微生物-金黃色葡萄球菌課件

一、生物學(xué)特性——菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征革蘭氏陽性球菌，直徑為0.5-1.0微米，鏡檢時呈單個、成對、四聯(lián)或不規(guī)則的簇群，如葡萄狀，故稱為葡萄球菌。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系一、生物學(xué)特性——菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征革蘭氏陽性球菌，直徑為0大多數(shù)菌株產(chǎn)生類胡羅卜素，使細(xì)胞團(tuán)呈現(xiàn)出深橙色到淺黃色，色素的產(chǎn)生取決于生長的條件，故稱金黃色葡萄球菌。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系大多數(shù)菌株產(chǎn)生類胡羅卜素，使細(xì)胞團(tuán)呈現(xiàn)出深橙色到淺黃色，色素大多數(shù)菌株最適生長溫度30-37℃，最適pH為7.0-7.5；兼性厭氧菌，在好氧條件下生長最好；可在15%氯化鈉和40%膽汁中生長。一般用含10%氯化鈉的胰酪胨大豆肉湯增菌或7.5%氯化鈉肉湯增菌。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系大多數(shù)菌株最適生長溫度30-37℃，最適pH為7.0-7.5所有的毒株產(chǎn)生血漿凝固酶，人和動物來源的菌株通?？赡掏?、人、馬和豬的血漿。金黃色葡萄球菌產(chǎn)生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和溶菌酶等，大多數(shù)菌株可水解天然的動物蛋白并釋放脂肪酸。在BP平板產(chǎn)生磷脂環(huán)。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系所有的毒株產(chǎn)生血漿凝固酶，人和動物來源的菌株生物學(xué)特性——致病性金黃色葡萄球菌為條件致病菌，菌株致病力的強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：a.溶血素：外毒素，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；在血平板培養(yǎng)出現(xiàn)溶血環(huán)。b.殺白細(xì)胞素：可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；c.血漿凝固酶：當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬作用。d.脫氧核糖核酸酶（DNA酶）

e.腸毒素：引起急性胃腸炎。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系生物學(xué)特性——致病性金黃色葡萄球菌為條金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，臨床表現(xiàn)多種多樣，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。

閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌葡萄球菌皮膚感染閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系葡萄球菌皮膚感染閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌腸毒素所引起的疾病，可引發(fā)不同程度的急性胃腸炎癥狀，惡心、嘔吐最為突出而且普遍，腹痛、腹瀉次之。當(dāng)金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時，經(jīng)8-10小時即可相當(dāng)數(shù)量的腸毒素。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌腸毒素所引起的疾二、檢驗(yàn)程序與操作方法根據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)：《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)》GB4789.10-94金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系二、檢驗(yàn)程序與操作方法根據(jù)中華人民共和國國家檢樣25g(ml)+225ml滅菌生理鹽水國標(biāo)：金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)程序直接計(jì)數(shù)方法增菌培養(yǎng)方法Baird-parker（貝爾德-帕克）0.3ml、0.3ml、0.4ml7．5％氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯血平板血平板，Baird-parker涂片染色觀察溶血血漿凝固酶試驗(yàn)報(bào)告36±1℃

24hr

36±1℃

24hr

36±1℃

24hr

閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系檢樣國標(biāo)：金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)程序直接計(jì)數(shù)方法增菌培養(yǎng)方法Ba檢驗(yàn)程序——增菌培養(yǎng)利用金黃色葡萄球菌耐鹽的特性（可耐受15%的氯化鈉），用含10%氯化鈉的胰酪胨大豆肉湯或7.5%氯化鈉肉湯增菌。置37攝氏度培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系檢驗(yàn)程序——增菌培養(yǎng)利用金黃色葡萄球菌耐鹽檢驗(yàn)程序——分離培養(yǎng)血平板：金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生溶血素，因此在血平板上產(chǎn)生明顯的溶血環(huán)。典型菌落：呈金黃色，有時也為白色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，有溶血環(huán)。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系檢驗(yàn)程序——分離培養(yǎng)血平板：金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生溶血素，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，有溶血環(huán)閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系大而突起，圓形，不透明，表面光滑，有溶血環(huán)閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食血平板制作成分：豆粉瓊脂（或營養(yǎng)瓊脂）100mL，脫纖維羊血（或兔血）5-10mL。制法：加熱融化瓊脂，冷至50℃，以無菌操作加入脫纖維羊血或兔血，搖勻，傾注平板。或分裝滅菌試管，擺成斜面。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系血平板制作成分：豆粉瓊脂（或營養(yǎng)瓊脂）100mL，脫纖維羊血BP（貝爾德-帕克）平板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、維生素和礦物元素丙酮酸鈉是一種生長促進(jìn)劑亞碲酸鹽對除金黃色葡萄球外的其他能分解卵黃的菌株有毒性，并使菌落產(chǎn)生黑色卵黃提供營養(yǎng)和有利于觀察卵磷脂環(huán)甘氨酸和氯化鋰對金黃色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。檢驗(yàn)程序——分離培養(yǎng)閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系BP（貝爾德-帕克）平板：檢驗(yàn)程序——分離培養(yǎng)閩北職業(yè)技術(shù)在BP平板上典型菌落為：灰色到黑玉色，圓形，光滑突起，濕潤，直徑2-3mm，邊緣常為淡色（米黃色或灰色），周圍為一混濁帶，在其外緣常有一透明圈。用接種針接觸菌落似有黃油樹膠的粘稠感。長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落，其黑色常較典型菌落淡些，且外觀可能粗燥，質(zhì)地較干燥。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系在BP平板上典型菌落為：灰色到黑玉色，圓形，B-P平板閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系B-P平板閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系革蘭氏陽性，球形，組成葡萄狀檢驗(yàn)程序——鑒定之革蘭氏染色鏡檢閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系革蘭氏陽性，球形，組成葡萄狀檢驗(yàn)程序——鑒定之革蘭氏染色鏡檢驗(yàn)程序——鑒定之凝固酶試驗(yàn)金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生血漿凝固酶，因此對其鑒別的主要試驗(yàn)是測定其凝固酶。方法一：試管法吸取1:4新鮮兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入培養(yǎng)24h的金黃色葡萄球肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL，振蕩搖勻，放36±1℃恒溫箱或水浴內(nèi)，每半小時觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固，即將試管傾斜或倒置時，呈現(xiàn)凝塊者，被認(rèn)為陽性結(jié)果。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系檢驗(yàn)程序——鑒定之凝固酶試驗(yàn)金黃色葡萄球試管法閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系試管法閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系陽性反應(yīng)陰性反應(yīng)不凝固少量、零散凝固明顯的塊狀凝固巨大塊凝固完全凝固，倒置不流動閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系陽性反應(yīng)陰性反應(yīng)不凝固少量、零散凝固明顯的塊狀凝固巨大塊凝固有凝塊血漿均勻混濁生理鹽水方法二：玻片法

在一張潔凈玻片中央加1滴生理鹽水，用接種環(huán)取待檢培養(yǎng)物與其混合（設(shè)陽性和陰性對照）制成菌懸液，若經(jīng)10~20s內(nèi)無自凝現(xiàn)象發(fā)生，則加入人或兔新鮮血漿1環(huán)（不用稀釋），與菌懸液混合，觀察結(jié)果。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系有凝塊血漿均勻混濁生理鹽水方法二：玻片法閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品

兔血漿制備成分：檸檬酸鈉0.106mol/L（31.3gNa3C6H5O7·2H2O溶于1L蒸餾水中）制法：一份加兔血9份混合后離心2000rpm，10min吸取上清液即為兔血漿。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系兔血漿葡萄糖肉浸液肉湯的制備成分：絞碎牛肉500g，氯化鈉5g，蛋白胨10g，磷酸氫二鉀2g，葡萄糖10g，蒸餾水1000mL，pH7.4～7.6。制法：將絞碎之去筋膜無油脂牛肉500g，與蒸餾水混合后放冰箱24h，除去液面之浮油，隔水煮沸半小時，使肉渣完全凝結(jié)成塊，用絨布過濾，并擠壓收集全部濾液，加水補(bǔ)足原量。加入蛋白胨、葡萄糖，氯化鈉和磷酸鹽，溶解后校正pH，煮沸并過濾、分裝，121℃30min高壓滅菌。閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系葡萄糖肉浸液肉湯的制備成分：絞碎牛肉500g，氯化鈉5g，蛋25g樣品+225ml生理鹽水

5mL樣品勻液（1:10）+50mL胰酪胨大豆肉湯血平板36±1℃

24hr

鏡檢與肉浸液肉湯培養(yǎng)血漿凝固酶試驗(yàn)

報(bào)告結(jié)果

定性檢測36±1℃

24hr

36±1℃

24hr

36±1℃6hr

BP平板閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系25g樣品+225ml生理鹽水5mL樣品勻液（1:1025g樣品+225ml生理鹽水

選三個連續(xù)梯度，每個梯度分別取1mL接種之至表面干燥的BP平板（如0.4mL，0.3mL，0.3mL）平板計(jì)數(shù)（分別記錄每種類型的菌落數(shù)）36±1℃

48hr

血平板、鏡檢與肉浸液肉湯培養(yǎng)血漿凝固酶試驗(yàn)報(bào)告結(jié)果金葡菌數(shù)/g(mL)定量檢測（平板法）每種類型選取一個菌落

36±1℃

24hr

36±1℃

6hr

適用于檢測金黃色葡萄球菌數(shù)不小于10/g（mL）的食品計(jì)算辦法：（三個平板中疑似金黃色葡萄球菌黑色菌落數(shù)相加）×血漿凝固酶陽性數(shù)÷5×稀釋倍數(shù)梯度稀釋

閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系25g樣品+225ml生理鹽水選三個連續(xù)梯度，每個梯度第一天器材準(zhǔn)備、樣品處理、增菌培養(yǎng)和BP平板分離接種上午：準(zhǔn)備的器材第一天下午規(guī)格名稱數(shù)量1、樣品處理：魚干、臘肉2、增菌培養(yǎng)3、BP平板制備及分離接種4、采集兔血的準(zhǔn)備：抗凝劑制備、滅過菌的容器和玻璃珠250ml三角瓶1個10×100mm試管6支1ml移液管2支10ml移液管2支直徑為90mm平皿8套250ml量筒1支閩北職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物工程系第一天器材準(zhǔn)備