植物葉綠體色素含量的測(cè)定(沈)課件

植物葉綠體色素含量的測(cè)定福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院植物生理生化實(shí)驗(yàn)室植物葉綠體色素含量的測(cè)定福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院12、為什么要測(cè)定完全液和缺素苗的葉綠色素含量？1、為什么要測(cè)定葉綠色素？2、為什么要測(cè)定完全液和缺素苗的葉綠色素含量？1、為什么2葉綠體色素在光合作用中起到吸收光能、傳遞光能的作用.因此，葉綠體色素的含量與植物的光合速率密切相關(guān)。在一定范圍內(nèi)，光合速率隨葉綠體色素含量的增加而升高。另外，葉綠體色素的含量是植物生長(zhǎng)狀態(tài)的一個(gè)反映，一些環(huán)境因素如元素缺乏、干旱、鹽漬、低溫等都可以影響葉綠體色素的含量與組成，并因之影響植物的光合速率。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康娜~綠體色素在光合作用中起到吸收光能、傳遞光3二、實(shí)驗(yàn)原理葉綠素a：吡咯環(huán)Ⅱ-CH3

葉綠素b：吡咯環(huán)Ⅱ-CHO葉黃素：3,3’-OH胡羅卜素：3,3’-HMg2+葉綠體色素組成二、實(shí)驗(yàn)原理葉綠素a：吡咯環(huán)Ⅱ-CH3Mg2+葉綠4葉綠素是雙羧酸的酯，一個(gè)羧基被甲醇所酯化，另一個(gè)羧基被葉綠醇所酯化。葉綠素a與b的不同之處是葉綠素a比b多兩個(gè)氫少一個(gè)氧。兩者結(jié)構(gòu)上的差別僅在于葉綠素a的第Ⅱ吡咯環(huán)上一個(gè)甲基(－CH3)被醛基(－CHO)所取代。葉綠素分子含有一個(gè)卟啉環(huán)的“頭部”和一個(gè)葉綠醇(植醇)的“尾巴”。葉綠素是雙羧酸的酯，一個(gè)羧基被甲醇所酯化，另一個(gè)羧基被葉綠醇5高等植物葉綠體色素葉綠素類(lèi)胡蘿卜葉黃素---C40H56O胡蘿卜素---C40H56葉綠素b---C55H70O6N4Mg葉綠素a---C55H72O5N4Mg高等植物葉綠體色素葉綠素類(lèi)胡蘿卜葉黃素---C40H56O胡6這兩類(lèi)色素均不溶于水，而溶于含有水的有機(jī)溶劑，故常用95％的酒精和80％丙酮提取，葉綠體色素易受光氧化，提取色素應(yīng)在弱光中進(jìn)行，并避光保存色素這兩類(lèi)色素均不溶于水，而溶于含有水的有機(jī)溶劑7

葉綠素吸收光譜：葉綠素吸收光譜：8最大吸收區(qū)域在藍(lán)紫光部分（400-500nm），基本上不吸收黃光，從而呈現(xiàn)黃色。

類(lèi)胡蘿卜素吸收光譜：最大吸收區(qū)域在藍(lán)紫光部分（400-500nm），基本9葉綠體色素提取液中各色素的吸收光譜雖有不同，但又存在著明顯的重疊，在不分離的情況下同時(shí)測(cè)定葉綠素a、葉綠素b和類(lèi)胡蘿卜素的濃度，可分別測(cè)定在663nm、645nm（分別是葉綠素a和葉綠素b在紅光區(qū)的吸收峰）和475nm的光吸收，然后根據(jù)Lambert-Beer定律，計(jì)算出提取液中葉綠素a、葉綠素b和類(lèi)胡蘿卜素的濃度。A663=82.04Ca+9.27Cb（1）A645=16.75Ca+45.60Cb（2）葉綠體色素提取液中各色素的吸收光譜雖有不10公式中Ca為葉綠素a的濃度，Cb為葉綠素b濃度（單位為g/L），82.04和9.27分別是葉綠素a和葉綠素b在663nm下的比吸收系數(shù)（濃度為1g/L，光路寬度為1cm時(shí)的吸光度值）；16.75和45.60分別是葉綠素a和葉綠素b在645nm下的比吸收系數(shù)。即混合液在某一波長(zhǎng)下的光吸收等于各組分在此波長(zhǎng)下的光吸收之和公式中Ca為葉綠素a的濃度，Cb為葉綠素b濃度（單位為g/L11將上式整理，可以得到下式：Ca=0.0127A663-0.00269A645（3）Cb=0.0229A645-0.00468A663（4）將葉綠素的濃度改為mg/L，則上式變?yōu)椋篊a=12.7A663-2.69A645（5）Cb=22.9A645-4.68A663（6）CT=Ca+Cb=8.02A663+20.21A645（7）CT為葉綠素的總濃度將上式整理，可以得到下式：12三、實(shí)驗(yàn)儀器及材料實(shí)驗(yàn)材料：缺素營(yíng)養(yǎng)液及完全營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)的玉米苗葉片實(shí)驗(yàn)儀器及試劑：S22分光光度計(jì)；研缽；移液管；漏斗；濾紙；95%乙醇；石英砂；CaCO3三、實(shí)驗(yàn)儀器及材料實(shí)驗(yàn)材料：13葉綠體色素是一種酯，因此不溶于水。通常用含有少量水的有機(jī)溶劑如80％的丙酮，或者95%乙醇的混合液來(lái)提取葉片中的葉綠體色素，用于測(cè)定葉綠體色素含量。之所以要用含有水的有機(jī)溶劑提取葉綠體色素，這是因?yàn)槿~綠體色素與蛋白質(zhì)結(jié)合牢，需要經(jīng)過(guò)水解作用才能被提取出來(lái)。1.葉綠體色素的提取提取方法研磨法浸提法四、實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體色素是一種酯，因此不溶于水。通常用含有少量水的有機(jī)溶劑14研磨法提取光合色素少許石英砂、碳酸鈣和1ml95%乙醇研磨至組織發(fā)白完全轉(zhuǎn)移定容至25ml研磨法提取光合色素少許石英砂、碳酸研磨至組織發(fā)白完全轉(zhuǎn)移定容15測(cè)量光吸收利用S22分光光度計(jì)分別測(cè)定葉綠體色素提取液在470nm、649nm和665nm下的吸光度測(cè)量光吸收16五、結(jié)果計(jì)算與分析1.結(jié)果計(jì)算

C(mg/L)×提取液總量（L）×稀釋倍數(shù)Chl=(mg/g鮮重)材料鮮重（g）*10002.比較分析不同營(yíng)養(yǎng)處理的植物葉綠素含量差異及其Chla/Chlb差異五、結(jié)果計(jì)算與分析1.結(jié)果計(jì)算17實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：1、研磨要在弱光下進(jìn)行，且速度要快；2、研磨時(shí)要加入少量的碳酸鈣，保護(hù)葉綠素；3、殘?jiān)械纳匾浞窒疵摚?、波長(zhǎng)要調(diào)準(zhǔn)；5、比色液不能混濁。實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：18六、思考題

1、