雄黃微波溶樣系統(tǒng)測(cè)定大鼠血砷濃度

雄黃微波溶樣系統(tǒng)測(cè)定大鼠血砷濃度

黃鼠尾是一種含有砷的礦物藥物，主要成分是as。1材料和方法1.1儀器AFS-920型雙道原子熒光光度計(jì)(北京吉天儀器公司);MK-I型光纖壓力自控微波溶樣系統(tǒng)(上海新科微波技術(shù)應(yīng)用研究所)。1.2試劑As標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg·mL1.3中藥雄黃,廣東佛山市制藥二廠提供(湖南產(chǎn))。1.4動(dòng)物SD大鼠,雄性,(350±50)g,清潔級(jí),廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,質(zhì)量合格證明No.0009754,No.0011510。1.5給藥劑量和方法1.5.1單次給藥1.5.2多次給藥SD大鼠連續(xù)15d灌服雄黃,75mg·kg1.6樣本采集1.6.1大鼠采血時(shí)間采血時(shí)間點(diǎn):藥前(給藥前3d),給藥后0.25,0.5,0.75,1,1.5,2,3,4,6,8,12,24,32,48,56,72,80,96h。動(dòng)物分組:考慮到大鼠血量有限,同一大鼠無(wú)法在所有時(shí)間點(diǎn)采血,故將大鼠進(jìn)行分組,在不同時(shí)間點(diǎn)采血,并確保每個(gè)時(shí)間點(diǎn)有6只大鼠血樣,用于測(cè)定血砷濃度,以平均值作為該時(shí)間點(diǎn)的血砷濃度值。30只大鼠隨機(jī)分為5組(6只/組):第1組在0.25,2,12,72,96h取血;第2組在0.5,3,24,80,96h取血;第3組在0.75,4,32,96h取血;第4組在1,6,48,96h取血;第5組在1.5,8,56,96h取血。眼眶取血約2～3mL,在3000r·min1.6.2多次給藥后血液樣本采集每次藥后3h眼眶取血約3mL,末次藥后24,48,72,96h眼眶取血約3mL。在3000r·min1.6.3臟器組織檢測(cè)10只大鼠單次給藥后96h取血完畢后,斷頭處死,解剖取臟器、組織,包括肝、腎、脾、肺、心、大腦、睪丸、腎上腺、膀胱、肌肉、脛骨、皮膚和毛發(fā)。每種臟器、組織各取兩份(腎上腺、膀胱各1份),每份0.4～0.5g(腎上腺約0.05g、膀胱約0.13g),稱重并記錄,于-20℃保存。多次給藥的大鼠分兩組(5只/組):第一組大鼠末次藥后96h取血后,斷頭處死,解剖取臟器、組織;第二組大鼠于末次藥后停藥2周后,取血,斷頭處死,解剖取臟器、組織,操作同上。1.6.4空白樣本的采集大鼠給藥前3d眼眶取血,分離得空白血清。另外取6只正常對(duì)照大鼠,取空白臟器組織樣本。1.7臟器組織的制備準(zhǔn)確吸取1mL血清(或0.4～0.5g臟器組織)于聚四氟乙烯溶樣杯中,加入濃硝酸2mL(臟器組織用3～4mL),室溫下放置2h進(jìn)行預(yù)反應(yīng),補(bǔ)加濃硝酸約0.5mL,然后進(jìn)行微波消化,0.5mPa壓力下加熱3min(臟器組織樣品于0.5mPa、1.0mPa壓力下各加熱2min),冷卻后開啟消解罐。聚四氟乙烯溶樣杯置于電熱板上加熱,趕盡NO1.8儀器條件和測(cè)量條件砷燈電流45mA,負(fù)高壓270V,原子化器高度9mm,原子化溫度:采用冷原子法,載氣流量500mL·min1.9預(yù)反應(yīng)進(jìn)樣測(cè)定吸取樣品待測(cè)液1.0mL,加入5%硫脲和5%抗壞血酸混合預(yù)還原劑2mL,再用2%HCI定容至10mL,混勻,室溫下放置0.5～1h進(jìn)行預(yù)反應(yīng),進(jìn)樣測(cè)定。取空白大鼠血清作為生物樣品的代表,低、中、高三個(gè)濃度(2.0,4.0,10.0μg·L采用PKSolutions2.02結(jié)果2.1給藥后黃鼠血砷濃度的時(shí)間關(guān)系和藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)雄黃單次給藥后,血砷濃度-時(shí)間曲線見圖1,藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表1。大鼠單次灌胃給予雄黃75mg·kg2.2雄黃單次給藥的血砷濃度雄黃連續(xù)15d給藥期間,血砷濃度-時(shí)間曲線見圖2。雄黃連續(xù)給藥15d,給藥時(shí)間間隔為24h,略長(zhǎng)于雄黃單次給藥的消除半衰期(22.70h)。藥-時(shí)曲線顯示,血砷濃度逐日上升,從第7天起達(dá)到穩(wěn)態(tài)濃度。平均穩(wěn)態(tài)濃度(obs)為127.8μg·L2.3砷在大鼠主要臟器和組織中的分布雄黃單次給藥后96h、多次給藥的末次藥后96h和停藥后2周,砷在大鼠主要臟器和組織中的分布情況見表2?？梢娚樵谄?、毛發(fā)、肺和腎上腺中分布較多。3雄黃多次給藥后砷在體內(nèi)分布情況本文作者曾對(duì)本實(shí)驗(yàn)中的受試藥物雄黃進(jìn)行了砷含量、形態(tài)、物相(X-衍射)和全元素分析(X-熒光),結(jié)果表明雄黃中總砷含量為673.45±22.00mg/g,折合成硫化砷百分含量為97.3%。主成分是β-雄黃(As本實(shí)驗(yàn)所得藥動(dòng)學(xué)參數(shù)與文獻(xiàn)雄黃多次給藥的消除半衰期為43.61h,比單次給藥的消除半衰期(22.70h)延長(zhǎng)近一倍,顯示多次給藥延緩了雄黃中總砷在體內(nèi)的消除。本文作者對(duì)雄黃及其代謝產(chǎn)物的藥動(dòng)學(xué)研究表明膽汁排泄是雄黃的主要排泄途徑之一(另文報(bào)道),并存在肝腸循環(huán)。肝腸循環(huán)會(huì)延長(zhǎng)藥物的消除半衰期,也會(huì)使砷在體內(nèi)的存留時(shí)間延長(zhǎng)。尚不清楚雄黃是否對(duì)藥物代謝酶P450有影響。雄黃單次給藥后,在大鼠各主要臟器、組織中均可檢測(cè)到砷,以脾、毛發(fā)、肺和腎上腺中分布較多,腎、心、肝、膀胱、皮膚次之,大腦、睪丸、肌肉、脛骨中分布較少。以往文獻(xiàn)與單次給藥相比,多次給藥后砷除了同樣在腎上腺、肺、毛發(fā)和脾分布較多外,在腎和膀胱的積累顯著增加。停藥2周后,砷在各臟器組織(心除外)中的含量普遍顯著降低,降幅從21.1%到69.5%不等,但仍有部分臟器組織(如肝、肺、大腦、膀胱、皮膚、毛發(fā))中的砷含量高于單次藥后96h的砷含量。綜上所述,雄黃中的砷只有少量的可溶性砷吸收進(jìn)人血液。單次給藥后,砷在大