紫外可見分光光度計的介紹及使用課件

紫外可見分光光度計紫外可見分光光度計1主要內容1儀器構成及原理2分光光度計的使用

波長掃描

定量測定3注意事項主要內容1儀器構成及原理2紫外可見分光光度計的介紹及使用ppt課件3一儀器原理紫外可見吸收光譜主要產生于分子價電子在能級間的躍遷。利用一定頻率的紫外--可見光照射被分析的物質，引起分子中價電子的躍遷，它將有選擇地被吸收。吸收光譜可以反映出物質的特征。

一儀器原理紫外可見吸收光譜主要產生于4物質對光的選擇性吸收－溶液對光的作用

溶液對光的作用示意圖物質對光的選擇性吸收－溶液對光的作用溶液對光的作用示意圖5I0入射光輻射強度I透射光輻射強度T透射比a吸光系數(shù)ε摩爾吸光系數(shù)光吸收遵循朗伯-比爾定律：I0入射光輻射強度光吸收遵循朗伯-比爾定律：6溶液對光吸收示意圖溶液對光吸收過程溶液對光吸收示意圖溶液對7偏離朗伯比爾定律的原因-化學因素

朗伯-比爾定律的假設條件一：

入射光為單色光。朗伯-比爾定律的假設條件之二：

吸收粒子是獨立的，彼此之間無相互作用。比爾定律適用于稀溶液。吸光組分的化學變化：

吸光組分的締合、離解，互變異構，絡合物的逐級形成，以及與溶劑的相互作用等，都將導致偏離比耳定律。偏離朗伯比爾定律的原因-化學因素朗伯-比爾定律的假設條件一8組成：光源、單色器，狹縫、樣品池、檢測器1．光源：①能提供連續(xù)的輻射；②光強度足夠大；③在整個光譜區(qū)內光譜強度不隨波長有明顯變化；④光譜范圍寬；⑤使用壽命長，價格低。

鎢燈——可見光區(qū)320～2500nm氫燈或氘燈——紫外光區(qū)195－375nm

組成組成：光源、單色器，狹縫、樣品池、檢測器組成92．單色器：包括狹縫、準直鏡、色散元件單色器是分光光度計的心臟部分，它的作用是把來自光源的混合光分解為單色光并能隨意改變波長。它的主要組成部件和作用是：①入射狹縫——限制雜散光進入。②色散元件——即棱鏡或光柵，是核心部件，可將混合光分解為單色光。

③準直鏡——把來自入射狹縫的光束轉化為平等光，并把來自色散元件的平等光聚焦于出射狹縫上。④出射狹縫——只讓特定波長的光射出單色器。

2．單色器：包括狹縫、準直鏡、色散元件103.吸收池玻璃——由于吸收紫外UV光，僅適用于可見光區(qū)；石英——適用于紫外和可見光區(qū)4．檢測器：將光信號轉變?yōu)殡娦盘柕难b置光電管光電倍增管二極管陣列檢測器5．記錄裝置：訊號處理和顯示系統(tǒng)3.吸收池11紫外可見分光光度計的介紹及使用ppt課件12紫外可見分光光度計的介紹及使用ppt課件13開始程序啟動按方法設定按鈕掃描范圍讀數(shù)方式掃描速度按樣品名輸入按鈕或將空白樣品分別放入參比池和樣品池進行用戶基線校正按按鈕將樣品放入樣品池開始測量按按鈕開始測量打印數(shù)據(jù)按按鈕打開數(shù)據(jù)處理界面數(shù)據(jù)檢索峰值檢出圖譜平滑、求導二波長掃描開始程序啟動按方法設定按鈕掃描范圍讀數(shù)方式掃描速度按樣品名輸14啟動UVSolution軟件

打開儀器主機電源。用鼠標點擊Windows開始菜單中的[HitachiApplications]選項中的[UVSolutions2.0]選項。或者直接在桌面上雙擊UVSolution圖標。啟動UVSolution軟件

打開儀器主機電源。用鼠標點擊152運行UVSolution軟件。軟件將自動配置計算機的串行口（RS232Port）見圖2運行UVSolution軟件。軟件將自動配置計算機的16儀器在初始化過程中進行如下自檢工作：ROM檢測RAM檢測波長步進電機運轉檢測氘燈點亮檢測鎢燈點亮檢測儀器波長校正儀器在初始化過程中進行如下自檢工作：173儀器主機開始初始化。見圖3儀器主機開始初始化。見圖18儀器主機初始化完畢，進入工作狀態(tài)。儀器主機初始化完畢，進入工作狀態(tài)。19測量參數(shù)設置1在[Edit]菜單中選擇[Method…]選項，或按按鈕。出現(xiàn)下列窗口。

測量參數(shù)設置1在[Edit]菜單中選擇[Method…]20General:總體設置頁面Measurement測量:

Wavelengthscan波長掃描Timescan時間掃描

Photometry定波長測量Operator操作者:輸入操作者的姓名Instrument儀器:儀器型號由軟件自動從儀器主機獲得。UseSampleTable使用樣品表:選擇是否使用樣品表。Comments備注:填寫一些備注信息。[Load]按鈕:用于裝載原來保存的方法文件。[Save]按鈕:保存當前的設置參數(shù)。[SaveAs]按鈕:將當前設置參數(shù)另存為一個方法文件。General:總體設置頁面21Instrument儀器參數(shù)設置頁面Instrument儀器參數(shù)設置頁面22Datamode讀數(shù)顯示方式，選擇Abs吸光度，波長掃描的起止范圍一般為190-800，狹縫值一般為2Light一般選擇“Auto”Datamode讀數(shù)顯示方式，選擇Abs吸光度，波長掃描的23Monitor顯示頁面

Monitor顯示頁面

24Processing數(shù)據(jù)處理頁面

Processing數(shù)據(jù)處理頁面25Report報告結果頁面

Report報告結果頁面26樣品名設置，備注信息及文件名輸入樣品名設置，備注信息及文件名輸入27基線校正用戶基線校正方法：可將scanspeed設小一些；進行樣品掃描時，可設大一些。將空白樣品分別放入樣品室的參比光路和樣品光路。按按鈕系統(tǒng)基線校正方法。使用空氣作為參比和樣品。按按鈕出對話框見圖，選擇System后按[OK]按鈕，進行系統(tǒng)基線校正?；€校正用戶基線校正方法：可將scanspeed設小一些28測量有兩種方法可以開始測量：使用菜單方式選擇[Spectrophotometer]菜單下Start]選項開始測量使用按鈕方式：按按鈕開始測量如果要終止掃描按按鈕。測量有兩種方法可以開始測量：29二光度掃描開始程序啟動按方法設定按鈕按樣品名輸入按鈕或將空白樣品分別放入參比池和樣品池將樣品放入樣品池開始測量按按鈕開始測量打印數(shù)據(jù)按按鈕打開數(shù)據(jù)處理界面進行用戶基線校正按按鈕定量測量設置波長輸入標樣二光度掃描開始程序啟動按方法設定按鈕按樣品名輸入按鈕或將空白30測量參數(shù)設置在[Edit]菜單中選擇[Method…]選項。出現(xiàn)下列設置窗口.測量參數(shù)設置在[Edit]菜單中選擇[Met31具體操作程序Method:general:Measurement測量方式選擇Photometry（光度計測量）

Quantitation定量參數(shù)設置頁面：具體操作程序Method:32在measure中選擇波長wavelength，在Calibration中選擇“1storder”，“2storder”，“3storder”，也可以不校準。在concertration中鍵入標準濃度單位。3.Instrument在measure中選擇波長wavelength，334

standards標準參數(shù)設置

鍵入標系的樣品濃度及名稱4standards標準參數(shù)設置345吸光度自動校零在開始測試前，需要進行吸光度校零。在樣品室參比和樣品光路中分別放入空白樣品。按按鈕進行吸光度校零。6在wavelength中設定掃描的最大吸收波長，7放入標樣，選中第一個標樣，點measure依次測定完成后自動給出標準曲線。8選擇SAMPLE進行樣品測定，全部測定完后點擊END，此時自動生成一個文件，打開此文件，另存為所需的文件名。9關機時，先退出UVsolution，再關電腦，最后關光度計上的power。5吸光度自動校零35三注意事項1.開機預熱15分鐘左右。2.測定時應注意：參照池和吸收池應是一對經校正好的匹配的吸收池，材料和規(guī)格一致。使用前后應將洗手池洗凈，測量時不能用手接觸窗口。已匹配好的比色皿不能用爐子和火焰干燥，不能加熱，以免引起光程長度上的改變。三注意事項1.開機預熱15分鐘左右。363.測量條件的選擇：選擇適宜波長的入射光:由于有色物質對光有選擇性吸收,為了使測定結果有較高的靈敏度,必須選擇溶液最大吸收波長的入射光?？刂莆舛華的準確的讀數(shù)范圍:由朗伯-比耳定律可知,吸光度只有控制在0.2~0.7讀數(shù)范圍內時,測量的準確度較高.選擇參比溶液：參比溶液是用來調節(jié)儀器工作零點的。若樣品溶液，試劑，顯色劑無色可用蒸餾水作參比溶液；反之應采用不加顯色劑的樣品液作參比溶液。4.用完后先關程序，再關儀器開關，關電源，關閉計算機。

5.正確登記，將儀器及實驗臺擦干凈。3.測量條件的選擇：37謝謝大家謝謝大家