浙江大學(xué)細胞培養(yǎng)-基本技術(shù)教學(xué)課件2

浙江大學(xué)細胞培養(yǎng)-基本技術(shù)細胞培養(yǎng)基本技術(shù)培養(yǎng)技術(shù)細胞系的建立和鑒定培養(yǎng)物的固定、染色顯微鏡觀察1、細胞培養(yǎng)技術(shù)細胞原代培養(yǎng)細胞傳代培養(yǎng)細胞凍存和復(fù)蘇細胞的運輸1.1細胞的原代培養(yǎng)是將機體內(nèi)的某組織取出,分散成單細胞,在人工條件下培養(yǎng)使其生存并不斷生長繁殖的方法。借助這種方法可以觀察細胞的分裂繁殖、細胞的接觸抑制、細胞的衰老、死亡等生命現(xiàn)象。幼稚狀態(tài)的組織和細胞,如動物的胚胎、幼仔的臟器等更容易進行原代培養(yǎng)義原代培養(yǎng)的最大優(yōu)點是細胞剛剛離體,生物性狀尚未發(fā)生很大變化,具有二倍體的遺傳性,而且大多數(shù)細胞表現(xiàn)出原來組織的特性。利用原代培養(yǎng)做各種實驗(藥物測試、細胞分化及病毒學(xué)方面)效果很好。原代培養(yǎng)也是建立各種細胞系(株)必須經(jīng)過的階段。原代細胞培養(yǎng)的實驗?zāi)康暮鸵蟆阏莆諢o菌操作技術(shù)°了解小鼠解剖操作技術(shù)了解原代細胞培養(yǎng)的一般方法與步驟了解培養(yǎng)細胞的消化分散°了解倒置顯微鏡的使用實驗材料實驗動物:孕鼠或新生小鼠液體:細胞生長液(內(nèi)含20%小牛血清)0.25%胰蛋白酶平衡鹽溶液70%乙醇器材:滅菌鑷子、剪刀、滅菌培養(yǎng)皿、細胞培養(yǎng)瓶、小瓶、燒杯、吸管、酒精燈原代細胞培養(yǎng)方法冷消化°胰酶消化法溫消化組織塊直接培養(yǎng)法消化法:采用無菌操作的方法,把組織(或器官)從動物體內(nèi)取出,經(jīng)酶消化處理,使分散成單個細胞然后在人工條件下培養(yǎng),使其不斷地生長和繁殖。切取意欲培養(yǎng)的動物器官或大組織塊洗去血污原易多余成分培貼塊法消化法養(yǎng)切成約mm,大小的植塊將所取組織剪方用于塊培養(yǎng)法蛋白酶許誚化機被方法吹打組織塊類不銹鋼網(wǎng)篩過對濾過液離亡(<』0or/min,<10min)用培養(yǎng)液懸浮成細胞懸液計數(shù)并調(diào)節(jié)細胞密度用于分離細胞培養(yǎng)消化法的分類切成2·3mm”小塊加胰蛋白37℃加蛋白配4C消化溫消化冷消化加新消優(yōu)液分次消(2030分鐘)包2靜沉去種培養(yǎng)化初代培薺法華本步驟粗切細切沖洗,自然沉降留少許BSS繼續(xù)培養(yǎng)翻轉(zhuǎn)干涸法erA(置37℃溫箱中)移入培養(yǎng)瓶中并吸凈BSs細胞生長培養(yǎng)24小時后薄層營養(yǎng)補液液培養(yǎng)法外植塊培養(yǎng)步驟圖解36、自己的鞋子，自己知道緊在哪里?！靼嘌?/p>

37、我們唯一不會改正的缺點是軟弱?！_什福科

38、我這個人走得很慢，但是我從不后退?！獊啿薄ち挚?/p>

39、勿問成功的秘訣為何，且盡全力做