免疫學(xué)技術(shù)-金免疫技術(shù)（臨床免疫檢驗(yàn)課件）

膠體金免疫滲濾試驗(yàn)POCT又稱即時(shí)檢驗(yàn)、床旁檢驗(yàn)，具有快速、小型、便攜等優(yōu)點(diǎn)，隨著iPOCT（智慧POCT）的問(wèn)世，POCT新技術(shù)不斷涌現(xiàn)，應(yīng)用領(lǐng)域不斷拓展膠體金免疫滲濾試驗(yàn)作為傳統(tǒng)的POCT平臺(tái)技術(shù)之一，具有廣闊的應(yīng)用前景前言免疫滲濾試驗(yàn)簡(jiǎn)稱“滴金法”，始創(chuàng)于1985年該法不需要儀器設(shè)備，只需要試劑因其最大的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，故又稱為快速斑點(diǎn)免疫結(jié)合試驗(yàn)?zāi)z體金免疫滲濾試驗(yàn)檢測(cè)原理將抗原或抗體點(diǎn)加在固相載體硝酸纖維素薄膜上，制成抗原或抗體包被的微孔濾膜并貼置于吸水材料上在一特殊的滲濾裝置上，依次滴加待測(cè)樣本、免疫金及洗滌液，液體在流經(jīng)微孔濾膜時(shí)，溶液中的抗原或抗體與膜上的抗體或抗原快速結(jié)合，形成大分子膠體金復(fù)合物，因膠體金本身呈紅色，陽(yáng)性反應(yīng)即在膜中央顯示紅色斑點(diǎn)膠體金免疫滲濾試驗(yàn)方法類型12雙抗體夾心法測(cè)抗原間接法測(cè)抗體雙抗體夾心法AB金標(biāo)抗體待測(cè)標(biāo)本間接法間接法將抗原包被在硝酸纖維素薄膜中央滴加待檢標(biāo)本，標(biāo)本中的待測(cè)抗體與微孔濾膜上的抗原特異性結(jié)合加洗滌液后，滴加金標(biāo)二抗，加洗滌液洗滌后，陽(yáng)性者即在膜中央呈紅色斑點(diǎn)(膠體金聚集)關(guān)鍵技術(shù)操作要點(diǎn)①將反應(yīng)板平放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，于小孔內(nèi)滴加待測(cè)標(biāo)本1~2滴，待完全滲入②于小孔內(nèi)滴加膠體金標(biāo)記物1~2滴，待完全滲入③于小孔內(nèi)滴加洗滌液2~3滴，待完全滲入④結(jié)果判定：膜中央有清晰的淡紅色或紅色斑點(diǎn)者判定為陽(yáng)性反應(yīng)，反之則為陰性反應(yīng)。斑點(diǎn)呈色的深淺相應(yīng)地提示待測(cè)標(biāo)本的陽(yáng)性程度臨床應(yīng)用主要為性激素類，如人絨毛膜促性腺激素(HCG)促黃體激素(LH)、促卵泡激素(FSH)等如甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)等如乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗體(HBsAb)、HCV抗體、人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體、梅毒抗體如心肌肌鈣蛋白I(cTnI)心肌肌鈣蛋白T(cTnT)肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌紅蛋白(Mb)等如可卡因、嗎啡等激素腫瘤標(biāo)志物感染性疾病心血管病標(biāo)志物毒品010203膠體金免疫滲濾試驗(yàn)的方法類型膠體金免疫滲濾試驗(yàn)的操作要點(diǎn)膠體金免疫滲濾試驗(yàn)的臨床應(yīng)用

小結(jié)膠體金免疫滲濾試驗(yàn)的檢測(cè)原理04思考題膠體金免疫滲濾試驗(yàn)的原理是什么？有哪些技術(shù)類型？怎樣判讀結(jié)果？免疫層析技術(shù)目前臨床中常用的新冠抗體血清學(xué)檢測(cè)方法有3種：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法、化學(xué)發(fā)光免疫分析法和膠體金免疫層析法，在這3種檢測(cè)方法中，免疫層析技術(shù)無(wú)需特殊處理標(biāo)本，僅需一滴血即可在15min內(nèi)通過(guò)肉眼觀察獲取檢測(cè)結(jié)果，可用于大規(guī)模的快速檢測(cè)和篩查

免疫層析的產(chǎn)業(yè)化之初，就奠定了其普及化之路，“早孕試紙”可以說(shuō)是一個(gè)很典型也很成功的案例。試紙有一些得天獨(dú)厚的優(yōu)勢(shì)，比如快速、簡(jiǎn)單、便攜、樣本多樣化，這些是任何其它方法所不能媲美的前言免疫層析技術(shù)免疫層析技術(shù)簡(jiǎn)稱“一步金法”以微孔濾膜為載體，將膠體金標(biāo)記技術(shù)與蛋白質(zhì)層析技術(shù)結(jié)合起來(lái)的快速固相膜免疫分析技術(shù)檢測(cè)原理待測(cè)標(biāo)本層析方法類型夾心法競(jìng)爭(zhēng)法間接法123夾心法主要用于檢測(cè)分子中至少含有兩個(gè)抗原表位的多價(jià)抗原夾心法雙抗體夾心法雙抗原夾心法競(jìng)爭(zhēng)法競(jìng)爭(zhēng)法主要用于檢測(cè)小分子抗原間接法間接法用于檢測(cè)抗體關(guān)鍵技術(shù)操作要點(diǎn)①將試劑條標(biāo)記線一端浸入待測(cè)標(biāo)本中2-5秒或在標(biāo)本加樣處加一定量待檢標(biāo)本，平放于水平桌面上②5-20分鐘內(nèi)觀察結(jié)果③僅出現(xiàn)一條紅色質(zhì)控條帶為陰性，同時(shí)出現(xiàn)反應(yīng)條帶和質(zhì)控條帶兩條紅色條為陽(yáng)性，無(wú)紅色條帶出現(xiàn)為試劑失效臨床應(yīng)用主要為性激素類，如人絨毛膜促性腺激素(HCG)促黃體激素(LH)、促卵泡激素(FSH)等如甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)等如乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗體(HBsAb)、HCV抗體、人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體、梅毒抗體如心肌肌鈣蛋白I(cTnI)心肌肌鈣蛋白T(cTnT)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌紅蛋白(Mb)等如可卡因、嗎啡等激素腫瘤標(biāo)志物感染性疾病心血管病標(biāo)志物毒品010203