ms的免疫病理機制及免疫干預(yù)治療課件

ms的免疫病理機制及免疫干預(yù)治療ms的免疫病理機制及免疫干預(yù)治療ms的免疫病理機制及免疫干預(yù)治療多發(fā)性硬化(MultipleSclerosis,MS)

的病理特征中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘病變多發(fā)性病灶，反復(fù)發(fā)作，慢性進行性過程病變常侵犯腦室周圍白質(zhì)、視神經(jīng)、脊髓傳導(dǎo)束、腦干、小腦臨床表型復(fù)雜：良性型、亞臨床無癥狀型、復(fù)發(fā)緩解型、慢性進展型2020/11/42多發(fā)性硬化(MultipleSclerosis,MS)

的病理特征中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘病變多發(fā)性病灶，反復(fù)發(fā)作，慢性進行性過程病變常侵犯腦室周圍白質(zhì)、視神經(jīng)、脊髓傳導(dǎo)束、腦干、小腦臨床表型復(fù)雜：良性型、亞臨床無癥狀型、復(fù)發(fā)緩解型、慢性進展型2020/11/42MS免疫學(xué)異常的基本特征病變神經(jīng)組織T細胞及單核巨噬細胞等炎性細胞浸潤神經(jīng)膠質(zhì)細胞增生外周血及CNS中存在MBP(髓磷脂堿性蛋白)特異性T細胞的活化外周血淋巴細胞中Th1/Th2比例異常，顯示Th1優(yōu)勢可分離出自身反應(yīng)性致病性T細胞，即MBP特異性T細胞，體外培養(yǎng)可形成克隆化，并能轉(zhuǎn)移致病性(動物實驗)，屬Th1細胞用MBP免疫動物可復(fù)制疾病模型IL-2、IFN-γ、TNF、IL-12等Th1型細胞因子可加重病情，而IL-4、IL-10等Th2型細胞因子能緩解病情緩解的病人及模型動物體內(nèi)能分離出Th2型的抑制性T細胞克隆2020/11/43MS發(fā)病的微生物感染引起

交叉免疫和分子模擬假說MS病人血清、腦脊液中存在高頻率、高滴度的HHV-6抗體MS腦組織中能通過PCR法擴增到HHV-6基因組DNA————MS發(fā)病與HHV-6有關(guān)HHV-6病毒蛋白可通過分子模擬機制激活MBP特異性自身反應(yīng)性T細胞？80%MS患者腦組織MS斑中的少突神經(jīng)膠質(zhì)細胞或斑周圍神經(jīng)白質(zhì)處含有HHV-6病毒蛋白101K或p41，而非MS者無一例陽性2020/11/44美國貝勒醫(yī)學(xué)院中國學(xué)者

秦瑩、藏敬伍教授夫婦重組HHV-6B101K蛋白及其29KD免疫優(yōu)勢片段：具有觸發(fā)復(fù)發(fā)緩解型MS(RR-MS)患者T細胞對HHV-6應(yīng)答的免疫原性。MS病人識別HHV-6的T細胞以較高的前質(zhì)頻率出，HHV-6對T細胞的致敏作用可能與RR-MS的臨床發(fā)作有關(guān)對從MS患者體內(nèi)獲得的HHV-6特異性T細胞株和從健康對照建株的T細胞進行比較，發(fā)現(xiàn)二者對HHV-6優(yōu)勢片段的反應(yīng)性不同2020/11/45MS患者HHV-6

特異性T細胞的反應(yīng)頻率2020/11/46MS與趨化因子的異常表達CNS組織病灶中大量浸潤CD4+T細胞異常的T細胞遷徙是MS發(fā)病的重要因素CD4+T細胞如何進入CNS？焦點：趨化因子及其受體的作用2020/11/471、RANTES(C-C趨化因子家庭成員)具有很強的趨化T細胞和單核巨噬細胞的能力優(yōu)勢趨化的T細胞主要是分泌IFN-γ的T細胞，而對其趨化作用不敏感的T細胞主要分泌IL-10(RANTES主要促進Th1/Th0細胞遷徙？)MS患者對外周T細胞表現(xiàn)較高的自發(fā)遷移能力，在RANTES或MIP-1α刺激下呈劑量依賴性增高，所需濃度0.1～1ng/ml，與MS患者血漿和腦脊液中測得的濃度一致免疫組化法證實RANTES在CNS主要由星形膠質(zhì)細胞表達，活動性患者的表達水平高于正常人2倍，也高于穩(wěn)定期患者Th1型細胞因子及IL-1β、TNF-α在體外均可刺激星形膠質(zhì)細胞RANTES表達增強Glatirameracetate:抑制IL-1β誘導(dǎo)RANTES表達，對MS起治療作用RANTES～Th1之間的正反饋相互調(diào)節(jié)：互為促進，參與MS發(fā)病2020/11/482、CCR5(RANTES的主要受體)CCR5在外周血T細胞上主要表達于Th1細胞免疫組化發(fā)現(xiàn)：★CCR5主要表達于MS炎癥損傷灶的T細胞、巨噬細胞、小膠質(zhì)細胞★MS中樞病灶中T細胞CCR5表達水平顯著高于外周血T細胞復(fù)發(fā)期炎性病灶中含量明顯升高，緩解期則降低用抗CCR5單抗封閉，可部分抑制RANTES引起的T細胞遷移有些MS患者CCR5基因兩端缺失，只能編碼中間一段的CCR5(無功能)，此類患者表現(xiàn)出較長的疾病緩解期，病灶中炎癥細胞浸潤減少——RANTES—CCR5參與MS發(fā)病中的T細胞遷移，但還有其他趨化因子及其受體參與，如RANTES還可以通過CCR1、CCR3遷移CCR5高表達是病因，還是繼發(fā)因素、炎癥刺激的結(jié)果？HHV-6的U12基因的ORF可編碼RANTES的功能性受體——HHV-6感染或再活化使CCR5高表達，或病毒基因產(chǎn)物模擬CCR5功能？2020/11/493、MIP-1MS患者CNS中MIP-1α/-1β含量明顯高于正常對照，尤以MIP-1β顯著主要分布于血管周圍、腦實質(zhì)的巨噬細胞和髓鞘降解產(chǎn)物在動物模型EAE，用MIP-1基因與一段重復(fù)的免疫刺激序列重組后對EAE小鼠作基因免疫接種，使小鼠體內(nèi)產(chǎn)生抗MIP-1抗體，可抑制MIP-1的趨化作用，使模型小鼠發(fā)病變緩、癥狀變輕、對EAE的抵抗力增強其他：MCP、MIG、IP-10、MMP、CXCR3、CCR1、CCR2等———趨化因子的級聯(lián)放大反應(yīng)？2020/11/410粘附分子與MS：VCAM-1慢性活動性MS病灶中VCAM-1/VLA-4水平升高，急性期則升高不明顯RR-MS、SP(二次發(fā)作)的外周血中，單核細胞和T細胞上VLA-4高于正常1.5倍，腦脊液中高出3倍腦脊液中sVCAM-1濃度明顯升高，復(fù)發(fā)期升高，緩解期回落，但血清濃度與對照一致，不隨病情變化——VCAM-1/VLA-4在MS復(fù)發(fā)時表達增高，尤其在CNS

腦脊液中sVCAM-1可作為反映MS病情活動的指標(biāo)2020/11/411TNF-α與sVCAM-1抗TNF-α抗體治療：加速疾病的活化矛TNF-α基因缺失小鼠，EAE模型病情更嚴(yán)重盾？TNF-α刺激人腦皮質(zhì)內(nèi)皮細胞(HCEC)：＊可使其顯著高表達VCAM-1,72小時達高峰＊144小時，培養(yǎng)上清sVCAM-1顯著增多，膜表面VCAM-1顯著減少＊sVCAM-1來源于膜表面的VCAM-1的脫落sVCAM-1達100ng/ml可阻斷VCAM-1的作用，阻止PBMCs與HCEC的粘附炎癥因素：TNF-α分泌→VCAM-1表達增高→病情惡化IFN-β→

sVCAM-1大量形成→病情緩解2020/11/412IFN-β對MS的治療作用與TNF-α協(xié)調(diào)作用→HCEC：sVCAM-1大量增加IFN-β單獨刺激無效sVCAM-1直接注射MS病人：緩解病情，治療作用

2020/11/413ICAM-1與MST細胞分泌的IFN-γ、TNF-α可促使腦內(nèi)皮質(zhì)細胞、小膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞、巨噬細胞的ICAM-1的表達呈增高在MS患者的腦脊液中，sICAM-1也升高，且也有抑制白細胞游走的功能2020/11/414Fas-FasL介導(dǎo)的細胞凋亡與MS在MS中，F(xiàn)as-FasL系統(tǒng)在三方面起作用1、外周T細胞凋亡2、CNST細胞凋亡3、其它非T細胞凋亡2020/11/415MS中Fas-FasL介導(dǎo)的T細胞凋亡在MS動物模型EAE中：①MBP特異的自身反應(yīng)性T細胞轉(zhuǎn)移給gld小鼠(FasL缺陷)：產(chǎn)生EAE遷徙型臨床癥狀②在Fas和FasL都缺乏的小鼠：急性期較少看到T細胞凋亡③急性期80%CD4+T細胞和50%巨噬細胞表達Fas和FasL，同時有20%的CD4+T細胞凋亡；一些星形膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元也表達Fas、FasL，但不凋亡④Fas缺乏的EAE易感小鼠，經(jīng)抗原誘導(dǎo)EAE后，CNS中有大量CD4+T細胞浸潤，但不凋亡，出現(xiàn)嚴(yán)重的神經(jīng)麻痹癥狀，死亡率高?！狤AE的臨床類型與轉(zhuǎn)歸與Fas-FasL介導(dǎo)的T細胞凋亡有關(guān)：缺乏Fas系統(tǒng)的作用，自身反應(yīng)性T細胞凋亡不良，可導(dǎo)致CNS損傷2020/11/416在MS病人體內(nèi)將病人腦脊液中大量的MBP特異的T細胞分離出來，體外培養(yǎng)，用FasL抗體阻斷MBP-T的凋亡，發(fā)現(xiàn)MBP-T明顯增多，提示MS病人體內(nèi)的MBP-T對FasL介導(dǎo)的凋亡非常敏感，然而病人體內(nèi)凋亡不良不凋亡的MBP-T能選擇性識別MBP的特定肽段，并呈現(xiàn)Th2細胞因子分泌格局，提示MBP-T細胞發(fā)生了由Th1→Th2的轉(zhuǎn)變MS病人外周血中多克隆T細胞凋亡不足，sFAS水平增高，抑制了多克隆T細胞的凋亡2020/11/417Fas-FasL介導(dǎo)非T細胞的凋亡MS病人腦損傷部位Fas、FasL表達量比正常部位高——Fas-FasL介導(dǎo)了腦實質(zhì)細胞的損傷？小膠質(zhì)細胞和T細胞表達FasL，少突膠質(zhì)細胞高表達Fas——小膠質(zhì)細胞和T細胞可引起MS中少突膠質(zhì)細胞損傷體外實驗證實：少突膠質(zhì)細胞對FasL誘導(dǎo)的凋亡敏感巨噬細胞死亡，也表達Fas——巨噬細胞的死亡也是由Fas-FasL介導(dǎo)2020/11/418DowlingPetal.1997.JNeurolsci免疫組化定位MSFas-FasL表達細胞及MS損傷部分凋亡，發(fā)現(xiàn)：

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MS病人腦白質(zhì)損傷部位多種細胞(主要是小膠質(zhì)細胞，也包括巨噬細胞)表達FasL，同時這些細胞也高表達Fas形態(tài)學(xué)和DNA梯度電泳證實：

＊MS損傷部位的細胞凋亡是導(dǎo)致少突膠質(zhì)細胞死亡的主要原因2020/11/419Fas-FasL介導(dǎo)的細胞凋亡對MS的意義Adouble-edgedsword:介導(dǎo)了CNS局部病灶中的組織損傷參與局部與外周淋巴細胞的清除及極化格局的轉(zhuǎn)換治療原則：促進自身反應(yīng)性T細胞凋亡，誘導(dǎo)向Th2轉(zhuǎn)換保護CNS中局部組織細胞，免受Fas-FasL介導(dǎo)的凋亡

2020/11/420樹突狀細胞(DCs)在MS中的作用⒈DCs在MS中的致病作用：＊促進T細胞活化、增殖和分化為Th1細胞＊釋放促炎癥因子，是致炎癥性細胞因子的重要來源＊激活自身反應(yīng)性T細胞⒉DCs在MS中的促進恢復(fù)和病情緩解的作用＊誘導(dǎo)活化的致病性自身反應(yīng)性T細胞凋亡、清除＊誘導(dǎo)自身反應(yīng)性T細胞耐受性形成2020/11/421外周DCs在MS中的致病作用MS患者外周血中分泌IFN-γ、TNF-α和IL-6的循環(huán)性DCs含量增加，提示DCs是致炎癥性細胞因子的重要來源，在MS發(fā)病中起到促進作用病毒、細菌感染→非特異性免疫途徑：激活DCs→俘獲交叉反應(yīng)性和/或隱蔽自身抗原→遷移到淋巴組織→激活自身反應(yīng)性T細胞→此T細胞獲得穿越血腦屏障的能力→進入CNS：攻擊宿主細胞，引起炎癥，造成組織損傷2020/11/422中樞DCs在MS中的作用CNS中有可表達高水平炎癥因子IFN-γ、TNF-α、IL-12的DCs腦膠質(zhì)細胞可在GM-CSF培養(yǎng)系統(tǒng)中產(chǎn)生DCs樣細胞——DCs不但在外周起作用，還可以在CNS中募集并成熟，在局部起到刺激和維持自身免疫的作用，從而參與致病過程CNS中DCs的來源？起源于腦膠質(zhì)細胞？外周遷移到CNS？2020/11/423DCs促進MS和EAE恢復(fù)的作用EAE恢復(fù)期的DCs：產(chǎn)生高水平NO，NO誘導(dǎo)DCs本身和自身反應(yīng)性T細胞凋亡——由DCs驅(qū)動、NO介導(dǎo)的負反饋環(huán)路促進了EAE的緩解MS病灶組織中CD8+DCs表達FasL，誘導(dǎo)表達Fas的CD4+T細胞、巨噬細胞、小膠質(zhì)細胞凋亡，消除或限制T細胞對其遞呈的抗原反應(yīng)——MS恢復(fù)期常常伴有炎性浸潤細胞的缺失和凋亡2020/11/424多發(fā)性硬化中補體的作用MS：機體對自身CNS內(nèi)髓鞘脂成分及其產(chǎn)生的細胞少突膠質(zhì)細胞發(fā)生免疫應(yīng)答靶細胞：少突膠質(zhì)細胞靶抗原：MBP、MOG、PLP、CNP和MAG及少突膠質(zhì)細胞的特異性蛋白病人腦脊液中可檢出補體攻膜復(fù)合物C56789：除T細胞、細胞因子之外，Ig和補體也參與其免疫病理髓鞘特異性蛋白MOG：能結(jié)合C1q，其結(jié)合位點在IgG位點附近——MOG是CNS內(nèi)活化補體的特異蛋白？病人少突膠質(zhì)細胞上表達的CD59減少，但星形膠質(zhì)細胞仍能表達大量CD59——這是少突膠質(zhì)細胞易于受損而星形膠質(zhì)細胞不易受損的原因？2020/11/425MS的免疫干預(yù)防治1、IFN-β的應(yīng)用：＊

IFN-β1b或IFN-β1a，皮下注射＊用于復(fù)發(fā)-緩解型病人，早期應(yīng)用效果較好＊明顯降低疾病惡化率，減慢病殘進展，阻止疾病復(fù)發(fā)機理：＊協(xié)同TNF-α促進sVCAM-1大量增加，抑制炎性T細胞浸潤＊直接抑制DCs分泌IL-12及T細胞分泌IFN-γ、IL-2，促進單核細胞產(chǎn)生IL-10，誘導(dǎo)DC2→Th2分化過程，抑制Th12020/11/426

2、T細胞疫苗/TCR疫苗/VβTCR疫苗的應(yīng)用＊以致病性T細胞或其TCR的Vβ獨特型決定簇刺激抗獨特型T細胞克隆的活化，從而抑制致病性T細胞的活化、增殖和致病＊已用于臨床試驗＊可激發(fā)Th2細胞活化