實驗四、Vc的含量測定(草酸)課件

實驗五、維生素C的定量測定（2，6-二氯酚靛酚法)實驗五、維生素C的定量測定（2，6-二氯酚靛酚法)1一、實驗目的1、學習維生素C2，6-二氯酚靛酚定量測定法的原理和方法。2、進一步熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技術。3、了解蔬菜、水果中維生素C含量情況。

一、實驗目的1、學習維生素C2，6-二氯酚靛酚定量測定法的2二、原理維生素C是人類營養(yǎng)中最重要的維生素之一，缺少它時會產生壞血病，因此又稱為抗壞血酸（ascorbicacid）。它對物質代謝的調節(jié)具有重要的作用。維生素C是具有L系糖型的不飽和多羥基物，屬于水溶性維生素。它分布很廣，植物的綠色部分及許多水果（如橘子、蘋果、草莓、山楂等）、蔬菜（黃瓜、洋白菜、西紅柿等）中的含量更為豐富。

二、原理維生素C是人類營養(yǎng)中最重要的維生素之一，3抗壞血酸分子中存在烯醇式結構——C=C——

OHOH

因而具有很強的還原性，氧化失去兩個氫原子而轉變成脫氫抗壞血酸。維生素C的結構抗壞血酸分子中存在烯醇式結構維生素C的結構4實驗四、Vc的含量測定(草酸)課件52，6—二氯酚靛酚鈉鹽（C12H6O2NCl2Na)染料2，6—二氯酚靛酚鈉鹽（C12H6O2NCl2Na)染料具有氧化性，可氧化抗壞血酸而其本身被還原為無色的衍生物，可作為維生素C含量測定的滴定劑和指示劑。在酸性環(huán)境中氧化型2，6-二氯酚靛酚呈紅色，在中性或堿性溶液中呈藍色。

2，6—二氯酚靛酚鈉鹽（C12H6O2NCl2Na)染料6用2，6—二氯酚靛酚滴定含有抗壞血酸的酸性溶液時，在抗血酸尚未完全被氧化時，滴下的2，6-二氯酚靛酚立即被還原為無色，當抗壞血酸全被氧化時，則滴下的2，6-二氯酚靛酚溶液呈紅色。所以在滴定過程中當溶液從無色轉變?yōu)槲⒓t色時，表示抗壞血酸全部被氧化，此時即為滴定的終點。根據滴定消耗染料標準溶液的體積，可以計算出被測定樣品中抗壞血酸（維生素C）的含量。用2，6—二氯酚靛酚滴定含有抗壞血酸的酸性溶7三、器材1、研缽2、移液管3、容量瓶4、錐形瓶5、微量滴定管（5ml）6、漏斗7、紗布8、濾紙9、分析天平三、器材1、研缽8附微量滴定管使用：附微量滴定管使用：9座式微量滴定管夾式微量滴定管座式微量滴定管夾式微量滴定管10微量滴定管的操作

1、檢查：用蒸餾水檢查滴定管的活塞是否漏水，活塞轉動是否靈活。2、裝滴定劑：搖勻試劑溶液，用試劑潤洗滴定管2-3次，約裝10-15ml左右。3、排氣泡：調節(jié)起始刻度（最好在整mL的刻度處，或調零，并記錄初始刻度數。4、滴定：勿頂活塞，防漏液，輕輕轉動活塞，滴定時邊用手腕輕輕搖動錐形瓶，近終點時要“半滴”操作——沖洗。微量滴定管的操作

1、檢查：用蒸餾水檢查滴定管的活塞是否漏水11V1讀數偏小V2正確讀數V3讀數偏大V1讀數偏小125、觀察顏色的變化和讀數。注意滴定管要垂直，視線與刻度平行，保留小數點后三位。6、滴定完畢，清洗干凈，涼干后在活塞處放一小紙片存放。5、觀察顏色的變化和讀數。注意滴定管要垂直，視線與刻度平行，13四、試劑和材料1、蘋果、Vc注射液

2、1％、2％草酸溶液3、2，6-二氯酚靛酚溶液100ml/組稱取0.21g碳酸氫鈉，0.26g2,6-二氯酚靛酚，溶于250ml蒸餾水中，稀釋到1000ml.過濾，裝入棕色瓶內，置冰箱內備用，保存不超過3天。每次臨用前用新配制的標準抗壞血酸溶液標定。已配好全班公用。四、試劑和材料1、蘋果、Vc注射液144、標準抗壞血酸溶液準確稱取純抗壞血酸結晶100mg溶于1％草酸溶液定容到100ml。裝入棕色瓶中貯存冰箱內。（已配好，全班公用）4、標準抗壞血酸溶液15五、操作五、操作161、維生素C提取液制備

待測樣品1：水洗干凈整株新鮮蔬菜或整個新鮮水果，用紗布或吸水紙吸干表面水分。然后稱取20g，加入20ml2％草酸，用研缽研磨，四層紗布過濾，反復抽提2-3次，（紗布可用少量2％草酸洗幾次）合并濾液，定容至50ml（濾液混濁可離心）備用。1、維生素C提取液制備172、標定準確量取1ml標準抗壞血酸溶液加入9ml1％草酸溶液于100ml錐形瓶。然后用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定，以生成為微紅色持續(xù)15秒不退色為終點。計算2，6-二氯酚靛酚溶液的濃度，以每ml2，6-二氯酚靛酚溶液相當于抗壞血酸的mg數來表示。（取10ml1％草酸液做空白對照，按以上方法滴定）2、標定183、滴定量取10ml樣品1提取液于錐形瓶中。用微量滴定管，以2，6-二氯酚靛酚溶液滴定樣品提取液，呈微弱的玫瑰色，持續(xù)5秒鐘不退色為終點，記錄所用2，6-二氯酚靛酚的ml數。注意整個滴定過程不要超過2分鐘。另取10ml1％草酸做空白對照滴定。樣品及空白同時各做二份。3、滴定19注意事項(1)某些水果、蔬菜（如橘子、西紅柿等）漿狀物泡沫太多，可加數滴丁醇或辛醇。(2)整個操作過程要迅速，防止還原型抗壞血酸被氧化。滴定過程一般不超過2min。滴定所用的染料不應小于1ml或多于4ml，如果樣品含維生素C太高或太低時，可酌情增減樣液用量或改變提取液稀釋度。注意事項(1)某些水果、蔬菜（如橘子、西紅柿等）漿狀物泡沫20(3)本實驗必須在酸性條件下進行。在此條件下，干擾物反應進行得很慢。(4)干擾滴定因素有：

色素：若提取液中色素很多時，滴定不易看出顏色變化，可用白陶土脫色，。

還原劑：樣品中可能有其它雜質還原二氯酚靛酚，但反應速度均較抗壞血酸慢，因而滴定開始時，染料要迅速加入，而后盡可能一點一點地加入，并要不斷地搖動三角瓶直至呈粉紅色，于15s內不消退為終點。(5)提取的漿狀物如不易過濾，亦可離心，留取上清液進行滴定。(3)本實驗必須在酸性條件下進行。在此條件下，干擾物反應進21實驗四、Vc的含量測定(草酸)課件22實驗四、Vc的含量測定(草酸)課件23實驗四、Vc的含量測定(草酸)課件24六、結果計算（VA-VB）*S維生素Cmg數/100g樣品=——————*100

VA為滴定樣品提取液所用的2，6-二氯酚靛酚溶液的mL數VB為滴定空白對照所用的2，6-二氯酚靛酚溶液的mL數S為1mL染料能氧化抗壞血酸mg數W為待測樣品的重量。