最低檢測(cè)限與

最低檢測(cè)限與第1頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月教學(xué)要求與目的掌握：1.線性試驗(yàn)的原理、用途。2.最低檢測(cè)限的定義及其評(píng)價(jià)方法。3.血清總蛋白的測(cè)定原理及操作方法。熟悉：1.可報(bào)告范圍、分析測(cè)量范圍的概念。2.生物檢測(cè)限與功能靈敏度的概念。3.血清總蛋白測(cè)定的臨床意義。第2頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、血清總蛋白測(cè)定凱氏定氮法參考方法

雙縮脲法常規(guī)測(cè)定方法酚試劑法染料結(jié)合法濁度法、紫外光譜法第3頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（一）實(shí)驗(yàn)原理

蛋白質(zhì)+Cu在540nm波長(zhǎng)處有吸收峰，在一定濃度范圍內(nèi)其吸光度增加與蛋白含量成正比，由此可求得蛋白質(zhì)含量。OH2+紫紅色絡(luò)合物第4頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）實(shí)驗(yàn)試劑

1、雙縮脲試劑2、標(biāo)準(zhǔn)液

本試劑盒為總蛋白50g/L氫氧化鈉

酒石酸鉀鈉

硫酸銅碘化鉀

第5頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）操作方法

1、操作參數(shù)：波長(zhǎng)：540nm溫度：37℃測(cè)定模式：終點(diǎn)法

第6頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.操作步驟（ul）BSUDH2O20標(biāo)準(zhǔn)液20血清20雙縮脲試劑100010001000

混勻，37℃水浴10分鐘，在540nm波長(zhǎng)處，用空白管調(diào)零，讀取各管吸光度。第7頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3、計(jì)算血清總蛋白(g/L)=測(cè)定管吸光度標(biāo)準(zhǔn)管吸光度×蛋白標(biāo)準(zhǔn)液濃度（50g/L）參考值：60－83g/L第8頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）注意事項(xiàng)

嚴(yán)重溶血和黃疸可使測(cè)定結(jié)果偏高,可作標(biāo)本空白管消除。2.脂肪乳糜干擾比色，可加丙酮離心。 3.右旋糖酐可使測(cè)定產(chǎn)生混濁影響結(jié)果。第9頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.靈敏度較低。1.精密度較好、準(zhǔn)確度較高，WHO推薦方法。（五）方法學(xué)評(píng)價(jià)3.操作簡(jiǎn)便你、快速，成本低廉。2.線性范圍寬（10-120g/L）。第10頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（六）臨床意義1.蛋白濃度升高（1）血液濃縮：脫水、外傷性休克等。（2）蛋白質(zhì)合成增加：多發(fā)性骨髓瘤、免疫增殖病等。第11頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（3）蛋白質(zhì)合成障礙：如肝臟疾病。（1）蛋白丟失：如腎病綜合征。2.蛋白濃度降低（2）攝入不足：營(yíng)養(yǎng)不良。

第12頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、檢測(cè)低限試驗(yàn)檢測(cè)低限（LLD）：指當(dāng)標(biāo)本中不含有待測(cè)分析物時(shí)，反應(yīng)響應(yīng)量可能出現(xiàn)的數(shù)值范圍，即單次測(cè)量可達(dá)到的非空白檢測(cè)響應(yīng)量對(duì)應(yīng)的分析物量。第13頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月生物檢測(cè)限（BLD）：某樣品單次檢測(cè)可能具有的最小響應(yīng)量剛大于空白檢測(cè)低限響應(yīng)量時(shí)，該樣品內(nèi)含有的分析物濃度或其它量值。第14頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月功能靈敏度（FS）：以日間重復(fù)CV為20%時(shí)對(duì)應(yīng)檢測(cè)限樣品具有的平均濃度確定為檢測(cè)系統(tǒng)或方法可定量報(bào)告的分析物的最低濃度或其它量值。第15頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（一）原理

選擇合適的空白標(biāo)本，該標(biāo)本與待測(cè)標(biāo)本的區(qū)別在于不含有待測(cè)物質(zhì)，一般用處理過(guò)的標(biāo)本或一般標(biāo)本，在分析步驟中省去關(guān)鍵試劑或操作。本次實(shí)驗(yàn)采用蒸餾水作為空白標(biāo)本，采用雙縮脲法進(jìn)行多次測(cè)定，求出吸光度的均值及標(biāo)準(zhǔn)差，計(jì)算最低檢測(cè)限。第16頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）操作步驟（ul）BSU（1----10）DH2O20標(biāo)準(zhǔn)液20雙縮脲試劑100010001000

混勻，37℃水浴10分鐘，在540nm波長(zhǎng)處，用空白管調(diào)零，讀取各管吸光度。第17頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）計(jì)算

1.計(jì)算10次測(cè)定的平均吸光度及標(biāo)準(zhǔn)差。

2.計(jì)算最低檢測(cè)限：平均吸光度+3S3.將吸光度值轉(zhuǎn)換成濃度單位。

LLD=A低/A標(biāo)×C標(biāo)第18頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月可報(bào)告范圍（RR）：指可以報(bào)告的所有結(jié)果的范圍，包含兩種類型的范圍，即分析測(cè)量范圍和臨床可報(bào)告范圍。三、線性范圍試驗(yàn)第19頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月分析測(cè)量范圍（AMR）：指對(duì)沒(méi)有進(jìn)行任何預(yù)處理（稀釋、濃度等）的標(biāo)本，由檢測(cè)系統(tǒng)直接測(cè)量得到的待測(cè)物的可靠結(jié)果范圍，在此范圍內(nèi)一系列不同樣本分析物的測(cè)量值與其實(shí)際濃度（真值）呈線性比例關(guān)系。也即線性范圍。第20頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月臨床可報(bào)告范圍（CRR）：指定量檢測(cè)項(xiàng)目向臨床能報(bào)告的檢測(cè)范圍，患者樣本可經(jīng)稀釋、濃縮或其它預(yù)處理。第21頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（一）原理

線性范圍是指系統(tǒng)最終輸出值（濃度或活性）與被分析物濃度或活性成比例的范圍。線性范圍的測(cè)定即測(cè)定濃度曲線接近直線的程度，它反映整個(gè)系統(tǒng)的輸出特征。第22頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

本試驗(yàn)使用不同濃度的總蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，用雙縮脲試劑測(cè)定各自的濃度，以標(biāo)準(zhǔn)液預(yù)期濃度為橫坐標(biāo)，測(cè)得濃度為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，即可繪制出一條直線，即計(jì)量反應(yīng)曲線。第23頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）試劑

1.蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液（50g/L）

2.混合血清（100g/L）

3.雙縮脲試劑第24頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）操作步驟

各測(cè)定管均測(cè)定雙份，混勻，37℃水浴10分鐘，在540nm波長(zhǎng)處，用空白管調(diào)零，讀取各管吸光度。（ul）BSU1U2U3U4U5DH2O20161284標(biāo)準(zhǔn)液20血清48121620試劑1000100010001000100010001000第25頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)（五）評(píng)價(jià)

1.目測(cè)法：是評(píng)估幾個(gè)不同濃度樣本的多次測(cè)量均值與實(shí)際值之間是否具有肉眼上的直線關(guān)系。沒(méi)有用到統(tǒng)計(jì)學(xué)方法來(lái)驗(yàn)證線性。

第26頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.平均斜率法：是采用最小二乘法直線回歸作統(tǒng)計(jì)分析方法。以總蛋白濃度預(yù)期值為橫坐標(biāo)，測(cè)定值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，若所有實(shí)驗(yàn)點(diǎn)在坐標(biāo)紙上呈明顯直線趨勢(shì)，建立回歸方程y=a+bx，要求a接近于0，b在0.97~1.03之間，若滿足此條件，則可直接判斷該測(cè)定方法是否在所要求的線性范圍。第27頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月若a較大，b>1.03或<0.97則認(rèn)為在高濃度或低濃度處的實(shí)測(cè)值和預(yù)期值間有較大偏差。試著舍去某組數(shù)據(jù)，