿從樣品中轉(zhuǎn)移至溶劑 中的轉(zhuǎn)移率（必須經(jīng)回收考察）。第175頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月7測(cè)定條件的優(yōu)化頂空進(jìn)樣提高靈敏度方法調(diào)節(jié)溶液的pH：對(duì)于堿和酸，通過(guò)控制pH可使其解離度改變，或使其待測(cè)物的揮發(fā)性變的更大，從而有利于分析。第176頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月內(nèi)徑流量(ml/min)線速度(cm/sec)1/4“50-602.6-3.21/8“20-304.2-6.3毛細(xì)管柱0.53(大孔徑)0.32mm(粗徑)3-522-381-320-410.20mm(細(xì)徑)0.5-121-320.10mm(快速)0.2-0.542-1067測(cè)定條件的優(yōu)化

氣路優(yōu)化 可使用下列推薦值來(lái)確定不同類型柱的最佳流量

填充柱第177頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月8方法學(xué)驗(yàn)證總則：首先明確將其歸為定量檢查或限度檢查驗(yàn)證內(nèi)容系統(tǒng)適用性專屬性準(zhǔn)確度（回收率）線性靈敏度（檢測(cè)限、定量限）耐用性第178頁(yè)，課件共194頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月8方法學(xué)驗(yàn)證系統(tǒng)適用性柱效填充柱法的理論板數(shù)應(yīng)大于1000。毛細(xì)管色譜柱的理論板數(shù)應(yīng)大于5000。重復(fù)性內(nèi)標(biāo)法：對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，所得被測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比RSD≤5%。 外標(biāo)法：所得被測(cè)物峰面積RSD≤10%。第179頁(yè)，課件共