沉淀反應(yīng) 沉淀反應(yīng)（免疫學檢驗課件）

第十四章沉淀反應(yīng)本章要點沉淀反應(yīng)的概念及特點。1液相內(nèi)沉淀試驗的原理及種類。2凝膠內(nèi)沉淀試驗的原理及種類。3雙向瓊脂擴散試驗的應(yīng)用。4凝膠免疫電泳技術(shù)的種類及原理。5沉淀反應(yīng)方法的技術(shù)要點、影響因素及臨床應(yīng)用。6CONTENTS目錄010203液相內(nèi)沉淀試驗?zāi)z內(nèi)沉淀試驗?zāi)z免疫電泳技術(shù)前言沉淀反應(yīng)（precipitation)可溶性抗原與相應(yīng)抗體發(fā)生特異性結(jié)合，在適當條件下而出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象。多克隆抗體可與抗原表面多個不同的表位結(jié)合，容易與多個抗原交聯(lián)成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)而發(fā)生沉淀，而單克隆抗體只與抗原表面的一種表位結(jié)合，不易形成交聯(lián)，故不適用于免疫沉淀試驗。沉淀反應(yīng)分類1.液相內(nèi)沉淀試驗環(huán)狀沉淀反應(yīng)、絮狀沉淀反應(yīng)、免疫比濁度分析。2.凝膠內(nèi)沉淀試驗單向瓊脂擴散試驗、雙向瓊脂

擴散試驗。3.凝膠免疫電泳技術(shù)對流電泳技術(shù)、免疫電泳技術(shù)、

火箭電泳技術(shù)、免疫固定電泳技術(shù)。液相內(nèi)沉淀試驗01液相內(nèi)沉淀試驗環(huán)狀沉淀試驗：抗原溶液疊加在細玻璃管內(nèi)的抗體液面上，二者在兩液面交界處形成白色沉淀環(huán)。1液相內(nèi)沉淀試驗絮狀沉淀試驗：可溶性抗原、抗體在液相中特異性結(jié)合，形成絮狀沉淀物。2液相內(nèi)沉淀試驗環(huán)狀沉淀試驗：透射、散射和免疫膠乳比濁法，應(yīng)用于自動化。3凝膠內(nèi)沉淀實驗02凝膠內(nèi)沉淀實驗指可溶性抗原、抗體在含有電解質(zhì)的凝膠內(nèi)自由擴散形成濃度梯度，二者在比例合適的位置形成肉眼可見的沉淀線或沉淀環(huán)。根據(jù)抗原與抗體反應(yīng)的方式和特性，可分為單向瓊脂擴散試驗和雙向瓊脂擴散試驗。凝膠內(nèi)沉淀實驗一、單向瓊脂擴散試驗（平板法）一、單向瓊脂擴散試驗（平板法）抗體與待測的抗原,在兩者比例合適的部位結(jié)合形成沉淀環(huán)。環(huán)的大小與抗原的濃度成正相關(guān)。本法穩(wěn)定、簡便、無需儀器設(shè)備。重復性和線性均可信，但靈敏度稍差、耗時長、影響因素多。一、單向瓊脂擴散試驗（平板法）單向免疫擴散試驗?zāi)z內(nèi)沉淀實驗二、雙向瓊脂擴散試驗（平板法）二、雙向瓊脂擴散試驗（平板法）將抗原抗體分別加在瓊脂糖凝膠不同的對應(yīng)孔中，兩者在凝膠中自由擴散，在比例合適處形成白色沉淀線。沉淀線的位置、形狀以及對比關(guān)系，可進行定性分析，如抗原或抗體的存在與否、相對含量估計、相對分子量分析和性質(zhì)分析。本法操作簡單、特異性高、結(jié)果可靠、成本低廉，但靈敏度低，耗時長，不能精確定量。二、雙向瓊脂擴散試驗（平板法）雙向瓊脂擴散試驗應(yīng)用雙向瓊脂擴散試驗應(yīng)用A：Ag、Ab濃度及分子量近似；B：Ag、Ab濃度近似，分子量Ag＜Ab；C：Ag、Ab濃度近似，分子量Ag＞Ab；D：濃度Ag＞Ab，分子量近似；E：濃度Ag＞Ab，分子量Ag＜Ab；F：濃度Ag＜Ab，分子量Ag＞Ab1.抗原或抗體的定性分析。2.抗原、抗體的相對分子量和相對濃度的估計。雙向瓊脂擴散試驗應(yīng)用抗原完全相同3.抗原性質(zhì)的分析抗原部分相同抗原完全不同雙向瓊脂擴散試驗應(yīng)用4.抗體效價的測定5.抗原或抗體純度的鑒定凝膠免疫電泳技術(shù)03凝膠免疫電泳技術(shù)電泳分析與沉淀反應(yīng)的結(jié)合產(chǎn)物，即可溶性抗原和抗體在直流電場的作用下，在凝膠內(nèi)加速定向泳動，彼此相遇而特異性結(jié)合，在比例合適處形成可見的沉淀物。該技術(shù)提高了沉淀反應(yīng)的速度和敏感度，廣泛用于臨床實驗診斷和科學研究。凝膠免疫電泳技術(shù)一、對流免疫電泳技術(shù)凝膠免疫電泳技術(shù)無沉淀線出現(xiàn)表明無相應(yīng)的抗原。沉淀線位于抗原抗體孔中間，說明兩者比例較適合。沉淀線偏向抗原孔一方，表示抗體濃度＞抗原，反之，則是抗體濃度＜抗原濃度。一、對流免疫電泳技術(shù)凝膠免疫電泳技術(shù)一、對流免疫電泳技術(shù)凝膠免疫電泳技術(shù)二、火箭免疫電泳技術(shù)凝膠免疫電泳技術(shù)單向免疫擴散和電泳的定量檢測技術(shù)。固定抗體不移動，抗原向正極泳動，隨著抗原量減少，基底區(qū)越來越窄，形成的沉淀線逐漸變窄，形成一個如火箭的沉淀峰，峰的高度與抗原量呈正相關(guān)。二、火箭免疫電泳技術(shù)火箭免疫電泳圖①②③④為標準抗原；⑤⑥為標本-+凝膠免疫電泳技術(shù)三、免疫電泳技術(shù)凝膠免疫電泳技術(shù)三、免疫電泳技術(shù)凝膠免疫電泳技術(shù)四、免疫固定電泳技術(shù)凝膠免疫電泳技術(shù)四、免疫固定電泳技術(shù)SPGAMκ

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