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講師:張年逢8.(12分)嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的β-葡萄糖苷酶(BglB)是一種耐熱纖維素酶,為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用,開展了以下試驗:Ⅰ.利用大腸桿菌表達BglB酶(1)PCR擴增bglB基因時,選用

基因組DNA作模板。(2)上圖為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。bglB基因不含圖中限制酶識別序列。為使PCR擴增的bglB基因重組進該質(zhì)粒,擴增的bglB基因兩端需分別引入

不同限制酶的識別序列。(3)大腸桿菌不能降解纖維素,但轉(zhuǎn)入上述建構(gòu)好的表達載體后則獲得了降解纖維素的能力,這是因為

。Ⅱ.溫度對BglB酶活性的影響(4)據(jù)圖1、2可知,80℃保溫30分鐘后,BglB酶會

;為高效利用BglB酶降解纖維素,反應(yīng)溫度最好控制在

(單選)A.50℃

B.60℃

C.70℃

D.80℃Ⅲ.利用分子育種技術(shù)提高BglB酶的熱穩(wěn)定性在PCR擴增bglB基因的過程中,加入誘變劑可提高bglB基因的突變率。經(jīng)過篩選,可獲得能表達出熱穩(wěn)定性高的BglB酶的基因。(5)與用誘變劑直接處理嗜熱土壤芽胞桿菌相比,上述育種技術(shù)獲得熱穩(wěn)定性高的BglB酶基因的效率更高,其原因是在PCR過程中

(多選)。B.bglB基因產(chǎn)生了定向突變

D.bglB基因突變不會導致僅針對bglB基因進行誘變

C.bglB基因可快速累積突變酶的氨基酸數(shù)目改變(12分)嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的β-葡萄糖苷酶(BglB)是一種耐熱纖維素酶,為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用,開展了以下試驗:Ⅰ.利用大腸桿菌表達BglB酶(1)PCR擴增bglB基因時,選用

嗜熱土壤芽孢桿菌

基因組DNA作模板。(2)上圖為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。bglB基因不含圖中限制酶識別序列。為使PCR擴增的bglB基因重組進該質(zhì)粒,擴增的bglB基因兩端需分別引入

NdeⅠ

BamHⅠ

不同限制酶的識別序列。(12分)嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的β-葡萄糖苷酶(BglB)是一種耐熱纖維素酶,為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用,開展了以下試驗:Ⅰ.利用大腸桿菌表達BglB酶(3)大腸桿菌不能降解纖維素,但轉(zhuǎn)入上述建構(gòu)好的表達載體后則獲得了降解纖維素的能力,這是因為

轉(zhuǎn)基因的

大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶

。Ⅱ.溫度對BglB酶活性的影響(4)據(jù)圖1、2可知,80℃保溫30分鐘后,BglB酶會

失活;為高效利用BglB酶降解纖維素,反應(yīng)溫度最好控制在

B

(單選)A.50℃

B.60℃

C.70℃

D.80℃Ⅲ.利用分子育種技術(shù)提高BglB酶的熱穩(wěn)定性在PCR擴增bglB基因的過程中,加入誘變劑可提高bglB基因的突變率。經(jīng)過篩選,可獲得能表達出熱穩(wěn)定性高的BglB酶的基因。(5)與用誘變劑直接處理嗜熱土壤芽胞桿菌相比,上述育種技術(shù)獲得熱穩(wěn)定性高的BglB酶基因的效率更高,其原因是在PCR過程中

A、C

(多選)。A.僅針對

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