微生物檢驗實驗室軍團菌屬檢驗標準操作規(guī)程

微生物檢驗實驗室軍團菌屬檢驗標準操作規(guī)程1.概述軍團菌屬細菌是一群病死率較高的急性呼吸道傳染病的病原菌，該菌屬包括45個種（60多個血清型），已從人體分離出的有嗜肺軍團菌、米克戴德軍團菌、波茲曼軍團菌等20種。嗜肺軍團菌是軍團菌屬的代表種。2.標本類型痰等標本。3.鑒定3.1形態(tài)與染色革蘭陰性纖細小桿菌。熒光顯微鏡下可見被熒光抗體包被的發(fā)亮菌體。3.2培養(yǎng)特性在緩沖活性炭酵母提取物瓊脂（BCYE）培養(yǎng)基上，本菌生長緩慢，應(yīng)每日觀察生長情況，在BCYE上需要3~5日方可見菌落，數(shù)日后增大到4~5mm，菌落呈灰白色，有光澤。3.3生化反應(yīng)大部分菌株氧化酶試驗陽性，不分解糖類，動力、明膠、馬尿酸鈉試驗陽性，觸酶試驗陽性，多數(shù)菌株產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶。3.4鑒別要點3.4.1本菌屬特征革蘭陰性細小桿菌，有多形性，蘇丹黑染色可顯藍黑色或藍灰色脂肪滴。在BCYEα平板上3~5日形成藍灰色、有光澤的菌落。普通瓊脂平板上不生長。3.4.2根據(jù)在BCYEα瓊脂上生長的菌落，在紫外線365nm燈光照射下產(chǎn)生紅色熒光可推斷為紅色軍團菌；產(chǎn)生藍白色熒光，如氧化酶陽性，則為博氏和其他軍團菌，如氧化酶陰性，則為杜氏、戈氏、徹氏、圖森山軍團菌；產(chǎn)生無色熒光，則根據(jù)馬尿酸水解、氧化酶及其他生化反應(yīng)進一步鑒定。3.5操作步驟3.5.1涂片、染色革蘭陰性桿菌。3.5.2鑒定直接熒光抗體染色，生化反應(yīng)。4.藥敏參見《藥物敏感性試驗標準操作規(guī)程》及CLSIM100-S20最新版本文件。5.質(zhì)量控制見《質(zhì)量管理程序》。6.檢驗結(jié)果解釋與分析本菌雖然營養(yǎng)要求和培養(yǎng)環(huán)境要求嚴格，但在外環(huán)境分布較廣，并可長期存活，致使通過污染水源空氣而傳播致病。從臨床或環(huán)境標本中分離軍團菌時，需先對標本作酸處理（軍團菌耐酸而其他雜菌則易被酸殺滅），并使用選擇性瓊脂平板（在BCYEα瓊脂平板上加入抗生素等抑制雜菌），以提高軍團菌的檢出率。軍團菌對多種抗菌藥物敏感，包括紅霉素、利福平、氨基糖苷類抗生素、β-內(nèi)酰胺抗生素、復方磺胺甲惡唑、多西環(huán)素和福喹諾酮類等。7.臨床意義軍團菌是一種以肺部感染為主的全身性疾病，嗜肺軍團菌是軍團菌病的病原菌，可通過空氣傳播進入肺臟，臨床表現(xiàn)多種多樣。易于侵犯患有慢性器質(zhì)性疾病、免疫功能低下的病人。也可從河水、空調(diào)的冷卻水、浴室和霧化器等處分離到，為醫(yī)院感染的主要致病菌之一。8.鑒定流程痰痰BCYEα瓊脂平板3~5日有灰白色有光澤菌落熒光抗體染色，生化鑒定軍團菌屬涂片染色G-桿菌參考文獻[1]周庭銀編著.臨床微生物學診斷與圖解，第二版，上海：上?？茖W技術(shù)出版社，2007[2]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編，全國臨床檢驗操作規(guī)程，第三版，南京：東南大學出版社，2006[3]中國合格評定國家認可委員會，CNAS-GL23:2008醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在臨床微生物學檢驗領(lǐng)域的指南，