菌種保存、傳代、使用、銷毀管理規(guī)程,操作規(guī)程

菌種保存、傳代、使用、銷毀管理規(guī)程,操作規(guī)程

傳代用菌種采用甘油冷凍管保存法。將菌種接種在適宜的瓊脂培養(yǎng)基上，待菌生長充分后，將菌液混合甘油并分裝至冷凍管中，冷凍管標(biāo)注菌種名稱、代數(shù)、保存日期等信息，然后放置于-80℃冰箱中保存。每年進(jìn)行一次復(fù)蘇和傳代，保存時(shí)間不超過5年。5.3.2.2液體石蠟保存法對(duì)于一些難以保存的菌種，采用液體石蠟保存法。將菌種接種在適宜的瓊脂培養(yǎng)基上，待菌生長充分后，將菌液混合液體石蠟并分裝至玻璃瓶中，瓶口用鋁箔密封，標(biāo)注菌種名稱、代數(shù)、保存日期等信息，保存溫度為-70℃。每年進(jìn)行一次復(fù)蘇和傳代，保存時(shí)間不超過5年。5.4菌種的傳代傳代用菌種每年進(jìn)行一次復(fù)蘇和傳代。復(fù)蘇后，將菌種接種至適宜的瓊脂培養(yǎng)基上，待菌生長充分后，按照規(guī)定的傳代代數(shù)制備傳代用菌種，并及時(shí)更新菌種庫存記錄。5.5菌種的使用使用菌種前，應(yīng)先確認(rèn)菌種的品質(zhì)和純度，并按照規(guī)定的傳代代數(shù)制備工作用菌種。使用后，應(yīng)及時(shí)更新菌種庫存記錄，并進(jìn)行相應(yīng)的消毒處理。5.6菌種的銷毀菌種在使用過程中，如出現(xiàn)變異或污染等情況，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行應(yīng)滅活處理，并填寫《菌種銷毀記錄表》，經(jīng)主管部門審核同意后，進(jìn)行銷毀處理。菌種庫存中長期未使用的菌種，應(yīng)定期進(jìn)行清理和銷毀處理。菌復(fù)蘇、復(fù)壯；?Sabouraud葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：用于白色念珠菌復(fù)蘇、復(fù)壯；?青霉素-鏈霉素瓊脂培養(yǎng)基：用于銅綠假單胞菌復(fù)蘇、復(fù)壯。5.4.1.1.3復(fù)蘇步驟：1.取出保存好的菌種管，用接種針在酒精燈上消毒；2.將接種針在75%酒精中消毒，再用酒精棉球擦拭消毒；3.用接種針在相應(yīng)的培養(yǎng)基上進(jìn)行接種；4.置于適宜溫度下孵育，待菌落出現(xiàn)后進(jìn)行傳代或進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。5.4.1.2標(biāo)準(zhǔn)菌株的確認(rèn)通過形態(tài)學(xué)、生理生化特性、分子生物學(xué)等方法進(jìn)行鑒定，確認(rèn)菌株的純度和種屬。5.4.1.3標(biāo)準(zhǔn)菌株的傳代將菌株從原始保存方式中轉(zhuǎn)移到新的保存方式中，確保菌株的保存和傳承。傳代次數(shù)不宜過多，一般不超過10代。5.4.2菌種的處理和保藏菌種的處理和保藏應(yīng)根據(jù)不同菌種的特性進(jìn)行選擇合適的方法。常用的方法包括冷凍保存、液氮保存、石蠟保存、干燥保存等。同時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格控制保存條件，確保菌株的保存質(zhì)量和有效期限。5.4.3菌種的傳遞和使用菌種的傳遞和使用應(yīng)遵循規(guī)范操作程序，確保菌株的純度和活力。同時(shí)，應(yīng)注意保護(hù)環(huán)境、防止污染，避免對(duì)人類和環(huán)境造成危害。5.6檢定菌種的保管為了保證檢定菌種的質(zhì)量，需要設(shè)專人加雙鎖保管，并建立《檢定菌種保存、領(lǐng)用登記臺(tái)賬》（附表3）。在保存期間，每天應(yīng)檢查保存菌種冰箱的溫度，必要時(shí)檢查菌種管的塞子是否松動(dòng)，是否染雜菌等，并及時(shí)填寫《檢定菌種觀察記錄》（附表4）。菌種應(yīng)定期檢查其菌落性狀、革蘭染色、顯微鏡下菌體形態(tài)，必要時(shí)檢查生化特性等項(xiàng)目。如果發(fā)現(xiàn)與原菌種變異較大，應(yīng)重新分離、純化、鑒定、再加以保存，并做好《檢定菌種鑒定記錄》（附表5）。所保管的菌種不能隨意轉(zhuǎn)讓其他單位和個(gè)人，需要時(shí)應(yīng)有單位證明和批準(zhǔn)手續(xù)方可供應(yīng)。5.7檢定菌種的使用微生物學(xué)檢驗(yàn)人員在需要時(shí)，從部門主管領(lǐng)取工作用菌種或傳代用菌種，并填寫《檢定菌種保存、領(lǐng)用登記臺(tái)賬》。使用后及時(shí)填寫《檢定菌種使用登記臺(tái)賬》（附表6），以便追蹤菌種使用歷史。菌液的制備方法為將新鮮的斜面菌種培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為10-100cfu/ml的菌懸液，置于～4℃冰箱冷藏，用于陽性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，使用期為24h，濃菌液放冰箱可保存一周。5.8檢定菌種（廢棄）的銷毀下列情況的菌種或培養(yǎng)物或被污染的器具等，必須采用121℃、45分鐘濕熱滅活處理：a、新一代菌種制備成功后的上一代菌種；b、使用完后的菌種和帶有標(biāo)準(zhǔn)菌株的器具和培養(yǎng)物；c、超過有效期的菌種；d、凡被污染、變異、可疑等異常情況菌種；e、其他應(yīng)廢棄的菌種。廢棄菌種的銷毀由微生物檢驗(yàn)員提出申請(qǐng)，交部門主管批準(zhǔn)后，進(jìn)行滅活處理，并有其他人在場監(jiān)督，并填寫《廢棄菌種（物品）銷毀處理記錄》（附表7）。6、相關(guān)文件相關(guān)文件包括《初始污染菌檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》、《純化水檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》、《中國藥典標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》等。7、注意事項(xiàng)微生物檢驗(yàn)人員最好具備生物相關(guān)專業(yè)背景，并接受培訓(xùn)，取得上崗證書。購買菌種時(shí)應(yīng)保留相關(guān)證明，并最好讓藥檢所開具證明，詳細(xì)說明購買的菌種名稱、代數(shù)和數(shù)量等信息，并將該證明附在《菌種接受記錄》后。為保護(hù)菌種和人員，在陽性操作間進(jìn)行菌種傳代和使用時(shí)，最好使用生物安全柜。菌種常用的是10-100cfu/ml的菌懸液，可根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定制備方法。對(duì)于細(xì)菌，可參照麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)管進(jìn)行估算。從孵育18-24小時(shí)的非選擇性培養(yǎng)基上，挑取3-5個(gè)菌落，直接用肉湯或鹽制成懸液作為接種，一般將濁度調(diào)整至麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)管10號(hào)對(duì)應(yīng)濃度，然后稀釋。麥?zhǔn)媳葷峁艿呐渲品椒閷?.048MBaCL和0.36NH2SO4混合，置于螺口試管中，放置于室溫暗處保存，使用前混勻。有效期為6個(gè)月。菌濃度為30×108cfu/ml，稀釋時(shí)一般使用無菌生理鹽水（0.9%氯化鈉溶液）。附表1為《檢定菌接收記錄》，附表2為《檢定菌種傳代記錄》，附表3為《檢定菌種保存、領(lǐng)用登記臺(tái)賬》，附表4為《檢定菌種觀察記錄》，附表5為《檢定菌種鑒定記錄》，附表6為《檢定菌種使用登記臺(tái)賬》，附表7為《廢棄菌種（物品）銷毀處理記錄》。這些附表記錄了檢定菌種的各個(gè)方面，如接收、傳代、保存、觀察、鑒定和使用等。檢定菌種鑒定記錄文件編號(hào)：BJ-QR-WJ013-A1菌種名稱及編號(hào)：本記錄用于記錄檢定菌種的鑒定情況。在記錄中，需要填寫菌種名稱及編號(hào)，以便進(jìn)行唯一的識(shí)別。鑒定原因：記錄中需要填寫鑒定菌種的原因，以便在后續(xù)的使用中進(jìn)行參考。鑒定項(xiàng)目：在記錄中，需要詳細(xì)記錄鑒定過程中的各項(xiàng)項(xiàng)目，包括菌落形態(tài)、革蘭染色、顯微鏡下形態(tài)、典型生化特征等等。鑒定結(jié)果：在記錄中，需要詳細(xì)記錄鑒定的結(jié)果，以便在后續(xù)的使用中進(jìn)行參考。操作人：在記錄中，需要記錄鑒定菌種的操作人，以便在后續(xù)的使用中進(jìn)行參考。復(fù)核人：在記錄中，需要記錄鑒定菌種的復(fù)核人，以便在后續(xù)的使用中進(jìn)行參考。附表6：《檢定菌種使用登記臺(tái)賬》檢定菌種使用登記臺(tái)賬文件編號(hào)：BJ-QR-WJ013-A1領(lǐng)用日期：在記錄中，需要記錄檢定菌種的領(lǐng)用日期，以便在后續(xù)的使用中進(jìn)行參考。備注：在記錄中，可以添加備注信息，以便在后續(xù)的使用中進(jìn)行參考。附表7：《廢棄菌種（物品）銷毀記錄》廢棄菌種（物品）銷毀記錄文件編號(hào)：BJ-QR-WJ013-A1日期：在記錄中，需要記錄廢棄菌種的銷毀日期，以便在后續(xù)的使用中進(jìn)行參考。起草人：在記錄中，需要記錄廢棄菌種銷毀記錄的起草人，以便在后續(xù)的使用中進(jìn)行參考。審核人：在記錄中，需要記錄廢棄菌種銷毀記錄的審核人，以便在后續(xù)的使用中進(jìn)行參考。批準(zhǔn)人：在記錄中，需要記錄廢棄菌種銷毀記錄的批準(zhǔn)人，以便在后續(xù)的使用中進(jìn)行參考。開始鑒定日期：在記錄中，需要記錄開始鑒定的日期，以便在后續(xù)的使用中進(jìn)行參考。名稱及編號(hào)：在記錄中，需要記錄被鑒定菌種的名稱及編號(hào)，以便進(jìn)行唯一的識(shí)別。數(shù)量：在記錄中，