講義6：微生物檢驗規(guī)范操作(6)實驗室安全基礎(chǔ)知識

食品微生物檢驗

規(guī)范操作基礎(chǔ)培訓(xùn)

6實驗室安全基礎(chǔ)知識

福建出入境檢驗檢疫局技術(shù)中心食品所微生物實驗室

2010.05

第一部分實驗室生物安全基本概念實驗室安全危害來源生物實驗室危害來源：生物危害其他危害

——危險性化學(xué)品

——火的危害

——電的危害

——噪聲

——電離輻射等一、生物安全基本知識

——相關(guān)文件和標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國國務(wù)院令第424號《病原微生物實驗室生物安全管理條例》已經(jīng)2004年11月5日國務(wù)院第69次常務(wù)會議通過并施行。（共七章七十二條）。國家環(huán)境保護總局令第32號《病原微生物實驗室生物安全環(huán)境管理辦法》（2006年5月1日實施）福建省實驗動物許可證管理辦法（共15條，2003年十月一日實施）CNAS已于2009年06月30日發(fā)布《實驗室生物安全認(rèn)可準(zhǔn)則》（CNAS-CL05:2009），2009年07月01日正式實施?！秾嶒炇疑锇踩J(rèn)可規(guī)則》（CNAS-RL05：2008）世界衛(wèi)生組織（WHO）實驗室生物安全手冊一、生物安全基本知識

——相關(guān)文件和標(biāo)準(zhǔn)GB19489-2008實驗室生物安全通用要求GB50346-2004生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)范GB15981-1995消毒與滅菌效果評價方法與標(biāo)準(zhǔn)GB/T19495.2-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測實驗室技術(shù)要求GB/T27403-2008實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品分子生物學(xué)檢測GB/T27405-2008實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品微生物檢測GB50073-2001潔凈廠房設(shè)計規(guī)范GBJ19-87采暖通風(fēng)和空氣調(diào)節(jié)設(shè)計規(guī)范WS233-2002微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室安全通用準(zhǔn)則SN/T1193-2003基因檢驗實驗室技術(shù)要求YY0569-2005生物安全柜ISO14644.1～8潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境國際標(biāo)準(zhǔn)ISO/DIS14698.1～3：潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境生物污染控制一、生物安全基本知識什么叫實驗室生物安全？Laboratorybilsafety

實驗室的生物安全條件和狀態(tài)不低于容許水平，可避免實驗室人員、來訪人員、社區(qū)及環(huán)境受到不可接受的損害，符合相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)等對實驗室生物安全責(zé)任的要求?！皩嶒炇疑锇踩币辉~用來描述那些用以防止發(fā)生病原體或毒素?zé)o意中暴露及意外釋放的防護原則、技術(shù)以及實踐。實驗室生物安全防護（biosafetyprotectionforlaboratories)

是指當(dāng)實驗室工作人員所處理的實驗對象含有致病性微生物及其毒素時，通過在實驗室設(shè)計建造、使用個體防護設(shè)施、嚴(yán)格遵守標(biāo)準(zhǔn)化工作及操作程序等方面采取綜合措施，以確保實驗室工作人員不受實驗室對象侵染，確保周圍環(huán)境不受污染。一、生物安全基本知識實驗室生物安全保障（laboratorybiosecurity）“實驗室生物安全保障”則是指單位和個人為防止病原體或毒素丟失、被竊、濫用、轉(zhuǎn)移或有意釋放而采取的安全措施。氣溶膠aerosols

懸浮于氣體介質(zhì)中的粒徑一般為0.001~100μm

的固態(tài)或液態(tài)微小粒子形成的相對穩(wěn)定的分散體系。一、生物安全基本知識

——感染性微生物的危險度等級分類危險度1級（無或極低的個體和群體危險）不太可能引起人或動物致病的微生物。危險度2級（個體危險中等，群體危險低）病原體能夠?qū)θ嘶騽游镏虏?，但對實驗室工作人員、社區(qū)、牲畜或環(huán)境不易導(dǎo)致嚴(yán)重危害。實驗室暴露也許會引起嚴(yán)重感染，但對感染有有效的預(yù)防和治療措施，并且疾病傳播的危險有限。危險度3級（個體危險高，群體危險低）病原體通常能引起人或動物的嚴(yán)重疾病，但一般不會發(fā)生感染個體向其他個體的傳播，并且對感染有有效的預(yù)防和治療措施。危險度4級（個體和群體的危險均高）病原體通常能引起人或動物的嚴(yán)重疾病，并且很容易發(fā)生個體之間的直接或間接傳播，對感染一般沒有有效的預(yù)防和治療措施。一、生物安全基本知識

——實驗室分級實驗室可以分為：基礎(chǔ)實驗室——生物安全防護水平一級（BSL-1）基礎(chǔ)實驗室——生物安全防護水平二級（BSL-2）防護實驗室——生物安全防護水平三級（BSL-3）最高防護實驗室——生物安全防護水平四級（BSL-4）根據(jù)操作不同危險度等級微生物所需的實驗室設(shè)計特點、建筑構(gòu)造、防護設(shè)施、儀器、操作以及操作程序來決定實驗室的生物安全水平。表1敘述了與不同危險度等級相對應(yīng)的（而非“等同的”）各危險度等級微生物所要求的實驗室生物安全水平。生物安全水平、操作和設(shè)備

BSC:生物安全柜；GMT:微生物操作技術(shù)規(guī)范不同生物安全水平對設(shè)施的要求

a在環(huán)境與功能上與普通流動環(huán)境隔離b取決于排風(fēng)位置不同生物安全水平對設(shè)施的要求c取決于實驗室中所使用的微生物因子

d例如：觀察窗、閉路電視、雙向通訊設(shè)備個體防護裝備

食品中微生物危害主要分為以下幾類：⑴細(xì)菌性危害：包括引起食物中毒的細(xì)菌及其毒素造成的危害；⑵真菌性危害：包括真菌及其毒素造成的危害；⑶病毒性危害：包括甲型肝炎病毒、諾如病毒等腸道病毒引起的危害；⑷寄生蟲性危害：包括蠕蟲和原蟲等引起的危害。

二、食品檢測領(lǐng)域——生物危害二、食品檢測領(lǐng)域——生物危害分級我國從事食品微生物檢測的實驗室開展的檢測項目包括：細(xì)菌總數(shù)、大腸菌群、糞大腸菌群等衛(wèi)生指標(biāo)菌的檢測。所有食品微生物檢測實驗室均從事這些項目的檢測。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）、美國疾病預(yù)防控制中心（CDC）、加拿大衛(wèi)生部、我國衛(wèi)生部等組織制定生物安全防護水平分類標(biāo)準(zhǔn)，從事此類微生物檢測的實驗室的安全防護等級為生物安全一級（BSL－Ⅰ）。

二、食品檢測領(lǐng)域——生物危害分級《人間傳染病原微生物名錄》、《動物病原微生物名錄》從事此類微生物檢測的實驗室的安全防護等級為生物安全二級（BSL－Ⅱ）：沙門氏菌志賀氏菌金黃色葡萄球菌蠟樣芽胞桿菌大腸桿菌O157副溶血性弧菌、霍亂弧菌、創(chuàng)傷弧菌、溶藻弧菌單核增生李斯特氏菌空腸彎曲桿菌小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌氣單胞菌假單胞菌霉菌和酵母菌計數(shù)、產(chǎn)毒真菌（黃曲霉、桔青霉、展青霉、禾谷鐮刀菌、茄病鐮刀菌、頭孢霉等）諾如病毒、輪狀病毒等腸道病毒（海產(chǎn)品、蔬菜、水果）、甲型肝炎病毒（海產(chǎn)品、蔬菜、水果）二、食品檢測領(lǐng)域——生物危害食品微生物檢測涉及的樣品種類：1定型包裝食品2即食食品3速凍食品4新鮮蔬菜、水果5冷凍與新鮮肉類6冷凍與新鮮水產(chǎn)品其中1～3類樣品被致病性微生物污染的機率和程度相對較低。4～6類樣品被致病性微生物污染的機率和程度較高，生物安全風(fēng)險較高。

第二部分基礎(chǔ)實驗室（一級和二級生物安全水平）安全指南主要內(nèi)容實驗室的設(shè)計和設(shè)施實驗室的基本規(guī)范健康和醫(yī)學(xué)監(jiān)測培訓(xùn)實驗室設(shè)備檢測過程安全防護廢棄物處理一、實驗室的設(shè)計和設(shè)施在設(shè)計實驗室和安排某些類型的實驗工作時，對于那些可能造成安全問題的情況要加以特別關(guān)注，這些情況包括：1、氣溶膠的形成2、處理大容量和∕或高濃度微生物3、儀器設(shè)備過度擁擠和過多4、嚙齒動物和節(jié)肢動物的侵?jǐn)_5、未經(jīng)允許人員進入實驗室6、工作流程：一些特殊標(biāo)本和試劑的使用。設(shè)施和設(shè)備要求詳見GB/T19489-2008中的要求典型的一級生物安全水平實驗室典型的二級生物安全水平實驗室在生物安全柜中進行可能發(fā)生氣溶膠的操作程序。

門保持關(guān)閉并貼上適當(dāng)?shù)奈ｋU標(biāo)志。潛在被污染的廢棄物同普通廢棄物隔開。二、實驗室的基本規(guī)范

BSL-Ⅰ和BSL-Ⅱ?qū)嶒炇遥?．進入規(guī)定

2．工作人員的防護要求

3.有關(guān)安全操作

4.實驗室工作區(qū)5.生物安全管理

1.進入規(guī)定1、在處理危險度2級或更高危險度級別的微生物時，在實驗室門上應(yīng)標(biāo)有國際通用的生物危害警告標(biāo)志（圖1）。2、只有經(jīng)批準(zhǔn)的人員方可進入實驗室工作區(qū)域。3、實驗室的門應(yīng)保持關(guān)閉。4、兒童不應(yīng)被批準(zhǔn)或允許進入實驗室工作區(qū)域。5、進入動物房應(yīng)當(dāng)經(jīng)過特別批準(zhǔn)。6、與實驗室工作無關(guān)的動物不得帶入實驗室。2.人員防護1、在實驗室工作時，任何時候都必須穿著連體衣、隔離服或工作服。2、在進行可能直接或意外接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料或感染性動物的操作時，應(yīng)戴上合適的手套。手套用完后，應(yīng)先消毒再摘除，隨后必須洗手。3、在處理完感染性實驗材料和動物后，以及在離開實驗室工作區(qū)域前，都必須洗手。4、為了防止眼睛或面部受到潑濺物、碰撞物或人工紫外線輻射的傷害，必須戴安全眼鏡、面罩（面具）或其他防護設(shè)備。5、嚴(yán)禁穿著實驗室防護服離開實驗室，（如去餐廳、咖啡廳、辦公室、圖書館、員工休息室和衛(wèi)生間）。6、不得在實驗室內(nèi)穿露腳趾的鞋子。7、禁止在實驗室工作區(qū)域進食、飲水、吸煙、化妝和處理隱形眼鏡。8、禁止在實驗室工作區(qū)域儲存食品和飲料。9、在實驗室內(nèi)用過的防護服不得和日常服裝放在同一柜子內(nèi)。3.有關(guān)安全操作1、嚴(yán)禁用口吸移液管。2、嚴(yán)禁將實驗材料置于口內(nèi)。嚴(yán)禁舔標(biāo)簽。3、所有的技術(shù)操作要按盡量減少氣溶膠和微小液滴形成的方式來進行。4、應(yīng)限制使用皮下注射針頭和注射器。除了進行腸道外注射或抽取實驗動物體液，皮下注射針頭和注射器不能用于替代移液管或用作其他用途。5、出現(xiàn)溢出、事故以及明顯或可能暴露于感染性物質(zhì)時，必須向?qū)嶒炇抑鞴軋蟾妗嶒炇覒?yīng)保存這些事件或事故的書面報告。6、必須制訂關(guān)于如何處理溢出物的書面操作程序，并予以遵守執(zhí)行。7、污染的液體在排放到生活污水管道以前必須清除污染（采用化學(xué)或物理學(xué)方法）。根據(jù)所處理的微生物因子的危險度評估結(jié)果，可能需要準(zhǔn)備污水處理系統(tǒng)。8、需要帶出實驗室的手寫文件必須保證在實驗室內(nèi)沒有受到污染。4.實驗室工作區(qū)1、實驗室應(yīng)保持清潔整齊，嚴(yán)禁擺放和實驗無關(guān)的物品。2、發(fā)生具有潛在危害性的材料溢出以及在每天工作結(jié)束之后，都必須清除工作臺面的污染。3、所有受到污染的材料、標(biāo)本和培養(yǎng)物在廢棄或清潔再利用之前，必須清除污染。4、在進行包裝和運輸時必須遵循國家和∕或國際的相關(guān)規(guī)定。5、如果窗戶可以打開，則應(yīng)安裝防止節(jié)肢動物進入的紗窗。5.生物安全管理1、實驗室主任（對實驗室直接負(fù)責(zé)的人員）負(fù)責(zé)制訂和采用生物安全管理計劃以及安全或操作手冊。2、實驗室主管（向?qū)嶒炇抑魅螀R報）應(yīng)當(dāng)保證提供常規(guī)的實驗室安全培訓(xùn)。3、要將生物安全實驗室的特殊危害告知實驗室人員，同時要求他們閱讀生物安全或操作手冊，并遵循標(biāo)準(zhǔn)的操作和規(guī)程。實驗室主管應(yīng)當(dāng)確保所有實驗室人員都了解這些要求。實驗室內(nèi)應(yīng)備有可供取閱的安全或操作手冊。4、應(yīng)當(dāng)制訂節(jié)肢動物和嚙齒動物的控制方案。5、如有必要，應(yīng)為所有實驗室人員提供適宜的醫(yī)學(xué)評估、監(jiān)測和治療，并應(yīng)妥善保存相應(yīng)的醫(yī)學(xué)記錄。三、健康和醫(yī)學(xué)監(jiān)測主管機構(gòu)有責(zé)任通過實驗室主任來確保實驗室全體工作人員接受適當(dāng)?shù)慕】当O(jiān)測。監(jiān)測的目的是監(jiān)控職業(yè)獲得性疾病。為達(dá)到這些目的，應(yīng)進行如下工作：1、根據(jù)需要提供主動或被動免疫（工作人員的免疫接種）2、促進實驗室感染的早期檢測3、應(yīng)禁止高度易感人群（如孕婦或免疫損傷人員）在高危險實驗室中工作4、提供有效的個體防護裝備和方法。在一級生物安全水平操作微生物的實驗室工作人員的監(jiān)測指南：歷史證據(jù)表明，在一級生物安全水平操作的微生物不太可能引起人類疾病或獸醫(yī)學(xué)意義的動物疾病。但理想的做法是，所有實驗室工作人員應(yīng)進行上崗前的體檢，并記錄其病史。疾病和實驗室意外事故應(yīng)迅速報告，所有工作人員都應(yīng)意識到應(yīng)用規(guī)范的實驗室操作技術(shù)的重要性。在二級生物安全水平操作微生物的實驗室工作人員的監(jiān)測指南：1、必須有錄用前或上崗前的體檢。記錄個人病史，并進行一次有目的的職業(yè)健康評估。2、實驗室管理人員要保存工作人員的疾病和缺勤記錄。3、育齡期婦女應(yīng)知道某些微生物（如風(fēng)疹病毒）的職業(yè)暴露對未出生孩子的危害。保護胎兒的正確措施因婦女可能接觸的微生物而異。四、培訓(xùn)

進入實驗室工作人員必須經(jīng)過培訓(xùn),方能取得進入實驗室控制區(qū)域工作的資格。培訓(xùn)由實驗室負(fù)責(zé)人組織,熟悉實驗室工作和操作規(guī)范的人員擔(dān)任輔導(dǎo)。培訓(xùn)內(nèi)容包括:1.實驗室生物安全管理規(guī)定、自身防護的規(guī)定及相關(guān)的其它規(guī)定；2.實驗室各項儀器裝備的使用方法；3.正確的著裝方法；4.微生物學(xué)操作基本技術(shù)及無菌操作方法；5.實驗室清潔及消毒方法；6.意外事故處理方法；7.國內(nèi)外新技術(shù)、新方法等的不定期培訓(xùn)。培訓(xùn)的實施細(xì)則

1.理論培訓(xùn):(l)培訓(xùn)目標(biāo):①熟悉本實驗室的各項規(guī)章制度和操作規(guī)范,形成初步的實驗室工作概念。②了解本實驗室從事工作的特點以及各種微生物的危害評估文件。(2)培訓(xùn)方式:

講解。(3)培訓(xùn)內(nèi)容:①本實驗室各項成文的規(guī)章制度:生物安全防護、廢棄物處理、安全制度、衛(wèi)生制度、責(zé)任制度、試劑定購制度、儀器使用制度等。②實驗室的各項規(guī)章制度和生物安全管理手冊。(4)考核:

由本實驗室三位工作人員組織對理論學(xué)習(xí)的書面考試和面試工作。書面考試注重其掌握的準(zhǔn)確程度,面試主要測試其熟練程度和靈活應(yīng)變能力。考核本合格者須重新學(xué)習(xí),不能進入下一步的培訓(xùn)。培訓(xùn)的實施細(xì)則

2.常規(guī)技能培訓(xùn):

(l)培訓(xùn)目標(biāo):①熟練基本實驗操作和儀器的使用；②初步培養(yǎng)實驗的基本觀念和良好的實驗習(xí)慣。(2)培訓(xùn)方式:

現(xiàn)場實驗。(3)培訓(xùn)內(nèi)容: ①衛(wèi)生打掃:實驗室地面、實驗臺面、超凈臺面、垃圾處理以及打掃得先后順序；工作休息區(qū)的衛(wèi)生打掃。②實驗室常規(guī)操作技術(shù):包括無菌觀念、平板的制備、劃線分離、顯微鏡觀察、菌落接種、活化、菌體收集、菌（毒）種保存等。③ 小型儀器的使用：微量移液器和移液管的使用、pH計和試紙、天平、混勻器、微波爐、電磁爐、水浴鍋等。④玻璃儀器的清洗:量筒、燒杯、三角瓶等。⑤大型儀器的使用:普通冰箱和低溫冰箱(存放和處理樣品)、高壓鍋、離心機、液氮罐、生物安全柜、生化培養(yǎng)箱、電泳設(shè)備、超凈臺、PCR儀、搖床、超聲破碎儀、顯微鏡等。⑥消毒和滅菌方法:物理滅菌（紫外、過濾、灼燒、高壓)法、化學(xué)滅菌(熏蒸、酒精、消毒液)法等。⑦辦公用品使用的培訓(xùn):電話、傳真機、電腦、打印機等。

五、實驗室設(shè)備選擇設(shè)備時應(yīng)符合一些基本原則，即：1、在設(shè)計上應(yīng)能阻止或限制操作人員與感染性物質(zhì)間的接觸2、建筑材料應(yīng)防水、耐腐蝕并符合結(jié)構(gòu)要求3、設(shè)備裝配后應(yīng)無毛刺、銳角以及易松動的部件4、設(shè)備的設(shè)計、建造與安裝應(yīng)便于操作、易于維護、清潔、清除污染和進行質(zhì)量檢驗。應(yīng)盡量避免使用玻璃及其他易碎的物品。需要詳細(xì)咨詢設(shè)備的性能和結(jié)構(gòu)規(guī)格，以確保設(shè)施具備必要的安全特性?；旧锇踩O(shè)備1、移液輔助器——避免用口吸的方式移液。有不同設(shè)計的多種產(chǎn)品可供使用。2、生物安全柜，在以下情況使用：——處理感染性物質(zhì)；如果使用密封的安全離心杯，并在生物安全柜內(nèi)裝樣、取樣，則這類材料可在開放實驗室離心——空氣傳播感染的危險增大時——進行極有可能產(chǎn)生氣溶膠的操作時（包括離心、研磨、混勻、劇烈搖動、超聲破碎、打開內(nèi)部壓力和周圍環(huán)境壓力不同的盛放有感染性物質(zhì)的容器、動物鼻腔接種以及從動物或卵胚采集感染性組織）。3、一次性塑料接種環(huán)，也可在生物安全柜內(nèi)使用電加熱接種環(huán)，以減少生成氣溶膠。4、螺口蓋試管及瓶子。5、用于清除感染性材料污染的高壓滅菌器或其他適當(dāng)工具。6、一次性巴斯德塑料移液管，盡量避免使用玻璃制品。7、在投入使用前，像高壓滅菌器和生物安全柜等設(shè)備必須用正確方法進行驗收。應(yīng)參照生產(chǎn)商的說明書定期檢測。常用設(shè)備的安全操作注意事項（1）生物安全柜分為I、II、III個不同等級。I級能夠保護工作人員和周圍環(huán)境，但不能切實保護操作樣本，因此生物安全柜I級不能用于食品微生物檢驗的無菌操作。II級生物安全柜在設(shè)計上不但能提供個體防護，而且能保護工作臺面的物品不受空氣的污染，其有四種不同的類型（A1、A2、B1和B2型），可用于操作危險度II級和III級的感染性物質(zhì)。III級生物安全柜則可提供更高級別的生物安全保護。常用設(shè)備的安全操作注意事項（2）生物安全柜使用要點：（1）使用者應(yīng)熟知生物安全柜的使用方法和局限性；（2）使用前后，工作臺面和內(nèi)壁要用消毒劑擦拭消毒，生物安全柜風(fēng)機應(yīng)至少運行5min完成凈化后使用；（3）使用中不能打開玻璃觀察檔板，應(yīng)穿個體防護服；（4）生物安全柜內(nèi)盡量少放置器材或標(biāo)本、不能影響后部壓力排風(fēng)系統(tǒng)的氣流循環(huán)；（5）放入生物安全柜的物品應(yīng)采用70％酒精來清除表面污染?？梢栽谙緞┙竦拿砩线M行實驗，以吸收可能濺出的液滴；（6）耐高壓滅菌的生物危害性廢棄物袋以及移液適宜于盛放盤不應(yīng)放在生物安全柜的外面；（7）在工作臺面上的操作應(yīng)按照從清潔區(qū)到污染區(qū)的方向進行；（8）在生物安全柜內(nèi)所形成的幾乎沒有微生物的環(huán)境中，應(yīng)避免使用明火，可使用電熱式接種環(huán)滅菌器，最好使用一次性無菌接種環(huán)；（9）盡可能避免雙臂頻繁進出生物安全柜，否則會干擾空氣屏障的完全性，影響防護；（10）一旦發(fā)生生物學(xué)危害物品溢出，應(yīng)在生物安全柜運行狀態(tài)下清理，使用有效的消毒劑，盡可能減少氣溶膠，所有接觸溢出的物品都要進行消毒或高壓滅菌。（11）每年應(yīng)對生物安全防護效果進行測試，定期維護。常用設(shè)備的安全操作注意事項（3）離心機

離心機是最常用的實驗室儀器，最易導(dǎo)致實驗室污染。掌握正確的離心機使用技術(shù)十分重要。

(1)在使用實驗室離心機時，儀器良好的機械性能是保障微生物安全的前提條件。

(2)應(yīng)按照操作手冊來操作離心機。

(3)離心機放置的高度應(yīng)當(dāng)使小個子工作人員也能夠看到離心機內(nèi)部，以正確放置十字軸和離心桶。

(4)離心管和盛放離心標(biāo)本的容器應(yīng)當(dāng)由厚壁玻璃制成，或最好為塑料制品，并且在使用前應(yīng)檢查是否破損。

(5)用于離心的試管和標(biāo)本容器應(yīng)當(dāng)始終牢固蓋緊(最好使用螺旋蓋)。

(6)離心桶的裝載、平衡、密封和打開必須在生物安全柜內(nèi)進行。

(7)離心桶和十字軸應(yīng)按重量配對，并在裝載離心管后正確平衡。

(8)操作指南中應(yīng)給出液面距離心管管口需要留出的空間大小。

(9)空離心桶應(yīng)當(dāng)用蒸餾水或乙醇(異丙醇，7O％)來平衡。

(1O)對于危險度3級和4級的微生物，必須使用可封口的離心桶(安全杯)。

(11)當(dāng)使用固定角離心轉(zhuǎn)子時，必須小心不能將離心管裝得過滿，否則會導(dǎo)致漏液。

(12)應(yīng)當(dāng)檢查離心機內(nèi)轉(zhuǎn)子部位的腔壁是否被污染或弄臟。如污染明顯，應(yīng)重新評估離心操作規(guī)范。

(13)應(yīng)當(dāng)檢查離心轉(zhuǎn)子和離心桶是否有腐蝕或細(xì)微裂痕。

(14)每次使用后，要清除離心桶、轉(zhuǎn)子和離心機腔的污染。

(15)使用后應(yīng)當(dāng)將離心桶倒置存放使平衡液流干。

(16)良好的離心操作技術(shù)和牢固加蓋的離心管可以提供足夠的保護，以防止感染性氣溶膠和可擴散粒子的產(chǎn)生。常用設(shè)備的安全操作注意事項（4）移液管、移液器

(1)應(yīng)使用移液設(shè)備，嚴(yán)禁用口吸取。(2)所有移液管應(yīng)帶有棉塞以減少移液器具的污染。

(3)不能向含有感染性物質(zhì)的溶液中吹入氣體。

(4)感染性物質(zhì)不能使用移液管反復(fù)吹吸混合。

(5)不能將液體從移液管內(nèi)用力吹出。

(6)刻度對應(yīng)(mark—to—mark)移液管不需要排出最后一滴液體，因此最好使用這種移液管。

(7)污染的移液管應(yīng)該完全浸泡在盛有適當(dāng)消毒液的防碎容器中。移液管應(yīng)當(dāng)在消毒劑中浸泡適當(dāng)時間后再進行處理。

(8)盛放廢棄移液管的容器不能放在外面，應(yīng)當(dāng)放在生物安全柜內(nèi)。

(9)有固定皮下注射針頭的注射器不能夠用于移液。

(1O)在打開隔膜封口的瓶子時，應(yīng)使用可以使用移液管的工具，而避免使用皮下注射針頭和注射器。

(11)為了避免感染性物質(zhì)從移液管中滴出而擴散，在工作臺面應(yīng)當(dāng)放置一塊浸有消毒液的布或吸有消毒液的紙，使用后將其按感染性廢棄物處理。常用設(shè)備的安全操作注意事項（5）接種環(huán)使用封閉式微型電加熱器消毒接種環(huán)，能夠避免在酒精燈的明火上加熱所引起的感染性物質(zhì)爆濺。最好使用不需要進行消毒的一次性接種環(huán)。常用設(shè)備的安全操作注意事項（6）冰箱與冰柜(1)冰箱、低溫冰箱和干冰柜應(yīng)當(dāng)定期除霜和清潔，應(yīng)清理出所有在儲存過程中破碎的安瓿和試管等物品。清理時應(yīng)戴厚橡膠手套并進行面部防護，清理后要對內(nèi)表面進行消毒。冰箱內(nèi)物品放置應(yīng)規(guī)范，。(2)儲存在冰箱內(nèi)的所有容器應(yīng)當(dāng)清楚地標(biāo)明內(nèi)裝物品的科學(xué)名稱、儲存日期和儲存者的姓名。未標(biāo)明的或廢舊物品應(yīng)當(dāng)高壓滅菌并丟棄。(3)應(yīng)當(dāng)保存一份凍存物品的清單。(4)除非有防爆措施，否則冰箱內(nèi)不能放置易燃溶液。冰箱門上應(yīng)注明這一點。

常用設(shè)備的安全操作注意事項（7）高壓滅菌器和滅菌消毒設(shè)備

(1)應(yīng)由受過良好培訓(xùn)的人員負(fù)責(zé)高壓滅菌器的操作和日常維護。

(2)預(yù)防性的維護程序應(yīng)包括：由有資格人員定期檢查滅菌器柜腔、門的密封性以及所有的儀表和控制器。

(3)應(yīng)使用飽和蒸氣，并且其中不含腐蝕性抑制劑或其他化學(xué)品，這些物質(zhì)可能污染正在滅菌的物品。

(4)所有要高壓滅菌的物品都應(yīng)放在空氣能夠排出并具有良好熱滲透性的容器中；滅菌器柜腔裝載要松散，以便蒸汽可以均勻作用于裝載物。(5)當(dāng)滅菌器內(nèi)部加壓時，互鎖安全裝置可以防止門被打開，而沒有互鎖裝置的高壓滅菌器，應(yīng)當(dāng)關(guān)閉主蒸汽閥并待溫度下降到80℃以下時再打開門。

(6)當(dāng)高壓滅菌液體時，由于取出時液體可能因過熱而沸騰，故應(yīng)采用慢排式設(shè)置。

(7)即使溫度下降到80℃以下，操作者打開門時也應(yīng)當(dāng)戴適當(dāng)?shù)氖痔缀兔嬲謥磉M行防護。

(8)在進行高壓滅菌效果的常規(guī)監(jiān)測中，生物指示劑或熱電偶計應(yīng)置于每件高壓滅菌物品的中心。最好在“最大”裝載時用熱偶計和記錄儀進行定時監(jiān)測，以確定滅菌程序是否恰當(dāng)。

(9)滅菌器的排水過濾器(如果有)應(yīng)當(dāng)每天拆下清洗。

(1O)應(yīng)當(dāng)注意保證高壓滅菌器的安全閥沒有被高壓滅菌物品中的紙等堵塞。常用設(shè)備的安全操作注意事項（8）均質(zhì)器、研磨器、超聲處理器在使用均質(zhì)器、研磨器、超聲處理器時，含有感染性物質(zhì)的氣溶膠可能溢出，應(yīng)戴手套并于吸收性材料罩住，在生物安全柜中操作。六、檢測過程

——識別實驗過程中的生物危害

食品微生物檢測實驗操作中可能存生物危害的材料與操作：1.樣本采集與運輸2.樣品接收與處理

新鮮蔬菜、水果、冷凍與新鮮肉類、冷凍與新鮮水產(chǎn)品，在樣品稱量和勻漿過程中，有直接接觸感染的可能性。3.樣品檢驗

（1）樣品的增菌培養(yǎng)

樣品通過增菌后微生物大量繁殖，在轉(zhuǎn)接過程中有產(chǎn)生氣溶膠和意外濺灑的可能，實驗者有直接大劑量接觸致病菌的機會。

（2）可疑菌株分離

分離培養(yǎng)的過程中，有產(chǎn)生氣溶膠和意外濺灑的可能，實驗者有直接大劑量接觸致病菌的機會。

（3）生化及血清學(xué)鑒定

實驗過程中要進行培養(yǎng)物的劃線、穿刺轉(zhuǎn)接，純培養(yǎng)物的混勻，生化培養(yǎng)管及診斷血清的開啟等操作，實驗中有產(chǎn)生氣溶膠、意外濺灑的可能，有被利器割傷的可能。并且，在實驗過程中直接接觸致病菌的純培養(yǎng)物。

（4）質(zhì)控實驗使用的陽性菌株培養(yǎng)物

質(zhì)控實驗中如果使用標(biāo)準(zhǔn)菌株，在菌株的活化、培養(yǎng)、轉(zhuǎn)接過程中有被利器割傷，產(chǎn)生氣溶膠和意外濺灑的可能，實驗者有直接大劑量接觸致病菌的機會。（5）其他操作：如PCR鑒定在使用PCR進行鑒定時，要對培養(yǎng)后的菌液進行離心處理,容易形成氣溶膠，實驗者有被致病菌感染的可能。

六、檢測過程

——識別實驗過程中的生物危害六、檢測過程

——安全操作注意事項（1）

1.樣品稱量和勻漿

（1）實驗室不能使用家用(廚房)勻漿器，因為它們可能泄漏或釋放氣溶膠。使用實驗室專用勻漿器更為安全。

(2）蓋子、杯子或瓶子應(yīng)當(dāng)保持正常狀態(tài)，沒有裂縫或變形。蓋子應(yīng)能封蓋嚴(yán)密，襯墊也應(yīng)處于正常狀態(tài)。（3）在使用勻漿器、搖床和超聲處理器時，容器內(nèi)會產(chǎn)生壓力，含有感染性物質(zhì)的氣溶膠就可能從蓋子和容器間隙逸出。應(yīng)戴上手套并用吸收性材料包住。（4）由于玻璃可能破碎而釋放感染性物質(zhì)并傷害操作者，建議使用塑料容器，尤其是聚四氟乙烯(polytetrafluoroethylene，PTFE)容器。（5）樣品勻漿后應(yīng)靜置2分鐘，待氣溶膠沉降后，在生物安全柜內(nèi)打開容器。

(6)樣品稱量結(jié)束后，應(yīng)使用與開始工作前相同的消毒方法對實驗區(qū)域進行消毒。與樣品接觸的器具、容器、手套和其他材料在清洗和棄置前必須進行消毒。

六、檢測過程

——安全操作注意事項（2）2.增菌培養(yǎng)、生化及血清鑒定

轉(zhuǎn)接是增菌培養(yǎng)過程常用的操作，要使用無菌技術(shù)以避免菌株的污染。增菌培養(yǎng)使用的容器，應(yīng)選用密閉、不易破碎的塑料容器。使用玻璃容器時，應(yīng)輕拿、輕放。涉及致病菌的增菌、生化轉(zhuǎn)接、血清學(xué)實驗操作應(yīng)在生物安全柜中進行。

注意：各種規(guī)范的實驗操作技術(shù)。

六、檢測過程

——安全操作注意事項（3）分子生物學(xué)檢測

使用增菌液、疑似陽性菌株培養(yǎng)物進行致病菌PCR鑒定時，應(yīng)首先將樣品液放在密閉離心管中，在100℃水域中加熱裂解并滅活，再提取核酸。每次離心后，應(yīng)靜置片刻，在生物安全柜中開啟離心管。食品病毒檢測中核酸提取過程中使用的Trizol-reagent對皮膚具有極強的腐蝕性，操作時應(yīng)戴乳膠手套。細(xì)菌、病毒核酸提取時使用氯仿、異丙醇等有機試劑具有一定毒性和揮發(fā)性，應(yīng)佩帶一次性手套并在通風(fēng)櫥或通風(fēng)良好的環(huán)境中配制和使用。實驗中使用的焦碳酸二乙酯、溴化乙錠具有致癌作用，應(yīng)戴乳膠或PE手套進行操作。焦碳酸二乙酯具有揮發(fā)性，應(yīng)在通風(fēng)櫥或通風(fēng)良好的環(huán)境中配制和使用。配制焦碳酸二乙酯所使用的吸管、燒杯、試劑瓶等應(yīng)于121℃高壓20min后再進行清洗。使用過的含溴化乙錠溶液和瓊脂糖凝膠應(yīng)集中進行無害化處理或上交專業(yè)公司處理。六、檢測過程

——安全操作注意事項（4）有毒有害物質(zhì)的稱量對于微生物檢測中會使用一些抑菌劑，其中有些對人體有害，例如：吖啶黃、亞碲酸鉀等。在稱量過程中粉末狀的抑菌劑可能通過呼吸道粘膜或經(jīng)皮膚接觸造成操作者中毒。（1）稱量一個空的、干凈的螺帽容器；（2）將預(yù)稱量的容器和化學(xué)試劑瓶拿到通風(fēng)櫥內(nèi)；（3）采取適當(dāng)?shù)谋Ｗo措施防止藥品與皮膚接觸，將所需量的試劑移入預(yù)稱量的螺帽容器中，并蓋住螺帽；（4）將已裝有化學(xué)物質(zhì)并蓋好螺帽的容器放到天平上，稱重；（5）稱量后的總量減去容器的質(zhì)量得到化學(xué)試劑的質(zhì)量，然后根據(jù)化學(xué)試劑的質(zhì)量，計算出配備溶液所需液體的體積；（6）將密閉的容器、溶液拿回通風(fēng)櫥，采用適當(dāng)?shù)谋Ｗo措施配成所需的化學(xué)溶液。六、檢測過程

——安全操作注意事項（5）裝有凍干標(biāo)準(zhǔn)菌株的安瓿的開啟食品微生物檢測中要使用標(biāo)準(zhǔn)菌株作為日常質(zhì)控菌株，購買的菌株在開啟時應(yīng)小心操作，防止割傷以及氣溶膠感染。應(yīng)該小心打開裝有凍干物的安瓿，因為其內(nèi)部可能處于負(fù)壓，突然沖入的空氣可能使一些物質(zhì)擴散進入空氣。安瓿應(yīng)該在生物安全柜內(nèi)打開，建議按下列步驟打開安瓿：（1）首先用75%酒精擦拭，清除安瓿外表面的污染。（2）如果管內(nèi)有棉花或纖維塞，可以在管上靠近棉花或纖維塞的中部銼一痕跡。（3）用一團乙醇浸泡的棉花將安瓿包起來以保護雙手，然后手持安瓿從標(biāo)記的銼痕處打開。（4）將頂部小心移去并按污染材料處理。（5）如果塞子仍然在安瓿上，用消毒鑷子除去。（6）緩慢向安瓿中加入液體來重懸凍干物，避免出現(xiàn)泡沫。

實驗室菌種的安全要求：菌株的生物危害程度應(yīng)與保藏實驗室生物防護水平相適應(yīng)，實驗室的裝備和管理應(yīng)符合《病原微生物實驗室生物安全管理條例》和GB19489《實驗室生物安全通用要求》

實驗室應(yīng)制定菌種使用、保藏管理制度和標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程，應(yīng)涵蓋菌種申購、保管、使用、傳代、存儲等諸方面。六、檢測過程

——安全操作注意事項（6）感染性物質(zhì)（菌種）的儲存、包裝與運輸

食品微生物檢測中使用的標(biāo)準(zhǔn)（參照菌種）的包裝與運輸應(yīng)按照《病原微生物實驗室生物安全管理條例》和《人間傳染的病原微生物名錄》有關(guān)規(guī)定進行。以食品微生物檢測中常見的沙門氏菌屬為例，其屬于第三類病原微生物，實驗活動所需生物安全實驗室級別為二級。運輸包裝分類為B類。具體要求如下：1.運輸專用名稱為：診斷標(biāo)本或臨床標(biāo)本或生命物質(zhì)B類。英文運輸專用名稱為：Biologicalsubstance，categoryB。UN編號為：UN3373。2.應(yīng)有三層包裝：第一層包裝要求用保存標(biāo)本的原始容器(外螺旋管),稱為主容器(見圖1)，需將蓋口密封，主容器單包裝最大運輸量液體1L，固體4kg；運輸標(biāo)本的主容器第二層包裝可以采用專用二級包裝桶或耐高壓塑料袋，稱為輔助容器(見圖2)，應(yīng)防水、防破損、防泄漏，并含吸收材料；運輸標(biāo)本的輔助容器(吸收材料)

第三層包裝是將密封好的輔助容器放入運輸包裝盒,稱為外包裝(見附圖5)，最大運輸量為液體4L、固體4kg，至少有一個表面≥100mm×100mm，運輸包裝盒要求有保持冷藏低溫功能，應(yīng)含制冷器件、襯墊材料。運輸標(biāo)本的外包裝七、常規(guī)消毒、滅菌和去污染方法清理和清洗（見第一章）物理消毒滅菌法（見第一章）化學(xué)消毒法

（見第一章）八、廢棄物處理廢棄物是指將要丟棄的所有物品。廢棄物處理的首要原則：是所有感染性材料必須在實驗室內(nèi)清除污染、高壓滅菌或焚燒。用以處理潛在感染性微生物或動物組織的所有的實驗室物品，在被丟棄前應(yīng)考慮的主要問題有：1、是否已采取規(guī)定程序?qū)@些物品進行了有效的清除污染或消毒？2、如果沒有，他們是否以規(guī)定的方式包裹，以便就地焚燒或運送到其他有焚燒設(shè)施的地方進行處理？3、丟棄已清除污染的物品時，是否會對直接參與丟棄的人員，或在設(shè)施外可能接觸到丟棄物的人員造成任何潛在的生物學(xué)或其他方面的危害？污染性材料和廢棄物的處理和丟棄程序?qū)嶒炇覒?yīng)建立廢棄物處理程序要對感染性物質(zhì)及其包裝物進行鑒別并分別進行處理，相關(guān)工作要遵守國家和國際規(guī)定。廢棄物可以分成以下幾類：1、可重復(fù)或再使用，或按普通“家庭”廢棄物丟棄的非污染（非感染性）廢棄物2、污染（感染性）銳器——皮下注射用針頭、手術(shù)刀、刀子及破碎玻璃；這些廢棄物應(yīng)收集在帶蓋的不易刺破的容器內(nèi)，并按感染性物質(zhì)處理3、通過高壓滅菌和清洗來清除污染后重復(fù)或再使用的污染材料4、高壓滅菌后丟棄的污染材料5、直接焚燒的污染材料。第三部分：化學(xué)品、火和電的安全一、危害性化學(xué)品暴露途徑人們可能通過下列方式暴露于危險性化學(xué)品：1、吸入2、接觸3、食入4、針刺5、通過破損皮膚。一、危害性化學(xué)品化學(xué)品的儲存實驗室應(yīng)該只保存滿足日常使用量的化學(xué)品。大量的化學(xué)品應(yīng)儲存在專門指定的房間或建筑物內(nèi)。關(guān)于不相容化學(xué)品的一般原則為了避免發(fā)生火災(zāi)和∕或爆炸，下表中左邊一欄的物質(zhì)在貯存和操作中應(yīng)避免接觸表中相應(yīng)的右邊一欄里的物質(zhì)。化學(xué)品的毒性作用爆炸性化學(xué)品關(guān)于不相容化學(xué)品的一般原則

化學(xué)品溢出應(yīng)配備下列物品：1、化學(xué)品溢出處理工具盒2、防護服，例如耐用橡膠手套、套鞋或橡膠靴、防毒面具3、鏟子和簸箕4、用于夾取碎玻璃的鑷子5、拖把、擦拭用的布