人教版高中生物選修1全套課件（正版）

人教版高中生物選修1生物技術實踐人教版高中生物選修1生物技術實踐1果酒和果醋的制作果酒和果醋的制作2一、制作果酒果醋的微生物：酵母菌——真菌醋酸菌——細菌二、兩種微生物的分類地位1.制作果酒——酵母菌2.制作果醋——醋酸菌一、制作果酒果醋的微生物：酵母菌——真菌醋酸菌——細菌二、兩3菌種名稱生物學分類代謝類型適宜溫度繁殖方式對氧的需求酵母菌真核生物異養(yǎng)兼性厭氧最適20℃出芽生殖前期需氧，后期不需氧醋酸菌原核生物異養(yǎng)需氧30—35℃二分裂一直需氧控制空氣的一些措施三、繁殖方式和代謝類型出芽生殖二分裂生殖菌種生物學分類代謝適宜繁殖方式對氧的需求真核生物異養(yǎng)最適204比較果酒制作果醋制作制作原理酵母菌先在有氧條件下大量繁殖，再在無氧條件下進行酒精發(fā)酵醋酸菌在氧氣、糖源充足時,將糖分解成醋酸；當缺少糖源時，將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿崴?、制作原理和發(fā)酵條件的比較比較果酒制作果醋制作制作原理酵母菌先在有氧條件下大量5制作果酒制作果醋最適發(fā)酵溫度18℃——25℃30℃——35℃對氧的需求前期：需氧后期：不需氧需充足氧pH酸性環(huán)境（3.3~3.5）酸性環(huán)境（5.4~6.3）發(fā)酵時間10——12d7——8d制作果酒制作果醋最適發(fā)18℃——25℃30℃——35℃對氧前6C6H12O6+6O2+6H2O→6CO2+12H2O+能量酶1、有氧呼吸：C6H12O6→2C2H5OH+2CO2+能量酶2、無氧呼吸：酵母菌制酒㈠制作果酒（前期需氧，后期厭氧）出芽生殖，增加酵母菌數(shù)量產生酒精C6H12O6+6O2+6H2O→6CO2+12H2O+71、若氧氣、糖源充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸，其反應式：酶

C6H12O6→3CH3COOH（醋酸）2、若缺少糖源，氧氣不足時，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿?，其反應式?/p>

酶2C2H5OH+O2→2CH3CHO（乙醛）+2H2O酶2CH3CHO+O2→2CH3COOH（醋酸）醋酸菌制醋㈡制作果醋（一直需要氧）1、若氧氣、糖源充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸，其反8

五、實驗流程示意圖五、實驗流程示意圖91、材料的選擇與處理 選擇新鮮的葡萄，榨汁前先將葡萄進行沖洗，除去枝梗。①、取葡萄500g，去除枝梗和腐爛的葉子。②、用清水沖洗葡萄1－2次除去污物。

討論：你認為應該先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為什么？

應該先沖洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗時引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機會六、實驗操作1、材料的選擇與處理六、實驗操作102、清洗（WHY？）3、榨汁

將沖洗除枝梗的葡萄放入榨汁機榨取葡萄汁。4、發(fā)酵：發(fā)酵裝置如下5、注意事項①將葡萄汁裝人發(fā)酵瓶，要留大約1／3的空間(如圖右圖所示)，并封閉充氣口。（為什么？）

塑料瓶中不能裝滿葡萄液汁，應留一定空間，有利于酵母菌有氧呼吸大量繁殖形成種群優(yōu)勢。防止榨汁機、發(fā)酵瓶帶菌引起發(fā)酵液污染70%酒精消毒2、清洗（WHY？）3、榨汁5、注意事項①將葡萄汁裝人11③制葡萄醋的過程中，要適時通過充氣口充氣。將溫度嚴格控制在30℃～35℃，時間控制在前7～8d左右。②制葡萄酒的過程中，要嚴格密閉，將溫度嚴格控制在18℃～25℃，時間控制在10～12d左右，可通過出料口對發(fā)酵的情況進行。及時的監(jiān)測。③制葡萄醋的過程中，要適時通過充氣口充氣。②制葡萄酒的過程中12課題2腐乳的制作專題1傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用課題2專題1傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用13以制作腐乳為例了解傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用，說明腐乳制作過程的科學原理，設計并完成腐乳的制作，分析影響腐乳品質的條件。教學目標以制作腐乳為例了解傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用，說明腐乳制14課題重點：說明腐乳制作過程的科學原理，設計并完成腐乳的制作。課題難點：在實踐中摸索影響腐乳品質的條件。重點與難點課題重點：說明腐乳制作過程的科學原理，設計并完成15一、基礎知識據(jù)史料記載，早在公元5世紀魏代古籍中，就有腐乳生產工藝的記載，到了明代我國就大量加工腐乳，而今腐乳已成長為具現(xiàn)代化工藝的發(fā)酵食品。小資料一、基礎知識據(jù)史料記載，早在公元5世紀魏161.你能利用所學的知識，解釋豆腐長白毛是怎么一回事嗎？想一想2.王致和為什么要撒許多鹽，將長毛的豆腐腌起來？答：豆腐上生長的白毛是毛霉的白色菌絲。嚴格地說是直立菌絲，在豆腐中還有匍匐菌絲。答：鹽能防止雜菌污染，避免豆腐腐敗。1.你能利用所學的知識，解釋豆腐長白毛是怎么一回事嗎？想一17腐乳制作的原理1、參與腐乳制作的主要微生物主要作用青霉曲霉酵母毛霉腐乳制作的原理1、參與腐乳制作的主要微生物主要作用青霉曲霉酵181、關于毛霉：（1）毛霉是一種絲狀真菌。繁殖方式為孢子生殖，新陳代謝類型為異養(yǎng)需氧型。（2）毛霉在腐乳制作中的作用：在豆腐的發(fā)酵過程中，毛霉等微生物產生的蛋白酶能將豆腐的蛋白質分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸．在多種微生物的協(xié)同作用下，普通的豆腐轉變成我們愛吃的腐乳．發(fā)酵的溫度為15～18℃。1、關于毛霉：（2）毛霉在腐乳制作中的作用：19毛霉菌落形態(tài)毛霉菌落形態(tài)20總狀毛霉菌落形態(tài)總狀毛霉菌落形態(tài)21思考題1.我們平常吃的豆腐，哪種適合用來做腐乳？答：含水量為70%左右的豆腐適于作腐乳。用含水量過高的豆腐制腐乳，不易成形。2.吃腐乳時，你會發(fā)現(xiàn)腐乳外部有一層致密的“皮”。這層“皮”是怎樣形成的呢？它對人體有害嗎？它的作用是什么？答：“皮”是前期發(fā)酵時在豆腐表面上生長的菌絲（匍匐菌絲），它能形成腐乳的“體”，使腐乳成形?！捌ぁ睂θ梭w無害。思考題1.我們平常吃的豆腐，哪種適合用來做腐乳？答：含水量222、微生物的作用機理釀造腐乳的主要工序是將豆腐進行前期發(fā)酵和后期發(fā)酵。前期發(fā)酵過程中，毛霉在豆腐（毛坯）上生長。毛霉生長大約5天后使白坯變成毛坯。豆腐表面被一層菌膜包住，形成腐乳的“體”。同時毛霉分解以蛋白質為主的蛋白酶，將豆腐所含有的蛋白質分解為各種氨基酸。2、微生物的作用機理釀造腐乳的主要工序是將豆23在后期發(fā)酵過程中，酶與微生物協(xié)同作用，通過研制并配入各種輔料（紅曲、面曲、酒釀），是蛋白酶作用緩慢，促進其他生化作用，生成腐乳的香氣。在后期發(fā)酵過程中，酶與微生物協(xié)同作用，通過研制并配入24二、實驗設計讓豆腐上長出毛霉加鹽腌制加鹵湯裝瓶密封腌制溫度保持在15-18℃；豆腐水分控制在70%左右。逐層加鹽，隨層數(shù)的加高而增加鹽量，腌制大約8天左右。鹵湯由酒及各種香辛料配制而成。封瓶時瓶口通過酒精燈火焰防止瓶口污染。二、實驗設計讓豆腐上長出毛霉加鹽腌制加鹵湯裝瓶密封腌制溫25腐乳制作的具體操作步驟：將豆腐切成3cm×3cm×1cm的若干塊；將豆腐塊平放在鋪有干粽葉的盤內，粽葉可以提供菌種，并能起到保溫的作用，每塊豆腐等距離排放，周圍留有一定距離，豆腐上面再鋪上干凈的粽葉；將平盤放入溫度保持在15-18℃的地方；腐乳制作的具體操作步驟：將豆腐切成3cm×3cm×1cm的若264.當毛霉生長旺盛，并呈淡黃色時，去除包裹平盤的保鮮膜以及撲在上面的粽葉，使豆腐塊的熱量和水分能夠迅速散失，同時散去霉味；5.當豆腐涼透后，將豆腐塊間連接在一起的菌絲拉斷，并整齊排列在容器內，準備腌制；6.長滿毛霉的毛坯與鹽的質量分數(shù)比為5：1，分層加鹽，在瓶口表面鹽要鋪厚些，大約腌制8天；4.當毛霉生長旺盛，并呈淡黃色時，去除包裹平盤的保鮮膜以及277.將黃酒、米酒和糖，按口味不同而配以各種香辛料（如胡椒、花椒、八角茴香、桂皮、姜、辣椒等）混合制成鹵湯；8.將廣口玻璃瓶洗凈，用高壓鍋在100℃蒸氣滅菌，將腐乳咸坯擺入瓶中，加入鹵湯和輔料，密封放置，常溫六個月可以成熟。7.將黃酒、米酒和糖，按口味不同而配以各種香辛料（如胡椒、28三、操作提示1、控制好材料的用量腌制時注意控制鹽的用量鹽的濃度過低不足以抑制微生物生長，可能導致豆腐腐敗變質；濃度過高會影響腐乳的口味。鹵湯中酒的含量應控制在12%左右酒精含量過高將會延長腐乳成熟的時間；含量過低不足以抑制微生物生長，可能導致豆腐腐敗。三、操作提示1、控制好材料的用量腌制時注意控制鹽的用量292、防止雜菌污染用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。裝瓶時，操作要迅速小心。封瓶時，最好將瓶口通過酒精燈的火焰，防止瓶口被污染。2、防止雜菌污染用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒30四、結果分析與評價A是否完成腐乳的制作能夠合理的選擇實驗材料與用具；前期發(fā)酵后豆腐的表面長有菌絲，后期發(fā)酵制作基本沒有雜菌的污染。四、結果分析與評價A是否完成腐乳的制作能夠合理的選擇31B腐乳質量的評價成功的腐乳應具有以下特點：色澤基本一致、味道鮮美、咸淡適口、無異味、塊形整齊、厚薄均勻、質地細膩、無雜質。B腐乳質量的評價成功的腐乳應具有以下特點：色32C能否總結不同條件對腐乳風味和質量的影響從鹽、酒的用量、發(fā)酵的溫度、發(fā)酵時間的長短、以及香辛料等因素中的某一因素說明其對腐乳風味或質量的影響。C能否總結不同條件對腐乳風味和質量的影響從鹽33制作原理實驗設計主要微生物根霉酵母結果分析與評價毛霉蛋白酶蛋白質小分子肽和氨基酸腐乳的制作曲霉機理脂肪酶脂肪甘油和脂肪酸讓豆腐上長出毛霉加鹽腌制加鹵湯裝瓶密封腌制操作提示控制鹽酒的用量防止雜菌污染課堂小結制作原理實驗設計主要微生物根霉酵母結果分析與評價毛霉蛋白酶蛋34課題3:制作泡菜并檢測亞硝酸鹽含量專題1:傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用課題3:制作泡菜并檢測亞硝酸鹽含量專題1:傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用35一、乳酸菌

乳酸菌是發(fā)酵糖類主要產物為乳酸的一類細菌的總稱。屬于原核生物乳酸菌種類多，分布廣，常見乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌（用于制酸奶）。乳酸鏈球菌（球狀）乳酸桿菌（桿狀）一、乳酸菌乳酸菌是發(fā)酵糖類主要產物為乳酸的一類36分布：在自然界分布廣泛，空氣、土壤、植物體表、人或動物腸道內部都有繁殖：以二分裂方式進行繁殖（無性生殖）代謝類型：異養(yǎng)厭氧型C6H12O62C3H6O3+能量酶乳酸菌耐鹽，最適pH=5，為發(fā)酵中的先鋒隊分布：在自然界分布廣泛，空氣、土壤、植物體表、人或動物腸道內37為什么含有抗生素的牛奶不能發(fā)酵為酸奶？牛奶發(fā)酵為酸奶主要依靠乳酸菌的發(fā)酵作用，而抗生素能夠殺死或抑制乳酸菌。為什么含有抗生素的牛奶不能發(fā)酵為酸奶？牛奶發(fā)38二、亞硝酸鹽自然界中，亞硝酸鹽分布廣泛，蔬菜、咸菜、豆粉中均含有。亞硝酸鹽為白色粉末，外觀與食鹽相似，有咸味，易溶于水，可作食品添加劑。亞硝酸鹽為強氧化劑，能夠把血液中攜帶氧的低鐵血紅蛋白轉變?yōu)楦哞F血紅蛋白，從而導致缺氧性中毒癥狀。二、亞硝酸鹽自然界中，亞硝酸鹽分布廣泛，蔬菜、39膳食中的亞硝酸鹽一般不會危害人體健康，但是，當人體攝入的亞硝酸鹽總量達到0.3～0.5g時，會引起中毒，當攝入總量達到3g時，會引起死亡。膳食中的絕大部分亞硝酸鹽隨尿排出，只有在特定的條件下才會轉變成致癌物――亞硝胺，亞硝胺對動物還具有致畸和致突變作用（亞硝酸鹽本身不是致癌物質）。亞硝酸鹽在pH=3，溫度適宜和一定微生物的作用下轉變成致癌物質亞硝胺，因此，霉變的食品亞硝胺可增至數(shù)十倍至數(shù)百倍。膳食中的亞硝酸鹽一般不會危害人體健康，但是，當40我國衛(wèi)生標準規(guī)定：亞硝酸鹽的殘留量在肉制品中不得超過30mg/kg，

醬菜中不超過20mg/kg，而嬰兒奶粉中不得超過2mg/kg。我國衛(wèi)生標準規(guī)定：亞硝酸鹽的殘留量41三、泡菜的制作三、泡菜的制作42選泡菜壇預處理新鮮蔬菜配置鹽水裝壇發(fā)酵成品泡菜測定亞硝酸鹽含量選泡菜壇預處理新鮮蔬菜配置鹽水裝壇發(fā)酵成品泡菜測定亞硝酸鹽含43檢查方法：壇口向上，壓入水中，看壇內壁有無滲水現(xiàn)象。無裂紋、無砂眼壇沿深、蓋子吻合好火候好檢查方法：壇口向上，壓入水中，看壇內壁有無滲水現(xiàn)象。無裂紋、44蔬菜處理將鮮菜修整、洗滌、陽光下晾曬，到菜表皮萎焉時收下，切分成條狀或片狀。蔬菜處理將鮮菜修整、洗滌、陽光下晾曬，到菜表皮45配制鹽水清水與鹽按4:1的比例配制好后煮沸冷卻。鹽的作用：調味，抑制微生物生長，所以鹽含量過低會造成細菌污染。煮沸的目的：殺菌冷卻是為了不影響乳酸菌的生命活動。配制鹽水清水與鹽按4:1的比例配制好后煮沸冷卻。鹽的作用：調46裝壇發(fā)酵將泡菜壇洗凈，并用熱水洗壇內壁兩次。將經過處理的蔬菜混合均勻，裝入泡菜壇內，裝至半壇時放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，繼續(xù)裝至八成滿，再徐徐注入配好的鹽水，使鹽水沒過全部菜料，蓋好壇蓋。向壇蓋邊緣的水槽中注滿水。并注意發(fā)酵過程中補充水。壇沿注滿水是為了保證壇內乳酸菌的發(fā)酵所需的無氧環(huán)境。裝壇發(fā)酵將泡菜壇洗凈，并用熱水洗壇內壁兩次。壇沿注滿水是為了47腌制條件溫度不能過高食鹽含量不能過低腌制時間不能過短細菌污染大量繁殖后，亞硝酸鹽含量增加腌制過程中，亞硝酸鹽含量先增多，后減少。腌制條件溫度不能過高腌制過程中，亞硝酸鹽含量先增多，后減少。48泡菜發(fā)酵的階段泡菜在發(fā)酵期間，由于乳酸菌的發(fā)酵作用，發(fā)酵產物乳酸不斷累積，因此可以根據(jù)微生物的活動情況和乳酸積累量，將泡菜發(fā)酵過程分為三個階段。泡菜發(fā)酵的階段泡菜在發(fā)酵期間，由于乳酸菌的發(fā)酵作用，發(fā)酵產物49

蔬菜剛入壇時，蔬菜表面帶入的微生物，主要是以不抗酸的大腸桿菌和酵母菌等較為活躍，它們產生較多的乳酸、酒精、醋酸和二氧化碳等，二氧化碳以氣泡從水槽內放出，逐漸使壇內形成嫌氣狀態(tài)。

發(fā)酵產物中除乳酸外，還有其他，如乙醇、CO2等稱異型乳酸發(fā)酵發(fā)酵前期：特點：還有一點點氧氣，微生物（大腸桿菌，酵母菌）發(fā)酵，產生代謝產物，二氧化碳排出，形成無氧環(huán)境，為后面乳酸菌發(fā)酵提供條件，乳酸含量逐漸增加，抑制微生物生長繁殖。蔬菜剛入壇時，蔬菜表面帶入的微生物，主要是以不抗酸的50

由于前期乳酸的積累，pH下降，嫌氣狀態(tài)的形成，乳酸桿菌進行活躍的同型乳酸發(fā)酵，乳酸的積累量可達到0.6%～0.8%；乳酸積累pH達3.5~3.8.大腸桿菌、酵母菌、霉菌等的活動受到抑制。這一期為完全成熟階段，泡菜有酸味且清香品質最好。

發(fā)酵產物中只有乳酸，稱為同型乳酸發(fā)酵發(fā)酵中期：特點:乳酸菌逐漸占據(jù)優(yōu)勢，其他發(fā)酵微生物受到抑制，乳酸積累增多由于前期乳酸的積累，pH下降，嫌氣狀態(tài)的形成，乳酸桿51

在此期間繼續(xù)進行的是同型乳酸發(fā)酵，乳酸含量繼續(xù)增加，可達1.0%以上。當乳酸積累達1.2％以上時，乳酸桿菌的活性受到抑制，發(fā)酵速度逐漸變緩甚至停止。

發(fā)酵后期：此階段泡菜酸度過高、風味不協(xié)調。特點：乳酸含量過高，抑制乳酸菌活動，乳酸菌減少。在此期間繼續(xù)進行的是同型乳酸發(fā)酵，乳酸含量繼續(xù)521、為什么泡菜壇內有時會長一層白膜，這層白膜是怎么形成的？形成白膜是由于產膜酵母的繁殖。酵母菌是兼性厭氧微生物，泡菜發(fā)酵液營養(yǎng)豐富，其表面氧氣含量也很豐富，適合酵母菌的繁殖。1、為什么泡菜壇內有時會長一層白膜，這層白膜是怎么形成的？532、為什么日常生活中要多吃新鮮蔬菜，不吃存放時間過長、變質的蔬菜？有些蔬菜，如小白菜和蘿卜等含有豐富的硝酸鹽。當這些蔬菜放置過久時發(fā)生變質（發(fā)黃、腐爛）或者煮熟后存放太久時，蔬菜中的硝酸鹽會被微生物還原成亞硝酸鹽，危害人體健康。2、為什么日常生活中要多吃新鮮蔬菜，不吃存放時間過長、變質54四、亞硝酸鹽含量的測定四、亞硝酸鹽含量的測定551、測定亞硝酸鹽含量的原理比色法

在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應后，再與N-1－萘基乙二胺鹽酸鹽結合生成玫瑰紅溶液。

將經過反應顯色后的泡菜待測樣品與標準液比色，即可估算出樣品中的亞硝酸鹽含量。1、測定亞硝酸鹽含量的原理比色法在鹽酸酸化條件563、步驟（1）配置溶液（2）配制標準液（3）制備泡菜樣品處理液（4）比色3、步驟（1）配置溶液（2）配制標準液（3）制備泡菜樣品572、材料與器具泡菜、對氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽、鹽酸亞硝酸鈉、氯化鎘、氯化鋇、氫氧化鈉、氫氧化鋁、蒸餾水、榨汁機、移液管、容量瓶、比色管等2、材料與器具泡菜、58（1）配置溶液對氨基苯磺酸溶液(4mg/mL)溶于鹽酸，避光保存N-1－萘基乙二胺鹽酸鹽溶液(2mg/mL)

避光保存亞硝酸鈉溶液(5ug/mL)提取劑：氯化鎘、氯化鋇氫氧化鋁乳液氫氧化鈉溶液（1）配置溶液對氨基苯磺酸溶液(4mg/mL)溶于鹽酸，避光59（2）配制標準顯色液

用移液管吸取0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL亞硝酸鈉溶液(相當于1ug，2ug，3ug，4ug，5ug和7.5ug亞硝酸鈉)，分別置于50mL比色管中，再取1支比色管作為空白對照。并分別加入2.0mL對氨基苯磺酸溶液，混勻，靜置3～5分鐘后；再分別加入1.0mLN-1－萘基乙二胺鹽酸鹽溶液，加蒸餾水至50mL，混勻；觀察亞硝酸鈉溶液顏色的梯度變化（玫瑰紅色逐漸加深）。（2）配制標準顯色液60制備樣品樣品處理液的制備增加亞硝酸鹽的溶解度中和乳酸吸附雜質，脫色，凈化作用制備樣品樣品處理液的制備增加亞硝酸鹽的溶解度中和乳酸吸附雜質61比色樣品即濾液加入比色管顯色反應：先加對氨基苯磺酸，后加N-1－萘基乙二胺鹽酸鹽

比色：顯色后與標準顯色液對比，找出顏色最相近的記錄對應亞硝酸鹽含量比色樣品即濾液加入比色管顯色反應：先加對氨基苯磺酸，后加62測定反應原理總結酸化：對氨基苯磺酸溶于鹽酸中重氮化：亞硝酸鹽+對氨基苯磺酸重氮鹽

酸顯色：重氮鹽+N-1－萘基乙二胺鹽酸鹽

比色：樣品和標準比色液對比，估算亞硝酸鹽含量①②③玫瑰紅色測定反應原理總結酸化：對氨基苯磺酸溶于鹽酸中重氮化：亞硝酸鹽63基本知識實驗設計乳酸菌發(fā)酵定義分類分布亞硝酸鹽操作提示泡菜壇選擇腌制條件泡菜的制作及亞硝鹽檢測發(fā)酵原理乳酸桿菌乳酸鏈球菌葡萄糖乳酸國家標準危害泡菜制作亞硝酸鹽含量測定時間、溫度、食鹽用量、微生物測定亞硝酸鹽含量的操作結果分析與評價課堂小結基本知識實驗設計乳酸菌發(fā)酵定義分類分布亞硝酸鹽操作提示泡菜壇64果酒果醋腐乳泡菜微生物類型原理反應條件檢測方法酵母菌，真菌，兼性厭氧醋酸菌，細菌，好氧菌毛霉，真菌，好氧乳酸菌，細菌，厭氧菌酵母菌的無氧呼吸產生酒精18~25℃，無氧重鉻酸鉀與其反應呈灰綠色醋酸菌的有氧呼吸產生醋酸30~35℃，通入氧氣品嘗、pH試紙檢測毛霉產生蛋白酶和脂肪酶15～18℃接種，酒精含量控制在12％左右乳酸菌無氧呼吸產生乳酸常溫，無氧條件pH檢測，亞硝酸鹽的檢測方法果酒果醋腐乳泡菜微生物類型原理反應條件檢測方法酵母菌，真菌，65某學生把甘藍切絲后制作泡菜，為了探究甘藍在不同的溫度下經過3天發(fā)酵后所生成的乳酸量，在第4天檢測的實驗結果如表：

(1)分析資料，你可以得出什么結論?(2)在泡菜制作時，乳酸含量大致在0.8％左右時風味最好，此時維生素C的保存率也較高，結合以上材料，你在制作泡菜時應該注意什么?練習題某學生把甘藍切絲后制作泡菜，為了探究甘藍在不同的溫度66(1)分析資料，你可以得出什么結論?從表中數(shù)據(jù)分析可得知，甘藍在31℃時所生成的乳酸含量最多，低于或者高于這個溫度所生成的乳酸量都比較少一些。(1)分析資料，你可以得出什么結論?從表中數(shù)據(jù)67(2)在泡菜制作時，乳酸含量大致在0.8％左右時風味最好，此時維生素C的保存率也較高，結合以上材料，你在制作泡菜時應該注意什么?注意把溫度控制在16℃左右為宜(2)在泡菜制作時，乳酸含量大致在0.8％左右時風味最好，此682001年1月4日（封壇前）2001年1月8日2001年1月12日2001年1月15日2001年1月19日0.15

0.600.200.100.101號壇2號壇0.15

0.200.100.050.053號壇0.15

0.800.600.200.20泡菜腌制過程中亞硝酸鹽含量的變化2001年1月4日0.15

1號壇2號壇0.15

3號壇0.694、實驗結果分析和討論選錄三只泡菜壇中的亞硝酸鹽含量變化的絕對數(shù)量雖然不同，但整體的變化趨勢卻基本相同。在腌制后的第五天，三只泡菜壇中亞硝酸鹽的含量都達到最高峰（1、2、3號壇中的亞硝酸鹽分別達到0.6mg/kg、0.2mg/kg、0.8mg/kg）4、實驗結果分析和討論選錄三只泡菜壇中的亞硝酸鹽含量70在腌制后的前6天內，泡菜中的亞硝酸鹽含量就可以達到最高峰。而第9天后泡菜中的亞硝酸鹽含量開始有明顯下降。這可能是由于泡菜在開始腌制時，壇內環(huán)境有利于某些細菌的繁殖（包括一些硝酸鹽還原菌），這些細菌可以促進硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。但隨著腌制時間的延長，乳酸菌也大量繁殖，對硝酸鹽還原菌產生一定的抑制作用，使其生長繁殖受到影響，造成泡菜中亞硝酸鹽的含量又有所下降。在腌制后的前6天內，泡菜中的亞硝酸鹽含量就可以達71專題2微生物的培養(yǎng)與應用課題1微生物的實驗室培養(yǎng)專題2課題172㈠.微生物的類群微生物原核類:真核類非細胞類：細菌、支原體、放線菌、藍藻個體微小、結構簡單酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：顯微藻類、原生生物（如：草履蟲、變形蟲等）病毒、類病毒、朊病毒◆微生物的共同特點：一.微生物基礎知識㈠.微生物的類群微生物原核類:真核類非細胞類：細菌、支原體、731.細菌的形態(tài)1.細菌的形態(tài)74細菌主要是以二分裂的方式進行增殖（如右圖）2.細菌的繁殖3.細菌的菌落⑴.定義：單個或者少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，會形成一個肉眼可見的、具有一定形態(tài)結構的子細胞群體，叫做菌落。⑵.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等。⑶.功能：每種細菌在一定條件下所形成的菌落，可以作為菌種鑒定的重要依據(jù)。細菌主要是以二分裂的方式進行增殖（如右圖）2.細菌的繁殖3.75幾種菌落及其形態(tài)幾種菌落及其形態(tài)76幾種菌落及其形態(tài)幾種菌落及其形態(tài)774.病毒的結構:由核酸和蛋白質構成。4.病毒的結構:由核酸和蛋白質構成。78病毒的結構病毒的結構79吸附注入合成釋放組裝5.病毒的繁殖病毒的增殖一般可分五個階段，即：吸附→注入核酸→合成核酸和蛋白質→組裝→釋放6.病毒的營養(yǎng)方式：寄生吸附注入合成釋放組裝5.病毒的繁殖病毒的增殖一般可分五個階段80微生物需要的五大類營養(yǎng)要素物質是：㈡.微生物需要的營養(yǎng)物質及功能1.碳源2.氮源3.生長因子4.無機鹽5.水：凡是能為微生物提供所需碳元素的營養(yǎng)物質。①無機碳源：CO2；NaHCO3等②有機碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等①構成細胞物質和一些代謝產物②異養(yǎng)微生物的能源⑴.概念⑵.來源：⑶.作用：1.微生物的碳源微生物需要的五大類營養(yǎng)要素物質是：㈡.微生物需要的營養(yǎng)物質及81①無機氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有機氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能夠為微生物提供N元素的營養(yǎng)物質。主要用于合成蛋白質、核酸及含N的代謝產物。2.微生物的氮源⑴.概念：⑵.來源：⑶.作用：3.生長因子⑶.常見的生長因子：⑴.概念：⑵.作用：微生物生長不可缺少的微量有機物。酶和核酸的組成成分。維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。①無機氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有機氮源：82㈢.培養(yǎng)基培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的營養(yǎng)基質。1.培養(yǎng)基的類型和用途2.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方(參考教材附錄內容)3.不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽、等營養(yǎng)物質，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質,例如:生長因子(即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。㈢.培養(yǎng)基培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，83劃分標準培養(yǎng)基種類特點用途物理性質化學成分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基用途鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基的種類不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產觀察微生物的運動、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計數(shù)、保藏菌種含化學成分不明確的天然物質工業(yè)生產培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學物質,以抑制不需要的微生物的生長,促進所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基劃分標準培養(yǎng)基種類特點用途物理性質化學成分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)84液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長back半固體培養(yǎng)基：(是否運動)

無動力有動力(彌散)固體培養(yǎng)基：菌落液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長back半固體培養(yǎng)基85分離導入了目的基因的受體細胞幾種選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基分離酵母菌、霉菌等真菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基back分離導入了目的基因的受體細胞幾種選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基86血清中含有：①多種蛋白質（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）②多種金屬離子；③激素；④促貼附物質，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。⑤各種生長因子⑥轉移蛋白⑦不明成分人工合成培養(yǎng)基只能維持細胞生存，要想使細胞生長和繁殖，還需補充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。血清中含有：人工合成培養(yǎng)基只能維持細胞生存，要想使細胞生長和87㈣.無菌技術1.無菌技術的概念無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。⑴消毒定義：利用化學或物理方法，殺死部份微生物的過程。2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別⑵滅菌的定義：以化學試劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達到完全無菌之過程。滅菌與消毒技術是微生物有關工作中最普通也是最重要的技術。㈣.無菌技術1.無菌技術的概念無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操88①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。③化學藥劑消毒法：用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒；氯氣消毒水源。④紫外線消毒。⑴.消毒的方法：3.常用的消毒與滅菌的方法①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。⑴.消毒的方法：3.89①灼燒滅菌②干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。③高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.⑵.滅菌的方法：①灼燒滅菌⑵.滅菌的方法：90最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過。而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設計的。最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以殺滅所有的生物91二.實驗操作(以培養(yǎng)大腸桿菌為例)㈠.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1.計算2.稱量3.溶化4.滅菌:將錐形瓶放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。5.倒平板:待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種。二.實驗操作(以培養(yǎng)大腸桿菌為例)㈠.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基92倒平板操作倒平板操作93㈡.純化大腸桿菌平板劃線法和稀釋涂布平板法。微生物的接種的常用接種方法有：1.平板劃線的操作方法平板劃線的操作㈡.純化大腸桿菌平板劃線法和稀釋涂布平板法。微生物的接種的常94人教版高中生物選修1全套ppt課件（正版）95一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個細胞無法形成規(guī)則的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；96人教版高中生物選修1全套ppt課件（正版）972.稀釋涂布平板的操作方法2.稀釋涂布平板的操作方法98人教版高中生物選修1全套ppt課件（正版）99人教版高中生物選修1全套ppt課件（正版）1004.菌種的保存接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保存。3.微生物的恒溫培養(yǎng)⑵.長期保存：甘油冷凍管藏法⑴.臨時保藏：4.菌種的保存接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保101三.結果分析與評價㈠.培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。㈡.接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達到要求，需要分析原因，再次練習。㈢.是否進行了及時細致的觀察與記錄培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀察記錄的同學會發(fā)現(xiàn)這一點，并能觀察到其他一些細微的變化。三.結果分析與評價㈠.培養(yǎng)基的制作是否合格102營養(yǎng)類型能源氫的供體基本碳源微生物舉例代謝類型光能無機營養(yǎng)(光能自養(yǎng)型)光能有機營養(yǎng)(光能異養(yǎng)型)化能無機營養(yǎng)(化能自養(yǎng)型)化能有機營養(yǎng)(化能異養(yǎng)型)光光無機物有機物無機物有機物無機物有機物二氧化碳二氧化碳及簡單有機物二氧化碳有機物大多數(shù)已知細菌和全部真核微生物硝化細菌氫細菌紫色非硫細菌藍細菌綠色硫細菌藻類營養(yǎng)類型能源氫的供體基本碳源微生物舉例代謝類型光能無機營養(yǎng)(103本課題知識小結:本課題知識小結:104課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)課題2105一、課題背景1、尿素的利用尿素是一種重要的農業(yè)氮肥。尿素不能直接被農作物吸收。土壤中的細菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細菌能利用尿素的原因土壤中的細菌分解尿素是因為它們能合成脲酶CO(NH2)2脲酶+H2O+CO22NH3一、課題背景1、尿素的利用尿素是一種重要的農業(yè)氮肥。尿素不能1063、常見的分解尿素的微生物芽孢桿菌、小球菌、假單胞桿菌、克氏桿菌、棒狀桿菌、梭狀芽孢桿菌，某些真菌和放線菌也能分解尿素。4、課題目的①從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌②統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌一.研究思路㈠.篩選菌株㈡.統(tǒng)計菌落數(shù)目㈢.設置對照3、常見的分解尿素的微生物芽孢桿菌、小球菌、假單胞桿菌、克氏1071、實例：PCR技術啟示：尋找目的菌種時要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應的環(huán)境中去尋找。原因：因為熱泉溫度70～800C，淘汰了絕大多數(shù)微生物只有Taq細菌被篩選出來。DNA多聚酶鏈式反應是一種在體外將少量DNA大量復制(PCR)的技術，此項技術要求使用耐高溫（930C）的DNA聚合酶。㈠.篩選菌株1、實例：PCR技術啟示：尋找目的菌種時要根據(jù)它對生存環(huán)108要分離一種微生物，必須根據(jù)該微生物的特點，包括營養(yǎng)、生理、生長條件等；方法：⑴抑制大多數(shù)微生物的生長⑵促進目的菌株的生長結果：培養(yǎng)一定時間后，該菌數(shù)量上升，再通過平板稀釋等方法對它進行純化培養(yǎng)分離。2、實驗室中微生物的篩選原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時抑制或阻止其他微生物生長。要分離一種微生物，必須根據(jù)該微生物的特點，包括營養(yǎng)、生10915.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)所需培養(yǎng)基：①從物理性質看此培養(yǎng)基屬于哪類？固體培養(yǎng)基15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4110②在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖氮源：尿素培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。5、培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理②在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖111允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，叫做選擇培養(yǎng)基尿素尿素允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的1126、怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

是分離尿素細菌判斷該培養(yǎng)基有無選擇性實驗組對照組培養(yǎng)基類型是否接種

目的

結果只生長尿素細菌生長多種微生物是6、怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？以尿素為牛肉膏

是分離判斷1131、顯微鏡直接計數(shù)：利用血球計數(shù)板(血細胞計數(shù)板），在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。㈡.統(tǒng)計菌落數(shù)目：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對運動細菌的計數(shù)；需要相對高的細菌濃度；個體小的細菌在顯微鏡下難以觀察；缺點：1、顯微鏡直接計數(shù)：利用血球計數(shù)板(血細胞計數(shù)板），在顯微鏡1142.間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）⑴原理：在稀釋度足夠高時，微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個菌落是由一個單細胞繁殖而成的，即一個菌落代表原先的一個單細胞。⑵常用方法：稀釋涂布平板法。每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。2.間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×115？說明設置重復組的重要性。在設計實驗時，一定要涂布至少3個平板，作為重復組，才能增強實驗的說服力與準確性。在分析實驗結果時，一定要考慮所設置的重復組的結果是否一致，結果不一致，意味著操作有誤，需要重新實驗。？說明設置重復組的重要性。在設計實驗時，一定要涂布至少3個平116注意事項①為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在30——300的平板上進行計數(shù)。②為使結果接近真實值可將同一稀釋度加到三個或三個以上的平板中，經涂布，培養(yǎng)計算出菌落平均數(shù)。③統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低。注意事項117計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（C÷V）×M某同學在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均數(shù)為234，那么每克樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1ml）()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4B計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（C÷V）×M某同學在稀釋倍118（三）設置對照判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：將未接種的培養(yǎng)基同時進行培養(yǎng)。判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用：完全培養(yǎng)基（營養(yǎng)成分齊全）接種后培養(yǎng)觀察菌落數(shù)目。主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度。（三）設置對照判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：判斷選擇培養(yǎng)基是否119實例：在做分解尿素的細菌的篩選與統(tǒng)計菌落數(shù)目的實驗時，A同學從對應的106倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約150個菌落，但是其他同學在同樣的稀釋度下只選擇出大約50個菌落。分析其原因。原因：⑴土樣不同⑵培養(yǎng)基污染或操作失誤(或者是混入了其他的含氮物質)實例：在做分解尿素的細菌的篩選與統(tǒng)計菌落數(shù)目的實驗時，A同學120小結：通過這個事例可以看出，實驗結果要有說服力，對照的設置是必不可少的。方案一：由其他同學用與A同學相同土樣進行實驗方案二：將A同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。結果預測：如果結果與A同學一致，則證明A無誤；如果結果不同，則證明A同學存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。小結：通過這個事例可以看出，實驗結果要有說服力，對照的設置是121實驗設計從肥沃、酸堿度接近中性的濕潤土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中?！拔⑸锏奶烊慌囵B(yǎng)基”[一]土壤取樣數(shù)量最大、種類最多大約70%—90%是細菌◆取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。實驗設計從肥沃、酸堿度接近中性的濕潤土壤中取樣。先鏟去表層土122[二]制備培養(yǎng)基

由于初次實驗，對于稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一個較為寬泛的范圍：稀釋倍數(shù)為103～107。

準備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基。每個稀釋度下需要3個選擇培養(yǎng)基，1個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。還需要8個滅菌試管和1個滅菌移液管。

將稀釋相同倍數(shù)的菌液，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為對照，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用。[二]制備培養(yǎng)基123◆應在火焰旁稱取土壤10g。◆在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁進行◆分離不同的微生物采用不同的稀釋度原因：不同微生物在土壤中含量不同目的：保證獲得菌落數(shù)在30～300之間、適于計數(shù)的平板（三） 樣品的稀釋◆應在火焰旁稱取土壤10g?！舴蛛x不同的微生物采用不同的稀釋124問題：為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？原因：土壤中各類微生物的數(shù)量（單位：株/kg）是不同的。例如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細菌數(shù)約為2185萬，放線菌數(shù)約為477萬，霉菌數(shù)約為23.1萬。結論：為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進行分離，同時還應當有針對性地提供選擇培養(yǎng)的條件。問題：為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細125㈣.取樣涂布◆實驗時要對培養(yǎng)皿作好標記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時間、稀釋度、培養(yǎng)物等?！羧绻玫搅?個或2個以上菌落數(shù)目在30——300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個重復的菌落數(shù)相差較大，表明試驗不精確，需要重新實驗。㈣.取樣涂布◆實驗時要對培養(yǎng)皿作好標記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)126㈤.微生物的培養(yǎng)與觀察在菌落計數(shù)時，每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結果，以防止因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數(shù)目。培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細菌：30～37℃培養(yǎng)1～2d放線菌：25～28℃培養(yǎng)5～7d霉菌：25～28℃的溫度下培養(yǎng)3～4d。㈤.微生物的培養(yǎng)與觀察在菌落計數(shù)時，每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)127微生物的培養(yǎng)與觀察微生物的培養(yǎng)與觀察128操作提示[一]無菌操作1、取土用的小鐵鏟的盛土樣的信封在使用前都需要滅菌。2、應在火焰旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶中，塞好棉塞。3、在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁操作。[二]做好標記注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期、平板培養(yǎng)樣品的稀釋度等。[三]規(guī)劃時間三、操作提示[一]無菌操作三、129四.結果分析與評價1.通過對照實驗，若培養(yǎng)物有雜菌污染，菌落數(shù)偏高；若培養(yǎng)物混入其他氮源，則菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高，難以選擇出分解尿素的微生物。2.提示：選擇每個平板上長有30—300個菌落的稀釋倍計算每克樣品的菌數(shù)最合適。同一稀釋倍數(shù)的三個重復的菌落數(shù)不能相差懸殊，如相差較大，表示實驗不精確。四.結果分析與評價1301.在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細菌后，如果PH升高，指示劑將變紅，說明該細菌能夠分解尿素。2.測定飲水中大腸桿菌數(shù)量的方法是將一定體積的水用細菌過濾器過濾后，將濾膜放到伊紅-美藍培養(yǎng)基上培養(yǎng)，大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色，通過記算得出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。五.課外延伸1.在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細菌131CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3脲酶pH升高指示劑（酚紅）將變紅CO（NH2）2+H2O 132大腸桿菌呈深紫色,中心有或無金屬光澤大腸桿菌在伊紅美藍瓊脂(EMB)上典型特征

大腸桿菌呈深紫色,中心有或無金屬光澤大腸桿菌在伊紅美藍瓊脂(133本課題知識小結:本課題知識小結:134纖維素：棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產物；纖維素是地球上含量最豐富的多糖類物質，植物每年產生的纖維素超過70億噸；分布植物的根、莖、葉中；纖維素：纖維素是地球上含量最豐富的多糖類物質，植物每年產生的1351、在草食性動物等的消化道內，也共生有分解纖維素的微生物，其原理也是產生纖維素酶而分解纖維素，而人沒有分解纖維素的能力。2、農作物秸稈：米秸、麥秸、稻草、草、木屑等富含大量的纖維素，被利用的機會很少、效率低；

纖維素生物燃料：

最有希望替代石油能源

科學家正致力于研究，怎樣將農業(yè)廢棄物、木材及生長更為迅速的草本植物，轉化為種類繁多的生物燃料（甚至是航空燃油）。1、在草食性動物等的消化道內，也共生有分解纖維素的微生物，其136課題3分解纖維素的微生物的分離課題3分解纖維素的微生物的分離137一、基礎知識1.纖維素

纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是含量最豐富的多糖類物質。一、基礎知識1.纖維素纖維素是一種由葡萄糖首尾相138土壤中某些微生物能夠產生纖維素酶,把纖維素分解為葡萄糖，后再利用。土壤中某些微生物能夠產生纖維素酶,把纖維素分解為葡萄1392.纖維素酶

纖維素酶是一種復合酶，一般認為它至少包括三種組分，即C1酶(外切酶)、CX酶(內切酶)和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纖維素一、基礎知識2.纖維素酶纖維二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纖維素一、140在2支20mL的試管中，分別放入1×6cm的濾紙條，再分別加入pH為4.8、物質的量濃度為0.1mol/L的醋酸-醋酸鈉緩沖液10mL、11mL。在加入10mL緩沖液的試管中加入1mL纖維素酶（70~80U/mL）。將二支試管固定在50mL的錐形瓶中，在搖床上以140r/min的轉速振蕩反應1h，觀察結果。1U表示1個酶活力單位，是指在溫度為25℃，其他反應條件，如pH等，均為最適的情況下，在1min內轉化1mmol的底物所需的酶量。底物：酶所作用和催化的化合物。

在2支20mL的試管中，分別放入1×6cm的141在一支試管中添加纖維素酶，另一支試管不添加纖維素酶；〖思考1〗實驗分析：P27的小實驗是如何構成對照的？濾紙崩潰法在一支試管中添加纖維素酶，〖思考1〗實驗分析：P27的小實驗142（2）纖維素分解菌的篩選1、篩選纖維素分解菌的方法______________。該方法可以通過________反應直接篩選。剛果紅染色法顏色2、其原理是：剛果紅可以與纖維素形成____________，當纖維素被_________分解后，紅色復合物無法形成，出現(xiàn)以_____________為中心的________，可以通過___________________________來篩選纖維素分解菌。紅色復合物纖維素酶纖維素分解菌

透明圈是否產生透明圈（2）纖維素分解菌的篩選1、篩選纖維素分解菌的方法_____143可根據(jù)是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌可根據(jù)是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌144練一練：1.下列關于纖維素酶的說法，錯誤的是A.纖維素酶是一種復合酶，至少包括三種B.纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖C.纖維素酶可用于去掉植物的細胞壁D.葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖練一練：1.下列關于纖維素酶的說法，錯誤的是A.纖維素酶是1452.利用剛果紅法可以篩選出纖維素分解菌，下列說法錯誤的是A.剛果紅能與纖維素形成紅色復合物B.剛果紅能與纖維二糖形成紅色復合物C.剛果紅不能與葡萄糖形成紅色復合物D.若培養(yǎng)基上產生了透明圈，則說明已篩

選出了纖維素分解菌2.利用剛果紅法可以篩選出纖維素分解菌，下列說法錯誤的是A.146(三)、實驗設計土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別培養(yǎng)基挑選菌落什么樣的環(huán)境取樣?①培養(yǎng)的目的?②選擇培養(yǎng)基的特點?挑選什么樣的菌落?①鑒別培養(yǎng)基的特點?②如何鑒別?根據(jù)：微生物對生存環(huán)境的要求，到相應環(huán)境中去找；目的：增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物；剛果紅染色法(三)、實驗設計土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別培養(yǎng)1471、纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基屬于______（固體、液體）培養(yǎng)基，原因是__________【資料二】選擇培養(yǎng)閱讀資料二“選擇培養(yǎng)基”，回答以下幾問題：液體沒有添加瓊脂2、該培養(yǎng)基對微生物_____（具有，不具有）選擇作用。如果具有，其選擇機制是____________________________________________________________________________具有以纖維素粉為唯一碳源，能分解纖維素的微生物可以大量繁殖；1、纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基屬于______（固體、液體）培養(yǎng)148若設置一個對照實驗說明選擇培養(yǎng)的作用，應控制的變量是將__________改為_________。3、你能否設計一個對照實驗，說明選擇培養(yǎng)基的作用？葡萄糖纖維素粉若設置一個對照實驗說明選擇培養(yǎng)的作用，應控制的變量是將___149【資料三】剛果紅染色法方法一：先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進行顏色反應方法二：在倒平板時就加入剛果紅【資料三】剛果紅染色法方法一：先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進行150培養(yǎng)基組成提供的主要營養(yǎng)物質CMC-Na5~10g碳源酵母膏1g碳源、氮源、生長因子KH2PO40.25g無機鹽土豆汁100mL碳源、生長因子瓊脂15g凝固劑上述物質溶解后，加蒸餾水定容至1000mL氫元素、氧元素鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基(水溶性羧甲基纖維素鈉)培養(yǎng)基組成提供的主要營養(yǎng)物質CMC-Na5~1151染色法優(yōu)點缺點方法一

方法二

顏色反應基本上是纖維素分解菌的作用操作繁瑣，剛果紅會使菌落之間發(fā)生混雜操作簡便，不存在菌落混雜問題產生淀粉酶的微生物也產生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明顯的透明圈。思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點與不足染色法優(yōu)點缺點方法一方法二顏色反應基本上152挑選產生透明圈的菌落挑取產生明顯的透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落。接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上，在300C－370C培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)。挑選產生透明圈的菌落挑取產生明顯的透明圈的菌落，一般153四、結果分析與評價

1.培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落

對照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長則說明培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到產生透明圈的菌落，則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。

四、結果分析與評價1.培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是154分解纖維素的微生物的分離纖維素酶種類、作用、催化剛果紅染色篩選原理實驗設計土壤取樣選擇培養(yǎng)涂布培養(yǎng)純化培養(yǎng)前置染色法后置染色法富含纖維素土壤增大分解菌含量染色鑒別分離出分解菌課堂總結分解纖維素的微生物的分離纖維素酶種類、作用、催化剛果紅染色篩155專題3植物組織培養(yǎng)技術專題3植物組織培養(yǎng)技術156一、課題目標說明植物組織培養(yǎng)的基本原理，學習植物組織培養(yǎng)的基本技術，進行菊花或其他植物的組織培養(yǎng)。二、課題重點與難點課題重點：植物組織培養(yǎng)過程中使用的無菌技術。課題難點：植物組織培養(yǎng)過程中使用的無菌技術。教法：談話法、多媒體輔助教學課時安排：2課時教學時間：3月1—2日一、課題目標157一、基礎知識課題1：菊花的組織培養(yǎng)（1）細胞的分化①概念：在個體發(fā)育中，由一個或一種細胞增殖產生的后代，在形態(tài)、結構、生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程②過程：1、植物的組織培養(yǎng)的基本過程一、基礎知識課題1：菊花的組織培養(yǎng)（1）細胞的分化①概念：在158③特點：（2）穩(wěn)定性：（1）持久性：一般來說，分化了的細胞將一直保持分化后的狀態(tài)，直到死亡（3）普遍性：③特點：（2）穩(wěn)定性：（1）持久性：一般來說，分化了的細胞將159⑤原因：基因在特定的時間和空間條件下的選擇性表達的結果④結果：形成不同的細胞和組織（2）細胞的全能性①定義：已經分化的細胞，仍然具有發(fā)育成完整個體的潛能②原理：生物體的每一個細胞都包含有該物種所特有的全套遺傳物質，都有發(fā)育成為完整個體所必需的全部基因⑤原因：基因在特定的時間和空間條件下的選擇性表達的結果④結果160高度特化的動物細胞，從整個細胞來說，全能性受到限制。但它的細胞核仍然保持著全能性，這是因為細胞核內含有該物種遺傳性所需要的遺傳物質已分化的植物細胞，仍具有全能性③實例受精卵>生殖細胞>體細胞④全能性的比較:高度特化的動物細胞，從整個細胞來說，全能性受到限制。但它的細161（3）植物組織培養(yǎng)細胞離體①必要條件：一定的營養(yǎng)物質、激素和其他外界條件②原理:細胞的全能性外植體：離體的器官、組織、細胞③相關概念:（3）植物組織培養(yǎng)細胞離體①必要條件：一定的營養(yǎng)物質、激素和162脫分化：再分化：細胞排列疏松而無規(guī)則,是高度液泡化的、成無定形狀態(tài)的薄壁細胞由高度分化的植物組織或細胞產生愈傷組織的過程。也叫去分化脫分化產生的愈傷組織繼續(xù)進行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官的過程愈傷組織:脫分化：再分化：細胞排列疏松而無規(guī)則,是高度液泡化的、成無定163人參的愈傷組織人參的愈傷組織164菠蘿的愈傷組織菠蘿的愈傷組織165人教版高中生物選修1全套ppt課件（正版）166人教版高中生物選修1全套ppt課件（正版）1672、影響植物組織培養(yǎng)的因素（1）植物材料的選擇煙草和胡蘿卜的組織培養(yǎng)較為容易枸杞愈傷組織的芽誘導比較難B、同一植物材料的年齡、保存時間的長短會影響實驗結果菊花的組織培養(yǎng)一般選擇未開花植株的莖上部新萌生的側枝A、植物材料的選擇直接關系到實驗的成敗2、影響植物組織培養(yǎng)的因素（1）植物材料的選擇煙草和胡蘿卜的168（2）不同的離體組織和細胞對營養(yǎng)、環(huán)境等條件的要求相對特殊，需配置適宜的培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基主要成分包括：A、大量元素:N、P、S、K、Ca、Mg等B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等C、有機物、植物激素（2）不同的離體組織和細胞對營養(yǎng)、環(huán)境等條件的要求相對特殊，169①常用的植物激素：生長素、細胞分裂素和赤霉素生長素類：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）細胞分裂素類：激動素（KT）、6－芐基嘌呤（6－BA）、玉米素（ZT）赤霉素類：赤霉酸（GA3）（3）植物激素的影響①常用的植物激素：生長素、細胞分裂素和赤霉素生長素類：2，4170②生長素和細胞分裂素作用植物中生長素和細胞分裂素是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關鍵性激素。在生長素存在的情況下，細胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強的趨勢使用順序實驗結果先使用生長素，后使用細胞分裂素有利于細胞分裂，但不利分化先使用細胞分裂素后使用生長素細胞既分裂也分化同時使用分化頻率高②生長素和細胞分裂素作用植物中生長素和細胞分裂素是啟動細胞分171生長素細胞分裂素：>有利于根的分化生長素細胞分裂素：<有利于芽的分化，抑制根的分化生長素細胞分裂素：＝促進愈傷組織生長③生長素和細胞分裂素同時使用，用量的比例對植物細胞發(fā)育方向的影響（4）pH、溫度、光照pH控制在5.8左右，溫度控制在18－22。C,每日用日光燈照射12h生長素細胞分裂素：>有利于根的分化生長素細胞分裂素：<有利于1723、植物組織培養(yǎng)過程:離體組織或細胞植物體脫分化細胞分裂素≈生長素愈傷組織芽根細胞分裂素>生長素細胞分裂素<生長素再分化植物細胞培養(yǎng)不需要光需要光3、植物組織培養(yǎng)過程:離體組織或細胞植物體脫分化細胞分裂素≈1731、培育無病毒植株2、培養(yǎng)紫草愈傷組織,提取紫草素（治療燙傷和割傷的藥物以及染料和化妝品的原料）4、基因工程中亦需用到植物組織培養(yǎng)的方法4、植物組織培養(yǎng)的應用：3、誘導離體的植物組織形成具有生根發(fā)芽能力的胚狀結構，包裹上人造種皮，制成人工種子，可以解決有些作物品種繁殖能力差，結子困難或發(fā)芽率低等問題1、培育無病毒植株2、培養(yǎng)紫草愈傷組織,提取紫草素（治療燙174二、實驗操作（一）制備MS固體培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基包括20多種營養(yǎng)成分，實驗室一般使用4。C保存配制好的培養(yǎng)基母液來制備1、配置各種母液二、實驗操作（一）制備MS固體培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基包括20多種營175①無機物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存②激素類、維生素類以及用量較小的有機物一般可按1mg/ml的質量濃度單獨配制成母液③用母液配制培養(yǎng)基時，需要根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計算用量①無機物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存1762、配置培養(yǎng)基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml①配制培養(yǎng)液②調PH③培養(yǎng)基的分裝由于菊花的莖段的組織培養(yǎng)比較容易，因此不必添加植物激素2、配置培養(yǎng)基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml①1773、滅菌分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進行高壓蒸汽滅菌1、選材：菊花莖段，取生長旺盛的嫩枝（二）外植體消毒2、消毒①流水沖洗菊花莖段用流水沖洗后可少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右3、滅菌分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進行高壓蒸汽滅菌1、選178②酒精處理用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分數(shù)為70％的酒精中搖動2－3次，持續(xù)6－7s，立即將外植體取出，在無菌水中清洗③消毒液處理取出后用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入質量分數(shù)為0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在無菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液②酒精處理用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分數(shù)為179（三）接種污染的主要來源是空氣中的細菌和孢子，接種室消毒是至關重要的。用70％的酒精噴霧使空氣消毒，酒精或新潔爾滅搽洗工作臺并用紫外線照射20分鐘1、接種室消毒2、無菌操作要求操作要在酒精燈火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼燒滅菌，接種后立即蓋好瓶蓋。3、材料的切取和接種（三）接種污染的主要來源是空氣中的細菌和孢子，接種室消毒是至1804、接種注意事項①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分數(shù)為70％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精燈火焰上燒一遍，冷卻后再接種②外植體在培養(yǎng)基中要分布均勻，放置外植體數(shù)量根據(jù)錐形瓶的大小確定，一般胡蘿卜3－4塊，菊的莖或葉6－8塊，也不要太少，以充分利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分和光照條件③插入時應注意方向，不要倒插。莖段、莖尖基部插入培養(yǎng)基利于吸收水分和養(yǎng)分4、接種注意事項①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分數(shù)為7181思考：你打算做幾組重復？你打算設置對照實驗嗎？答：每種材料或配方至少要做一組以上的重復。設置對照實驗可以取用一個經過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說明培養(yǎng)基制作合格，沒有被雜菌污染。思考：你打算做幾組重復？你打算設置對照實驗嗎？答：每種材料或182（四）培養(yǎng)接種后的錐形瓶最好放在無菌箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)期間應定期消毒。培養(yǎng)溫度18~22℃，每日用日光燈光照12h（四）培養(yǎng)接種后的錐形瓶最好放在無菌箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)期間應定期183（五）移栽移栽生根的菊花試管苗之前，應先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓試管苗在培養(yǎng)間生長幾日1、打開封口膜2、清洗轉移用流水清洗根部的培養(yǎng)基，將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境下生活一段時間（五）移栽移栽生根的菊花試管苗之前，應先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，184（六）栽培3、移栽珍珠巖：固體基質型，含水量高、蓄水性強、透性好，適合栽培幼苗長壯后，移栽到土壤中幼苗移栽后，每天觀察并記錄幼苗的生長情況，適時澆水、施肥，直至開花（六）栽培3、移栽珍珠巖：固體基質型，含水量高、蓄水性強、透185人教版高中生物選修1全套ppt課件（正版）186植物的花藥培養(yǎng)在育種上有什么意義？花粉粒（1N）單倍體植株（1N）二倍體純合子植株（2N）縮短了育種周期，為新品種的培育開辟了新途徑。植物的花藥培養(yǎng)在育種上有什么意義？花粉粒（1187花的結構花的結構188花絲花藥：囊狀結構，內有很多花粉

花粉是由花粉母細胞（即小孢子母細胞）經過減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細胞?；ǚ鄣陌l(fā)育要經歷：四分體時期、單核期、雙核期等階段。（一）被子植物的花粉發(fā)育雄蕊基礎知識花絲花藥：囊狀結構，內有很多花粉花粉是由花粉母189（一）被子植物的花粉發(fā)育（一）被子植物的花粉發(fā)育1901花粉母細胞（2n）4個小孢子(小孢子四分體)（n）減分有分1個花粉管細胞核（n）1個生殖細胞核（n）有分2個精子單核居中期（n）單核靠邊期（n）花粉發(fā)育過程：1花粉母細胞（2n）4個小孢子(小孢子減分有分1個花粉管細胞191注意：①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細胞核和生殖細胞核。（精子在花粉管中形成）②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細胞進行一次有絲分裂，形成兩個精子，這樣的花粉在成熟時，含有一個營養(yǎng)核和兩個精子。③兩個精子和一個營養(yǎng)核的基因型相同。注意：①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細胞核和生殖細192（二）產生花粉植株的兩種途徑形成原因：主要取決于培養(yǎng)基中的激素的種類及其濃度的配比（二）產生花粉植株的兩種途徑形成原因：主要取決于培養(yǎng)基中的激193體細胞胚（胚狀體）：在組織培養(yǎng)過程中，某些體細胞在形態(tài)上轉變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結構，發(fā)育過程亦與合子胚類似，被稱為體細胞胚（胚狀體）。體細胞胚（胚狀體）：194（三）影響花藥培養(yǎng)的因素1、材料的選擇不同植物同一植物的不同生理狀況（花期早期－初花期）合適的花粉發(fā)育期（單核居中期與靠邊期之間）此外，植株生長條件、材料低溫預處理、接種密度等2、培養(yǎng)基的組成（三）影響花藥培養(yǎng)的因素195實驗操作材料選取材料和消毒接種和培養(yǎng)實驗操作材料選取材料和接種和196（一）材料選取通過鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。最常用的方法：