中醫(yī)研究中實驗動物專家講座

大家上過“試驗動物學”沒有？動物試驗是近代生命科學試驗發(fā)展起來主要伎倆，生命科學許多重大發(fā)覺和突破均建立在動物試驗之上。

中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第1頁美國心理學會動物研究指導總則“動物行為研究者應努力促進對基本行為原理了解和/或為提升人類健康和幸福作貢獻。為到達這些目標，研究者要確保動物權利和人道地對待它們。即使有法律和要求，但一只動物即時保護則有賴于科學家個人良知。”（B.H.坎特威茨等.試驗心理學,116）美國心理學會還提供了學生研究者指導標準?？傮w上，“當采取動物被試時，應精心照料并盡可能降低它們痛苦和不適?！保˙.H.坎特威茨等.試驗心理學,124）中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第2頁中醫(yī)能不能采取試驗動物？突出問題是四診困難、情志難以把握，大家有什么看法。有利原因、不利原因分別有哪些？有些人懷疑心理學研究價值，責問政府何以資助小白鼠走迷津。這是他們對于心理學研究期望不恰當，而不在于心理學研究本身。（B.H.坎特威茨等.試驗心理學,24）有些人經(jīng)過幾年研究發(fā)覺，盡管不一樣地域山雀“方言”不一樣，但在同一地域生活山雀所發(fā)出入侵警報模式確能夠穩(wěn)定地延續(xù)幾代。（B.H.坎特威茨等.試驗心理學,35）雄獅試驗。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第3頁動物試驗主要性（教材第二段）：動物試驗是試驗中醫(yī)學主要組成部分和主要研究方法和伎倆，不論對中醫(yī)學數(shù)千年來所積累疾病認識、防治豐富經(jīng)驗進行驗證和總結，對歷代醫(yī)家理法方藥研究，對中醫(yī)學理論研究和發(fā)展，還是對當前中醫(yī)藥學各個學科教學、科研，對新治療方法（包含應用藥品和非藥品療法）發(fā)展，乃至對新中醫(yī)藥學理論體系創(chuàng)建，等等，都是不可缺乏。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第4頁近幾十年來，試驗動物學已經(jīng)作為一門獨立學科快速地發(fā)展起來。試驗動物學對試驗動物喂養(yǎng)、繁殖、馴化、監(jiān)測和開發(fā)應用，以及動物試驗規(guī)范和要求形成了一整套完整理論和方法，這些一樣適合用于中醫(yī)動物試驗。同時，中醫(yī)動物試驗又有其本身特點，其研究、發(fā)展還將豐富試驗動物學內(nèi)容。第一節(jié)動物試驗主要要求和特點中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第5頁一、試驗動物選擇試驗動物定義：試驗動物是指以試驗研究為目標，在一定環(huán)境條件控制下，經(jīng)過培養(yǎng)馴化，含有明確生物學特征和清楚遺傳和微生物背景動物。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第6頁圖1小鼠圖2裸小鼠圖4裸大鼠圖5大鼠圖6白兔圖7兔喂養(yǎng)圖8比格犬及其喂養(yǎng)圖9馬及其喂養(yǎng)慣用試驗動物中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第7頁試驗動物種類繁多，在進行試驗時，應依據(jù)課題需要和動物特征加以選擇，使研究目標與動物種屬、特征和個體差異相吻合，才能確保研究工作順利進行。不一樣科學試驗要求選擇和開發(fā)最適宜試驗動物。正確選擇試驗動物，試驗設計周密詳盡，能夠節(jié)約人力、動物和時間，以最小代價，最大程度地取得可靠研究結果。不然，不但會造成無須要浪費，嚴重還會影響到試驗結果判斷，甚至造成試驗失敗。所以，選擇和開發(fā)試驗動物是動物試驗首要步驟，至關主要，應給予足夠重視。在醫(yī)學研究中首先要從研究目標和試驗要求來選擇試驗動物，其次要考慮是否輕易取得、是否經(jīng)濟及輕易喂養(yǎng)等原因。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第8頁三個基本要求：試驗動物通常應該具備個體間均一性、遺傳性能穩(wěn)定性和比較輕易取得這三個基本要求。詳細要求以下：1．盡可能選取機能、代謝、結構及其它方面機能與人相同試驗動物普通來說，動物進化階段愈高，機能、代謝、結構愈復雜，也就愈靠近人類。2．選取標準化試驗動物標準化試驗動物指遺傳背景明確、喂養(yǎng)環(huán)境與動物體內(nèi)微生物得到控制、符合一定標準試驗動物。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第9頁只有選取標準化試驗動物，而且試驗過程也在標準環(huán)境中喂養(yǎng)動物，在試驗中才能排除因動物雜交、遺傳上不均質(zhì)及環(huán)境條件改變，所引發(fā)個體反應不一致，排除因動物攜帶細菌、病毒、寄生蟲和潛在疾病影響，才能便于分析試驗結果，降低試驗誤差，提升科學性，準確性，把所取得結果與同類研究進行比較、交流，并得到認可。在試驗研究中應防止使用隨意交配繁殖動物，而應依據(jù)研究目標選擇用遺傳學控制方法培育出來近交系、突變系、系統(tǒng)雜交或封閉群動物。同時應對試驗動物進行微生物控制，發(fā)展使用無菌動物、已知菌動物或無特定病原體（SPF）動物。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第10頁

試驗動物分類按遺傳控制分類：（1）近交系，即純系動物：其動物遺傳均質(zhì)性確保了試驗反應穩(wěn)定性。（2）封閉群動物：能很好地代表自然群體遺傳特征。（3）雜交一代動物（F1）：在一定程度上，兼有近交系和封閉群特點。（4）突變動物：往往含有鮮明人類疾病模型特征。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第11頁

按微生物控制程度，我國將試驗動物分為四個等級：（1）普通級動物：普通為教學示范用。（2）清潔級動物：國內(nèi)科研工作要求標準動物，適合于大多數(shù)科研課題。（3）無特定病原體動物（SPF動物）：國際標準試驗動物。（4）無菌動物（CF動物）和悉生動物：僅在特殊課題需要時使用。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第12頁圖10動物試驗中心圖11清潔級準備室圖12清潔級走廊圖13小鼠喂養(yǎng)室中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第13頁3．選取解剖、生理特點符合試驗目標要求試驗動物催吐試驗——適宜選取猴、貓，不選取大小鼠，因為小/大鼠無嘔吐反應。膽囊功效試驗——不選取大鼠，因為大鼠無膽囊。發(fā)汗中藥研究——不能選取小鼠（無汗腺）。慢性支氣管炎試驗——不能選取大小鼠，因為小/大鼠氣管及支氣管腺不發(fā)達。計劃生育研究——常選取小鼠和大鼠。因繁殖力強，性周期和妊娠期短，生長快。如慣用小鼠做抗生育、抗著床、抗早孕、抗排卵等試驗應用上首選動物。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第14頁心血管病研究——豬(辛克萊小型豬/廣西巴馬小型豬/歐米尼豬)。豬冠狀動脈，在解剖學、血液動力學上與人類相同。對高膽固醇食物反應與人一樣，很輕易出現(xiàn)動脈粥樣硬化經(jīng)典病灶。試驗外科學研究——犬(比格犬/華北犬/西北犬/狼犬)。內(nèi)臟與人相同，百分比近似。臨床醫(yī)生在研究新手術或麻醉方法時往往選取犬來做動物試驗，取得經(jīng)驗和技巧后用于臨床。如心血管外科，腦外科，斷肢再植，器官和組織移植等。行為學和精神病及神經(jīng)生物學研究——獼猴。制造和判定脊髓灰質(zhì)炎疫苗——獼猴是唯一試驗動物。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第15頁4．選取不一樣種屬品系試驗動物一些特殊反應，使適合于不一樣研究目標需要腫瘤研究——常選取近交系小鼠，如AKR小鼠白血病發(fā)生率可達90％；C3H小鼠乳腺癌發(fā)病率達97％，而不選取C57BL等小鼠，因其乳腺癌發(fā)病率極低(＜5％)。發(fā)燒、解熱和檢驗致熱源試驗——適宜選取兔做試驗，因?qū)俸銣貏游?，對致熱物質(zhì)反應敏感。高血壓病研究——選取SHR大鼠，因自發(fā)性高血壓，心血管疾病發(fā)病率高，對降壓藥品有反應。耳科學研究——豚鼠聽神經(jīng)對聲波尤其是700～Hz純音最敏感，慣用于聽覺和內(nèi)耳疾病研究。免疫學研究——豚鼠易引發(fā)變態(tài)反應，產(chǎn)生大量補體，是過敏性休克和變態(tài)反應研究首選動物。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第16頁5．試驗動物種屬、品系選擇假如試驗結論只針對某一品系則使用一個品系。假如試驗結論針對整個物種在內(nèi)普通性研究則使用多個不一樣起源品種、品系。普通對多物種進行試驗時，應先選小型動物，再推廣到大型物種；要求只能建立在對多個物種進行試驗基礎上，才能推廣到人類，也稱動物試驗外推。慣用次序時小鼠、大鼠、兔、犬、猴。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第17頁6．恪守動物試驗普通規(guī)則

（1）年紀、體重應依據(jù)試驗目標來選擇適齡動物。普通試驗均用成年動物進行；幼齡動物普通較成年動物敏感；老年動物代謝活動及各種機能低下，反應遲鈍，除了作老年醫(yī)學研究外，其它專業(yè)極少應用。同一試驗所選動物年紀應一致，體重大致相近，普通不應相差10%。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第18頁（2）性別不一樣性別動物對同一試驗處理（如藥品、刺激等）感受性常有差異，在試驗研究中如無特殊要求，普通宜選取雌雄各半做試驗。（3）生理狀態(tài)與健康情況動物不一樣生理狀態(tài)如懷孕、授乳時對外界刺激反應常有所改變，在普通研究中應從試驗組中刪除；必須選取健康動物進行試驗。（4）試驗季節(jié)和晝夜過程不一樣季節(jié)和不一樣晝夜，動物機體反應性會有一定改變，在試驗動物選擇中也應給予注意。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第19頁（5）試驗重復與必定因為不一樣種動物有不一樣功效和代謝特點，所以在必定一個試驗結果時，往往采取兩種以上動物進行比較觀察，尤其將動物試驗結果推斷到人試驗時應該慎重。比如，所選試驗動物如一個為嚙齒類動物，另一個應該為非嚙齒類動物。慣用序列是小鼠、大鼠、狗或猴。二、中醫(yī)動物試驗研究注意點試驗動物在中醫(yī)試驗應用和發(fā)展中，提議注意以下幾個方面。1．中醫(yī)動物試驗研究應以中醫(yī)理論為指導2．中醫(yī)動物試驗研究應從中醫(yī)臨床出發(fā)3．中醫(yī)動物試驗研究應突出中醫(yī)治療標準中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第20頁一、證動物模型開創(chuàng)和發(fā)展自本世紀60年代以來，在中醫(yī)證動物模型制作與研究方面做了大量研究工作。迄今證動物模型逾150各種。其中包含各種虛證（陰虛、陽虛、氣虛、血虛、各臟腑虛）、血瘀證、肝郁證、寒證、熱證、溫病衛(wèi)氣營血諸證、里實證等模型，等等。試驗動物疾病模型應用于中醫(yī)臨床研究，為中醫(yī)診療方法研究提供了大量試驗模型，為臨床理論深化與新理論形成提供了便利。教材上事例很好。第二節(jié)中醫(yī)動物試驗研究主要內(nèi)容中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第21頁二、以動物試驗驗證臨床治療方法，探求其作用機理臨床治療方法動物試驗研究主要包含以下幾方面（以下例子很好，能夠選擇性介紹）：1．研究經(jīng)方作用機理（如姜廷良桂枝湯研究）2．研究名老中醫(yī)經(jīng)驗療法作用機理（如二仙湯研究）3．應用于新藥開發(fā)（如譚日強肝達康片研制）中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第22頁三、中醫(yī)基礎理論研究及其在教學上應用四、其它研究與應用動物試驗在中醫(yī)研究中已滲透到各個領域。除以上所介紹外，較多應用領域有中藥藥理（包含性味歸經(jīng)）試驗研究、中草藥毒理動物試驗、各類慣用中草藥有效成份藥理、毒理和代謝，中草藥原料開發(fā)、保健品和化裝品等開發(fā)，以及對其安全性評價等等。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第23頁從生物學觀點看，人與動物現(xiàn)有特殊性也有其共同，正因為人與動物存在著共同性，所以動物試驗結果對人是有參考意義，而且試驗動物能夠依據(jù)研究目標需要進行各種試驗，允許嚴格控制試驗條件，能夠重復試驗，進行多指標觀察與損害性觀察。所以利用動物試驗，結合臨床觀察，已成為中醫(yī)藥研究必要伎倆。因為辨證為中醫(yī)特點之一，所以動物證研究被列為研究中醫(yī)突破口，用動物模擬“證”試驗研究。然而，復制中醫(yī)“證”動物模型工作復雜、難度大、任務艱巨。盡管如此，近年來在廣大中、西醫(yī)和中西醫(yī)結合科研工作者努力下，研制出了大量動物模型。其復制方法主要有3類：第三節(jié)證動物模型研究范例中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第24頁1．依據(jù)中醫(yī)基礎理論。2．依據(jù)西醫(yī)臨床、藥學知識。3．依據(jù)科研結果。教材介紹了三個范例。一、寒涼藥、溫熱藥所致寒證、熱證動物模型二、乙酰苯肼致血虛證動物模型三、風寒濕邪家兔痹證模型問題是，慣用試驗動物，大鼠、小鼠能不能實現(xiàn)四診，能不能實現(xiàn)基于四診辨證，以及辨證論治？中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第25頁小鼠辨證論治方法由來和進展方肇勤潘志強陳曉盧文麗付曉伶李海燕陳德溯侯俐廖明娟湯偉昌管冬元吳中華許敏闞衛(wèi)兵許家佗上海中醫(yī)藥大學

中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第26頁

引言

辨證論治是中醫(yī)學優(yōu)勢。在新形式下，怎樣深入揭示辨證論治機制、提升辨證論治療效，是中醫(yī)、中西醫(yī)結合基礎學科主要研究方向。辨證論治基礎研究主要借助于小鼠等試驗動物。為了滿足研究需要，國內(nèi)學術界業(yè)已發(fā)展出200余種證候動物模型，集中在常見氣、血、陰、陽虛證和實熱、血瘀等實證。在很大程度上填補了辨證論治研究動物模型欠缺，促進了辨證論治基礎研究與發(fā)展。不過迄今為止，尚缺乏小鼠四診和基于四診辨證論治方法和技術，這成為新時期中醫(yī)藥基礎研究瓶頸。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第27頁

那么，為何要實現(xiàn)基于四診小鼠辨證？這是因為一些學術問題已凸現(xiàn)出來：（1）證候是體內(nèi)多系統(tǒng)、組織、細胞、分子等不一樣層次生物學改變外在綜合反應。因為缺乏小鼠四診方法，以往相關小鼠證候判斷，主要依據(jù)試驗室檢測數(shù)據(jù)，或治療反證，一直未能建立起證候與試驗室指標一一對應聯(lián)絡。而大量研究表明，當前一些慣用試驗室指標還不能代表證候。（2）試驗室檢測，大多要求損傷、處死動物，如此難以動態(tài)觀察證候自然演變和辨證論治療效。（3）試驗室檢測，大多成本高、檢測周期長，不利于辨證論治基礎研究和發(fā)展高效、批量要求。

中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第28頁

（4）大量證候動物模型、試驗室檢測和方證論治一再證實，試驗用大鼠、小鼠是存在證候。（5）我們長久動物試驗，一再觀察到試驗動物大鼠、小鼠存在體質(zhì)差異，以及同病異證、異病同證現(xiàn)象，不加辨證單方治療，療效往往受到限制，甚至會產(chǎn)生副作用。所以，我們提出，實現(xiàn)小鼠基于四診辨證是學術發(fā)展必定趨勢和要求。那么，怎樣實現(xiàn)小鼠四診呢？比如問診怎樣問？中醫(yī)四診重視面色和舌診，小鼠頭面充滿被毛，舌又不會配合地伸出來，怎樣望診？小鼠怎樣把脈？一些學者還一直對中醫(yī)四診有顧慮，不能量化，小鼠四診能否量化？對此我們開展了長久探索和研究，結果以下：中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第29頁

圖1正常與晚期荷瘤小鼠面容圖2正常小鼠圖3腫瘤壓迫張口呼吸小鼠

一、疾病小鼠存在證侯及其演變中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第30頁

圖4早期荷瘤昆明種小鼠圖5中期荷瘤氣虛小鼠

圖6中晚期荷瘤氣虛小鼠圖7中晚期荷瘤陰虛小鼠圖8晚期荷瘤陰陽兩虛小鼠中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第31頁以下為不一樣組別荷瘤小鼠爪：

圖11爪消瘦而略紅圖12爪淡掌略胖圖9正常小鼠爪圖10爪淡伸展無力中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第32頁以下為編號為H9荷瘤小鼠不一樣日期拍攝爪：

圖15腫瘤接種第2周圖16腫瘤接種第2.5周圖13腫瘤接種第1周圖14腫瘤接種第1.5周中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第33頁二、正常小鼠存在體質(zhì)差異/證候差異

圖17正常昆明種小鼠后爪圖18偏虛證正常昆明種小鼠后爪

圖19正常昆明種小鼠后爪R值正態(tài)分布圖20正常昆明種小鼠體重正態(tài)分布中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第34頁

三、小鼠怎樣問診

人、鼠對話是困難，不過問診所期望采集信息卻大多是能夠取得，而且部分信息完整性、可靠性還優(yōu)于普通臨床上問診。為何呢？眾所周知，問診歸納起來是十問：一問寒熱二問汗，三問頭身四問便，五問飲食六胸腹，七聾八渴俱當辨，九問舊病十問因，還要參考服藥。臨床上，患者普通情況也是問診主要內(nèi)容。對此，小鼠能夠經(jīng)過以下路徑實現(xiàn)：中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第35頁1.問寒熱。小鼠畏寒，往往表現(xiàn)為扎堆，喂養(yǎng)中能夠觀察到；畏寒另一特點是畏寒局部體表溫度下降，經(jīng)過體表紅外成像數(shù)碼拍攝和圖像處理，能夠準確定量；而體內(nèi)和體表溫度改變，能夠分別經(jīng)過肛溫、腋溫、尾溫、爪溫檢測取得。所以，以上檢測能夠很好地到達問寒熱主要目標，而且部分實現(xiàn)了量化。

2.問汗。有報道嘗試經(jīng)過特殊染色技術，檢測爪面出汗點和數(shù)量多寡；有試驗觀察了皮毛潮濕程度，部分填補了問汗困難。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第36頁

3.問頭身。頭身感受能夠綜合兩個方面信息取得：1）造模方法，假如這些方法在臨床上可能造成頭身證候，比如頭顱手術、高血壓、感冒等，能夠參考；2）小鼠曠場自主探究和活動、抖攏檢測，假如頭身痛楚，則小鼠活動和探究頻率和幅度會降低。

4.問便。喂養(yǎng)能夠直接觀察大便數(shù)量和質(zhì)量，小便能夠經(jīng)過代謝籠完整回收，觀察其數(shù)量和性狀。

5.問飲食。攝食量和飲水量能夠準確測量，嚙齒頻率（經(jīng)過聲音采集與分析）能夠部分反應其脾胃健康是否。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第37頁

6.胸腹。方法類似于問頭身。

7.聾。生理學有聽覺反應檢測，能夠采?。恍∈髸鐖?、抖攏檢測能夠觀察小鼠反應靈敏與遲鈍，間接反應其聽覺。

8.渴。飲水量準確測量，以及結合代謝籠尿液搜集數(shù)量、顏色，判斷其可能水分經(jīng)過呼吸、汗液、尿液代謝路徑：陽熱盛往往表現(xiàn)為飲多而尿少且赤；下消則飲一溲一，等等。

9.問舊病。試驗動物疾病遺傳，以及疾病或證候造模方法是明確，而臨床卻往往做不到。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第38頁

10.問病因。同上，而且造模藥品干預過程也是明確。

11.參服藥。治療干預統(tǒng)計是十分明確。

12.普通情況。包含動物購入和試驗日期、品系、月齡、性別，喂養(yǎng)、繁殖背景等均是明確。所以，小鼠即使難以實現(xiàn)傳統(tǒng)意義上問診，比如疼痛性質(zhì)或連續(xù)時間，但問診許多主要內(nèi)容，卻是能夠詳細、準確取得。而且，大多能夠準確地定量，因而其可靠性、準確性往往還要優(yōu)于通常意義上臨床問診。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第39頁

四、小鼠怎樣望診

1.望面色

以下列圖右是正常小鼠，腫瘤虛證小鼠在左側。從圖中能夠看到，正常小鼠頭部上抬，直視相機鏡頭，很關注；眼裂寬，眼色紅潤、有神；吻部飽滿、紅潤；腫瘤虛證小鼠則相反，頭低垂、目光呆滯，失去了好奇；雙目色暗；吻部瘦削、色暗滯。21正常與腫瘤小鼠面容與體態(tài)

中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第40頁

2.望舌

清醒狀態(tài)下，小鼠舌不易自主伸出，假如強迫其伸出，必定嚴重干擾氣血運行，不符合中醫(yī)四診標準。當小鼠麻醉后，能夠方便地輕輕撐開小鼠嘴，使其舌自然伸出口腔之外，采取顯微放大（8-15×），是能夠清楚觀察到。其表現(xiàn)與人類舌象十分相同。血虛舌淡，陰虛陽盛舌偏紅。不過，麻醉會干擾小鼠氣血運行；不一樣模型小鼠對麻醉耐受度還不一樣，甚至難以接收；麻醉過深會造成小鼠死亡，過淺則小鼠會出現(xiàn)掙扎、不配合等等。所以，常規(guī)地開展舌診，有一定限制。有沒有部分能夠替換方法？中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第41頁

圖22正常小鼠舌圖23環(huán)磷酰胺模型圖24乙酰苯肼模型圖25甲狀腺素模型圖26丙基硫氧嘧啶模型

圖27正常小鼠爪圖28環(huán)磷酰胺模型圖29乙酰苯肼模型圖30甲狀腺素模型圖31丙基硫氧嘧啶模型

圖32正常小鼠尾圖33環(huán)磷酰胺模型圖34乙酰苯肼模型圖35甲狀腺素模型圖36丙基硫氧嘧啶模型小鼠舌象與爪尾比較中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第42頁

3.望爪和尾

與人類不一樣，小鼠爪、尾角化質(zhì)比較薄，能夠很好地反應氣血充盈和陰陽盛衰表現(xiàn)。以上不一樣模型小鼠爪、尾（8×）各取自以上舌象同一小鼠。就紅色程度而言，各模型舌、爪、尾是一致，爪、尾色能夠部分替換舌色和面色。將以上標準拍攝顯微數(shù)碼照片輸入電腦，采取計算機和Photoshop7.0圖像軟件，能夠?qū)λ髤^(qū)域提取色素，圖像挖掘。所取得國際標準色R、G、B數(shù)值（R代表紅色，G代表綠色，B代表藍色），能夠換算出紅色程度分量值r。r=R/（R+G+B）。將以上不一樣模型舌、爪、尾小鼠r提取并作圖以下：中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第43頁

以上結果說明：（1）舌、爪、尾顏色改變趨勢是一致，r值改變趨勢也一致。（2）反應紅色程度，舌優(yōu)于爪、爪優(yōu)于尾。所以，要觀察氣血寒熱，優(yōu)先觀察舌、其次是爪。

（3）經(jīng)過標準顯微攝影和經(jīng)計算機圖像處理，能夠?qū)崿F(xiàn)部分小鼠望診標準化、客觀化和計量化。圖37計算機圖像處理后各組小鼠爪、尾、舌r值中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第44頁

4.望診其它采集內(nèi)容

包含：稱重、望形體虛實、望形體神、望形體寒熱、望運動步態(tài)、望精力、望毛色虛實、望呼吸情況、望眼神、望耳、望鼻、望唇、望腹、望二陰、望大便、望小便、望爪、望尾、望睡眠、爪和尾顯微拍照（顏色、胖瘦、光澤、爪舒展、爪伸展、爪老嫩、爪潔凈、爪潰爛）。5.不一樣品系小鼠爪等證候表現(xiàn)非常一致

以上望診方法，是否適合用于常見不一樣品系小鼠？黑色與白色小鼠是否一致？我們比較了慣用不一樣品系小鼠C57小鼠（黑色）、BALBc、ICR、昆明小鼠（均為白色）四診表現(xiàn)，發(fā)覺含有很高一致性。這一結果提醒，我們所建立望診方法是適合用于慣用不一樣品系小鼠。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第45頁以下是不一樣品系小鼠爪：

圖38C57小鼠爪圖39BALBc小鼠爪圖40ICR小鼠爪圖41昆明小鼠爪中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第46頁五、小鼠怎樣切診1.小鼠怎樣把脈

我們沒有開展小鼠把脈研究，主要是擔心會干擾其氣血運行。然而，我們建立了小鼠自然狀態(tài)下心電快速采集。該設計思緒和采集裝置已經(jīng)取得中華人民共和國專利，專利號為：ZL03116816.7。能夠類似于檢測脈至數(shù)與節(jié)律，如促、結、代、數(shù)、疾、緩、遲等脈象。2.切診其它項目與內(nèi)容

包含體溫和膚之溫涼、腫塊大小與質(zhì)地、肌力強弱等，不一樣疾病和證候動物還會有一些特殊檢測內(nèi)容。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第47頁六、小鼠怎樣聞診

小鼠聞診內(nèi)容當前主要為嗅氣味，聲音標準采集和分析將有利于判斷小鼠虛實。七、小鼠四診標準化、客觀化、計量化采集與分析

為實現(xiàn)小鼠非創(chuàng)傷性標準化、客觀化、計量化四診檢測，我們提出并初步建立了小鼠四診工作站。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第48頁

1.思緒和標準

繼承中醫(yī)四診和辨證論治理論與方法，模擬中醫(yī)臨床四診信息采集方式，實現(xiàn)小鼠非創(chuàng)傷性四診檢測，同時部分實現(xiàn)四診檢測標準化、量化，提升四診檢測速度，以適應大樣本檢測之需。即：（1）非創(chuàng)傷性檢測；（2）標準化、客觀化、計量化；（3）可操作標準，即操作輕易和方便，便于掌握和普及；（4）低成本標準，利于普及；（5）流水作業(yè)標準，以提升檢測速率。中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第49頁

2.小鼠四診工作站內(nèi)容

（1）小鼠行為學曠場試驗檢測單元（2）小鼠爪、尾顯微放大拍攝單元（3）小鼠舌顯微放大拍攝單元

圖42小鼠曠場檢測圖42-1小鼠爪尾顯微放大拍攝單元中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第50頁（4）小鼠自然狀態(tài)下心電快速采集單元

圖43小鼠清醒狀態(tài)下前后肢引導出心電圖42－3小鼠爪持法圖42－3小鼠尾持法中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第51頁（5）小鼠腋溫采集單元（6）小鼠體重采集單元（7）小鼠整體外觀攝影單元（8）小鼠抖攏自主活動情況采集單元（9）小鼠攝食量稱量單元（10）小鼠飲水量測量單元（11）荷瘤小鼠瘤徑測量（12）信息綜合處理單元3.小鼠四診檢測操作流程和標準（1）操作流程（2）操作標準中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第52頁八、小鼠常見證候辨證標準1．四診信息標準采集2．建立各四診信息正常參考值（1）建立試驗前各四診信息正常參考值（2）建立正常對照組動態(tài)正常參考值（3）部分檢測數(shù)據(jù)基數(shù)校正3．癥狀歸類預處理表1形質(zhì)、遲動、淡、紅、青紫、瘀、寒熱癥狀類類別癥狀形質(zhì)降低如消瘦、體重減輕/偏輕、爪和尾瘦癟，等形質(zhì)增加如胖、體重偏重/重、爪和尾胖/腫，等動心率偏數(shù)/數(shù)、吻和軀體移動增加，等遲心率緩/遲、吻和軀體移動減弱，等淡唇、耳、爪、尾淡/偏淡等紅唇、耳、爪、尾紅/偏紅等熱腋溫偏高/高等寒腋溫低/偏低、蜷縮、扎堆、發(fā)抖等青紫、瘀唇、耳、爪、尾暗、偏暗/青紫、腫塊，等中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第53頁表2虛實、濕、毒、病因病邪、病態(tài)癥狀歸類類別癥狀實如：病邪造模、腫瘤，等虛如：老年、發(fā)育不良，食量降低、體重減輕等濕大便偏濕、粘液便、皮毛濕，等毒如癌腫等病因病邪如接種腫瘤、血管結扎、失血，等病態(tài)如爪不潔、污物附著，等表3五臟定位癥狀歸類類別癥狀心神志異常、眼中無神、嗜臥、心臟病變等肝筋脈拘攣、目疾、多怒撕咬、或肝臟病變等脾飲食降低、腹脹滿、肌體羸瘦、瀉利等肺皮膚病變、喘急、鼻孔見有出血和撓鼻等腎老年、羸瘦、發(fā)育不良、生殖及生殖器異常等中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第54頁

4．常見寒熱、虛實、氣血、陰陽、病邪、五臟證候辨證標準

（1）寒、熱、虛、實等辨證標準

表4寒、熱、虛、實等辨證標準證辨證標準寒證寒表現(xiàn)1項或以上偏寒證寒表現(xiàn)1項或以上，權重分值低熱證紅、熱表現(xiàn)1項或以上偏熱證紅、熱表現(xiàn)1項或以上，權重分值低虛證虛、形質(zhì)降低、遲、色淡等表現(xiàn)1項或以上，項目多，程度重偏虛證虛、形質(zhì)降低、遲、色淡等表現(xiàn)1項或以上，權重分值低實證實、形質(zhì)增加、濕、毒、病因病邪等表現(xiàn)1項或以上，愈重愈實偏實證實、形質(zhì)增加、濕、毒、病因病邪等表現(xiàn)1項或以上，權重分值低中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第55頁（2）陰虛證、陰虛火旺、陽虛證、陰陽兩虛、氣虛證、血虛證等辨證標準

表5陰虛證、陰虛火旺、陽虛證、陰陽兩虛、氣虛證、血虛證等辨證標準證辨證標準陰虛證形質(zhì)降低1項，或虛證+紅、熱、動1項或以上偏陰虛證形質(zhì)降低1項，或虛證+紅、熱、動1項或以上，權重分值低陰虛火旺證陰虛證+火征，紅、熱、動分值高陽虛證虛證+（寒1項或以上，或+遲、淡2項或以上）偏陽虛證虛證+（寒1項或以上，或+遲、淡2項或以上，權重分值低）陰陽兩虛證虛證分值高（有別于氣虛），或陽虛證+陰虛證1項或以上氣虛證遲、虛證權重分值低氣偏虛證遲、虛證權重分值更低血虛證淡+可能失血現(xiàn)象血偏虛證淡+可能失血現(xiàn)象，權重分值低氣血兩虛證氣虛+血虛證中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第56頁（3）部分病邪辨證標準（4）五臟證候辨證標準

表6部分病邪辨證標準病邪辨證標準濕證濕類證候1項或以上濕熱證濕證+熱證，或肛門紅腫充血，1項或以上毒（熱毒）毒類證候1項或以上血瘀證青紫、瘀1項或以上表7五臟證候辨證標準五臟辨證標準心表4-6證候+心定位表現(xiàn)1項或以上肝表4-6證候+肝定位表現(xiàn)1項或以上脾表4-6證候+脾定位表現(xiàn)1項或以上肺表4-6證候+肺定位表現(xiàn)1項或以上腎表4-6證候+腎定位表現(xiàn)1項或以上中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第57頁當前，我們已經(jīng)編寫出方法學專著：《辨證論治試驗方法學——試驗小鼠診法與辨證》中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第58頁九、發(fā)表學術論文1.方法學學術論文

[1]方肇勤,潘自強,付曉伶,等.小鼠四診采集項目標準提議.中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志,,11(9):692-694[2]方肇勤.昆明種小鼠辨證標準提議.全國辨證論治研討會(上海),3.[3]方肇勤,潘志強,湯偉昌,等.小鼠四診工作站構建與操作標準.上海中醫(yī)藥大學學報,,20(1)[4]潘自強,方肇勤,闞衛(wèi)兵,等.正常昆明種小鼠后爪圖譜及RGB值.上海中醫(yī)藥大學學報,,17(3):46-47[5]潘自強,方肇勤,闞衛(wèi)兵,等.荷瘤小鼠后爪部分證標志圖譜.中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志,,10(2):27-29[6]潘自強,方肇勤,付曉伶,等.荷瘤小鼠若干經(jīng)典證演變及其后爪圖像特征.上海中醫(yī)藥雜志,,10(6):62-64[7]潘志強,盧文麗,方肇勤.小鼠舌象顯微拍攝(待發(fā)表)[8]盧文麗,方肇勤,潘志強,等.小鼠氣、血、陰、陽、虛等四種模型四診比較和評價(待發(fā)表)[9]盧文麗,方肇勤,潘志強,等.小鼠氣、血、陰、陽、虛等八種模型四診比較和評價(待發(fā)表)中醫(yī)研究中實驗動物專家講座第59頁2.荷瘤小鼠辨證論治學術論文

[10]李海燕,方肇勤