第7章-革蘭陽(yáng)性球菌課件

獸醫(yī)微生物學(xué)獸醫(yī)微生物學(xué)1第7章革蘭陽(yáng)性球菌第一節(jié)葡萄球菌屬第二節(jié)鏈球菌屬第三節(jié)腸球菌屬第四節(jié)蜜蜂球菌屬第7章革蘭陽(yáng)性球菌第一節(jié)葡萄球菌屬2革蘭陽(yáng)性球菌球菌種類很多，按革蘭染色特性分為革蘭陽(yáng)性球菌和陰性球菌兩大類，獸醫(yī)臨床上重要的是革蘭陽(yáng)性球菌，其中的葡萄球菌屬和鏈球菌屬的某些成員是人和動(dòng)物的重要致病菌。革蘭陽(yáng)性球菌球菌種類很多，按革蘭染色特性分為3第一節(jié)葡萄球菌屬一、屬的特征：

1、葡萄球菌分布廣泛:空氣、飼料、飲水、地面及物體表面。人及畜禽的皮膚、粘膜、腸道、呼吸道及乳腺中。2、致病性葡萄球菌常引起各種化膿性疾患、敗血癥或膿毒敗血癥。當(dāng)污染食品時(shí)，可引起食物中毒。3、圓形，直徑0.5-1.5μm，排列成葡萄狀（如圖）；無(wú)芽胞、無(wú)鞭毛，有的可形成莢膜或粘液層。第一節(jié)葡萄球菌屬一、屬的特征：4第7章-革蘭陽(yáng)性球菌課件54、需氧或兼性厭氧，可在普通培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，但不能在麥康凱培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。最適溫度35-40℃，最適pH為7.0-7.5。5、致病性菌株多能產(chǎn)生脂溶性的黃色或檸檬色，不著染培養(yǎng)基。4、需氧或兼性厭氧，可在普通培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，但不能在麥康凱培養(yǎng)66、分類（1）按產(chǎn)生色素顏色：金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌和檸檬色葡萄球菌。（2）1974年葡萄球菌屬分：金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌。（3）《伯吉系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》將本屬細(xì)菌分為37種，許多種內(nèi)還分亞種。常見(jiàn)的動(dòng)物致病菌有金黃色葡萄球菌、豬葡萄球菌、中間葡萄球菌、偽中間葡萄球菌及海豚葡萄球菌。6、分類7二、金黃色葡萄球菌常見(jiàn)的致病菌多為金黃色葡萄球。1.培養(yǎng)及生化特性

在普通瓊脂平板形成濕潤(rùn)、光滑、隆起的圓形菌落，直徑1-2mm，有時(shí)可達(dá)4-5mm。菌落顏色依菌株而異，初呈灰白色，繼而為金黃色。在血液瓊脂平板形成的菌落較大，產(chǎn)溶血素的菌株多為病原菌，在菌落周圍呈現(xiàn)明顯的β溶血。2.抗原及變異

葡萄球菌細(xì)胞壁上的抗原構(gòu)造比較復(fù)雜，含有多糖及蛋白質(zhì)兩類抗原。二、金黃色葡萄球菌8多糖抗原

具有型特異性，可分為11個(gè)型，臨床分離多為5型和8型。蛋白抗原

人源菌株都含有葡萄球菌蛋白A(SPA)，來(lái)自動(dòng)物源菌株則少見(jiàn)。SPA能與人、猴、豬、犬及幾乎所有哺乳動(dòng)物的免疫球蛋白的Fc段結(jié)合，結(jié)合后的IgG仍能與相應(yīng)抗原特異性反應(yīng)。用于免疫學(xué)及診斷技術(shù)（協(xié)同凝集試驗(yàn)）。SPA與IgG結(jié)合形成的復(fù)合物在機(jī)體內(nèi)具有生物學(xué)作用（趨化性、抵抗吞噬、損傷血小板等）。多糖抗原具有型特異性，可分為11個(gè)型，臨床分離多為5型和9第7章-革蘭陽(yáng)性球菌課件103、抵抗力及藥物敏感性

在無(wú)芽孢菌中，葡萄球菌的抵抗力較強(qiáng)。在干燥的膿汁或血液中可存養(yǎng)2-3個(gè)月，80℃30min才能殺死。對(duì)龍膽紫、洗必泰、消毒凈、新潔爾滅、度米芬等敏感。對(duì)磺胺類、青霉素、金霉素、紅霉素、新霉素等抗生素敏感，但易產(chǎn)生耐藥性。

4、致病性及毒力因子

金色葡萄球菌可產(chǎn)生多種毒素和酶，故致病性強(qiáng)。常引起化膿性疾?。▌?chuàng)傷感染、膿腫、乳腺炎、敗血癥、膿毒敗血癥等）及毒素性疾?。ū黄咸亚蚓廴镜氖澄锘蝻暳峡梢鹑嘶騽?dòng)物的食物中毒性疾?。?、抵抗力及藥物敏感性在無(wú)芽孢菌中，葡萄球菌的抵抗力較強(qiáng)11毒力因子：葡萄球菌蛋白A、莢膜、毒素及酶。

α毒素

α溶血素，與牛羊的壞疽性乳腺炎有關(guān)，它還導(dǎo)致白細(xì)胞等崩解。α毒素是不耐熱的蛋白質(zhì)（外毒素），對(duì)多種哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞有溶血作用，而從動(dòng)物分離的菌株常見(jiàn)β溶血素。

作用原理：毒素分子插入紅細(xì)胞的細(xì)胞膜疏水區(qū)，形成微孔，造成紅細(xì)胞溶解，屬于穿孔毒素。

腸毒素

引致人類食物中毒，刺激嘔吐中樞，表現(xiàn)嘔吐、腹瀉。腸毒素是結(jié)構(gòu)相似的一組蛋白質(zhì)，耐熱抗酸，能經(jīng)受100℃30min或胃蛋白酶的水解根據(jù)抗原性差異可以將其分為20多個(gè)血清型，A、B兩型是引起食物中毒的常見(jiàn)血清型，其次是D型。毒力因子：葡萄球菌蛋白A、莢膜、毒素及酶。12凝固酶

多數(shù)致病株能同時(shí)產(chǎn)生兩種凝固酶，一種分泌于菌體外（游離凝固酶）。另一種結(jié)合在菌體表面（結(jié)合凝固酶），它們能使含有抗凝劑的家兔或人的血漿凝固，稱為凝固酶。凝固酶耐熱，經(jīng)100℃30min或高壓滅菌僅降低少量活性。

作用：保護(hù)菌株，有助致病菌株抵御宿主體內(nèi)吞噬細(xì)胞和殺菌物質(zhì)的作用，同時(shí)也使感染局限化。檢測(cè)葡萄球菌的凝固酶是鑒別菌株的重要指標(biāo)，致病株多數(shù)為凝固酶陽(yáng)性。

另外還有耐熱核酸酶、溶纖維蛋白酶、透明質(zhì)酸酶，又稱為擴(kuò)散因子。凝固酶多數(shù)致病株能同時(shí)產(chǎn)生兩種凝固酶，一種分泌于菌體外（135.微生物學(xué)診斷（1）涂片染色鏡檢

取膿汁、滲出液、乳汁、血液，中毒癥取剩余食物等。將病料涂片染色鏡檢。如發(fā)現(xiàn)有大量典型的葡萄球菌課初步診斷。（2）分離培養(yǎng)鑒定

將病料劃線接種于5％綿羊或兔血液瓊脂平板，37℃培養(yǎng)18-24h，菌落金黃色，周圍呈溶血圈者多為致病菌株。進(jìn)一步鑒定還要做凝固酶試驗(yàn)、分解甘露醇試驗(yàn)，陽(yáng)性者多為致病菌。必要時(shí)可做動(dòng)物試驗(yàn)。

5.微生物學(xué)診斷14第二節(jié)鏈球菌屬第二節(jié)鏈球菌屬15

鏈球菌種類多、分布廣。有些可致人或動(dòng)物的各種化膿性疾病、肺炎、乳腺炎、敗血癥等。一、分類

按溶血性分為α、β、γ3類。在鑒定鏈球菌的致病性方面有一定的意義。

α型溶血鏈球菌

在菌落周圍形成不透明的草綠色溶血環(huán)，紅細(xì)胞未完全溶解，血紅蛋白變成綠色。此菌致病力不強(qiáng)，多為條件性菌。β型溶血鏈球菌

菌落周圍形成完全透明的溶血環(huán)，紅細(xì)胞完全溶解。這類菌致病力強(qiáng)，常引起人及動(dòng)物各種疾病。鏈球菌種類多、分布廣。有些可致人或動(dòng)物的各種化膿16

γ型溶血鏈球菌

菌落周圍無(wú)溶血現(xiàn)象。一般為非致病菌。二、形態(tài)與染色

鏈球菌呈圓形或卵圓形，直徑小于2.0μm，常排列成鏈狀或成雙。肉湯內(nèi)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的鏈球菌常呈長(zhǎng)鏈排列，革蘭氏陽(yáng)性，多有莢膜。三、培養(yǎng)及生化特性

多為兼性厭氧菌，少數(shù)為厭氧菌。致病菌營(yíng)養(yǎng)要求較高，普通培養(yǎng)基中生長(zhǎng)不良，需添加血液、血清、葡萄糖等。在血液瓊脂平板上長(zhǎng)成直徑0.1-1.0mm，灰白色，表面光滑，邊緣整齊的小菌落。多數(shù)致病菌株有溶血性。血清肉湯中初呈均勻渾濁，后呈顆粒狀沉淀，上清透明。（實(shí)驗(yàn)課培養(yǎng)的大腸桿菌的菌液）γ型溶血鏈球菌菌落周圍無(wú)溶血現(xiàn)象。一般為非致病菌。17菌膜菌沉淀均勻渾濁對(duì)照菌膜菌沉淀均勻渾濁對(duì)照18四、致病性

致病性鏈球菌可產(chǎn)生多種毒素或酶，可致人及多種動(dòng)物的很多疾病，化膿感染、肺炎、乳房炎等。溶血素

分為對(duì)氧敏感溶血素O(SLO)和對(duì)氧穩(wěn)定溶血素S(SLS)兩種，呈溶血性。致熱外毒素

舊名紅疹毒素，主要由A群鏈球菌產(chǎn)生，致人猩紅熱，小劑量皮內(nèi)注射家兔可引起局部紅疹，大劑量注射可致全身紅疹。其他

不同致病菌株，可產(chǎn)生鏈激酶（溶纖維蛋白酶），透明質(zhì)酸酶等，其性質(zhì)作用類葡菌。四、致病性致病性鏈球菌可產(chǎn)生多種毒素或酶，可致人及多種動(dòng)19

細(xì)胞壁上的脂磷壁酸(LFA)與菌體吸附于宿主黏膜有關(guān)。其莢膜成分、M蛋白等具有抗吞噬作用。五、抵抗力

本屬細(xì)菌的抵抗力不強(qiáng)。對(duì)青霉素、磺胺類藥物敏感，易產(chǎn)生耐藥性。六、免疫性

鏈球菌的抗原結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，機(jī)體感染后有多種抗體產(chǎn)生，已知抗M蛋白的抗體具有保護(hù)作用，M蛋白有多種抗原型，各型間缺乏有效的交叉保護(hù)。我國(guó)研制的豬、羊鏈球菌疫苗有一定的免疫效果。

細(xì)胞壁上的脂磷壁酸(LFA)與菌體吸附于宿主20七、微生物學(xué)診斷

病料（膿汁、乳汁、血液、組織）涂片染色鏡檢，見(jiàn)革蘭氏陽(yáng)性、具莢膜、成對(duì)或鏈狀排列的球菌，可作初步診斷。確診需用血液瓊脂平板分離培養(yǎng)，觀察菌落、溶血等特征，并進(jìn)行生理生化試驗(yàn)。用群、型特異性血清作血清學(xué)試驗(yàn)，對(duì)病原菌定群或定型。七、微生物學(xué)診斷病料（膿汁、乳汁、血液、組織）涂片染色鏡21溶血性鏈球菌溶血性鏈球菌22八、主要致病菌（一）無(wú)乳鏈球菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌：三種鏈球菌是牛、山羊和綿羊的急性、慢性乳腺炎的病原菌之一，其中最常見(jiàn)的是無(wú)乳鏈球菌。形態(tài)及染色特性三者形態(tài)相似，直徑0.5-1.0μm。均無(wú)莢膜，革蘭陽(yáng)性。無(wú)乳鏈球菌常呈長(zhǎng)鏈停乳鏈球菌形成中等長(zhǎng)度的鏈乳房鏈球菌的鏈較短，有時(shí)成對(duì)排列八、主要致病菌無(wú)乳鏈球菌常呈長(zhǎng)鏈停乳鏈球菌形成中等長(zhǎng)度的鏈乳23抵抗力及藥物敏感性對(duì)熱、干燥及消毒藥的抵抗力不強(qiáng)。對(duì)青霉素、紅霉素等抗生素及磺胺類等藥物均敏感。致病性及免疫性引致牛、山羊和綿羊的急性、慢性乳腺炎，其中最常見(jiàn)的是無(wú)乳鏈球菌。感染后，三種菌均不產(chǎn)生明顯的免疫，目前也無(wú)可靠的多價(jià)菌苗。微生物學(xué)診斷取少量乳汁或其離心沉淀物涂片、染色、鏡檢，如發(fā)現(xiàn)鏈球菌及大量的白細(xì)胞，可作出初步診斷。需通過(guò)生化實(shí)驗(yàn)做進(jìn)一步的鑒定。抵抗力及藥物敏感性對(duì)熱、干燥及消毒藥的抵抗力不強(qiáng)。對(duì)青霉24(二)豬鏈球菌：是豬鏈球菌病的重要致病菌，并可感染人而致死。1、血清型：按莢膜抗原的差異分為35個(gè)血清型，包括1－34和1/2，豬鏈球菌2型是其中毒力最強(qiáng)、最常見(jiàn)的一種，豬鏈球菌1型、7型及9型也可使豬發(fā)病死亡。2、致病性：表現(xiàn)敗血癥、腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、肺炎和突然死亡。豬鏈球菌2型在豬群中通常通過(guò)口鼻感染，在扁桃體中增殖，還可存在于母豬的子宮或陰道中，攜帶豬鏈球菌2型的豬對(duì)其它豬具有傳染性。(二)豬鏈球菌：是豬鏈球菌病的重要致病菌，并可感染人而致死。253、毒力因子

豬鏈球菌2型的溶菌酶釋放因子（Muramidase-releasedproteinMRP）、胞外因子（ExtracellularfactorEF）、莢膜多糖抗原（CapsularPolysaccharidebiosynthesislocuscps）和溶血素等是主要的毒力因子。其中，莢膜多糖還是豬鏈球菌的型特異性抗原，據(jù)此可將豬鏈球菌分為35個(gè)血清型。豬鏈球菌2型cps2J基因僅可以與2型與1/2血清型產(chǎn)生雜交。顯示cps2J基因?yàn)樨i鏈球菌2型的特異性基因，可以作為鑒定豬2型鏈球菌的依據(jù)。3、毒力因子豬鏈球菌2型的溶菌酶釋放因子（Murami264、我國(guó)流行情況

我國(guó)于1991年在廣東省首次證實(shí)該病的存在；1998年和1999年夏季分別在江蘇部分地區(qū)豬群中爆發(fā)，并導(dǎo)致特定人群的25人感染，致死1人；2005年夏季，在四川省資陽(yáng)、內(nèi)江等8地市21個(gè)縣市區(qū)爆發(fā)，致死豬只647頭，感染發(fā)病人數(shù)為204，其中致死38人。

4、我國(guó)流行情況我國(guó)于1991年在廣東省首次證實(shí)該病的存27第7章-革蘭陽(yáng)性球菌課件284、微生物學(xué)診斷：（1）取樣：安全問(wèn)題：a)

在標(biāo)本采集過(guò)程中，注意使用一次性隔離服、手套、防護(hù)口罩等防護(hù)措施。b)

在標(biāo)本采集過(guò)程中,嚴(yán)格采取防護(hù)措施，防止針頭等銳器刺傷。準(zhǔn)備工作：a)

無(wú)菌、封閉性好的試管。b)

可以清楚標(biāo)記且標(biāo)記不易脫落的記號(hào)筆。c)

樣品采樣記錄表。d)

采集組織標(biāo)本的無(wú)菌容器。e)

無(wú)菌的剪刀、鑷子和手術(shù)刀。f)

血平皿(或者使用血培養(yǎng)瓶)。4、微生物學(xué)診斷：29（2）樣品的處理：將采集的樣品接種于高葡萄糖肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)6h。取培養(yǎng)液1mL，12000r/min離心3min，去掉上清。用200μL滅菌雙蒸水充分重懸菌泥，100℃煮沸15min，再12000r/min離心5min，收集上清。上清即可以作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。（2）樣品的處理：將采集的樣品接種于高葡萄糖肉湯培養(yǎng)基中，330（3）PCR：在1個(gè)PCR管中依次加入10×Buffer：2.5μL2mmol/LdNTP：5μLepf-1、epf-2：各0.2μLcps2J-1、cps2J-2：各0.3μLmrp-1、mrp-2：各0.3μLTaq酶0.3μL模板1μL補(bǔ)雙蒸水至25μL94℃預(yù)變性2min，94℃50s，53℃40s，72℃50s，運(yùn)行30個(gè)循環(huán)，最后延伸8min。取5μLPCR產(chǎn)物，于1%瓊脂糖凝膠電泳，在紫外燈下觀察。（3）PCR：在1個(gè)PCR管中依次加入31cps2J-230bpepf-570bpMrp-860bp瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果cps2J-230bp瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果32馬鏈球菌獸疫亞種（舊稱獸疫鏈球菌）：可致多種家畜的炎癥及敗血病，包括馬的創(chuàng)傷感染、敗血癥、子宮炎、流產(chǎn)、幼駒臍帶炎；牛乳腺炎、子宮炎；豬敗血癥、關(guān)節(jié)炎；羊敗血癥、心包炎、胸膜炎、肺炎；雞敗血癥等。

馬鏈球菌馬亞種（舊稱馬腺疫鏈球菌）：是引起馬腺疫的病原體。感染馬下頜淋巴結(jié)形成膿灶。

肺炎鏈球菌(又名肺炎球菌、肺炎雙球菌)：常引起人大葉性肺炎或腦膜炎，亦可致幼畜肺炎或敗血癥。馬鏈球菌獸疫亞種（舊稱獸疫鏈球菌）：可致多種家畜的炎33第三節(jié)腸球菌屬

腸球菌屬原先屬于鏈球菌屬的D群成員。鑒于二者16SrRNA序列的差異，1984年Schleifer提議將其獨(dú)立建屬，并于1994年獲得確認(rèn)?，F(xiàn)歸屬于球菌綱，乳酸桿菌目，腸球菌科。除腸球菌屬外該科還包括奇異桿菌屬、蜜蜂球菌屬、四聯(lián)球菌屬及漫游球菌屬。第三節(jié)腸球菌屬腸球菌屬原先屬于鏈球菌屬的D群34形態(tài)及培養(yǎng)特性腸球菌為圓形或橢圓形、呈鏈狀排列的革蘭陽(yáng)性球菌，老齡菌可呈革蘭陰性。無(wú)鞭毛、無(wú)芽孢，為需氧或兼性厭氧菌。對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求高，在血平板37℃培養(yǎng)18h，可形成灰白色、不透明、表面光滑、直徑0.5-1mm大小的圓型菌落，不同的菌株產(chǎn)生不同的溶血現(xiàn)象。致病性及致病機(jī)理家畜最常見(jiàn)的是本屬菌所致的尿道感染，雞則為心內(nèi)膜炎。致病機(jī)理不明，推測(cè)可能與抗生素的濫用導(dǎo)致菌群失調(diào)有關(guān)，腸球菌因?qū)股赜休^大抗性而成為機(jī)會(huì)致病菌。形態(tài)及培養(yǎng)特性腸球菌為圓形或橢圓形、呈鏈狀排列的35第四節(jié)蜜蜂球菌屬本屬菌屬于球菌科，僅包括蜂房蜜蜂球菌1個(gè)種，曾稱為蜂房鏈球菌，Baily經(jīng)系統(tǒng)鑒定后改為本名。第四節(jié)蜜蜂球菌屬本屬菌屬