食品檢驗-糖課件

糖分析檢測1糖分析檢測1單糖的結(jié)構(gòu)基礎知識糖的表示式2

單糖是多羥基醛或酮。從3碳糖至8碳糖天然界都有存在。每個糖都有兩個以上的手性碳原子，它們的命名規(guī)則是：碳原子的排列順序是從醛基或者酮基基團為C-1開始的。單糖在水溶液中形成半縮醛環(huán)狀結(jié)構(gòu)，即成呋喃糖和吡喃糖。具有六元環(huán)結(jié)構(gòu)的糖——吡喃糖（pyranose）具有五元環(huán)結(jié)構(gòu)的糖——呋喃糖（furanose）糖處游離狀態(tài)時用Fischer式表示，苷化后成環(huán)用Haworth式表示單糖的結(jié)構(gòu)基礎知識糖的表示式2單糖是多羥基醛或酮。單糖的結(jié)構(gòu)基礎知識

醛糖和酮糖甘油醛和二羥基丙酮有相同的化學組成，C3H6O3，但是不同的結(jié)構(gòu)，它們屬于結(jié)構(gòu)異構(gòu)體。3

立體異構(gòu)

甘油醛有一個不對成碳原子（手性碳原子），所以它有兩個立體異構(gòu)體，即D-和L-型。并且互為鏡像異構(gòu)體。單糖的結(jié)構(gòu)基礎知識醛糖和酮糖3立體異構(gòu)單糖的結(jié)構(gòu)基礎知識Fischer與Haworth的轉(zhuǎn)換及其相對構(gòu)型

4

單糖成環(huán)后新形成的一個不對稱碳原子稱為端基碳（anomericcarbon）。生成的一對差向異構(gòu)體（anomer）有α、β二種構(gòu)型。從Fischer式看（C1與C5的相對構(gòu)型）：C1-OH與原C5（六碳糖）或C4（五碳糖）-OH，順式為α，反式為β。從Haworth式看：C1-OH與C5（或C4）上取代基之間的關系：同側(cè)為β，異側(cè)為α。單糖的結(jié)構(gòu)基礎知識Fischer與Haworth的轉(zhuǎn)換及其相單糖的結(jié)構(gòu)基礎知識5糖的絕對構(gòu)型（D、L）

絕對構(gòu)型D-和L-的判斷是從醛基或者酮基開始最遠的手性碳原子。

Fischer式中最后第二個碳原子上-OH向右的為D型，向左的為L型。Haworth式中C5向上為D型，向下為L型。單糖的結(jié)構(gòu)基礎知識5糖的絕對構(gòu)型（D、L）Fischer式單糖的結(jié)構(gòu)基礎知識環(huán)的構(gòu)象6

呋喃糖五元環(huán)接近在同一平面上。唯醛糖的C3、酮糖的C4超出平面0.5A，幾乎是固定的結(jié)構(gòu)。

六元環(huán)有船式和椅式構(gòu)象，在溶液或固體狀態(tài)是都是椅式構(gòu)象，不是C1便是1C。[C表示椅式（chairform）]。

以C2、C3、C5、O四個原子構(gòu)成的平面為準，C4處面上，C1處面下的標為4C1，簡稱C1，反之1C4簡稱1C。Angyal用總自由能來分析構(gòu)象式的穩(wěn)定性，比較二種構(gòu)象式的總自由能差值，能量低的是優(yōu)勢構(gòu)象。單糖的結(jié)構(gòu)基礎知識環(huán)的構(gòu)象6呋喃糖五元環(huán)接近在

多糖研究的基本步驟1、多糖鏈的釋放、提?。ㄋ?、堿解、酶解、堿解結(jié)合酶解）2、多糖的分離純化（蛋白質(zhì)去除、脫色素、小分子雜質(zhì)、凝膠柱色譜、離子交換柱色譜、分級沉淀）3、多糖純度檢測（UV、凝膠過濾、電泳、HPLC)4、多糖一級結(jié)構(gòu)的測定（糖基組成、連接方式、分子量、異頭碳構(gòu)型、分支等）7多糖研究的基本步驟7糖分析常用方法：

化學法部分和完全酸水解、乙酰解、甲醇解（水解成單糖）高碘酸氧化、Smith降解(糖苷鍵位置，單糖組成和分子比例，聚合度、分支)甲基化分析（糖苷鍵位置，包括分支點、單糖組成和分子比例）

生物法酶法（糖基連接次序，

-/-異頭體）

色譜法

-PC,TLC（單糖組成）

-HPLC和GC（單糖組成和分子比例，定量分析）

波譜法UV（純度檢查）IR（

-/-異頭體、吡喃環(huán)/呋喃環(huán)）MS（分子量等）NMR（

-/-異頭體、糖基連接次序）8糖分析常用方法：化學法8多糖分析方法1.單糖組成分析2.糖苷鍵鏈接分析3.異構(gòu)體分析4.多糖分子量的測定5.糖的連接順序6.保健食品中多糖的定性定量測定方法9多糖分析方法1.單糖組成分析9水解：多糖水解成單糖。完全酸水解：多糖與強酸（濃硫酸、濃鹽酸）在（80-100℃）水解

4-10h。操作：取樣20mg，加0.5-1mol/L硫酸溶液２ml，充氮除氧封管，在１００℃水解１0小時，水解液用碳酸鋇中和，離心過濾，濾液備用?；?0mol／L三氟醋酸（TFA），120℃恒溫lh，或2moI／LTFA，100℃恒溫6h。部分酸水解：0.02mol/LHCl,多糖鏈上呋喃糖苷鍵、位于末端的糖苷鍵和支鏈上的糖苷鍵易水解特性。水解后，醇析、離心，將上清液和沉淀分別進行分析。乙酰解：將多糖與乙酐、冰醋酸、濃硫酸等混合反應，可得到乙酰化單糖，用于單糖組成分析。甲醇解：多糖與HCl-CH3OH混合反應，半縮醛甲基化，減少異構(gòu)物，有利分辨。

1、單糖組分的確定:10水解：多糖水解成單糖。1、單糖組分的確定:101)紙層析(Paperchromatography,PC)：濾液與標準品同時點于濾紙上，展開劑展開后，顯色，根據(jù)樣品和標準品的Rf值和斑點顏色進行鑒定。溶劑系統(tǒng)

被分離的混合物乙酸乙酯：吡啶：水（2：1：2）乙酸乙酯：乙酸：水（3：1：3）木糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖正丁醇：乙酸：水（4：1：5）葡萄糖，半乳糖，甘露糖，木糖，L-巖藻糖，葡萄糖醛酸，氨基葡萄糖及氨基半乳糖正丁醇：吡啶：水（6：4：3）鼠李糖、巖藻糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖等★111)紙層析(Paperchromatography,PC苯胺-二苯胺顯色劑：80℃、10min,醛糖顯藍、藍紫色或藍綠色，酮糖呈棕色，檢出限量為10ug。苯胺-鄰苯二甲酸顯色劑：105℃、5-10min,戊糖顯鮮紅色,巳醛糖及糖醛酸為棕色,在紫外光下有熒光,而一般戊糖則無熒光,可用來區(qū)別戊糖及巳糖,氨基葡萄糖呈淺棕斑點,紫外下呈黃綠色熒光，靈敏度為1ug。12苯胺-二苯胺顯色劑：80℃、10min,醛糖顯藍、藍紫色２）薄層層析（ThinLayerChromatography，

TLC)：硅膠（常用0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液調(diào)配）。

水解后薄層檢測：先將樣品酸水解后，點樣展開檢測。薄層酸水解檢測:將點有待測樣品的高效薄層板在12N鹽酸蒸氣中60

C水解40min，取出薄層板待酸揮發(fā)干以后，將標準品點于同一塊板上，然后置于層析缸內(nèi)展開，吹干展開劑后噴糖顯色劑，與標準品進行對照。

13２）薄層層析（ThinLayerChromatograp苦豆子膠多糖組分的薄層色譜圖1、甘露糖2、半乳糖3、混合標準單糖4、苦豆子膠多糖水解物例：

食品研究與開發(fā)2006，27（11）：16114苦豆子膠多糖組分的薄層色譜圖1、甘露糖例：食品研究與開發(fā)2３）HPLC法：A:直接HPLC法：用HRC-NH2色譜柱，乙腈-水（７5：25）為流動相，示差檢測器。面積歸一法，還可計算各組分百分含量。B:柱前衍生化HPLC法：1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化HPLC測定單糖含量，PMP是最好衍生化試劑之一，衍生物不易裂解，分析時不產(chǎn)生異構(gòu)峰，且在250nm處有強烈的紫外吸收。（C18）15３）HPLC法：15例：標準單糖HPLC圖譜庫拉索蘆薈多糖水解衍生物的HPLC圖譜木立蘆薈多糖水解衍生物的HPLC圖譜食品科學，2006，27：19416例：標準單糖HPLC圖譜庫拉索蘆薈多糖水解衍生物的HPLC圖4)氣相色譜法（GasChromatography,GC)或GC-MS法：先衍生化成硅烷化衍生物，GC分離后檢測糖的組分及摩爾比?？膳cMS聯(lián)用GC-MS。凡是能夠氣化且穩(wěn)定、不具腐蝕性的液體或氣體，都可用氣相色譜法分析。有的化合物沸點過高難以氣化或熱不穩(wěn)定而分解，則可通過化學衍生化的方法，使其轉(zhuǎn)變成易氣化或熱穩(wěn)定的物質(zhì)后再進行分析。局限性：不適于高沸點、難揮發(fā)、熱穩(wěn)定性差的高分子化合物和生物大分子化合物分析。174)氣相色譜法（GasChromatography,例：混合標準單糖衍生化GC圖譜白芷多糖水解衍生化產(chǎn)物GC圖譜18例：混合標準單糖衍生化GC圖譜白芷多糖水解衍生化產(chǎn)物GC圖譜１）高碘酸氧化法：可以選擇性斷裂糖分子中鄰二羥基和鄰三羥基處,生成相應的多糖醛、甲酸(或甲醛),反應定量進行，每開裂一個C-C鍵消耗一分子高碘酸。如,1,2-,1,4-,1,6-糖苷鍵能夠反應，而1,3-糖苷鍵的則不能，且不同位置的縮合，高碘酸的消耗量和甲酸生成量不同，用氫氧化鈉滴定甲酸的量,可以判斷糖苷鍵位置、直鏈多糖聚合度、支鏈多糖的分支數(shù)目等。1,3-不消耗高碘酸

1,2-；1,4-

消耗1mol高碘酸1,6-消耗2mol高碘酸,

生成1mol甲酸操作:一般取25mg樣品,溶于20mmol／L高碘酸鈉溶液50ml中,在５-１5度暗處氧化14天，取25ml加乙二醇１ml,用0.12mol/L氫氧化鈉溶液滴定，以測定甲酸的生成量。2、糖苷鍵連接位置的測定：19１）高碘酸氧化法：可以選擇性斷裂糖分子中鄰二羥基和鄰三羥基處1-2糖苷鍵1-3糖苷鍵２）Smith降解法：是過碘酸氧化的改良反應，即在高碘酸氧化后，NaBH4還原，再用弱酸部分水解。水解液中和后，紙色譜法分離鑒定，以確定糖苷鍵的連接位置，若有葡萄糖檢出，肯定有１,３-糖苷縮合。201-2糖苷鍵1-3糖苷鍵２）Smith降解法：是過碘酸氧化的1-4糖苷鍵1-6糖苷鍵211-4糖苷鍵1-6糖苷鍵213）甲基化分析：

羥基的全甲基化：強堿條件下（使糖基的自由羥基離子化，生成穩(wěn)定的碳陰離子），與碘甲烷(或硫酸二甲酯，三甲基氯硅烷)作用，甲基化化生成甲醚。

甲基化產(chǎn)物的水解、還原、乙酰化：酸水解（90%甲酸）得到甲基化單糖，再經(jīng)NaBH4還原為對堿穩(wěn)定的糖醇，然后用乙酸酐在吡啶中乙?；玫礁鞣N部分甲基化的糖醇乙酰衍生物。

GC和GC-MS分析：與標準譜圖歸屬比較，可確定單糖組分的種類、比例和糖苷鍵的位置。異頭碳糖苷鍵構(gòu)型、糖基順序無法確定。223）甲基化分析：224）酶法①內(nèi)切糖苷酶F（天冬酰胺-N-乙酰葡糖胺糖苷酶）②內(nèi)切糖苷酶H（β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶）③唾液酸酶④α-半乳糖苷酶⑤β-N-乙酰氨基己糖糖苷酶⑥α-甘露糖苷酶⑦β-甘露糖苷酶234）酶法①內(nèi)切糖苷酶F（天冬酰胺-N-乙酰葡糖胺糖苷酶）2１）紅外光譜（infraredspectrograph，IR）法：紅外光譜法是一種專屬性很強、應用較廣（固體、液體、氣體樣品）的鑒別方法。在800nm-20um連續(xù)光掃描記錄下來的圖譜。原理：由分子的振動及轉(zhuǎn)動能級躍遷而引起的。３、異頭體的測定：24１）紅外光譜（infraredspectrograph，I

異頭體類型：型糖苷鍵在８９０cm-1左右處有特征吸收；型糖苷鍵在８４０cm-1處有特征吸收。呋喃糖和吡喃糖：呋喃糖在924±13，

879±7cm-1，吡喃糖相應在917±13，

770±14cm-1處。吡喃糖種類：

-D-葡萄吡喃糖特征吸收在855833cm-1處，-D-葡萄吡喃糖905876cm-1。

磷酸基、磺酸基等取代基團信息IR能給的糖結(jié)構(gòu)信息：25異頭體類型：型糖苷鍵在８９０cm-1左右處有特征吸收；２）核磁共振（NuclearMagneticResonance,NMR）法：1H-NMR中:C1質(zhì)子信號小于5ppm，為型，如4.53信號為型糖苷鍵；型糖苷鍵常大于5ppm，常在5.4-5.1ppm。13C-NMR中:

型C1:103-105ppm,型97-101ppm.3）酶法：酶促反應的高度專一性，利用糖苷酶，糖苷酶對多糖底物的催化反應，可確認多糖糖苷鍵類型。26２）核磁共振（NuclearMagneticResona

多糖的分子量測定是研究多糖性質(zhì)的一項重要工作。多糖的理化性質(zhì)及活性與多糖的分子量及其分布有關，如右旋糖酐：

分子量為10萬-20萬時能使血液中紅細胞聚集，而分子量為2萬-4萬時，不但不使紅細胞聚集，反而使已聚集的紅細胞解聚，所以不同分子量的右旋糖酐在臨床上有完全不同的應用。又如低分子肝素（4000-6000）：抗血栓藥物；而普通肝素（3000-40000）用于抗凝血。

多糖類藥物的分子量及其分布的測定，在確保生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性以及臨床用藥的安全有效性方面，顯得尤為重要。4、多糖分子量的測定：27多糖的分子量測定是研究多糖性質(zhì)的一項重要工作。多糖數(shù)均和重均分子量：（Numberaverageandweightaveragemolecularweight）

對于多糖來說，其分子鏈的長短可以是一個混合物，在衡量其分子量時，往往是一個平均數(shù)。數(shù)均分子量就是依據(jù)總體分子的個數(shù)，求出分子量來的，如應用化學方法和滲透壓方法測定的即為數(shù)均分子量。重均分子量就是依據(jù)各個分子的重量求出的分子量，如沉降方法，擴散方法，光散射方法測得的分子量屬于重均分子量。按照理論計算，如果重均分子量和數(shù)均分子量數(shù)值相等，這生物大分子樣品屬于均一的樣品，如果重均分子量大于數(shù)均分子量，則這生物大分子樣品為混合品。混合品一定是重均分子量大于數(shù)均分子量，倒過來是不可能的。因此數(shù)均分子量與重均分子量之差，是衡量樣品是否均一的標志。D=Mw/Mn28數(shù)均和重均分子量：28

凝膠過濾法：lgM=a+bV

HPLC法：2005年版藥典收載

專用的凝膠柱（按照所測樣品的分子量大小選擇特定排阻范圍的凝膠柱）

示差檢測器。

GPC（GelPermeationChromatography）專用軟件。分子量、分布等信息。

其它法：質(zhì)譜法（FAB-MS,ESI-MS），凝膠電泳法、滲透壓法、蒸汽壓滲透計法、黏度法、沉淀法等等。多糖分子量測定常用的方法29凝膠過濾法：lgM=a+bV多糖分子量測定常用的方法29lgMw=a+btRMw為標樣的已知重均分子量；

tR為標樣的保留時間。D=Mw/Mn標準葡聚糖樣品多糖30lgMw=a+btRD=Mw/Mn標準葡聚糖樣品多糖305、糖的連接順序：酶法：利用外切酶：

,或

-甘露糖苷酶、

,或

-半乳糖苷酶、

,或

-乙酰氨基葡萄糖苷酶等，從糖鏈的非還原端依次切下相應的單糖。核磁共振（NMR）法：二維NMR315、糖的連接順序：酶法：利用外切酶：,或-甘露糖苷酶6、多糖類藥物定性定量測定方法鑒別:１）一般鑒別：多糖水解成單糖，在濃酸中加熱脫水生成糖醛或衍生物，它們在

萘酚作用下生成有色物質(zhì)。２）溶解度的測定：根據(jù)藥典，多糖類藥物測定在水、有機溶劑、稀堿溶液中的溶解度。大多數(shù)葡聚糖在水中溶解度小，不溶于有機溶劑，但溶于稀堿溶液。酸性粘多糖溶于水。３）比旋度：多糖均有一定的比旋度，按照藥典測定。４）特性黏度：按照藥典黏度測定法。包括：鑒別，檢查，含量測定326、多糖類藥物定性定量測定方法鑒別:包括：鑒別，檢查，含量測純度檢查（雜質(zhì)檢查）:主要為來自原始原料的核酸、蛋白質(zhì)等。常用分光光度法測260nm,280nm有無吸收來判斷。33純度檢查（雜質(zhì)檢查）:33多糖含量測定常用方法:

1）分光光度法

苯酚一硫酸法(DuboiS方法)

：多糖在硫酸作用下水解成單糖，并迅速脫水生成糠醛衍生物，與苯酚反應生成有色化合物，再用分光光度法測定其多糖含量。標準曲線法：1）波長的選擇：選擇待測物質(zhì)的最大吸收波長，這時靈敏度最高，且可以避免其它物質(zhì)的干擾。485nm.2）標準溶液的配制及標準曲線的繪制：以濃度為橫坐標，吸收度為縱坐標，來繪制一條標準曲線。3）待測物的含量計算：直接將待測物質(zhì)的吸光值代入標準曲線計算.34多糖含量測定常用方法:標準曲線法：342）滴定法

斐林試劑法:

該方法是先準確吸取斐林試劑甲、乙液各5mL于l50mL錐形瓶中，加熱至沸騰，而后用標準葡萄糖液滴定，直至溶液藍色褪盡為止，紀錄滴定體積。然后再準確吸取斐林溶液甲、乙液各5mL，于另一l50mL錐形瓶中，準確加入2mL待測液，加熱至沸騰，然后用標準葡萄糖液滴定，直至溶液藍色褪盡為止，紀錄滴定體積。最后，用差值法，計算待測液含糖量。該方法優(yōu)點是所需待測液少、方便、準確、并且現(xiàn)像明顯、所需藥品價格便宜、精密度高。滴定分析法的計算

設A為待測組分，B為標準溶液，滴定反應為：

aA+bB?cC+dD

當A與B按化學計量關系完全反應時，則：

nA:nB=a:b

求待測溶液濃度CA:

若已知待測溶液的體積VA

和標準溶液的濃度CB和體積VB，則

VA.CA=a/bVB.CB

CA=a/b.VB.CB/VA

352）滴定法滴定分析法的計算

設A為待測3）色譜法（內(nèi)標法）

（1）氣相色譜法

困難是多糖本身沒有足夠的揮發(fā)性。利用水解技術，將多糖水解為單糖之后進行衍生化反應，再用GC進行分析，以木糖醇為內(nèi)標物，目前采用的衍生化方法主要是甲基化法（三甲基氯硅烷）。（2）高效液相色譜法(外標法)

A:直接HPLC法：用HRC-NH2色譜柱，乙腈-水（７5：25）為流動相，示差檢測器。B:柱前衍生化HPLC法：PMP是最好衍生化試劑之一，衍生物不易裂解，分析時不產(chǎn)生異構(gòu)峰，且在250nm處有強烈的紫外吸收。（C18）363）色譜法（內(nèi)標法）364)生物檢定法：如肝素，延長新鮮兔＼豬血凝血時間。目前使用多糖的檢測方法包括苯酚分光光度法、色譜法和滴定法等。

374)生物檢定法：373838核磁共振在多糖結(jié)構(gòu)的應用一維NMR

1核磁共振氫譜（1HNMR譜）

2碳核磁共振譜（13CNMR譜）二維NMR11H-1HCOSY

2、TOCSY(全相關)譜

3、1H-13CCOSY譜（HMQC）

4、遠程1H-13CCOSY譜（HMBC）

5、NOESY譜

6、INADEQUATE譜

39核磁共振在多糖結(jié)構(gòu)的應用一維NMR39核磁共振氫譜（1HNMR譜）

核磁共振氫譜（1HNMR），也稱為質(zhì)子磁共振譜（protonmagneticresonance，pmr），是發(fā)展最早，研究得最多，應用最為廣泛的核磁共振波譜。在較長一段時間里核磁共振氫譜幾乎是核磁共振譜的代名詞。原因:一：質(zhì)子的天然豐度接近100%,核磁共振測定的絕對靈敏度是所有磁核中最大的。在PFTNMR（脈沖傅立葉變換核磁共振譜儀）出現(xiàn)之前，天然豐度低的同位素，如13C等的測定很困難。二：1H是有機化合物中最常見的同位素，1HNMR譜是有機物結(jié)構(gòu)解析中最有用的核磁共振譜之一。

在多糖中的應用

可給出的信號有在4.3-5.9ppm的異頭質(zhì)子.可以判斷異頭碳的構(gòu)型(δ>5.00為α-型,δ<5.00為β-型).

在1.1-1.3ppm處的6-位脫氧糖的甲基雙峰.

在2.0-2.2ppm處的乙酰氨基的甲基峰.

在3.0-4.2ppm的非常小的區(qū)域中,結(jié)果嚴重重疊不能給出結(jié)構(gòu)信息.40核磁共振氫譜（1HNMR譜）核磁共振氫譜（1HNMR碳核磁共振譜（13CNMR譜）1BB譜(Protonbroadbanddecoupling):

最常見的碳譜是寬帶全去偶譜(BB)，又稱質(zhì)子噪聲去耦譜，質(zhì)子噪聲去耦譜可以使碳譜簡化，它損失了13C和1H之間的耦合信息，每一種化學等價的碳原子只有一條譜線。碳譜的化學位移對核所受的化學環(huán)境是很敏感的，它的范圍比氫譜寬得多，一般在0-250ppm。對于分子量在300-500的化合物，碳譜幾乎可以分辨每一個不同化學環(huán)境的碳原子，而氫譜有時卻嚴重重迭。2DEPT譜(Distortionlessenhencementbypolarizationtransfer):DEPT譜即無畸變極化轉(zhuǎn)移增益法。可在質(zhì)子去偶,又可在質(zhì)子不去偶的條件下測定,由于BB譜無法確定譜線所屬的碳原子的級數(shù)，所以可以通過改變照射1H的第三脈沖寬度()，使作45，90，135變化并測定其13CNMR譜。

=45時，CH1和CH2和CH3均為正號。

=90時，只有CH1有正信號，而CH2和CH3信號均為0。

=135時，只有CH1和CH3有正信號，而CH2有負信號。

41碳核磁共振譜（13CNMR譜）1BB譜(Proton在多糖中的應用

確定異頭碳的數(shù)目:異頭碳的共振一般出現(xiàn)在90-112ppm.

確定構(gòu)型

:一般來說α-型連接的C1化學位移比β-型低1.5-3.0,α-型的化學位移為97-101，β-型103-105，來確定確定構(gòu)型。

預言多糖的聚合程度:一般還原末端的C-1出現(xiàn)在90-98ppm間,而取代碳水化合物的C-1(非還原單糖)出現(xiàn)在98-112ppm),因而可預言多糖的聚合程度.

其他化學位移的信號:52-57ppm間的共振信號一般為氨基取代碳的信號.170-176ppm范圍的低場信號反映有己糖醛酸的羧基或乙?；拇嬖?在60-70ppm間醛糖只有一個共振峰,而酮糖有兩個.42在多糖中的應用

確定異頭碳的數(shù)目:異頭碳的共振一般出現(xiàn)在9α-型β-型異頭氫區(qū)異頭碳區(qū)α-型β-型43α-型β-型異頭氫區(qū)異頭碳區(qū)α-型β-型432DH-H相關譜---H-HCOSYCOSY譜本身為正方形，當F1和F2譜寬不等時則為矩形。正方形中有一條對角線（一般為左下—右上）。對角線上的峰稱為對角峰（diagonalpeak）。對角線外的峰稱為交叉峰（crosspeaks）或相關峰（correlatedpeaks）。每個相關峰或交叉峰反映兩個峰組間的耦合關系。COSY主要反映3J耦合關系。解譜方法：取任一交叉峰作為出發(fā)點，通過它作垂線，會與某對角線峰及上方的氫譜中的某峰組相交，它們即是構(gòu)成此交叉峰的一個峰組。再通過該交叉峰作水平線，與另一對角線峰相交，再通過該對角線峰作垂線，又會與氫譜中的另一峰組相交，此即構(gòu)成該交叉峰的另一峰組。442DH-H相關譜---H-HCOSYCOSY譜本身為2DH-H相關譜---H-HCOSY452DH-H相關譜---H-HCOSY45全相關譜TOCSY、HOHAHATOCSY（TotalCorrelationSpectroscopy）與HOHAHA（HomonuclearHartmannHahnspectscopy）稱為總相關譜?？蓮哪骋粋€氫核的譜峰出發(fā)，找到與它處于同一耦合體系的所有氫核譜峰的相關峰。TOCSY和HOHAHA的用途及譜圖的外觀是一樣的，只是實驗時所用的脈沖序列不同。TOCSY和HOHAHA譜目前正被越來越廣泛的使用。46全相關譜TOCSY、HOHAHATOCSY（Total47471H-13CCOSY譜（HMQC）HMQC異核多重量子相干（HeteronuclearMultipleQuantumCoherence)

C-HCOSY是13C和1H核之間的位移相關譜。它反映了13C和1H核之間的關系。它又分為直接相關譜和遠程相關譜，直接相關譜是把直接相連的13C和1H核關聯(lián)起來，矩形的二維譜中間的峰稱為交叉峰（crosspeak）或相關峰（correlatedpeak），反映了直接相連的13C和1H核，在此圖譜中季碳無相關峰。481H-13CCOSY譜（HMQC）HMQC異核多重4949遠程1H-13CCOSY譜（HMBC）50HMBC（1H檢測的異核多鍵相關實驗，1HDetectedHeteronuclearMultipleBondCorrelation或LongRangeHeteronuclearMultipleQuantumCoherecel）。遠程相關譜則是將相隔兩至四根化學鍵的13C和1H核關聯(lián)起來，甚至能跨越季碳、雜原子等，交叉峰或相關峰比直接相關譜中多得多，因而對于幫助推測和確定化合物的結(jié)構(gòu)非常有用。

遠程1H-13CCOSY譜（HMBC）50HMBC（1HNOESY譜和ROESY譜二維NOE譜簡稱為NOESY，它反映了有機化合物結(jié)構(gòu)中核與核之