含量及有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)

含量及有關(guān)物質(zhì)

分析方法驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)文章來源：藥審中心審評(píng)二部黃曉龍

本文介紹了在對(duì)含量及有關(guān)物質(zhì)測定所用的分析方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證時(shí)，各項(xiàng)指標(biāo)的可接受標(biāo)準(zhǔn)，以利于判斷該分析方法的可行性。內(nèi)容包括：準(zhǔn)確度、線性、精密度、專屬性、檢測限、定量限、耐用性和系統(tǒng)適應(yīng)性。1.準(zhǔn)確度含量：該指標(biāo)主要是通過回收率來反映。驗(yàn)證時(shí)一般要求分別配制濃度為80％、100％和120％的供試品溶液各三份，分別測定其含量，將實(shí)測值與理論值比較，計(jì)算回收率。

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在98.0%-102.0%之間，9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于2.0%。

有關(guān)物質(zhì)：

驗(yàn)證時(shí)一般要求根據(jù)有關(guān)物質(zhì)的定量限與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中該雜質(zhì)的限度分別配制三個(gè)濃度的供試品溶液各三份（例如某雜質(zhì)的限度為0.2%，則可分別配制該雜質(zhì)濃度為0.1％、0.2％和0.3％的雜質(zhì)溶液），分別測定其含量，將實(shí)測值與理論值比較，計(jì)算回收率，并計(jì)算9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的RSD。

準(zhǔn)確度

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在80%-120%之間，如雜質(zhì)的濃度為定量限，則該濃度下的平均回收率可放寬至70%-130%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。準(zhǔn)確度2.線性含量：

線性一般通過線性回歸方程的形式來表示。具體的驗(yàn)證方法為：在80％至120％的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的供試液，分別測定其主峰的面積，計(jì)算相應(yīng)的含量。以含量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析。

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.998，Y軸截距應(yīng)在100％響應(yīng)值的2％以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

線性有關(guān)物質(zhì)：在定量限至一定的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的供試液，分別測定該雜質(zhì)峰的面積，計(jì)算相應(yīng)的含量。以含量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析。可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.990，Y軸截距應(yīng)在100％響應(yīng)值的25％以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。線性3.精密度含量：

1）重復(fù)性

配制6份相同濃度的供試品溶液，由一個(gè)分析人員在盡可能相同的條件下進(jìn)行測試，所得6份供試液含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。2）中間精密度

配制6份相同濃度的供試品溶液，分別由兩個(gè)分析人員使用不同的儀器與試劑進(jìn)行測試，所得12個(gè)含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

有關(guān)物質(zhì)：

1）重復(fù)性

配制6份雜質(zhì)濃度（一般為0.1%）相同的供試品溶液，由一個(gè)分析人員在盡可能相同的條件下進(jìn)行測試，所得6份供試液含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于15%。2）中間精密度

配制6份雜質(zhì)濃度（一般為0.1%）相同的供試品溶液，分別由兩個(gè)分析人員使用不同的儀器與試劑進(jìn)行測試，所得12個(gè)含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于20%。

精密度4.專屬性含量：

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：空白對(duì)照應(yīng)無干擾，主成分與各有關(guān)物質(zhì)應(yīng)能完全分離，分離度不得小于2.0。以二極管陣列檢測器進(jìn)行純度分析時(shí)，主峰的純度因子應(yīng)大于980。有關(guān)物質(zhì)：可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：空白對(duì)照應(yīng)無干擾，該雜質(zhì)峰與其它峰應(yīng)能完全分離，分離度不得小于2.0。5.檢測限含量：主峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于3。有關(guān)物質(zhì)：雜質(zhì)峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于3。6.定量限含量：

主峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于10。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，所測6份溶液主峰的保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。有關(guān)物質(zhì)：雜質(zhì)峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于10。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，所測6份溶液雜質(zhì)峰保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于5.0%。

7.耐用性含量：

分別考察流動(dòng)相比例變化±5％、流動(dòng)相pH值變化±0.2、柱溫變化±5℃、流速相對(duì)值變化±20％時(shí)，儀器色譜行為的變化，每個(gè)條件下各測試兩次?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必須達(dá)到基線分離；各條件下的含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

有關(guān)物質(zhì)：

分別考察流動(dòng)相比例變化±5％、流動(dòng)相pH值變化±0.2、柱溫變化±5℃、檢測波長變化±5nm、流速相對(duì)值變化±20％以及采用三根不同批號(hào)的色譜柱進(jìn)行測定時(shí)，儀器色譜行為的變化，每個(gè)條件下各測試兩次?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：各雜質(zhì)峰的拖尾因子不得大于2.0，雜質(zhì)峰與其他成分峰必須達(dá)到基線分離；各條件下的雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，雜質(zhì)含量的絕對(duì)值在±0.1％以內(nèi)。

耐用性8.系統(tǒng)適用性含量：

配制6份相同濃度的供試品溶液進(jìn)行分析，主峰峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，主峰保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必須達(dá)到基線分離，主峰的理論塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。

有關(guān)物質(zhì)：

配制6份相同濃度的雜質(zhì)溶液進(jìn)行分析，該雜質(zhì)峰峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1.0%。另外，雜質(zhì)峰的拖尾因子不得大于2.0，理論塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。

系統(tǒng)適用性9.溶液穩(wěn)定性有關(guān)物質(zhì)：按照分析方法分別配置對(duì)照品溶液與供試品溶液，平行測定兩次主成分與雜質(zhì)的含量，然后將上述溶液分別貯存在室溫與冰箱冷藏室（4℃）中，在1、2、3、5和7天時(shí)分別平行測定兩次主成分與雜質(zhì)的含量。

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：主成分的含量變化的絕對(duì)值應(yīng)不大于2.0%，雜質(zhì)含量的絕對(duì)值在±0.1％以內(nèi)，并不得出現(xiàn)新的大于報(bào)告限度的雜質(zhì)。

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鄭國鋼溶出度研究試驗(yàn)主要包括以下內(nèi)容：（1）溶出介質(zhì)的選擇（2）溶出介質(zhì)體積的選擇（3）溶出方法（轉(zhuǎn)籃法與槳法）的選擇（4）轉(zhuǎn)速的選擇（5）溶出度測定方法的驗(yàn)證（6）溶出度均一性試驗(yàn)（批內(nèi)）（7）重現(xiàn)性試驗(yàn)（批間）（1）溶出介質(zhì)的選擇

溶出介質(zhì)通常采用水、0.1mol/L鹽酸溶液、緩沖液（pH值3～8為主）。對(duì)在上述溶出介質(zhì)中均不能完全溶解的難溶性藥物，可加入適量的表面活性劑，如十二烷基硫酸鈉（0.5%以下）等，應(yīng)有文獻(xiàn)依據(jù)，并盡量選用低濃度，必要時(shí)應(yīng)做生物利用度考察。

（2）溶出介質(zhì)體積的選擇

溶出介質(zhì)的體積需使藥物符合漏槽條件，大杯法（第一、二法）常用體積為500、900和1000ml，小杯法（第三法）常用體積為100～250ml。部分品種為滿足在溶出量測定時(shí)藥物濃度的需要，可采用低于上述限度范圍的溶劑。

漏槽條件即做溶出的最佳條件，是指藥物所處釋放介質(zhì)的濃度遠(yuǎn)小于其飽和濃度，生理學(xué)解釋為藥物在體內(nèi)被迅速吸收，制劑的體外包