生物化學(xué)檢驗(yàn)常用技術(shù)教學(xué)課件

第三章生物化學(xué)檢驗(yàn)常用技術(shù)基電干電因泳化化光分學(xué)貨增朽分分分術(shù)求技術(shù)術(shù)第一節(jié)光譜分析技術(shù)光譜分析技術(shù)是根據(jù)物質(zhì)吸收或發(fā)吸收光譜分析技射輻射能而建立起來(lái)的一類分析方法,發(fā)射光譜分析技術(shù)散射光譜分析技術(shù)因不同分子的原子和原子團(tuán),其發(fā)射光譜和吸收光譜不同,而相同的物質(zhì)在定條件下,其發(fā)射光譜和吸收光諧的強(qiáng)光譜分析技術(shù)是一種最常用的生化檢度與該物質(zhì)的含量成正比關(guān)系。因此可驗(yàn)技術(shù),它主要包括吸收光譜分析:可見(jiàn)、紫外、紅外分對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析,此類技術(shù)光光度法和原子吸收分光光度法稱為光譜分析技術(shù)。散射光譜分析:散射比濁法和透射比濁法發(fā)射光譜分析:火焰光度法、原子發(fā)射光譜法和熒光光譜法、吸收光譜分析法光是一種高速傳播的電磁波,光的波長(zhǎng)(2)的常用單位是納米(nm),可見(jiàn)光波長(zhǎng)00~760nm,<400n稱為紫外光,>760nm稱為紅外光,波長(zhǎng)愈短,能量愈大可見(jiàn)、紫外吸收光譜是由于多原子分子的價(jià)電子在電磁輻射的作用下,由基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài),這種因物質(zhì)分子對(duì)輻射能的選擇性吸收而得到的光譜稱為吸收光譜吸收光譜分析法包括可見(jiàn)、紫外、紅外和原子吸收分析法。其中最常用的是可見(jiàn)光分析法,也被不嚴(yán)格地稱為比色分析法,準(zhǔn)確的名稱應(yīng)是可見(jiàn)光分光光度法用于比色分析的光源與被測(cè)溶液的顏色應(yīng)為互補(bǔ)色0.575光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示器「鎢燈、鹵鎢燈350~100濾光片玻璃比色皿氫燈、氘燈180~360棱鏡光柵石英比色皿(一)、分光光度技術(shù)的基本原理1、吸光度與透光度當(dāng)光線通過(guò)均勻、透明的溶液時(shí)可出現(xiàn)三種情況:一部分光被散射,部分光被吸收,另有一部分光透過(guò)溶液。設(shè)入射光強(qiáng)度為I,透射光強(qiáng)度為I,I和I之比稱為透光度,即:入射光lo透射光1T×100%為T(mén)%稱為百分透光度。透光度的負(fù)對(duì)數(shù)稱為吸光度即A=-1gT=-1gI/Io=1gIo/2、Lambert-Beer定律當(dāng)一束平行單色光通過(guò)均勻的非散射樣品時(shí),吸光度與溶液層厚度和溶液濃度成正比。loLambert-Beer定律適用于可見(jiàn)光、紫外光、紅外光和均勻非散射的液體Lambert-Beer定律是討論溶液吸光度冋溶液濃度和溶液層厚度之間關(guān)系的基本定律,該定律是分光分析的理論基礎(chǔ)1.Lambert定律當(dāng)一束強(qiáng)度為3amei定透過(guò)某種吸光溶液后,由于溶液吸收則透過(guò)的光線為I。當(dāng)溶液濃度不變F液層愈厚,則光線強(qiáng)度的減弱愈顯著合#Lame定與Ber定律可得說(shuō)明吸光物質(zhì)對(duì)單色光吸收的強(qiáng)度與物質(zhì)的濃度和液層厚度成正比Beer定律當(dāng)一束強(qiáng)度為l。的單色吸光系數(shù)的物理意義是吸光物質(zhì)在單位濃七透過(guò)某種吸光溶液后,若液層厚度不變度及單位厚度時(shí)的吸光度,在給定條件下(波長(zhǎng)、市濃不同時(shí),溶液的度意大則透過(guò)液性,濃度取光系數(shù)是物樂(lè)的特常戴七的強(qiáng)度愈弱,其定量關(guān)系A(chǔ)=KC。K值愈大,能測(cè)定的濃度C愈小,則靈敏度愈高。當(dāng)液層厚度不變時(shí),吸光度與溶液濃意成正比,這就是Beer定律3、Lambert-Beer定律的應(yīng)用條件Lambert-Beer定律適用于可見(jiàn)光、紫外光、紅外光和均勻非散射的液體以及分散均勻的態(tài)或氣態(tài)樣品單色光的勻介質(zhì)吸收物質(zhì)元相互作用4、Lambert-Beer定律的偏離現(xiàn)象溶液:稀溶液、化學(xué)變化光學(xué);非單色光、散射和折射儀器;光源、實(shí)驗(yàn)條件5、空白溶液的選擇在分光光度法中,為消除顯色劑及樣品中各種共存有色物質(zhì)產(chǎn)生的干擾、抵消比色皿和試劑對(duì)入射光的影響而用來(lái)調(diào)節(jié)儀器百分透光率為100%的溶液。蒸餾水劑品含待測(cè)元素不顯1、溶劑空白:不加樣品和任何試劑,用純?nèi)軇?如蒸餾水或其他有機(jī)溶劑)作參比溶液。先擇原則:當(dāng)顯色劑及其它試劑均無(wú)色,被測(cè)試樣中又無(wú)其他有色離子時(shí),選用溶劑參比試劑空白:用不加樣品,而顯色劑和其他試劑都相同的溶液作參比溶液擇原則:當(dāng)顯色劑本身有顏色或其它試劑有顏色,被測(cè)試樣中又無(wú)其他有色離子時(shí),選用試劑參比3、樣品空白:用不加顯色劑的樣品溶液作參比溶液選擇原則:當(dāng)試樣溶液有顏色,而試劑、顯色劑均無(wú)顏色時(shí),選用樣品空白4、平行操作空白:按樣品分析完全相同的操作步驟,用不含待測(cè)元素的樣品進(jìn)行平行操作以消除操作過(guò)程中引入干擾雜質(zhì)所帶來(lái)的誤差選擇原則:當(dāng)操作過(guò)程中由于試劑、器皿、水和氣等因素引入了一定量的被測(cè)試樣組分的干擾離子5、不顯色空白:可將一份試樣加入適當(dāng)?shù)难诒蝿?將被測(cè)組分掩蔽起來(lái),使之不再與顯色劑作用,而顯色劑相當(dāng)對(duì)均湖試料封有續(xù)包個(gè)以此作為參比溶液,這樣可以消除顯色劑和一些