葛根總黃酮對急性酒精中毒小鼠自主行為活動(dòng)的影響

葛根總黃酮對急性酒精中毒小鼠自主行為活動(dòng)的影響

酒精飲料被稱為急性酒精飲料。這是由于喝得太多的酒精或酒精飲料，中樞神經(jīng)系統(tǒng)會從興奮變?yōu)橐种?，并表現(xiàn)出一些中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，如肝臟、腎臟、胃、脾、心臟和其他重要的人體器官?？赡軙劳?。葛根為豆科植物野葛Puerarialobata(Willd.)Ohwi或甘葛藤P.thomsoniiBenth的干燥根,味甘,性辛、涼,歸脾、胃經(jīng),具有解酒,透疹、解肌退熱、除煩、生津止渴等功效。葛根一直是眾多解酒方藥中的重要組成部分,含葛根的方藥較多,有很好的解酒和預(yù)防作用。但葛根中具有解酒作用的具體成分尚不明確。本實(shí)驗(yàn)以葛根總黃酮為研究對象,研究其對醉酒小鼠的行為學(xué)的影響,并評價(jià)其對醉酒的預(yù)防作用,為開發(fā)預(yù)防醉酒的藥品或保健品提供基礎(chǔ)。1濃縮和濃縮方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級昆明小鼠,體質(zhì)量(20±2)g,雄性,購于廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,許可證編號:SCXK(粵)20130020。1.2藥物與試劑葛根加8倍量70%乙醇水浴回流3h。共2次,合并濾液,減壓濃縮。濃縮液甲醇溶解,過已活化300目硅膠柱,甲醇與氯仿混合溶劑(甲醇:氯仿=2∶7)洗脫。收集洗脫液,減壓濃縮,真空干燥得葛根總黃酮1.3主要儀器恒溫水浴箱(北京醫(yī)療設(shè)備廠),旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠),自主活動(dòng)儀(成都泰蒙儀器有限公司),TGL-16G臺式高速離心機(jī)(上海醫(yī)用分析儀器廠),分析天平(上海?？惦娮觾x器廠),氣相色譜分析儀(北京瑞利儀器有限公司)。2對小鼠的影響2.1單次預(yù)防給藥雄性KM小鼠60只,體質(zhì)量(20±2)g。隨機(jī)分為正常組、模型組、葛根高劑量組、葛根中劑量組、葛根低劑量組,共5組,每組12只。正常組、模型組灌胃生理鹽水,葛根高、中、低劑量組給予相應(yīng)劑量的葛根總黃酮。灌胃體積均為0.2mL/10g。灌胃給藥后30min,按0.14mL/10g體重給予56%紅星二鍋頭2.2多次預(yù)防給藥雄性KM小鼠60只,體質(zhì)量(20±2)g。隨機(jī)分為正常組、模型組、葛根高劑量組、葛根中劑量組、葛根低劑量組,共5組,每組12只。正常組、模型組灌胃生理鹽水,葛根高、中、低劑量組給予相應(yīng)劑量的葛根總黃酮。灌胃體積均為0.2mL/10g。連續(xù)灌胃3d,末次灌胃給藥后30min,按照0.14mL/10g體質(zhì)量給予56%紅星二鍋頭,造成醉酒模型。測定小鼠攀附時(shí)間、睡眠潛伏時(shí)間、睡眠時(shí)間。并記錄給酒30min后小鼠5min內(nèi)自主活動(dòng)次數(shù),以后每1h記錄,記錄5h。2.3葛根總黃酮對血液中乙醇濃度的影響小鼠禁食不禁水12h后,每組小鼠按照500mg/kg進(jìn)行給藥,30min后每組按0.14mL/10g灌胃紅星二鍋頭。小鼠給藥后分別在0.5h、1h、1.5h、2h、3h,5個(gè)時(shí)段各取5只小鼠的血液。置于38℃的水浴鍋中,靜置2h后,3000r/min離心機(jī)離心10min,取上層血清,并用0.45μm微孔濾膜濾過,濾液用蒸餾水稀釋1倍,取5μL進(jìn)行乙醇含量的測定,得出的峰面積通過用乙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=345.0X+248.0(r=0.99),計(jì)算得出小鼠血清中乙醇的含量。2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件單因素方差分析、非參數(shù)檢驗(yàn)處理,實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ue0af±s)表示。P<0.05、P<0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3單次給藥后大鼠自主活動(dòng)及血液中乙醇濃度ld503.1.1單次給藥對小鼠醉酒及醒酒的影響葛根高、中、低劑量組攀附時(shí)間、睡眠潛伏期均長于模型組,睡眠時(shí)間均短于模型組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01);表明葛根總黃酮提取物具有顯著延長醉酒小鼠攀附時(shí)間、延長睡眠潛伏期、縮短睡眠時(shí)間的作用。(見表1)3.1.2單次給藥對自主活動(dòng)影響葛根高、中、低劑量組及模型組小鼠給酒30min、1h、2h、3h、4h、5h后自主活動(dòng)次數(shù)均大于正常組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01);葛根高、中、低劑量組小鼠給藥30min、1h、2h、3h、4h、5h后自主活動(dòng)次數(shù)均低于及模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01);表明葛根總黃酮能明顯降低醉酒小鼠興奮性,表現(xiàn)為自主活動(dòng)次數(shù)顯著減少。(見表2)3.2多次給藥3.2.1多次給藥對小鼠醉酒及醒酒的影響多次給藥后葛根高、中、低劑量組攀附時(shí)間、睡眠潛伏期均長于模型組,睡眠時(shí)間均短于模型組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01);表明葛根總黃酮提取物具有顯著延長醉酒小鼠攀附時(shí)間、延長睡眠潛伏期、縮短睡眠時(shí)間的作用。(見表3)3.2.2多次給藥自主活動(dòng)影響多次給藥后葛根高、中、低劑量組及模型組小鼠給藥30min、1h、2h、3h、4h、5h后自主活動(dòng)次數(shù)均大于正常組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01);葛根高、中、低劑量組小鼠給藥30min、1h、2h、3h、4h、5h后自主活動(dòng)次數(shù)均低于及模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01);表明葛根總黃酮能明顯降低醉酒小鼠興奮性,表現(xiàn)為自主活動(dòng)次數(shù)顯著減少。(見表4)3.3葛根總黃酮對血液中乙醇濃度的影響葛根高、中、低劑量組小鼠給藥30min、1h、2h、3h、4h、5h后血液中乙醇濃度均低于及模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);表明葛根總黃酮能在一定程度上影響酒精的吸收或代謝,使血清中乙醇含量相應(yīng)的降低。(見表5)。4對酒精發(fā)酵的影響葛根總黃酮是葛根提取物中的主要有效成分,對預(yù)防醉酒有一定的作用。結(jié)果表明:葛根總黃酮能明顯延長急性酒精中毒小鼠攀附時(shí)間、延長睡眠潛伏期;縮短睡眠時(shí)間,降低醉酒后小鼠的自主活動(dòng)次數(shù)。醉酒時(shí)大量的酒精經(jīng)胃壁、腸壁吸收后快速進(jìn)入人體而大量的蓄積在血液或組織中。酒精首先作用于腦干網(wǎng)狀體致使大腦皮質(zhì)的機(jī)能亢進(jìn),當(dāng)腦中酒精濃度增加到一定量時(shí),大腦皮層就產(chǎn)生睡覺的意識,最后發(fā)生麻木性昏迷。體內(nèi)酒精經(jīng)代謝消耗后恢復(fù)其原有狀態(tài)。酒精由消化系統(tǒng)吸收進(jìn)入人體的速度快。空腹飲酒,第1小時(shí)就可吸收60%,1個(gè)小時(shí)后,可高達(dá)90%以上。而酒精在體內(nèi)氣化和排泄較慢,因此,大量的酒精積累在血液或組織中。酒精可作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng),使機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的變化,并依次表現(xiàn)為興奮期、共濟(jì)失調(diào)期、昏睡期。小鼠酒精灌胃后主要由胃、腸道吸收,并迅速進(jìn)入血液、組織中,血清中乙醇濃度逐漸上升。小劑量的乙醇作用于腦中突觸后膜苯二氮卓-γ-氨基丁酸受體而影響大腦皮層,而表現(xiàn)出興奮狀態(tài)本實(shí)驗(yàn)中給酒后小鼠血液中的乙醇含量在1.5-2h達(dá)到最大值,之后乙醇含量逐漸降低。葛根總黃酮高、中、低劑量均使小鼠血清中乙醇濃度降低,乙醇濃度上升的趨勢較緩慢,在小鼠血清中乙醇濃度達(dá)到最大值之后,葛根總黃酮高、中、低劑量組小鼠血清中乙醇濃度明顯降低,即高、中、低濃度葛根總黃酮均能抑制胃腸道對酒精的吸收或加速小鼠體內(nèi)的酒精代謝;高、中、低濃度葛根總黃酮均能延長醉酒小鼠的睡眠潛伏期,縮短醉酒小鼠的睡眠時(shí)間;降低醉酒小鼠的興奮性。表明葛根總黃酮高、中、低劑量均有較好的解酒作用,高劑量組明顯優(yōu)于中、低劑量組,中、低劑量組無明顯差別。單次給藥與多次給藥均有很好的解酒效果,單次給藥與多次給藥之間沒有明顯差別。本研究結(jié)果表明,葛根總黃酮能明顯延長小鼠的醉酒時(shí)間,顯著降低醉