自體細(xì)胞免疫治療進(jìn)展課件

自體細(xì)胞生物免疫治療在臨床上的應(yīng)用

贛州市腫瘤醫(yī)院內(nèi)科劉軒.7/21/20231細(xì)胞免疫治療腫瘤生物免疫治療定義、發(fā)展歷史、組成腫瘤生物免疫治療的特點國內(nèi)外研究現(xiàn)狀細(xì)胞過繼免疫治療定義、發(fā)展歷史DC-CIK治療各種腫瘤生物治療的展望.7/21/20232腫瘤生物免疫治療發(fā)展歷史腫瘤生物免疫治療概念于1953年首次提出。1975年NCI提出生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑（BRM）概念。由于BRM不能被臨床醫(yī)生接受，或者BRM沒有確切表達(dá)此療法特點等原因，BRM逐漸被生物治療所取代。國內(nèi)經(jīng)歷了對腫瘤生物治療從認(rèn)識到狂熱推廣，形成LAK，TIL浪潮，細(xì)胞因子熱，樹突狀細(xì)胞疫苗熱及治療風(fēng)之后，發(fā)展到DC/CIK細(xì)胞治療，逐漸到理性規(guī)范化和深入研究階段。2014年CSCO對腫瘤免疫治療重點關(guān)注?？筆D-1、PDL-1,伊匹單抗等藥物通過對T淋巴細(xì)胞的重激活達(dá)到抗腫瘤效果，對腦膠質(zhì)瘤、惡性黑色素瘤等很多腫瘤取得了良好效果。兩條腿走路？？.7/21/20233腫瘤生物治療三大里程碑生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑的提出與過繼細(xì)胞治療方法的應(yīng)用腫瘤抗原肽疫苗的發(fā)現(xiàn)基因治療方案的確定.7/21/20234細(xì)胞免疫治療定義

腫瘤細(xì)胞免疫治療是指根據(jù)非正常細(xì)胞免疫學(xué)原理，誘發(fā)人體自身產(chǎn)生大量具備免疫殺傷作用的特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞，對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行精確性、特異性、靶向性、主動式攻擊，殺滅體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞。

2000年在美國舉行的“國際腫瘤生物和免疫治療年會”的總結(jié)報告指出：”生物治療是目前醫(yī)療界已知的唯一一種有望完全消滅癌細(xì)胞的治療手段，21世紀(jì)是腫瘤生物治療世紀(jì)“.7/21/20235目前腫瘤三大常規(guī)治療的局限性.7/21/20236生物治療化療放療手術(shù)腫瘤綜合治療第四大腫瘤治療模式作為第三代生物治療技術(shù)，CIK/DC免疫治療由于其明確的治療優(yōu)勢已成為繼手術(shù)、放療、化療之后的第四大腫瘤治療模式。腫瘤綜合治療.7/21/20237腫瘤細(xì)胞免疫治療特點增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫促進(jìn)機(jī)體造血功能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡利用藥物前體轉(zhuǎn)化酶，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞藥物敏感性，降低化療全身毒副作用抑制腫瘤血管的形成.7/21/20238過繼細(xì)胞免疫歷史1982年，Rosenberg等提出淋巴細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞概念，并對LAK細(xì)胞臨床應(yīng)用進(jìn)行了深入的探討：殺傷力不夠，需要細(xì)胞數(shù)量多（3X1010-11），由于擴(kuò)增能力有限，需要在輸注細(xì)胞的同時，大劑量應(yīng)用IL-2，產(chǎn)生了不良反應(yīng)：頑固性體液儲留Rosenberg提出腫瘤侵潤淋巴細(xì)胞（TIL），其腫瘤殺傷力較LAK有了明顯的提高，并且無需大劑量IL-2的聯(lián)合應(yīng)用，但細(xì)胞獲取的問題限制了TIL的應(yīng)用。1989年一個研究小組，用CD3單抗擴(kuò)增小鼠脾細(xì)胞獲得一個細(xì)胞群，命名為CD3激活的殺傷細(xì)胞（CD3-AK)，并且在體外顯示出較LAK更高的殺傷力。1991年Stanford大學(xué)骨髓移植中心的Schmidt-Wolf等以IFN-r,IL-1,IL-2,CD3-mb共培養(yǎng)PBMC，得到了一個強(qiáng)大抗腫瘤活性的細(xì)胞群，命名為細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞，其達(dá)到近似療效所需的細(xì)胞數(shù)較之LAK細(xì)胞小1個數(shù)量級，而且體內(nèi)應(yīng)用時無需聯(lián)合使用重組IL-2，因此CIK細(xì)胞的臨床應(yīng)用前景備受矚目。.7/21/20239

細(xì)胞過繼免疫治療

是指向腫瘤患者輸注具有抗腫瘤活性的免疫細(xì)胞，直接殺傷腫瘤細(xì)胞或激發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)來殺傷腫瘤細(xì)胞，達(dá)到治療腫瘤的目的自然殺傷細(xì)胞(naturekillercells,NK)淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(lymphokine-activatedkillercells,LAK)腫瘤侵潤淋巴細(xì)胞(tumorinfiltratingcells,TIL)CD3單克隆抗體激活的殺傷細(xì)胞(anti-CD3antibody-activatedkillercell,CD3-AK)細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytocineinducedkillercells,CIK)數(shù)突狀細(xì)胞（dentriticcell,DC).7/21/202310CIK是一群異質(zhì)性細(xì)胞群，多數(shù)帶有T細(xì)胞特征，部分帶有NK細(xì)胞特征，88%的CD56+細(xì)胞共表的CD3+，效應(yīng)細(xì)胞是CD3+CD56+；未經(jīng)培養(yǎng)的PBMC中，CD3+CD56+的比例是1-5%。培養(yǎng)后，它的絕對和相對數(shù)量明顯增加（細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大1000倍，群體中的比例擴(kuò)大10倍）；實驗證明，CD3+CD56+主要來源于PBMC中的T細(xì)胞（CD3+CD56-），而非NK細(xì)胞（CD3-CD56+）。.7/21/202311通過表面CD3受體結(jié)合而被激活，導(dǎo)致胞漿毒性顆粒釋放而產(chǎn)生溶瘤作用CIK細(xì)胞被激活后，分泌細(xì)胞因子實現(xiàn)對腫瘤細(xì)胞的抑制或殺傷作用通過LFA-1/I-CAM-1系統(tǒng)與靶細(xì)胞結(jié)合實行非MHC限制性殺傷通過釋放顆粒酶和穿孔素對靶細(xì)胞實行非MHC限制性殺傷CIK細(xì)胞抗腫瘤機(jī)制直接殺傷間接殺傷通過激活Fas-FasL系統(tǒng)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡CIK細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子能顯著刺激初始型T細(xì)胞增殖，有效激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，提高病人自身抗腫瘤的能力。激活機(jī)體免疫系統(tǒng).7/21/202312.7/21/202313CIK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞電鏡照片CIK細(xì)胞粘附到癌細(xì)胞細(xì)胞膜上攻擊癌細(xì)胞，使其細(xì)胞膜破裂，最終癌細(xì)胞碎解.7/21/202314CIK細(xì)胞抗腫瘤的優(yōu)勢增殖速度快，主要效應(yīng)細(xì)胞CD3+CD56+細(xì)胞的增殖可達(dá)1000倍。殺瘤活性高：其殺傷活性遠(yuǎn)高于其它細(xì)胞療法，如：LAK。殺瘤譜廣：CIK細(xì)胞對消化道腫瘤、肺癌、腎癌、惡性黑色素瘤、淋巴瘤、肝癌、白血病等均表現(xiàn)出強(qiáng)大的殺傷活性。對耐藥腫瘤同樣可以起到殺傷的作用。殺瘤活性不受某些免疫抑制劑的影響（如環(huán)孢素A（CSA）和FK506）。能抵抗腫瘤細(xì)胞引發(fā)的效應(yīng)細(xì)胞Fas-FasL凋亡。對正常骨髓造血前體細(xì)胞毒性很小。.7/21/202315CIK細(xì)胞回輸前后患者外周血效應(yīng)細(xì)胞亞群的變化

CD3+CD3+CD4+CD3+CD8+CD3+CD56+回輸前73.1±3.436.4±3.134.5±5.26.5±2.010.8±3.6回輸后76.2±8.538.2.4±9.840.0±9.820.1±7.215.7±4.9摘自：《解放軍醫(yī)學(xué)雜志》2004年4月29卷第4期，自體CIK細(xì)胞治療肝癌的安全性和有效性評價。（施明等）.7/21/202316臨床有效性的研究1、2000年YamazakiT等人在柳葉刀雜志報道了CIK預(yù)防肝癌根治性腫瘤切除術(shù)后復(fù)發(fā)的隨機(jī)對比臨床研究。統(tǒng)計顯示，經(jīng)過CIK治療的病人肝癌復(fù)發(fā)的危險降低了41%，3年無復(fù)發(fā)率為48%(對照組：33%)。2、天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院任秀寶等應(yīng)用DC-CIK治療非小細(xì)胞肺癌并進(jìn)行了3年臨床研究。術(shù)后42例生物治療+化療組與同期42例常規(guī)化療對照組對比2年總生存率顯著提高94.7，對照組為78.8%±7.0%（P＜0.05)。3、上海第二軍醫(yī)大曹雪濤、萬濤教授等2008年完成了150例轉(zhuǎn)移性晚期大腸癌應(yīng)用腫瘤抗原負(fù)載DC細(xì)胞治療的臨床研究，研究結(jié)果CR+PR達(dá)到46.2%，顯著高于隨機(jī)對照化療組22.5%。4、蘇州大學(xué)附屬第三醫(yī)院蔣敬庭等進(jìn)行CIK治療29例老年人中晚期胃癌患者副反應(yīng)分析。結(jié)果回輸患者PR8例，MR9例，SD7例，PD5例，總緩解率58.6%5、廣州中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院司徒杰等報道了9例腎癌患者CIK治療的情況。應(yīng)用CIK治療后，腎癌患者體內(nèi)的T細(xì)胞亞群比例有治療前的抑制狀態(tài)恢復(fù)到正常比例，患者隨訪最長4年均無復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移。.7/21/202317經(jīng)肝動脈栓塞化療序貫聯(lián)合射頻消融和細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞治療肝細(xì)胞癌的隨機(jī)研究中山大學(xué)腫瘤醫(yī)院影像介入中心，華南腫瘤學(xué)國家重點實驗室－趙明、吳沛宏、曾益新等目的：隨機(jī)對照研究一組原發(fā)性肝癌病例治療對照組：肝動脈栓塞化療（TACE）序貫聯(lián)合CT導(dǎo)向下射頻消融（RFA）研究組：肝動脈栓塞化療（TACE）序貫聯(lián)合CT導(dǎo)向下射頻消融（RFA）+CIK評價兩種方法在原發(fā)性肝癌治療中的療效和抗病毒作用方法：64例原發(fā)性肝癌患者經(jīng)TACE序貫聯(lián)合RFA治療后6－8周，經(jīng)臨床評價無明確殘留病變后分組研究組：33例首先連續(xù)完成4次CIK細(xì)胞經(jīng)靜脈/肝動脈回輸，每次間隔時間為1－3周；再每4周1次，共行4次CIK細(xì)胞經(jīng)靜脈/肝動脈回輸隨訪1年以上并每1－2個月評價腫瘤情況對照組：31例出院每1－2月評價腫瘤情況，隨訪1年以上結(jié)果：2組病例1年生存期均達(dá)到100%。隨訪6個月，1年無瘤生存率兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。HBV-DNA含量在治療前后兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義P<0.01?！吨腥A醫(yī)學(xué)雜志》2006年7月，第86卷，第26期.7/21/202318<103/L103-106/L>106/LP<0.01治療前治療后治療前治療后對照（A）組治療（B）組人數(shù)《中華醫(yī)學(xué)雜志》2006年7月，第86卷，第26期患者治療前后血清HBVDNA含量變化.7/21/202319提高急性白血病患者完全緩解病人的無病生存期

陸道培教授領(lǐng)導(dǎo)的研究小組用自體

CIK或自體DC-CIK治療了111例經(jīng)化療或（和）自體造血干細(xì)胞移植（ASCT）治療后完全緩解（CR）的急性白血病患者。96例CR患者再接受

CIK或DC-CIK治療后，5年無病生存率（DFS）為66%，明顯高于在該醫(yī)院接受單純化療或ASCT治療的患者。14／15例殘留的白血病染色體和（或）基因標(biāo)志均轉(zhuǎn)陰。無一例發(fā)生嚴(yán)重不良反應(yīng)。主要不良反應(yīng)為畏寒、寒戰(zhàn)、發(fā)熱、疲乏，均在24小時內(nèi)消失。.7/21/202320Figure1Survivalratesofpatientsaftercytokine-inducedkillercellsimmunotherapypluschemotherapyandchemotherapyalone.CIK:Cytokineinducedkiller.CIK治療胃癌頻率與療效IncreasingthefrequencyofCIKcellsadoptiveimmunotherapymaydecreaseriskofdeathingastriccancerpatients(156例)Jing-TingJiang,…….Xue-GuangZhang蘇州大學(xué)WorldJGastroenterol2010December28;16(48):6155-6162.7/21/202321腫瘤綜合基礎(chǔ)優(yōu)化治療一線選擇！CIK/DC免疫治療與三大常規(guī)治療方法的對比優(yōu)勢.7/21/202322聯(lián)合治療方案聯(lián)合治療的意義術(shù)后+CIK/DC快速恢復(fù)手術(shù)造成的免疫損傷；特異性清除術(shù)后微小殘余腫瘤病灶，防治轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)；增強(qiáng)對化療藥物敏感性，減少放療毒副作用；增強(qiáng)放療敏感性，減少放療毒副作用；抵抗化療藥物的免疫抑制作用；支持骨髓功能衰竭后的免疫重建；放療+CIK/DC化療+CIK/DC常規(guī)治療無效CIK/DC單用直接殺傷腫瘤細(xì)胞；活化后產(chǎn)生大量炎性細(xì)胞抑制瘤、殺瘤；誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡；促進(jìn)T細(xì)胞增殖活化；提高機(jī)體免疫力；CIK/DC聯(lián)合治療方案.7/21/202323DC/CIK細(xì)胞DC和CIK是腫瘤免疫治療的兩個重要部分，前者DC(樹突狀細(xì)胞)識別抗原、激活獲得性免疫系統(tǒng)，后者CIK(細(xì)胞因子活化殺傷細(xì)胞)通過發(fā)揮自身細(xì)胞毒性和分泌細(xì)胞因子殺傷腫瘤細(xì)胞，二者聯(lián)合確保了一個高效和諧的免疫體系。兩者聯(lián)合可以顯著抑制腫瘤細(xì)胞的生長、增殖，幫助機(jī)體恢復(fù)同腫瘤細(xì)胞作斗爭的能力，最大限度地調(diào)動人體的免疫功能，盡可能減少體內(nèi)殘存腫瘤細(xì)胞的數(shù)量，明顯改善患者的生活質(zhì)量，有效提高腫瘤患者的生存期，是一種更先進(jìn)、更有效的治療手段。.7/21/202324DC/CIK細(xì)胞治療原理生物DC-CIK細(xì)胞治療，是在體外培養(yǎng)造血干細(xì)胞，誘導(dǎo)其分化為樹突狀細(xì)胞（DC），再用經(jīng)抗原刺激的樹突狀細(xì)胞（DC）誘導(dǎo)CIK細(xì)胞產(chǎn)生特異性腫瘤殺傷作用的治療技術(shù)。即將樹突狀細(xì)胞（DC）與CIK細(xì)胞進(jìn)行共同培養(yǎng)而成的殺傷性細(xì)胞群體（DC-CIK），使其抗腫瘤的活性大大提高后，再把這些本來就來源于病人自身并在體外激活了的抗腫瘤細(xì)胞回輸?shù)讲∪梭w內(nèi)，讓這支經(jīng)過特殊訓(xùn)練的“特種部隊”去殺滅腫瘤細(xì)胞

.7/21/202325DC/CIK細(xì)胞治療特點1、DC-CIK細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，保證充足數(shù)量的腫瘤殺傷細(xì)胞，且細(xì)胞殺傷活性也大大增強(qiáng)。研究證實CD3單克隆抗體誘導(dǎo)激活的T淋巴細(xì)胞在體外可克隆擴(kuò)增5×104倍，且在體外培養(yǎng)能保持活躍的生長態(tài)勢達(dá)4周之久。正常的CIK細(xì)胞經(jīng)過體外培養(yǎng)可回輸給患者有效細(xì)胞數(shù)量是1×1010。2、DC-CIK具有識別腫瘤的機(jī)制，對正常的細(xì)胞無毒性作用，對正常骨髓造血前體細(xì)胞沒有毒性。3、抗瘤譜廣，對絕大多數(shù)腫瘤均有殺傷作用。4、對多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感，腫瘤殺傷活性不受環(huán)孢菌素A（CsA）、他克莫司（FK506）等免疫抑制劑的影響。5、是典型的個體化生物治療模式。將DC-CIK細(xì)胞回輸后，既能直接殺傷腫瘤細(xì)胞，又能使機(jī)體免疫能力提高，產(chǎn)生特異的抗腫瘤作用，從而對腫瘤治療施以雙重作用。6、由于DC-CIK細(xì)胞是活化的自體細(xì)胞，應(yīng)用起來非常安全.7/21/202326DC/CIK細(xì)胞治療適應(yīng)癥由于DC-CIK細(xì)胞對絕大多數(shù)腫瘤均有殺傷作用，在多種腫瘤的治療中展示了應(yīng)用前景。如各種肉瘤、黑色素瘤、惡性淋巴瘤、腎癌、非霍奇金氏淋巴瘤及高分化腺癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌、消化道腫瘤（胃癌、結(jié)腸癌、食道癌）、胰腺癌、喉癌、頭頸部腫瘤、淋巴瘤（T細(xì)胞淋巴瘤除外）、白血病、多發(fā)性骨髓瘤等。有些腫瘤，如各種肉瘤、黑色素瘤、腎癌等對化療不敏感，因此DC-CIK細(xì)胞治療是其主要治療方式。.7/21/202327DC/CIK細(xì)胞治療禁忌癥孕婦或正在哺乳的婦女T細(xì)胞淋巴瘤患者不可控制的嚴(yán)重感染患者對IL-2等生物制品過敏的患者艾滋病患者正在進(jìn)行全身放療、化療的患者晚期腫瘤造成的惡病質(zhì)、外周血象過低者.7/21/202328治療過程采集外周血50-80ml或是血細(xì)胞分離機(jī)采集單個核細(xì)胞；實驗室培養(yǎng)、誘導(dǎo)、激活；DC細(xì)胞：第7天多點皮內(nèi)或靜脈注射；CIK細(xì)胞：第9－10天靜脈回輸。整個療程10天左右。.7/21/202329

回輸圖示.7/21/202330CIK/DC細(xì)胞治療流程第一步：外周血細(xì)胞采集第二步：CIK/DC誘導(dǎo)第三步：抗原負(fù)載/擴(kuò)增第四步：CIK/DC回輸.7/21/202331CIK/DC細(xì)胞治療流程.7