生物選修1一專題復(fù)習(xí)課件

選修1——生物技術(shù)實(shí)踐

專題一傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)選修1——生物技術(shù)實(shí)踐專題一傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)1課題1果酒和果醋制作

復(fù)習(xí)目標(biāo)：

說明果酒和果醋制作的原理設(shè)計(jì)制作果酒和果醋的裝置完成果酒和果醋的制作課題1果酒和果醋制作復(fù)習(xí)目標(biāo)：2一、基礎(chǔ)知識(shí)（一）、果酒制作1、發(fā)酵菌種：

（1）分類地位：?jiǎn)渭?xì)胞

生物（真菌）（2）代謝類型：

.

（3）發(fā)酵條件：

①溫度：是酵母菌

和

的重要條件。酵母菌生長(zhǎng)繁殖的最適溫度為

左右，酒精發(fā)酵時(shí)將溫度嚴(yán)格控制在

。②氧氣：前期需O2，后期

。（理由是

）③PH：呈

。（5.0～6.0）真核異養(yǎng)兼性厭氧型生長(zhǎng)發(fā)酵20℃18℃～25℃不需O2酸性先有氧呼吸大量繁殖，后無氧條件酒精發(fā)酵一、基礎(chǔ)知識(shí)（一）、果酒制作真核異養(yǎng)兼性厭氧型生長(zhǎng)發(fā)酵3在

、

的發(fā)酵液中，酵母菌能大量生長(zhǎng)繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都因無法適應(yīng)這一環(huán)境而受到抑制。故在利用酵母菌自制葡萄酒的過程中，不需要進(jìn)行滅菌。2、制作原理：（用反應(yīng)式表示）（1）

；（2）

.缺氧呈酸性C6H12O6

＋6O26CO2

＋6H2OC6H12O62C2H5OH＋2CO2

在、的發(fā)酵液中，酵母菌能大量4例：有釀制葡萄酒的兩個(gè)簡(jiǎn)易裝置，請(qǐng)分析回答（1）果酒的制作離不開酵母菌，酵母菌在有氧無氧條件下都能生存，所以，它屬于________微生物。（2）在葡萄酒的自然發(fā)酵過程中，酵母菌的來源是

。（3）制作果酒，需將溫度嚴(yán)格控制在_____℃。制作果酒后制果醋，應(yīng)將溫度控制在_______。（4）葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時(shí)，要留有大約1/3的空間，這是因?yàn)開________。既為酵母菌大量繁殖提供適量的氧氣，又防止發(fā)酵旺盛時(shí)汁液溢出兼性厭氧型附著在葡萄皮上的野生型酵母菌

18－2530—35℃例：有釀制葡萄酒的兩個(gè)簡(jiǎn)易裝置，請(qǐng)分析回答（1）果酒的制作離5（5）甲裝置中，A液體是_____，NaHCO3溶液的作用是

；葡萄汁若用乙裝置，在發(fā)酵過程中，必須進(jìn)行的操作是

。與乙裝置相比，甲裝置的優(yōu)點(diǎn)是

。（6）果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可用

來檢驗(yàn)。在酸性條件下，該試劑與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)

。在果酒釀造過程中，如果果汁滅菌不嚴(yán)格，含有醋酸桿菌，在酒精發(fā)酵旺盛時(shí)，醋酸桿菌能否將果汁中的糖發(fā)酵為醋酸?

?；揖G色不能吸收酵母菌酒精發(fā)酵產(chǎn)生的CO2每隔12小時(shí)左右（一定的時(shí)間）將瓶蓋擰松一次既能及時(shí)吸收（發(fā)酵產(chǎn)生的）CO2，又能減少被雜菌污染的機(jī)會(huì)重鉻酸鉀（5）甲裝置中，A液體是_____，NaHCO3溶液的作用是6（二）、果醋制作1、菌種：

（1）分類地位：?jiǎn)渭?xì)胞

生物（2）代謝類型：

.

（3）發(fā)酵條件：①溫度：醋酸菌的最適生長(zhǎng)溫度為

，醋酸發(fā)酵時(shí)將溫度嚴(yán)格控制在此范圍內(nèi)。②氧氣：醋酸菌是好氧細(xì)菌，要供應(yīng)充足，要

不斷通入氧氣。③PH：呈

。原核異養(yǎng)需氧型30℃～35℃酸性（二）、果醋制作1、菌種：原核異養(yǎng)需氧型3072、原理：（用反應(yīng)式表示）（1）氧氣、糖源都

：醋酸菌將葡萄汁中的

分解成

。（糖制醋）（2）氧氣充足、糖源不足：醋酸菌將

→乙醛→

。（酒變醋）果酒制作果醋的反應(yīng)式為:

。充足糖醋酸乙醇醋酸C2H5OH＋O2

CH3COOH＋H2O2、原理：（用反應(yīng)式表示）充足糖醋酸乙醇醋酸C2H5OH＋8（三）、菌種來源

1、酵母菌菌種的來源葡萄酒自然發(fā)酵的酵母菌主要是附著在

的酵母菌，放久的葡萄有酒味就是這個(gè)道理；為提高果酒品質(zhì)，可以直接在果汁中加入人工培養(yǎng)的酵母菌或適當(dāng)接種食品發(fā)酵的酵母菌。葡萄皮上（三）、菌種來源1、酵母菌菌種的來源葡萄皮上92、醋酸菌菌種的來源通入的空氣中會(huì)有一些醋酸菌，帶到發(fā)酵液中，大量繁殖，而其他的菌因不適應(yīng)這種條件而不能繁殖；也可以直接在果酒中加入醋酸菌。（可以先買一瓶醋，打開蓋暴露于空氣中，一段時(shí)間后在醋的表面有一層薄膜（實(shí)際是醋酸菌），可以用這層薄膜進(jìn)行接種，這樣可以明顯縮短制作醋的時(shí)間。）2、醋酸菌菌種的來源10二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(一)制作流程挑選葡萄果酒果醋酵母菌醋酸菌

沖洗榨汁酒精發(fā)酵醋酸發(fā)酵二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)挑選葡萄果酒果醋酵母菌醋酸菌11(二)發(fā)酵裝置甲1、裝置甲(帶蓋的瓶子)制葡萄酒，在發(fā)酵制酒過程中，每隔12h左右將瓶蓋擰松一次，但又不打開，這樣做的目的是

。當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)生酒精后，再將瓶蓋打開，蓋上一層紗布，進(jìn)行制果醋的發(fā)酵。(如圖)用帶一層紗布的瓶子制醋紗布擰松是為了及時(shí)放出CO2氣體，防止爆裂；不打開是為了防止雜菌污染(二)發(fā)酵裝置甲1、裝置甲(帶蓋的瓶子)制12出料口充氣口排氣口乙

2、裝置乙的充氣口在

時(shí)關(guān)閉，在

時(shí)連接充氣泵不斷向內(nèi)

；排氣口主要是排出

；排氣口要通過一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身相連，這樣做的目的是

；出料口的作用是

。酒精發(fā)酵醋酸發(fā)酵充入空氣CO2防止雜菌污染對(duì)發(fā)酵情況進(jìn)行及時(shí)的監(jiān)測(cè)出料口充氣口排氣口乙2、裝置乙的充氣口在時(shí)關(guān)13三、操作提示

（一）材料的

：選擇

的葡萄，榨汁前先將葡萄進(jìn)行

，除去

。1、沖洗的主要目的是

；沖洗應(yīng)注意不能

，以防止

。2、先沖洗后除去枝梗的理由是

。選擇和處理新鮮沖洗枝梗除去污物反復(fù)沖洗菌種流失避免除去枝梗時(shí)使葡萄破損，增加被雜菌污染的機(jī)會(huì)三、操作提示（一）材料的：選擇14（二）防止

.

1、

要清洗干凈，并晾干。2、

要清洗干凈，用體積分?jǐn)?shù)為70%的

消毒。3、裝入葡萄汁后，

。發(fā)酵液被污染榨汁機(jī)發(fā)酵瓶酒精封閉充氣口（二）防止.15（三）控制好

.

1、葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時(shí)，要留有大約

的空間。

2、制葡萄酒的過程中，將溫度嚴(yán)格控制在

，時(shí)間控制在

左右，可通過出料口

。

3、制葡萄醋的過程中，將溫度嚴(yán)格控制在

，時(shí)間控制在

左右，并注意適時(shí)通過

。發(fā)酵的條件1/318℃～25℃10～12d對(duì)發(fā)酵情況進(jìn)行及時(shí)監(jiān)測(cè)30℃～35℃7～8d充氣口充氣（三）控制好.發(fā)16四、結(jié)果分析、檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)

1、在果酒發(fā)酵中，生產(chǎn)出的葡萄酒呈深紅色的原因是

。2、果汁發(fā)酵產(chǎn)物的檢驗(yàn)：（1）檢驗(yàn)有無酒精產(chǎn)生：用

（在

條件下），反應(yīng)呈現(xiàn)

。（2）檢驗(yàn)有無醋酸產(chǎn)生：可通過觀察菌膜、嗅味和品嘗、

檢測(cè)等。紅葡萄皮的色素進(jìn)入發(fā)酵液重鉻酸鉀酸性灰綠色PH試紙四、結(jié)果分析、檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)1、在果酒發(fā)酵中，生產(chǎn)出的葡萄酒呈17[試題精選]1.（2008年南通市四縣市高三聯(lián)合試卷）下列關(guān)于果醋制作的說法正確的是（）A．醋酸菌是好氧菌，在制作過程中要一直打開發(fā)酵瓶B．在制作葡萄醋的過程中，溫度應(yīng)嚴(yán)格控制在18～25℃C．當(dāng)糖源不足時(shí)，醋酸菌先將酒精轉(zhuǎn)變成乙醛，再將乙醛變?yōu)榇姿酓．醋酸菌在糖源和氧氣充足時(shí)，能將葡萄糖分解成醋酸和二氧化碳C[試題精選]1.（2008年南通市四縣市高三聯(lián)合試卷）下列關(guān)182．（2008屆五市三區(qū)調(diào)研卷）一位學(xué)生將葡萄糖和酵母菌溶液放入一個(gè)保溫瓶中，并用帶有兩個(gè)孔的塞子封口，酵母—葡萄糖溶液的溫度隨時(shí)間慢慢地升高，指示劑的顏色也開始改變（該指示劑遇酸變紅）。下列判斷正確的是（）（多選題）A．保溫瓶?jī)?nèi)的溫度將一直保持穩(wěn)定不變B．保溫瓶中氧氣的含量對(duì)酵母菌呼吸作用的類型有重要的影響C．實(shí)驗(yàn)可用來測(cè)定酵母菌呼吸作用釋放熱量的變化D．指示劑變色的情況與保溫瓶中空氣的量無關(guān)，與葡萄糖的量有關(guān)BC2．（2008屆五市三區(qū)調(diào)研卷）一位學(xué)生將葡萄糖和酵母菌溶液19

3．回答下列有關(guān)果酒和果醋制作的小題：（1）果酒和果醋制作時(shí)，用到菌種的代謝類型分別是

、

。（2）在果酒制作中，生產(chǎn)出的葡萄酒呈深紅色，這種有色物質(zhì)來源于

。在利用酵母菌自制葡萄酒的過程中，不需要進(jìn)行滅菌，因?yàn)榘l(fā)酵液中的

能抑制絕大多數(shù)其他微生物的繁殖。異養(yǎng)兼性厭氧型異養(yǎng)需氧型紅葡萄皮缺氧、酸性條件3．回答下列有關(guān)果酒和果醋制作的小題：異養(yǎng)兼性厭氧型異養(yǎng)需20（3）可通過

證明醋酸的產(chǎn)生。為進(jìn)一步確定酵母菌無氧呼吸的產(chǎn)物，可以再用

檢測(cè)發(fā)酵瓶中有無酒精產(chǎn)生，正確的操作步驟是：先在試管中加入2mL

，然后加入3mol/L的

，振蕩混勻后滴加

，若實(shí)驗(yàn)組反應(yīng)呈現(xiàn)

，對(duì)照組試管中溶液無顏色變化，則可確定被鑒定物為酒精。重鉻酸鉀PH試紙發(fā)酵液H2SO4

重鉻酸鉀灰綠色（3）可通過證明醋酸的產(chǎn)生。為進(jìn)一步確定酵21（4）在果酒制作中，若酵母菌有氧呼吸和無氧呼吸消耗了等量的葡萄糖，則它們放出的CO2之和與它們消耗的O2之和比為（）

A．1：1B．3：0C．6：0D．4：3（5）若酒精發(fā)酵中，經(jīng)檢測(cè)發(fā)酵裝置活菌數(shù)量適宜但卻不產(chǎn)生酒精，可能的原因是

。D裝置密封性差，空氣進(jìn)入裝置（4）在果酒制作中，若酵母菌有氧呼吸和無氧呼吸消耗了等量的224.（08南京零模）下圖是兩位同學(xué)制果酒和果醋的裝置。同學(xué)甲用A(帶蓋的瓶子)裝置制葡萄酒，在瓶中加入適量葡萄汁，溫度控制在18～25℃，每隔12h左右將瓶蓋擰松一次(注意不是打開瓶蓋)。當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)生酒精后，再將瓶蓋打開，蓋上一層紗布，溫度控制在30～35℃，進(jìn)行果醋發(fā)酵。同學(xué)乙用B裝置，溫度控制與甲相同，不同的是除制果酒時(shí)充氣口用夾子夾緊外,排氣的橡膠管也用夾子夾住，并且每隔12h左右松一松夾子

放出多余的氣體。制果醋時(shí)打開夾子適時(shí)向充氣口充氣。經(jīng)過20天左右；兩位同學(xué)各自完成發(fā)酵制作據(jù)此回答有關(guān)問題：4.（08南京零模）下圖是兩位同學(xué)制果酒和果醋的裝置。同學(xué)甲23

(1)酵母菌與醋酸桿菌在結(jié)構(gòu)上的最大區(qū)別是后者

。從制酒和制醋兩階段對(duì)裝置的處理方式判斷，酵母菌和醋酸桿菌的細(xì)胞呼吸類型依次是

、

。(2)同學(xué)甲在制酒階段，每隔12h左右就要將瓶蓋擰松一次；但又不打開，這樣做的目的是

。(3)B裝置中排氣口要通過一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身相連，這樣做的目的是

。(4)制葡萄酒時(shí)要將溫度控制在18～25℃，而制葡萄醋時(shí)要將溫度控制在30—35℃,原因是

。無成形的細(xì)胞核兼性厭氧型需氧型（有氧呼吸型）擰松是為了及時(shí)放出CO2氣體,防止爆裂;不打開是為了防止雜菌污染防止雜菌污染18～25℃是酵母菌生長(zhǎng)和發(fā)酵的適宜溫度,30—35℃是醋酸菌生長(zhǎng)和發(fā)酵的適宜溫度(1)酵母菌與醋酸桿菌在結(jié)構(gòu)上的最大區(qū)別是后者無成形的245．某生物興趣小組利用下圖裝置制作果酒和果醋，請(qǐng)分析回答下列問題。（1）制葡萄酒時(shí)，要將溫度控制在

；制葡萄醋時(shí)，要將溫度控制在

。（2）制作

時(shí)，應(yīng)將2開關(guān)打開，以便

。制作果酒時(shí)，為保證發(fā)酵罐中有較多的菌體，必須先

，當(dāng)達(dá)到一定數(shù)量后，應(yīng)控制的培養(yǎng)條件是

，此時(shí)發(fā)酵作用的反應(yīng)式是

。隨著發(fā)酵程度的加深，液體密度會(huì)逐漸

。18℃～25℃30℃～35℃果醋充入空氣（無菌）封閉充氣口C6H12O62C2H5OH＋2CO2

降低充入空氣（無菌）5．某生物興趣小組利用下圖裝置制作果酒和果醋，請(qǐng)分析回答下列25（3）發(fā)酵過程應(yīng)及時(shí)排氣，這是因?yàn)?/p>

。（4）制作葡萄酒時(shí)，將時(shí)間控制在

d左右，可通過[]

對(duì)發(fā)酵情況進(jìn)行

。制作葡萄醋時(shí)，將時(shí)間控制在

d左右，并注意適時(shí)通過[]

充氣。（5）當(dāng)果酒制作好之后，如果利用此裝置繼續(xù)制作果醋，為保證效果，應(yīng)向發(fā)酵液中

。（6）在釀酒和釀醋的過程中都要涉及到各種微生物，在上述兩過程中主要涉及到的生物在結(jié)構(gòu)上本質(zhì)區(qū)別是

。10~123出料口及時(shí)的監(jiān)測(cè)7~82充氣口發(fā)酵過程中產(chǎn)生大量CO2，及時(shí)排氣是為了防止發(fā)酵瓶爆裂通入空氣（無菌）；加入醋酸菌前者有成形的細(xì)胞核，后者沒有（3）發(fā)酵過程應(yīng)及時(shí)排氣，這是因?yàn)?0~123出料口及時(shí)26課題2腐乳的制作復(fù)習(xí)目標(biāo)：說明腐乳制作過程的科學(xué)原理設(shè)計(jì)并完成腐乳的制作分析影響腐乳品質(zhì)的條件課題2腐乳的制作復(fù)習(xí)目標(biāo)：27一、基礎(chǔ)知識(shí)1.發(fā)酵菌種(主要):

(還有

等)（1）分類地位：多細(xì)胞

生物(絲狀真菌)（2）代謝類型：

.

（3）發(fā)酵條件：

①溫度：溫度控制在

。②氧氣：

。③濕度：用保鮮膜控制濕度，并定期換氣。

④豆腐的品質(zhì)（含水量）：

。

毛霉真核異養(yǎng)需氧型15℃～18℃需要70%青霉、酵母、曲霉、一、基礎(chǔ)知識(shí)1.發(fā)酵菌種(主要):(還有28（4）分布:廣泛,常見于

、水果、

、谷物上（5）特點(diǎn)：生長(zhǎng)迅速，具有發(fā)達(dá)的白色

，

如下圖。（實(shí)際上還有匍匐菌絲，可形成腐乳外面的“皮”）土壤蔬菜菌絲（4）分布:廣泛,常見于、水果、、292、制作原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成

；脂肪酶可將脂肪水解為

。在多種微生物的協(xié)同作用下，普通的豆腐轉(zhuǎn)變成我們愛吃的腐乳。思考：腐乳味道鮮美，營養(yǎng)價(jià)值較高，原因主要有（1）

；（2）

。小分子的肽和氨基酸甘油和脂肪酸大分子分解成小分子，易吸收大分子分解成小分子，營養(yǎng)物質(zhì)種類增加2、制作原理：小分子的肽和氨基酸甘油和脂肪酸大分子分解成小分30先創(chuàng)造條件讓毛霉生長(zhǎng)再加鹽控制毛霉的生長(zhǎng)

控制毛霉的生長(zhǎng)，同時(shí)增加風(fēng)味和口感前期發(fā)酵二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)后期發(fā)酵讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉加鹽腌制加鹵湯裝瓶密封腌制先創(chuàng)造條件讓毛霉生長(zhǎng)再加鹽控制毛霉的生長(zhǎng)控制毛霉的生長(zhǎng)31相關(guān)資料1．毛霉的生長(zhǎng)：溫度控制在

，并保持濕度。約

后，開始生長(zhǎng)，

后菌絲生長(zhǎng)旺盛,

后布滿菌絲。豆腐塊上的毛霉來自

，現(xiàn)代的腐乳生產(chǎn)是在嚴(yán)格

的條件下，將

直接接種在豆腐上（可避免雜菌污染，保證質(zhì)量）。２．加鹽腌制：隨著層數(shù)的加高而

，接近瓶口的鹽要

。腌制約

天左右。加鹽的作用：①使豆腐塊析出水分變硬；②

；③調(diào)味15℃～18℃空氣中的毛霉孢子優(yōu)良毛霉菌種48h3d5d無菌增加鹽量鋪厚一些8抑制微生物生長(zhǎng)，避免豆腐腐敗變質(zhì)相關(guān)資料1．毛霉的生長(zhǎng)：溫度控制在，并保323.配制鹵湯：鹵湯是由

及

配制而成。酒的含量一般控制在

左右。加酒可抑制

，同時(shí)能使腐乳具有獨(dú)特的香味調(diào)味。香辛料種類多可

，也具有防腐殺菌的作用。酒香辛料12%微生物的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)腐乳的風(fēng)味3.配制鹵湯：酒香辛料12%微生物的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)腐乳的風(fēng)味33三、操作提示（一）控制好

的用量

1.用鹽腌制時(shí)，注意控制鹽的用量。鹽的濃度過低，不足以

，可能導(dǎo)致

；鹽的濃度過高，會(huì)影響

。豆腐塊與鹽的比列為。

2.鹵湯中酒的含量應(yīng)控制在

左右。酒精含量過高，腐乳成熟的時(shí)間

；酒精含量過高，不足以抑制

，可能導(dǎo)致豆腐

。材料抑制微生物的生長(zhǎng)豆腐腐敗變質(zhì)腐乳的口味12%延長(zhǎng)微生物的生長(zhǎng)腐敗變質(zhì)5:1三、操作提示（一）控制好的用量材料抑制微生物的生34（二）防止

.1.用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用

消毒。2.裝瓶時(shí)，操作要

。整齊地?cái)[放好豆腐、加入鹵湯后，要用膠條將瓶口

。封瓶時(shí)，最好將瓶口通過酒精燈的

，防止瓶口被污染。雜菌污染沸水迅速小心密封火焰3、抑制微生物的生長(zhǎng)應(yīng)加

。鹽、酒、鹵湯（二）防止.1.用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷35四、泡菜制作1、乳酸菌：原核、分裂生殖、異養(yǎng)厭氧3、流程：菜葉、鹽水、裝壇、密閉2、原理：C6H12O6→2C3H6O3+2ATP4、測(cè)定亞硝酸鹽：NO2-+對(duì)氨基苯磺酸→玫瑰紅四、泡菜制作1、乳酸菌：原核、分裂生殖、異養(yǎng)厭氧3、流程：菜36專題1-3制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量一、基礎(chǔ)知識(shí)1、乳酸菌①____細(xì)胞的______生物；②種類（常見）：________菌和______菌③增殖方式：______生殖；④分布：空氣、_____、植物體表、人或動(dòng)物的______等。單原核乳酸鏈球乳酸桿分裂土壤腸道常用于生產(chǎn)酸奶專題1-3制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量一、基礎(chǔ)知識(shí)1、乳酸菌37⑤代謝類型：____________

在_____條件下，能分解葡萄糖為_______，可用來生產(chǎn)泡菜和______。⑥反應(yīng)式：_______________________________異養(yǎng)厭氧型無氧乳酸酸奶C6H12O6酶2C3H6O3（乳酸）+少量能量制作泡菜的原理：乳酸菌無氧呼吸將葡萄糖分解成乳酸⑤代謝類型：____________異養(yǎng)厭氧型無氧乳酸382、亞硝酸鹽①理化特性：為___色粉末，___溶于水。白易在人體內(nèi)的代謝特點(diǎn)：正常情況下亞硝酸鹽可以_________；只有在特定條件下（適宜的_____、___和___________作用），才會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)橹掳┪铩猒______。隨尿排出

PH

溫度

一定亞硝胺

的微生物

1、材料準(zhǔn)備(1)選擇泡菜壇：標(biāo)準(zhǔn)是

、

、

、

、

，否則容易引起蔬菜腐爛。(2)選擇原料：質(zhì)地鮮嫩、無蟲咬、無爛痕斑點(diǎn)?；鸷蚝脽o裂紋無砂眼壇沿深蓋子吻合好2、亞硝酸鹽①理化特性：為___色粉末，___溶于水。白易在392、制作過程(1)原料處理：將新鮮蔬菜預(yù)先清洗、晾曬，然后切成

。(2)配制鹽水：泡菜鹽水按清水和鹽為

質(zhì)量比配制,并將鹽水

備用。(3)裝壇：將預(yù)處理的新鮮蔬菜混勻后裝壇，裝至

時(shí)，放入

等佐料，并繼續(xù)裝至

滿，再徐徐倒入配制好的鹽水，使鹽水

。(4)封壇發(fā)酵：蓋上泡菜壇蓋子，在壇蓋邊沿的__中注滿

進(jìn)行密封發(fā)酵。發(fā)酵時(shí)間受到

影響。條狀或片狀4∶1煮沸冷卻半壇蒜瓣、生姜、香辛料八成浸沒全部菜料水槽水溫度2、制作過程條狀或片狀4∶1煮沸冷卻半壇蒜瓣、生姜、40在______條件下，亞硝酸鹽與_________發(fā)生_________后，與________________結(jié)合形成__________。將顯色反應(yīng)后的樣品與已知濃度的______進(jìn)行______，可大致估算出泡菜中亞硝酸鹽的含量。測(cè)定亞硝酸鹽的步驟包括：①__________；②______________；③______________；④______。配制溶液時(shí)，需要加入鹽酸的是___________________________；需要避光保存的是___________________________________________；比色時(shí)需靜置15min的原因是________________。鹽酸酸化對(duì)氨基苯磺酸重氮化反應(yīng)N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽玫瑰紅色染料標(biāo)準(zhǔn)液目測(cè)比較配制溶液配制標(biāo)準(zhǔn)顯色液制備比色樣品處理液對(duì)氨基苯磺酸溶液和提取劑對(duì)氨基苯磺酸溶液；N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽使反應(yīng)充分進(jìn)行在______條件下，亞硝酸鹽與________41三、檢測(cè)亞硝酸鹽的含量1、實(shí)驗(yàn)原理在

條件下，亞硝酸鹽與

發(fā)生

后，與

結(jié)合形成

。將顯色反應(yīng)后的樣品與已知濃度的

進(jìn)行

，可大致估算出泡菜中亞硝酸鹽的含量。檢測(cè)亞硝酸鹽的方法是

。鹽酸酸化對(duì)氨基苯磺酸重氮化反應(yīng)N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽玫瑰紅色染料標(biāo)準(zhǔn)液目測(cè)比較2、操作過程(1)配制溶液(2)配制標(biāo)準(zhǔn)顯色液(3)制備樣品處理液(4)比色比色法三、檢測(cè)亞硝酸鹽的含量1、實(shí)驗(yàn)原理鹽酸酸化對(duì)氨基苯磺酸重42泡菜風(fēng)味形成的關(guān)鍵是加入

。按照清水與鹽的質(zhì)量比是

。氫氧化鋁乳液的作用

。調(diào)味料4:1吸附樣品濾液中的雜質(zhì)腌制的條件控制腌制的時(shí)間、溫度和食鹽的用量腌制過程中亞硝酸鹽含量的變化是先增加后減少泡菜壇內(nèi)有一層白膜的原因產(chǎn)膜酵母的繁殖加鹽的作用：滅菌、滲出蔬菜中的水、調(diào)味泡菜風(fēng)味形成的關(guān)鍵是加入。按照清水與鹽的質(zhì)43與傳統(tǒng)發(fā)酵有關(guān)的幾類微生物的比較酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌生物學(xué)分類生活方式適宜溫度主要生殖方式出芽生殖二分裂生殖孢子生殖二分裂生殖主要用途釀酒、發(fā)面釀醋制作腐乳制作酸奶、泡菜真核生物原核生物真核生物原核生物異養(yǎng)兼性厭氧異養(yǎng)需氧異養(yǎng)需氧異養(yǎng)厭氧20℃左右30～35℃15～18℃室溫與傳統(tǒng)發(fā)酵有關(guān)的幾類微生物的比較酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌生物學(xué)44果酒果醋腐乳泡菜微生物類型原理反應(yīng)條件檢測(cè)方法酵母菌，真核，兼性厭氧醋酸菌，細(xì)菌，好氧菌毛霉，真菌，好氧乳酸菌，細(xì)菌，厭氧菌酵母菌的無氧呼吸產(chǎn)生酒精20℃左右，無氧酸性重鉻酸鉀與其反應(yīng)呈灰綠色醋酸菌的有氧呼吸產(chǎn)生醋酸30~35℃，通入氧氣品嘗、pH試紙檢測(cè)等毛霉產(chǎn)生蛋白酶和脂肪酶等催化有機(jī)物分解15～18℃接種，酒精含量控制在12％左右乳酸菌無氧呼吸產(chǎn)生乳酸常溫，無氧條件pH檢測(cè)，亞硝酸鹽的檢測(cè)方法果酒果醋腐乳泡菜微生物類型原理反應(yīng)條件檢測(cè)方法酵母菌，真核，45生物選修1一專題復(fù)習(xí)ppt課件46培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為

和

在液體培養(yǎng)基中加入

（是從紅藻中提取的一種多糖，在配制培養(yǎng)基中用作凝固劑）后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)，可以形成肉眼可見的

。液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基。凝固劑瓊脂菌落按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為

和

.選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括

、

、

、氮源。水無機(jī)鹽碳源培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為液體培472、成分：水、無機(jī)鹽、碳源、氮源、例如：培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加

；培養(yǎng)霉菌時(shí)需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至

；培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需要將pH調(diào)至

；培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)需要提供

的條件。還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)___、____的要求PH氧氣維生素酸性中性或微堿性無氧特殊營養(yǎng)物質(zhì)2、成分：水、無機(jī)鹽、碳源、氮源、例如：還需要滿足微生物生長(zhǎng)48五.以下選擇培養(yǎng)基可以分離哪些微生物？加入青霉素的培養(yǎng)基

殺死細(xì)菌、放線菌，分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基

殺死多種微生物，分離出金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基

分離出自生固氮菌（非固氮菌因缺少氮源被淘汰）不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基

分離出自養(yǎng)型微生物（異養(yǎng)微生物因缺少有機(jī)物被淘汰）加入抗生素的培養(yǎng)基利用抗生素抗性基因作標(biāo)記基因，選擇分離出導(dǎo)入目的基因的工程菌五.以下選擇培養(yǎng)基可以分離哪些微生物？加入青霉素的培養(yǎng)基492、消毒：指使用較為溫和的

僅殺死物體

或

的部分對(duì)人體有害的微生物（不包括

）。常用的方法

、

、

。物理或化學(xué)方法表面內(nèi)部指使用______的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括

。常用的方法有_______、________、__________煮沸消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥劑消毒法強(qiáng)烈灼燒滅菌干熱滅菌高壓蒸汽滅菌3、滅菌：芽孢和孢子芽孢和孢子2、消毒：指使用較為溫和的50

無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止________污染的方法。_________必須無菌、_________也必須要無菌、___________時(shí)不能帶入其他雜菌主要包括：雜菌2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別

消毒：使用較溫和理化因素，僅殺死物體表面或內(nèi)部的一部分對(duì)人體有害的微生物的過程。不能殺死芽孢和孢子。滅菌：使用強(qiáng)烈的理化因素消滅物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子。各種器具培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移菌種無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止_______51（2）灼燒滅菌——如接種環(huán)等：接種時(shí)，用于接種工具或其他金屬用具滅菌。直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒可以迅速徹底滅菌（3）干熱滅菌：用于耐高溫需干燥物品（玻璃器皿、金屬用具）（4）高壓蒸汽滅菌——培養(yǎng)基：用于培養(yǎng)基等物品的滅菌（2）灼燒滅菌——如接種環(huán)等：（3）干熱滅菌：（4）高壓蒸汽52四、純化大腸桿菌純化大腸桿菌就是為了獲得大腸桿菌的_________，這需在培養(yǎng)時(shí)，盡量使菌落中的菌體來自于____________的分裂，即這個(gè)菌落的細(xì)菌群體由___________繁殖而來，這就需要接種時(shí)盡量接種_____的大腸桿菌。一個(gè)大腸桿菌一個(gè)大腸桿菌單個(gè)最常用的方法平板劃線法稀釋涂布平板法純種菌落四、純化大腸桿菌純化大腸桿菌就是為了獲得大腸53三.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計(jì)算：2.稱量：3.溶化：牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋4.滅菌：5.倒平板：分散成單個(gè)細(xì)胞,形成單個(gè)菌落加入瓊脂，不斷用玻棒攪拌的原因？防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂將配置好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，放入

，在壓力為

KPA，溫度為

度下滅菌。將培養(yǎng)皿放入

內(nèi)滅菌。

高壓蒸汽滅菌鍋100干熱滅菌箱121待培養(yǎng)基冷卻至________時(shí)在_________附近操作進(jìn)行：50℃左右酒精燈火焰三.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計(jì)算54①在火焰旁右手拿錐形瓶，左手拔出______(如圖1)。④待平板________后，將平板_______放置(如圖4)。棉塞火焰進(jìn)行滅菌，防止一條縫隙皿蓋冷卻凝固倒過來瓶口微生物污染培養(yǎng)基②右手拿錐形瓶，使錐形瓶的瓶口迅速通過_____，目的是____________________________________(如圖2)。③左手將培養(yǎng)皿打開_________，右手將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，立刻蓋上_____(如圖3)。圖1圖2圖3圖4①在火焰旁右手拿錐形瓶，左手拔出______(如圖1)。④待553.思考討論答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以防止培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。倒過來1.平板冷凝后，要將平板

放置？3.思考討論答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基562.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；

每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。

劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。3.思考討論2.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃573.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。4.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。3.思考討論3.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？3.思考58為了保持菌種的純凈，需對(duì)菌種進(jìn)行保藏。對(duì)于頻繁使用的菌種，我們可以采用________法，將菌種接種到________培養(yǎng)基上，菌落長(zhǎng)成后置于____冰箱保存，將菌種放在低溫環(huán)境中保藏的目的是_______________________，但時(shí)間長(zhǎng)了菌種容易被_____________，因此每_____個(gè)月后需重新接種。對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用_________法，在3ml的甘油瓶中，裝入1ml甘油后____，將1ml菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶，充分混合，放在_____的冷凍箱保存。3．菌種的保存臨時(shí)保藏甘油管藏降低微生物的新陳代謝速率3～6固體斜面4℃污染或產(chǎn)生變異滅菌-200C為了保持菌種的純凈，需對(duì)菌種進(jìn)行保藏。3．菌種的59(6)若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過_______處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。滅菌(6)若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及滅菌60第6課時(shí)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成

之后，才能被植物利用。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗麄兡芎铣?/p>

。氨脲酶第6課時(shí)土壤中分解尿素的尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)61一、研究思路(1)思路：提供有利于

生長(zhǎng)的條件(包括

、

、

等)，同時(shí)

或

其他微生物生長(zhǎng)。(2)實(shí)例：PCR技術(shù)利用的耐高溫的

是從生活在熱泉中的

細(xì)菌中提取的,之所以能從熱泉中篩選出該菌是因?yàn)?/p>

。(3)選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許

種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)

或

其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱做選擇培養(yǎng)基。1、篩選菌株目的菌株pH抑制阻止DNA聚合酶Taq熱泉的高溫條件淘汰了絕大多數(shù)微生物特定抑制阻止?fàn)I養(yǎng)溫度一、研究思路(1)思路：提供有利于622．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目稀釋涂布平板法顯微鏡直接計(jì)數(shù)（最常用）（1）稀釋涂布平板法

①統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來源于樣品稀釋液中的

。通過統(tǒng)計(jì)平板上的

，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在

平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。一個(gè)活菌菌落數(shù)30～3002．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目稀釋涂布平板法顯微鏡直接計(jì)數(shù)（最常用）（63微生物要利用尿素需要分泌

，不能分泌脲酶的微生物不能利用尿素。，其選擇機(jī)制是

。加入青霉素___________加入高濃度食鹽_____________;不加氮源________;不加含碳有機(jī)物___________。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法有___________和___________；一般選擇菌落數(shù)在_______平板進(jìn)行計(jì)數(shù)；成功統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)腳_____；統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)比活菌的實(shí)際數(shù)目

是因?yàn)開_____________________________________酵母菌、霉菌等金黃色葡萄球菌固氮菌自養(yǎng)型微生物稀釋涂布平板法直接計(jì)數(shù)顯微鏡30～300稀釋度當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞在一起時(shí)，觀察到的只是一個(gè)菌落只有能夠以分泌脲酶從而以尿素作為氮源的微生物才能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)低脲酶微生物要利用尿素需要分泌，不能分泌脲酶的微64②從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的活菌數(shù)的計(jì)算方法是

。(平均菌落數(shù)÷涂布的稀釋液體積)×稀釋倍數(shù)③利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)?/p>

。在實(shí)際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在

之間、適于計(jì)數(shù)的平板。測(cè)定土壤中細(xì)菌數(shù)量一般選用

。測(cè)定放線菌的數(shù)量，一般選用

。

測(cè)定真菌的數(shù)量，一般選用

。一般來說在一定的培養(yǎng)條件下同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。

。稀釋度30~300104105106103104105102103104形狀、大小、隆起程度、顏色②從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的活菌數(shù)的計(jì)算方法是653．菌種的鑒定挑選選擇培養(yǎng)基中不同形態(tài)的菌落接入含

培養(yǎng)基的斜面中，由于細(xì)菌合成的

酶分解尿素產(chǎn)生了

，使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH上升，使指示劑變色，菌落周圍變

。酚紅脲氨紅3．菌種的鑒定挑選選擇培養(yǎng)基中不同形態(tài)的菌落接66八.微生物數(shù)量測(cè)定測(cè)定土壤中的細(xì)菌數(shù)，一般選用104、105、106倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)。

實(shí)驗(yàn)時(shí)，每一濃度至少涂布3個(gè)平板，以增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力和準(zhǔn)確性。

當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的菌落來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品大約含有多少個(gè)活菌。八.微生物數(shù)量測(cè)定67課題三分解纖維素的微生物的分離1）

是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物，木材、作物秸稈等也富含纖維素。（2）纖維素酶是一種

酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即

，前兩種酶使纖維素分解成

，第三種酶將纖維二糖分解成

。纖維素最終被水解成葡萄糖，為微生物的生長(zhǎng)提供營養(yǎng)。棉花復(fù)合C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶纖維二糖葡萄糖課題三分解纖維素的微生物的分離1）是自然界中纖68纖維素分解菌的篩選（1）篩選方法：

法。能夠通過顏色反應(yīng)直接對(duì)微生物進(jìn)行篩選。（2）剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成

，但并不和水解后的

和

發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們?cè)诤欣w維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時(shí)，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅－纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以

為中心的

。這樣，我們就可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。剛果紅染色紅色復(fù)合物纖維二糖葡萄糖纖維素分解菌透明圈纖維素分解菌的篩選剛果紅染色紅色復(fù)合物纖維二糖葡萄糖纖維素分69（1）土壤采集選擇

的環(huán)境。（2）剛果紅染色法分離纖維素分解菌的步驟倒平板操作、制備菌懸液、涂布平板（3）剛果紅染色法種類一種是

進(jìn)行顏色反應(yīng)，另一種是在

。課題延伸對(duì)分解纖維素的微生物進(jìn)行了初步的篩選后，只是分離純化的第一步，為確定得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行

的實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有

和

兩種。纖維素酶的測(cè)定方法，一般是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的

進(jìn)行定量的測(cè)定。富含纖維素先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅倒平板時(shí)就加入剛果紅發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶液體發(fā)酵固體發(fā)酵葡萄糖（1）土壤采集選擇70提示：可將菌液接種在含牛肉膏蛋白胨的基礎(chǔ)培養(yǎng)基與之對(duì)照,或者將纖維素改為葡萄糖。你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說明選擇培養(yǎng)基的作用你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說明培養(yǎng)基是否被污染提示：可將菌液接種在含牛肉膏蛋白胨的基礎(chǔ)培養(yǎng)基與之對(duì)照,或者71細(xì)胞分化：在生物個(gè)體發(fā)育過程中，細(xì)胞在

上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過程。，在培養(yǎng)了一段時(shí)間以后，會(huì)通過

，形成愈傷組織，愈傷組織的細(xì)胞

，是一種高度

的呈無定形狀態(tài)的

細(xì)胞。由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細(xì)胞的

，或者叫做去分化。脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成

等器官，這個(gè)過程叫做

。再分化形成的試管苗，移栽到地里，可以發(fā)育成完整的植物體。形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能離體的植物組織或細(xì)胞細(xì)胞分裂排列疏松而無規(guī)則液泡化薄壁脫分化再分化根芽細(xì)胞分化：在生物個(gè)體發(fā)育過程中，細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能離體72材料：不同的

，培養(yǎng)的難易程度差別很大。植物材料的選擇直接關(guān)系到試驗(yàn)的成敗。對(duì)于同一植株材料，材料

和

的長(zhǎng)短等都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。菊花組織培養(yǎng)一般選擇

作材料。一般來說，容易進(jìn)行

的植物容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。選取生長(zhǎng)旺盛嫩枝進(jìn)行組培的是嫩枝生理狀態(tài)好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。植物組織的年齡保存時(shí)間未開花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝無性繁殖植物組織培養(yǎng)的必要條件：

、

、和

。細(xì)胞離體一定的營養(yǎng)物質(zhì)、激素其他外界條件材料：不同的，培養(yǎng)的難易程度差別很大73常用的培養(yǎng)基是

培養(yǎng)基，其中含有的大量元素是

，微量元素是

，有機(jī)物有

等。激素大量元素和微量元素提供

，有機(jī)物提供

，蔗糖提供

，同時(shí)能夠

。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量

營養(yǎng)，還要加入

。MSN、P、S、K、Ca、MgFe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖生活所必須的無機(jī)鹽滿足離體的植物細(xì)胞在正常代謝途徑受一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)要求碳源維持細(xì)胞的滲透壓無機(jī)激素常用的培養(yǎng)基是培養(yǎng)基，其中含有的大量元素74使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先生長(zhǎng)素，后細(xì)胞分裂素先細(xì)胞分裂素，后生長(zhǎng)素同時(shí)使用激素：植物激素中

和

是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。在生長(zhǎng)素存在的情況下，細(xì)胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強(qiáng)趨勢(shì)。在培養(yǎng)基中需要添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素等植物激素，其濃度、等

都影響結(jié)果。有利于分裂但不分化細(xì)胞既分裂也分化分化頻率提高生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素使用的先后順序、用量的比例使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先生長(zhǎng)素，先細(xì)胞分裂素，同時(shí)使用激素：植物激75生長(zhǎng)素／細(xì)胞分裂素比值與結(jié)果比值高時(shí)比值低時(shí)比值適中促根分化，抑芽形成促芽分化，抑根形成促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)（4）環(huán)境條件：

pH、溫度、光照pH控制在

左右，溫度控制在

。C,每日用

。5.818－22日光燈照射12h生長(zhǎng)素／細(xì)胞分裂素比值與結(jié)果比值高時(shí)比值低時(shí)比值適中促根分76植物組織培養(yǎng)過程:離體組織或細(xì)胞植物體脫分化細(xì)胞分裂素≈生長(zhǎng)素愈傷組織芽根細(xì)胞分裂素>生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素<生長(zhǎng)素再分化植物組織培養(yǎng)過程:離體組織或細(xì)胞植物體脫分化細(xì)胞分裂素≈生長(zhǎng)77制備MS固體培養(yǎng)基外植體消毒接種培養(yǎng)移栽栽培實(shí)驗(yàn)操作制備MS固體培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)操作78二、實(shí)驗(yàn)操作（一）制備MS固體培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基包括20多種營養(yǎng)成分，實(shí)驗(yàn)室一般使用4。C保存配制好的培養(yǎng)基母液來制備1、配置各種母液①無機(jī)物中大量元素濃縮

倍，微量元素濃縮

倍，常溫保存②激素類、維生素類以及用量較小的有機(jī)物一般可按1mg/ml的質(zhì)量濃度

配制成母液③用母液配制培養(yǎng)基時(shí)，需要根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計(jì)算用量10100單獨(dú)二、實(shí)驗(yàn)操作（一）制備MS固體培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基包括20多種營79由于菊花的莖段的組織培養(yǎng)比較容易，因此

.3、滅菌分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進(jìn)行

.不必添加植物激素高壓蒸汽滅菌由于菊花的莖段的組織培養(yǎng)比較容易，3、滅菌分裝好的培養(yǎng)基連同80外植體的消毒外植體：

片段。選取菊花莖段時(shí)，要取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝。菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右。用

吸干外植體表面的水分，放入體積分?jǐn)?shù)為

中搖動(dòng)2~3次，持續(xù)

，立即將外植體取出，在

中清洗。取出后仍用無菌吸水紙吸干外植體表面水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為

溶液中

。取出后，在無菌水中至少清洗3次，目的是

。注意：對(duì)外植體進(jìn)行表面消毒時(shí)，就要考慮藥劑的消毒效果，又要考慮植物的耐受能力。離體的組織和細(xì)胞無菌吸水紙70%的酒精6~7s無菌水0.1%的氯化汞1~2min漂洗消毒液外植體的消毒外植體：81（三）接種接種前用

將工作臺(tái)擦拭一遍。1、接種室消毒2、無菌操作要求操作要在

完成，每次使用器械后，都需要用火焰

，接種后立即蓋好瓶蓋。3、材料的切取和接種70％的酒精酒精燈火焰旁灼燒滅菌插入莖段時(shí)應(yīng)注意方向，

。莖段、莖尖基部插入培養(yǎng)基利于吸收水分和養(yǎng)分不要倒插（四）培養(yǎng)接種后的錐形瓶最好放在

中培養(yǎng)。培養(yǎng)期間應(yīng)定期消毒。培養(yǎng)溫度

，每日用

。無菌箱18~22℃日光燈光照12h（三）接種接種前用將工作臺(tái)擦拭一遍。182JLSSYBYH月季的花藥培養(yǎng)zxxkwJLSSY月季的花藥培養(yǎng)zxxkw83

花粉是由

（即小孢子母細(xì)胞）經(jīng)過

而形成的，因此，花粉是

細(xì)胞。花粉的發(fā)育要經(jīng)歷：

等階段。花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂單倍體的生殖四分體時(shí)期、單核期、雙核期花粉是由84小孢子母細(xì)胞（

）時(shí)期單核（

）期雙核期（）細(xì)胞核（

）細(xì)胞核（

）細(xì)胞（）細(xì)胞（

）個(gè)精子（

）分裂（

）分裂單核（

）期（）分裂減數(shù)小孢子四分體居中靠邊有絲生殖生殖花粉管營養(yǎng)有絲22NNNNNNNNN小孢子母細(xì)胞（）時(shí)期單核（）期雙85產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑通過花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株（即單倍體植株）一般有兩種途徑，一種是花粉通過

階段發(fā)育為植物，另一種是花粉在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成

，再將其誘導(dǎo)分化成植株。這兩種途徑之間并沒有絕對(duì)的界限，主要取決于

。胚狀體愈傷組織培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比花藥中的花粉胚狀體脫分化愈傷組織花藥中的花粉脫分化分化叢芽再分化叢芽誘導(dǎo)生根移栽產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑通過花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株（即單倍體植株86影響花藥培養(yǎng)的因素誘導(dǎo)花粉能否成功及誘導(dǎo)成功率的高低，受多種因素影響，其中

與

是主要的影響因素·親本的生理狀況：花粉早期是的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株，選擇

。·合適的花粉發(fā)育時(shí)期：一般來說，在

，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花藥培養(yǎng)成功率最高·花蕾：選擇

的花蕾·此外

、

以及

等對(duì)誘導(dǎo)成功率都有一定影響·材料的選?。哼x擇花藥時(shí)，一般要通過

來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。確定花粉發(fā)育時(shí)期的最常用的方法是

。但是，某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，需采用

，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成

。材料的選擇培養(yǎng)基的組成月季的初花期單核期完全未開放親本植株的生長(zhǎng)條件材料的低溫預(yù)處理接種密度鏡檢醋酸洋紅法焙花青-鉻礬法藍(lán)黑色影響花藥培養(yǎng)的因素誘導(dǎo)花粉能否成功及誘導(dǎo)成功率的高低，受多種87（二）材料的消毒5、

沖洗3～5次

花藥的外面有花萼、花瓣保護(hù)，通常處于無菌狀態(tài)1、花蕾用

浸泡

秒2、

清洗3、

吸干花蕾表面的水分4、放入

溶液中

分鐘（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精無菌水質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞無菌水無菌吸水紙302～4（